ANALISIS MICROBIOLOGICO DE UNA

MUESTRA DE QUESILLO
RECUENTO TOTAL DE
BACTERIAS AEROBIO MESOFILAS (RTBAM)
OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL

 Determinar la calidad higiénica del quesillo

OBJETIVO ESPECIFICO

 Determinar la calidad higiénica del quesillo por el método RTBAM.

 Practicar las regla para el conteo de colonias.
 Observar si la cantidad presente en el alimento está en el rango permitido y verificar
su rango.

FUNDAMENTO TEÓRICO
En el recuento de microorganismos aerobios mesofilos se estima la flora total, pero sin
especificar el tipo de germen.

Se puede determinar la calidad sanitaria de los productos analizados indicando, además de las
condiciones de higiénicas de la materia prima, la forma como fueron manipulados durante su
elaboración.

Un recuento bajo de aerobios mesófilos no implica o no asegura la ausencia de

patógenos o sus toxinas, de la misma manera un recuento elevado no significa
presencia de flora patógena. Ahora bien, salvo en alimentos obtenidos por
fermentación, no son recomendables recuentos elevados.

Su significado es diverso:
 Materia prima excesivamente contaminado.
 Deficientes métodos de manipulación durante la elaboración de los productos.
 Alto recuento suele ser signo de inmediata alteración del producto.
 Tasa superior de 106 -107 gérmenes por gramo suelen ser ya inicio de descomposición.

MATERIALES EQUIPOS

- 3 tubos de ensayo - Balanza

- 1 probeta de 100ml - incubadora
- 3 cajas petri - autoclave
- 5 pipetas de 2ml REACTIVOS
 - 1 pipeta de 10ml
- Solución fisiológica
- 1gradilla - Agar PCA
- 1 bolsa de Stomacher - muestra ( quesillo)
- 1 mechero
- Cucharilla, encendedor
- Toalla, franela
- Rotulador
- Desinfectante al 15%
- Alcohol al 70%

METODOLOGIA

 Preparar el agar PCA 100 ml

 Preparar 260 ml de solución fisiológica

 Limpiar el mesón y las manos con desinfectante y alcohol

 Esterilizar todo el material, cuchara, pipetas, probeta, agar, sol. Fisiológica en el
autoclave por 15 min. a 121°C
 Con una pipeta de 10 ml pipetear a cada tubo 9 ml y rotular -2, -3, -4
respectivamente
 Homogenizar la muestra dentro la bolsa, pesar 25 gr de muestra en una bolsa
de Stomacher con una cuchara cerca del mechero.
 Añadir 225 ml de la solución fisiológica a la muestra previamente antes dejar
enfriar a 40°C y homogenizar, esa será la muestra madre (solución -1), dejar
reposar
 Rotulamos -2, -3 y -4en las placas respectivamente
 Cerca del mechero pipeteamos 2ml de la solución madre (solución-1)
agregamos 1 ml a la placa -1 y 1ml al tubo -2 y desechamos la pipeta
 Homogenizamos el tubo -2 y pipeteamos 1ml al tubo -3, desechamos la pipeta
 Esperamos que el agar enfríe a 50-60°C aproximadamente
  Vertimos el agar PCA aproximadamente 25ml a cada placa y homogenizamos
en forma circula a ambos sentidos, esperamos que gelifique para después
incubar
 Una vez gelificado llevamos las placas invertidas a incubar por 24-48hrs a 37°C
 Lavamos todos los materiales usados y desinfectamos el mesón
 Pasada las 24 y 48hrs realizamos el recuento total de bacterias para hacer
cálculos y hallar resultados

DATOS, CÁLCULOS Y RESULTADOS

Parámetro: RTBAM Rango: 25-250 colonias

Medio: PCA Muestra: apanado de carne

Primer conteo:

-1 -2 -3
Incontable Incontable 532

Segundo conteo:
 -1 -2 -3
Incontable Incontable 620

Cálculos.- primer conteo

RTBAM = Nº de colonias*dilución

3
RTBAM = 532*10

RTBAM = 5.32*105 UFC/g

Segundo conteo:

RTBAM = Nº de colonias*dilución

3
RTBAM = 620*10

RTBAM = 6,2*105 UFC/g

Resultados.-
NUMERO DE PARAMETROS RESULTADOS LIMITE NORMA DE
NORMA DE DE ENSAYO *(UFC/gr) (UFC/gr) REFERENCIA
ENSAYO DE LIMITE

Recuento:

NB – 32003 Bacterias 6,2*105 1 ×107 NB - 310017

mesofilas
aerobias

OBSERVACIONES
Pasado las 24 horas se pudo observar en nuestras placas Petri estaba bien
homogenizado el agar en la placa -1 era incontable en la placa -2 era incontable y
en la placa -3 se podía contar las colonias .

 Según el rango de colonias establecida para este parámetro se observo q en la

placa -1 es incontable y sobrepasa el rango, la placa-2 es incontable sobrepasa
el rango y por ultimo nuestra placa -3 se podía contar pero no entraba al rango
permitido según las colonias.
 El error que se cometió es que teníamos que hacer diluciones hasta -5 donde si
entraba al rango de las colonias nos confundimos con las diluciones de vrbl.
CONCLUSIONES
 Pudimos determinar correctamente la calidad higiénica de nuestra muestra
(apanado de carne ).
 Comparando con el análisis microbiológico nuestro apanado de carne no
está en estado de putrefacción rango de nuestro RTBAM es aceptable
según la norma boliviana .

COLIFORMES TOTALES

Y FECALES
OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL

 Evaluar la calidad del quesillo mediante la búsqueda de microorganismos

coniformes totales y coniformes fecales.

OBJETIVO ESPECÍFICA

 Por medio de la técnica recuento en placas determinar la cantidad de

coniformes hallado en el quesillo observando los medios de cultivo.
 Utilizar adecuadamente los materiales y equipos para analizar los microorganismos.
 Realizar de manera correcta el recuento de bacterias típicas en las placas de
crecimiento
 Detectar si la muestra traída es apta para el consumo humano.

FUNDAMENTO TEÓRICO
Los coniformes fecales son subgrupos de los coniformes totales, capaces de fermentar la
lactosa a 44.5 grados en vez de 37 grados como lo hacen los coniformes totales.

Aproximadamente el 95%de los grupos de los coniformes presentes en heces están formados
por escherichia coli y ciertas especies de de klebsiella .ya que los coliformes fecales se
encuentran casi exclusivamente en las heces de los animales de sangre caliente, se consideran
que reflejan mejor la presencia de contaminación fecal. Estos últimos se denominan termo
tolerantes por su capacidad de soportar temperaturas más elevadas. Esta es las características
que diferencia a coliformes totales y fecales.

Cuando los coliformes llegan a los alimentos, no sólo sobreviven, sino que se multiplican, por
lo que en los alimentos el grupo coliforme adquiere un significado distinto al que recibe en el
agua. En productos alimenticios que han recibido un tratamiento térmico (pasteurización,
horneado, cocción, etc.), se utilizan como indicadores de malas prácticas sanitarias.

El grupo de bacterias coliformes totales comprende todos los bacilos Gramnegativos aerobios
o anaerobios facultativos, no esporulados, que fermentan la lactosa con producción de gas en
un lapso máximo de 48 h. a 35°C ± 1ºC.
El grupo de coliformes fecales, está constituido por bacterias Gram-negativas capaces de
fermentar la lactosa con producción de gas a las 48 h. de incubación a 44.5 ± 0.1°C. Este grupo
no incluye una especie determinada, sin embargo la más prominente es Escherichia coli.

Su presencia se interpreta como una indicación de que los organismos patógenos pueden estar
presentes y su ausencia indica que el agua o el alimento estudiado se hallan de organismos
productores de enfermedades.

MATERIALES EQUIPOS

- 6 tubos de ensayo - Balanza

- 1 probeta de 100ml - incubadora
- 4cajas petri - autoclave
- 6 pipetas de 2ml REACTIVOS
- 1 pipeta de 10ml
- 2 matraces de 500 y 250ml - Solución fisiológica
- 1gradilla - Agar VRBL
- 1 bolsa de Stomacher - muestra (carne apanado )
- 1 mechero - caldos CVBB y EC
- Cucharilla, encendedor
- Toalla, franela
- Rotulador
- Desinfectante al 15%
- Alcohol al 70%

METODOLOGIA

 Preparar el agar VRBL 100 ml

 Preparar 80 ml de caldo CVBB y EC
 Preparar 290 ml de solución fisiológica

 Limpiar el mesón y las manos con desinfectante y alcohol

 Esterilizar todo el material, cuchara, pipetas, probeta, agar, sol. Fisiológica en el
autoclave por 15 min. a 121°C
 Con una pipeta de 10 ml pipetear a cada tubo 9 ml y rotular -2, -3,
respectivamente
  Homogenizar la muestra dentro la bolsa, pesar 25 gr de muestra en una bolsa
de Stomacher con una cuchara cerca del mechero.
 Añadir 225 ml de la solución fisiológica a la muestra previamente antes dejar
enfriar a 40°C y homogenizar, esa será la muestra madre (solución -1), dejar
reposar
 Rotulamos -1, -2 y -3 en las placas respectivamente
 Cerca del mechero pipeteamos 2ml de la solución madre (solución-1)
agregamos 1 ml a la placa -1 y 1ml al tubo -2 y desechamos la pipeta
 Homogenizamos el tubo -2 y pipeteamos 1ml al tubo -3, desechamos la pipeta
 Homogenizamos el tubo -5 y pipeteamos 1ml a la placa -5
 Esperamos que el agar enfríe a 50-60°C aproximadamente
 Vertimos el agar VRBL aproximadamente 20ml a cada placa y homogenizamos
en forma circula a ambos sentidos, esperamos que gelifique para después
incubar
 Una vez solidificado verter un poco mas de agar para que cubra toda la placa y
los microorganismos crezcan en medio anaeróbico
 Una vez gelificado llevamos las placas invertidas a incubar por 24 hrs a 35 ± 2 °C
 Lavamos todos los materiales usados y desinfectamos el mesón
 Pasada las 24 hrs realizamos el recuento total de bacterias típicas (color rojo
purpura con un halo de precipitado)
 Elegir tres colonias típicas para sembrar en los caldos
 Tomar un poco de la colonia elegida con un asa previamente esterilizada en el
mechero al rojo vivo, sembrar primero en el caldo EC y después volver a tomar
la muestra para sembrar sin quemar en el caldo CVBB, repetir el mismo
procedimiento para las tres colonias elegidas
 Incubar el caldo CVBB A 35 ± 2 °C y el caldo EC a 44.5 °C durante 24 – 48°C
 Pasado el tiempo de incubación realizar los cálculos y resultados

DATOS, CÁLCULOS Y RESULTADOS

Datos . -

Parámetro: COLIFORMES Y FECALES Rango: 15 – 150 coloniasb

Medio: VRBL Muestra: apanado de carne

-1 -2 -3
Incontable 65 18

Caldo EC 24 CF Positivo Positivo Negativo

48 CF Positivo Positivo positivo

Caldo VBB 24 CF Positivo Positivo Positivo

Caldo de 24 horas Indol(E. Negativo negativo positivo
triptona colis

Cálculos.-
tuvos positivos
CF O CT ¿ N de colonias × ×
tuvos totales dilucion
3 3
CF ¿18× 3 × 10

CF=1.8×10 4 UFC/g
3 3
CT ¿18× 3 × 10

CT=1.8×10 4 UFC/g
tuvos positivos indol ±
EC¿ N de colonias × tuvos totales
×
gas positivo
× dilucion

3 1 2
EC =68× 3 × 3 ×10 EC =2.27×10 3 UFC/g

Resultados.-
NUMERO DE PARAMETROS RESULTADOS LIMITE NORMA DE
NORMA DE DE ENSAYO *(UFC/gr) (UFC/gr) REFERENCIA
ENSAYO DE LIMITE

Recuento:
 NB – 32005 E. coli 2.27×10 3 5*102 NB - 310017

OBSERVACIONES
 Pasado las 24 horas se pudo observar que en la placa -1 era incontable en la
placa -2 se podía apreciar mejor las colonias típicas que son rojo purpuras con
un precipitado donde si entraba al rango y por último en la placa -3 también
entraba al rango de las colonias.
 Después se tomó de la PLACA -3 tres colonias típicas donde se sembró a los
caldos calco ECOLI y CALDO VBB donde pasado las 24 horas solo reaccionaron
dos tubos con presencia de gas los cual se esperó otras 24 horas para ver si
reaccionara el ultimo tuvo.
Par la determinación de EC. se tomó los tubos que tenían presencia de gas de los
caldos ecolis donde se sembró en las placas que tenían agar EMB Pasado las 24 horas
se pudo observar que en la placa -1 no estaban distribuidos tan bien en placa -2 se
podía apreciar mejor las colonias típicas que son verde metálicos des pues se sembró
en agua de triptona en tres tubos en lo cual solo dio en un tubo indol positivodonde se
pudo apresiar en la parte superior una cinta de color rojo.

CONCLUSIONES
 Comparando con el rango de aceptabilidad según la norma BOLIVIANA nuestro
resultado sobrepasa el rango establecido asi que el alimento analizado no está
dentro de la norma sanitaria establecida y no es recomendable el consumo.

MOHOS Y LEVADURAS
OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL

 Realizar adecuadamente mediante el método de conteo de placas, el número de

mohos y levaduras presentes en el quesillo destinado al consumo humano.
 Identificar las características macroscópicas de mohos y levaduras.

OBJETIVO ESPECIFICO

 Determinar la calidad higiénica del quesillo.

 Comprender el fundamento de todas las etapas del método de detección y
cuantificación de mohos y levaduras en alimentos.
 Realizar de manera correcta el recuento de mohos y levaduras en las placas de
crecimiento.

FUNDAMENTO TEÓRICO
Se considera como moho determinado tipo de hongo multicelular filamentoso, dotado de
micelios verdaderos y microscópicos, mientras que las levaduras son aquellos hongos con
células independientes que cresen formando agregados y que pueden presentar diferentes
aspectos celulares, desde globosas hasta cilíndricas, pasando por formas alargadas u ovoides.
Las levaduras en medio solido generan colonias semejantes a las que se aprecian en las
bacterias. Otra diferencia entre ambos grupos resiste en su identificación. Las levaduras al
igual que las bacterias, pueden ser sometidas a diferentes pruebas bioquímicas que permita su
identificación. Sin embargo los mohos raramente pueden ser clasificados de acuerdo a este
criterio, siendo más habitual su clasificación de acuerdo a caracteres morfológicos observados
por microscopia.

Los hongos y las levaduras se encuentran ampliamente distribuidos en el ambiente, pueden

encontrarse como flora normal de un alimento o como contaminante en equipos mal
sanitizados.ciertas especies de hongos y levaduras son útiles en la elaboración de algunos
alimentos, sin embargo también pueden ser causantes de la descomposición de los alimentos.

ESTRUCTURA Y APARIENCIA;

Las levaduras son organismos que están formados por una célula, que en general es redonda u
ovalada, mientras que los mohos tienen una estructura completamente multicelular que, visto
a simple vista es completamente diferente al de las levaduras. Los mohos tienden a ser mucho
más colorido y pueden tener una textura lanosa o velluda mientras que una colonia de
levaduras es incolora y generalmente lisa.

Los hongos y levaduras pueden utilizar ciertos sustratos como pectinas, carbohidratos
como polisacáridos, ácidos orgánicos, proteínas y lípidos. También pueden causar
problemas a través de: (a) síntesis de metabolitos tóxicos (micotoxinas), (b) resistencia
al calor, congelamiento, antibióticos o irradiación y (c) habilidad para alterar sustratos
no favorables permitiendo el crecimiento de bacterias patógenas. Pueden también
causar malos olores y sabores y la decoloración de las superficies de alimentos

MATERIALES EQUIPOS

- 2 tubos de ensayo - Balanza

- 1 probeta de 100ml - incubadora
- 4 cajas petri - autoclave
- 4 pipetas de 2ml REACTIVOS
- 1 pipeta de 10ml
- 2 matraces de 500 y 250ml - Solución fisiológica
- 1gradilla - Agar PDA
- 1 bolsa para Stomacher - muestra (apanado de carne )
- 1 mechero - Acido tartárico
- Cucharilla, encendedor - Oxitetraciclina
 - Toalla, franela
- Rotulador
- Desinfectante al 15%
- Alcohol al 70%

METODOLOGIA

 Preparar el agar PDA 100 ml

 Preparar 290 ml de solución fisiológica

 Limpiar el mesón y las manos con desinfectante y alcohol

 Esterilizar todo el material, cuchara, pipetas, probeta, agar, sol. Fisiológica en el
autoclave por 15 min. a 121°C
 Con una pipeta de 10 ml pipetear a cada tubo 9 ml y rotular -2, -3,
respectivamente
 Homogenizar la muestra dentro la bolsa, pesar 25 gr de muestra en una bolsa
de Stomacher con una cuchara cerca del mechero.
 Añadir 225 ml de la solución fisiológica a la muestra previamente antes dejar
enfriar a 40°C y homogenizar, esa será la muestra madre (solución -1), dejar
reposar
 Rotulamos -1, -2 y -3 en las placas respectivamente
 Cerca del mechero pipeteamos 2ml de la solución madre (solución-1)
agregamos 1 ml a la placa -1 y 1ml al tubo -2 y desechamos la pipeta
 Homogenizamos el tubo -2 y pipeteamos 1ml al tubo -3, desechamos la pipeta
 Esperamos que el agar enfríe a 50-60°C aproximadamente y añadimos media
capsula de oxitetraciclina y acido tartárico 1.6ml por 100 ml de agar
 Vertimos el agar PDA aproximadamente 25ml a cada placa y homogenizamos
en forma circula a ambos sentidos, esperamos que gelifique para después
incubar
 Una vez gelificado llevamos las placas sin invertir a incubar por 3 – 5 o 7 días a
25°C o dejamos al ambiente pero siempre cuidando de dejarlos en un lugar
oscuro para favorecer el crecimiento
 Lavamos todos los materiales usados y desinfectamos el mesón
  Pasada 3 – 5 días realizamos el recuento total de mohos y levaduras para hacer
cálculos y hallar resultados

DATOS, CÁLCULOS Y RESULTADOS

Parámetro: MOHOS Y LEVADURAS Rango: 10 – 150 colonias

Medio: PDA Muestra: APANADO DE CARNE

3 DIA 10¿ 1 10¿ 2 10¿ 3

MOHOS 236 75 8
LEVADURAS 60 12 1

¿1 ¿2 ¿3
5 DIA 10 10 10
MOHOS 245 75 8
LEVADURAS 64 14 2

7 DIA 10¿ 1 10¿ 2 10¿ 3

MOHOS 270 75 8
LEVADURAS 67 15 2
Cálculos.-

MOHOS O LEVADURAS= Nº de colonias*dilución

5 DIA:

MOHOS =75×10 2 MOHOS =7.5×10 3 UFC/g

LEVADURAS =67×10 1 LEVADURAS =6.7×10 2 UFC/g

Resultados.-
NUMERO DE PARAMETROS RESULTADOS LIMITE NORMA DE
NORMA DE DE ENSAYO *(UFC/gr) (UFC/gr) REFERENCIA
ENSAYO DE LIMITE

Recuento:

NB – 32003 mohos 7.5×10 3 NB - 310017

NB – 32003 levaduras 6.7×10 2 NB - 310017

OBSERVACIONES
 Se observó un gran crecimiento de mohos y levaduras hasta los 7 días era un
poco más difícil el conteo de los mohos y de las levaduras por que crecieron
mucho más .
 Las hifas y los micelios de los mohos eran de color blanco o marfil y las
levaduras eran cremosas

CONCLUSIONES
- La muestra no es apta para el consumo ya que tiene demasiada cantidad de
mohos y levaduras.

INVESTIGACION DE SALMONELLA
OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL

 Determinar la presencia o ausencia de salmonella en el quesillo.

OBJETIVO ESPECIFICO
  Determinar la calidad higiénica del quesillo
 Sembrar correctamente en la serie bioquímica

FUNDAMENTO TEÓRICO
Salmonella es un género de bacteria, pertenecientes a la familia enterobacteriae, integrado
por células en forma de bacilos, no esporuladas y ha bitualmente móviles mediante flagelos
peritricos.son bacterias Gram - negativas de metabolismos anaerobio facultativo, que reducen
los nitratos a nitritos y que fermentan la glucosa produciendo ácido y gas. Raramente
fermentan la lactosa o la sacarosa.

La identificación y /o confirmación de las colonias presuntivas de salmonella se realiza

mediante pruebas bioquímicas que utilizan medios diferentes como el agar entérico hektoen y
el agar xilosa lisina desoxicolato(XLD ). Las colonias típicas de este microorganismo son
rosadas, pueden presentar o no un centro negro debido a la producción de ácido sulfhídrico en
agar XLD y verdosa o verde azulado con o sin centros negros en el agar hektoen.en algunos
casos son completamente negras.

Simultáneamente, se puede llevar a cabo en medio de agar triple hierro (TSI) y el agar lisina de
hierro (LIA). Prueba como urea, de producción de indol, crecimiento de caldo KCN
fermentación de dulcitol o la utilización de malo nato de sodio también sirve como pruebas
bioquímicas complementarias.

MATERIALES EQUIPOS

- 5 tubos de ensayo - Balanza

- 1 probeta de 100ml - incubadora
- 2 cajas petri - autoclave
- 1 pipetas de 2ml REACTIVOS
- 1 pipeta de 10ml
- 2 matraces de 500 y 250ml - Solución fisiológica
- 1gradilla - Agar XLD
- 1 bolsa de Stomacher - muestra (Rabadilla de pollo)
- 1 mechero - Serie bioquímica
- Cucharilla, encendedor
- Toalla, franela
- Rotulador
- Desinfectante al 15%
- Alcohol al 70%
METODOLOGIA

 Preparar el agar XLD 70 ml, la serie bioquímica y el caldo de tetrationato

 Preparar 290 ml de solución fisiológica

 Limpiar el mesón y las manos con desinfectante y alcohol

 Esterilizar todo el material, cuchara, pipetas, probeta, sol. Fisiológica en el
autoclave por 15 min. a 121°C
 Preparar el agar y el caldo porque no se autoclavan
 Veritr el agar en las placas para que gelifique y guardar en la conservadora
hasta usarla

PREENRIQUECIMIENTO

 Homogenizar la muestra dentro la bolsa, pesar 25 gr de muestra en una bolsa

de Stomacher con una cuchara cerca del mechero.
 Añadir 225 ml de la solución fisiológica a la muestra previamente antes dejar
enfriar a 40°C y homogenizar, esa será la muestra madre, dejar reposar
 incubar por 24hrs a 35 ± 2 °C para revivificar las bacterias

ENRIQUECIMIENTO

 Pipetear 1 ml de la solución madre a caldo de tetrationato ya preparado(10ml

de caldo de tetrationato añadir 0.1ml de verde brillante y 0.2 ml de yodo)
 Dejar incubando el caldo de tetrationato a 42.5 °C por 24 hrs

AISLAMIENTO

 Estriar en las placas de XLD con un asa de punta redonda del caldo de
tetrationato(antes agitar)
 Incubar las placas de XLD en la incubadora a 35±2 °C por 24 a 48 hrs si es que
no presenta crecimiento de colonias negras
 Elegir una colonia aislada de la placa de XLD para sembrar en las serie
bioquímica

CONFIRMACION
  Primero sembrar en TSI (estría, picadura) y luego en LIA ( picadura, estría) sin
quemar ni tomar otra vez la colonia
 Tomar un poquito de colonia sembrar en MIO (picadura) después en CS (estría)
tomando otra vez la colonia
 Dejar incubar toda la serie bioquímica a 35±2°C por 24 hrs
 Observar los cambios de color, presencia de gas y sulfatación para ver la
presencia de salmonella

DATOS, CÁLCULOS Y RESULTADOS

Datos.- CALDO TETRATIONATO

Parámetro: SALMONELLA
Muestra: APANADO DE CARNE

Cálculos.-
 SERIE BIOQUIMICA PARA LA
DETERMINACION DE LA SALMONELA

 Para determinar la salmonela en la serie bioquímica lo que determina la

presencia de salmonela es kia y lia.
 KIA glucosa positivo
 Lactosa negativa
 Gas positivo
 Sulfuro positivo
 LIA Sulfuro positivo
 Descarboxilacion dela lisina positiva

Resultados.-
SAL = PRECENSIA/25gr
NUMERO DE PARAMETROS RESULTADOS LIMITE NORMA DE
NORMA DE DE ENSAYO *(UFC/gr) (UFC/gr) REFERENCIA
ENSAYO DE LIMITE

Recuento:

NB ISO - Salmonella Presencia / presencia NB - 310017

6579 25 gr

OBSERVACIONES
 El estriado en la placa de XLD no estuvo perfectamente realizado
 Se sobrecargo el asa para sembrar en kia y el medio cambio todo a negro

CONCLUSIONES
 Se determinó correctamente la práctica y el resultado obtenido fue
Presencia/25 gr de muestra, esto demuestra el mal estado del alimento
analizado y representa un peligro para la sociedad ya que puede causar
enfermedades.

INVESTIGACION Y RECUENTO DE

CLOSTRIDIUM SULFITO – REDUCTORES

OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL

 Analizar los resultados obtenidos por la muestra analizada conforme a la

normatividad

OBJETIVO ESPECIFICO

 Determinar la calidad higiénica de mi quesillo

  Realizar de manera correcta el recuento de bacterias en los tubos de
crecimiento
 Comparar los resultados obtenidos con la norma y verificar su rango

FUND AMENTO TEÓRICO

L o s C l o s t r i d í u m s u l fi t o r e d u c t o r e s   s o n a q u e l l a s
b a c t e r i a s d e   m o r f o l o g í a b a c i l a r , G+, a n a e r o b i a s
e s t r i c t a s ,   c a p a c e s   d e f o r m a r e s p o r a s yc o n
c a p a c i d a d   d e r e d u c i r e l s u l fi t o a s u l f u r o
Fundamento: La técnica se basa en contar
el número de colonias de bacterias esporuladas y
con c a p a c i d a d s u l fi t o r e d u c t o r a d e s a r r o l l a d a s e n
m e d i o d e   c u l ti v o s ó l i d o g l u c o s a d o   c o n s u l fi t o
sódico y una sal de hie rro.
E s p e c i e s d e l   g é n e r o C l o s t r i d i u m   ti e n e n u n a
supervivencia mucho mayor que cualquier otro
indicador bacteriano de  contaminación fecal
debido a su capacidad formadora  de esporas.
Si se evidencian simultáneamente coliformes y
Clostridium es evidente el origen fecha
de la contaminación. Si sólo se detectaran
Clostridium indicaría una contaminación fecal rem ot a

Algunas de las especies del género Clostridium tienen la propiedad de reducir el ion
sulfito a sulfuro que en presencia de citrato férrico o cualquier otra sal
(metales pesados) forman colonias de color negro. El recuento de esporas es
considerado como el indicador más importante de las bacterias anaerobias
capaces de formar esporas. Estas estructuras de supervivencia suelen presentarse en
alimentos enlatados que no han sido producidos bajo condiciones de
calidad en cada proceso y malas condiciones de almacenamiento.

MATERIALES EQUIPOS

- 9 tubos de ensayo - Balanza

- 1 probeta de 100ml - incubadora
- 6 pipetas de 2ml REACTIVOS
- 1 pipeta de 10ml
- 2 matraces de 500 y 250ml - Solución fisiológica
 - 1gradilla - Agar SPS
- 1 bolsa de Stomacher - muestra (quesillo)
- 1 mechero
- Cucharilla, encendedor
- Toalla, franela
- Rotulador
- Desinfectante al 15%
- Alcohol al 70%
- parafina

METODOLOGIA

 Preparar el agar SPS 60 ml

 Preparar 290 ml de solución fisiológica

 Limpiar el mesón y las manos con desinfectante y alcohol

 Esterilizar todo el material, cuchara, pipetas, probeta, agar, sol. Fisiológica y
parafina en el autoclave por 15 min. a 121°C
 Verter 10ml de agar SPS a cada tubo
 Con una pipeta de 10 ml pipetear a cada tubo 9 ml y rotular -2, -3, -4, -5
respectivamente
 Homogenizar la muestra dentro la bolsa, pesar 25 gr de muestra en una bolsa
de Stomacher con una cuchara cerca del mechero.
 Añadir 225 ml de la solución fisiológica a la muestra previamente antes dejar
enfriar a 40°C y homogenizar, esa será la muestra madre (solución -1), dejar
reposar
 Rotulamos -1, -2, -3 y -4 en los tubos con agar respectivamente
 Dejar enfriar el agar a 50 – 60 °C
 Cerca del mechero pipeteamos 2ml de la solución madre (solución-1)
agregamos 1ml al tubo -2, el otro verter al tubo con agar desde el fondo del
tubo hacia arriba ir soltando los 1ml poco a poco uniformemente y desechamos
la pipeta
 Realizar el mismo procedimiento hasta el tubo -4
  Después verter la parafina a cada tubo con agar cerca de 1 cm de altura sin
agitar mucho
 Incubar en un recipiente donde no exista la presencia de aire a 35 ± 2°C por 48
hrs (ayudarnos con una vela)
 Abrir el recipiente, realizar el recuento de colonias y hacer los resultados

DATOS, CÁLCULOS Y RESULTADOS

Datos.-

Parámetro: CLOSTRIDIUM Rango: 15 – 150 colonias

Medio: SPS Muestra: miel de abeja

-1 -2 -3 -4

0 0 0 0

Resultados.-

OBSERVACIONES
 No hubo ningún cambio en el agar dentro las condiciones establecidas

CONCLUSIONES
 El alimento analizado no presenta clostridium, por tanto, es apto para el
consumo humano