UNIVERSIDAD NACIONAL DE

MOQUEGUA

TITULO:
Mapa Conceptual - Artículos de Ingeniería Genética

CURSO:
Biotecnología
DOCENTE:
Dr. Hebert Hernan Soto
Gonzales
ESTUDIANTE:
Rubiliz Silvana Huancco Bravo
Ciclo:
VII Ciclo
Fecha y lugar:
27 de Junio del 2021, Ilo
 OPTIMIZACIÓN Y VALIDACIÓN DE UNA PCR EN TIEMPO REAL PARA LA
RÁPIDA IDENTIFICACIÓN DE BACILLUS THURINGIENSIS, SIMULADOR
DE BACILLUS ANTHRACIS

Realizado por

Álvarez, Larigauderie, Ortega, Granja y Cabria.

Introducción Objetivo Metodología Resultados y Discusión Conclusiones

Dado la Homología y la nula Desarrollar y validar una PCR Extracción y cuantificación

Optimización del ensayo Se ha optimizado y validado
patogenidad-humano en tiempo real para la rápida del ADN molde
una PCR en tiempo real
identificación
el
del
Cepa HD-1 de B. A 60°C: reduce el LOD hasta
simulador del B. anthracis
B. thuringiensis para thuringiensis subsp. kurstaki la dilución 10^-6 La eficiencia y linealidad del
entrenamiento de la unidades método fueron adecuadas
es el obtenido del y
operativas
B. thuringiensis: bacteria laboratorio de Biología aumenta la eficiencia de la
patógena Molecular del INTA. reacción de amplificación al
Dicha qPCR: una elevada
93%,
para sensibilidad

insectos, nemátodos, Cultivo enriquecido, proceso con un

protozoos y platelmintos periódico, se incubó y se Validación del ensayo
purifico el ADN total. LOD de 13 egc

el rango lineal del ensayo

La toxicidad: las proteínas La cuantificación, calculo de abarca las 6 primeras
cristal (cry) =(cantidad * 6,022x10^23) / los egs Tanto la inclusividad como la
diluciones.
(longitud * 1x10^9 * 650). exclusividad: 100%.
La PCR: análisis de cepas
de B. thuringiensis
para
descubrir proteínas
insecticidas inéditas.
Actualmente: 75 familias de
genes cry
Se implementaron diferentes
PCRs en tiempo real. Los productos de la qPCR:
para
identificar distintas cepas de
B. thuringiensis
Eficiencia, linealidad y límite
Este simulador:
entrenamiento de la NBQ de
las FAS
Optimización de la PCR
El valor R2 igual a 0,9993.
cualitativa en tiempo real
El ensayo, la sonda de Límite de detección del
hidrolisis, la amplificación método
Para optimizar el ensayo: La dilución 10^-6 son
(58, 60 y 62°C). positivos, dilución 10^-7 son
15 resultados positivos y 5
negativos, 10^-8 son 12
positivos y 8 negativos.
gel agarosa 2%
Inclusividad y exclusividad
Validación del ensayo:
de detección
Esta qPCR es especifica
para el gen cry1A
La pendiente de la curva
estándar, coeficiente de
correlación R^2 y menor
un valor de Cq inferior a 38
concentración de ADN
y
banda de 69 pb en la cepa
Determinación del cutoff
HD-1 de B. thuringiensis
value
subsp. kurstak
 Inclusividad y exclusividad: 1 La inclusividad y la exclusi -
cepa DIANA, 24 cepas no vidad : 100%
diana respectivamente

Evaluación inicial del método

Evaluación inicial del método:
preparo dos escenarios
biológicos
se obtuvo una identificación
positiva de B. thuringiensis
Primero: atentado ferroviario

LOD es mayor que la

de otras qPCR especificas
Segundo: laboratorio
clandestino
Ninguna de las 24 cepas
no diana utilizadas mostró un
resultado positivo.

Es importante disponer de un
ensayo molecular rápido,
sensible y específico

la identificación de B.
thuringiensis, simulador de
B. anthracis
Información Obtenida:
https://scielo.isciii.es/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1887-85712018000200084