EVALUACIÓN GENOTOXICA DE MICRONUCLEOS Y OTRAS ANORMALIDADES

Calderón Contreras María José y Gutiérrez Hinojosa Linda Lucía

Universidad Popular del Cesar, Estudiantes de microbiología

RESUMEN
Los micronúcleos son cuerpos citoplasmáticos de naturaleza nuclear, se
corresponden con material genético no incorporado correctamente a las células
hijas durante la división celular, reflejan aberraciones cromosómicas y se
originan por roturas cromosómicas, por errores durante la replicación y
posterior división celular del ADN y/o por la exposición a agentes
genotóxicas. Esta práctica tuvo como objetivo Determinar micronúcleos en
células epiteliales de la mucosa bucal e identificar sus anormalidades, y para
esto, se realizó un raspado en la mucosa oral, Se centrífugo por 10 minutos a
1500 RPM, coloración con giemsa, y luego el conteo de los micronúcleos.
Donde finalmente en toda la placa donde fueron observadas, se identificó 1
micronúcleo y aparte de esto se observó un total de 31 núcleos. Fue facil
distinguir los micronúcleos debido a su tamaño, o la presencia del centrómero o
cinetócoro.

Palabras claves: Micronúcleos; Mucosa oral; Anormalidades nucleares;

Evento genotóxico y citotóxico.

ABSTRACT
Micronuclei are cytoplasmatic bodies of nuclear origin which correspond to
genetic material that is not correctly incorporated in the daughter cells in the
cellular division; they reflect the existence of chromosomal aberrations and are
originated by chromosomal breaks, replication errors followed by cellular
division of the DNA and/or exposure to genotoxic agents. The objective of this
practice was to determine micronuclei in epithelial cells of the buccal mucosa
and identify their abnormalities, and for this, a scraping was performed on the
oral mucosa, it was centrifuged for 10 minutes at 1500 RPM, staining with
giemsa, and then the count of the micronuclei. Where finally, in the whole plate
where they were observed, 1 micronucleus was identified and apart from this a
total of 31 nuclei were made. Micronuclei were easy to distinguish because of
their size, or the presence of the centromere or kinetochore .
Keywords: Micronucleus; Oral mucosa; Nuclear abnormalities; Genotoxic y
citotoxic event

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 INTRODUCCIÓN potencialmente peligrosos; por tanto,
se torna susceptible de sufrir daños.
Los micronúcleos son fragmentos o
El epitelio de revestimiento oral
cromosomas completos que quedan
(60%) es estratificado no
fuera del núcleo durante la mitosis;
queratinizado formado por células
mediante su estudio se pueden
con abundante citoplasma, permite
evaluar los efectos de genotóxicos
la penetración de colorantes y facilita
ambientales y ocupacionales. Esta
la observación e identificación de
prueba es ampliamente utilizada y es
características morfológicas del
una alternativa eficaz, sencilla y
núcleo y membrana celular. Además
económica para detectar la perdida
la mucosa tiene elevada capacidad
de material genético. Por otra parte,
proliferativa y aunque esta
la cavidad oral puede reflejar el
particularidad mantiene la población
estado de salud de los individuos,
celular constante, por otro lado, se
debido a que la mucosa que la
vuelve más vulnerable a daño al
recubre, puede presentar evidencias
ADN. Esto cobra relevancia ya que
a nivel microscópico como
el 90% del cáncer tienen origen
macroscópico de cambios indicativos
epitelial, así que la mucosa oral es
de enfermedad local sistémica o por
usada para monitorear eventos
exposición a sustancias tóxicas así
genotóxicos tempranos causados
como efectos secundarios por
por cancerígenos inhalados o
tratamientos. Dichas ventajas,
ingeridos.(Torres. O & Ramos. M.,
favorecen su utilización en pruebas
2013) El objetivo de esta práctica es
para evaluar genotóxicos o
conocer los micronúcleos y las
citotóxicos. (Torres. O & Ramos. M.,
anormalidades que se pueden
2013 ). El mecanismo de formación
presentar en nuestra cavidad bucal.
o su significado biológico de cada
una de estas anormalidades no esta
muy bien esclarecido, sin embargo
MATERIALES Y MÉTODOS
bajo condiciones patológicas
(obesidad, artritis reumatoide, lupus  Tubos cónicos
eritematoso sistémico, diferentes  Solución salina
tipos del cáncer, problemas  Citocepillo
hematológicos como linfoma  Microscopio
Inmunoblástico, leucemia aguda  Colorante de Giemsa y Wright
megaloblástica; linfoma Hodgkin,  Centrifuga
leucemia granulocítica crónica,  Laminas portaobjetos
 Pipetas Pasteur
anemia linfocítica, mieloma múltiple,
 Marcador
anemia trombocitopénica, púrpura
trombocitopénica idiopática,
leucemia linfocítica aguda, entre
otras) o de exposición (tabaco,
alcohol, drogas, quimioterapia
antineoplásica). (Samanta y Dey,
2010). La mucosa es una barrera
protectora del resto del organismo,
es un punto de contacto de agentes
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  Se realizó un raspado
de la mucosa oral con el
citocepillo por 90 segundos
aproximadamente, luego se
introdujo en un tubo con 3ml
de solución salina y se
completó hasta llegar a 12ml
con solución salina al 0.85%
 Se centrífugo por 10 minutos
a 1500 RPM, para descartar En toda la placa donde fueron
el sobrenadante, se repitió 3 observadas, se identificó 1
veces, posteriormente se micronúcleo y aparte de esto se
tomó una pipeta Pasteur y observó un total de 31 núcleos.
agregamos 3 gotas de
sedimento en cada extremo 30--------------1000
de la lamina. 1----------------X
= 33
 Se dejo secar a temperatura
De 1000 núcleos de célula 33 eran
ambiente, fijamos con calor
desnaturalizados.
para colorear con giemsa por
10 minutto
ANALISIS DE RESULTADOS
 Luego lavamos con solución
salina, dejamos secar, para
Los micronúcleos son una
se observamos en
herramienta útil para la prevención
microscopio en el objetivo de
de tumores en la detección temprana
100X.
de efectos secundarios, de
 Para reconocer un enfermedades crónicodegenerativas
micronúcleos se tiene en y envejecimiento precoz (Bonassi et
cuenta que el diámetro del al.).  , ya que se forman durante la
MN debe tener una medida transición de metafase–anafase en
entre 1/16-1/3 del diámetro mitosis y pueden ser cromosomas
del núcleo principal (menos completos rezagados ocasionado
de una mitad del núcleo por un daño al uso mitótico (efecto
principal). No refractarios aneuploidógeno) o bien, fragmentos
Intensidad de tinción similar a de cromosomas sin centrómero
el núcleo principal No unidos (daño clastogénico) (Schmid, 1975);
a el núcleo de la célula de en el estudio realizado logramos
origen Pueden tocar el núcleo observar y distinguir los
de la célula de origen pero no micronúcleos debido a su tamaño, o
superponerse con él y su la presencia del centrómero o
membrana debe verse con cinetócoro lo que permite,
claridad diferenciarlos y realizar un conteo,
 Luego se contaron las células en donde se logro encontrar 1
y se determino el porcentaje micronúcleo y 31 núcleos, en los que
de micronúcleos. de 1000 células 33 fueron
desnaturalizadas. Estos eventos
RESULTADOS pueden ocurrir espontáneamente,
sin embargo, en presencia de ciertos
agentes endógenos (Migliore et al.;
Ramos-Remus et al., 2002;

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 Rodríguez-Vázquez et al.,
2000) o exógenos, la presencia de
MN incrementan; convirtiéndose
estos, en indicadores del efecto de
agentes mutágenos, genotóxicos o
teratógenos específicamente,
micronucleogénicos (Heddle et al.,
1991).
CONCLUSIÓN
La evaluación de micronúcleos es
una alternativa al test de
aberraciones cromosómicas
convencional, en el que se analizan
las alteraciones presentes en
metafases mitóticas y permite
detectar aberraciones cromosómicas
que responden a alteraciones de tipo
estructural o alteraciones numéricas
del agente en estudio. El conteo de
los MN, es llevado a cabo fácilmente
en cualquier tejido que se divida
como en el epitelio de mucosa oral.
ANEXO
CUESTINARIO
1. ¿Cuáles son las causas por
las cuales pueden aparecer
las anomalías del núcleo?
RTA/ En el núcleo se pueden
producir alteraciones de
genotoxicidad y/o citotoxicidad en la
morfología de las células
neoplásicas también las puede
causar defectos genéticos en el
mantenimiento del genoma,
envejecimiento acelerado, daño
genotóxico y algunas enfermedades
degenerativas.
2. ¿En qué microorganismos
podríamos estudiar
micronúcleos?
RTA/ Tetrahymena thermophila tiene
una versatilidad única permite a los
científicos usarla para identificar
factores clave relacionados con la
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expresión de los genes y la
integridad del genoma.
3. Que determina un ensayo de
micronúcleos?
RTA/ El ensayo de micronúcleos
está considerado como un ensayo
práctico, universalmente validado y
accesible tecnológicamente, útil para
evaluar la inestabilidad genética
inducida por agentes genotóxicos.
Este método se puede hacer en
muestras sangre total, células
exfoliadas de la mucosa oral o
cualquier otro tipo celular con
actividad mitótica con algunas
variaciones.
4. Qué relación puede encontrar
entre biomarcador y
biomonitor?
RTA/ BIOMONITORES: La
biomonitorización, por trabajar con
organismos vivos, da información
acerca de las relaciones entre las
condiciones ambientales y el mundo
vivo; por hacerse a lo largo del
tiempo permite hacer comparaciones
entre distintos estados, y los datos
obtenidos pueden servir para
predecir futuros cambios que puedan
ser importantes para el ser humano.
BIOMARCADORES: Los
marcadores biológicos o
biomarcadores son los cambios
medibles, ya sean estos
bioquímicos, fisiológicos o
morfológicos, que se asocian a la
exposición a un tóxico. Por ejemplo;
el nivel de colinesterasa en sangre
se cambia por la exposición a
plaguicidas. Un nivel anormalmente
bajo de colinesterasa es un
 biomarcador de la situ hybridization: its
exposición a plaguicidas application to the human
organofosforados. lymphocyte micronucleus
assay after treatment with four
suspected
aneugens. Mutagenesis,
11(3):285-90, 1996.   
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