CONTENIDO

1. INTRODUCCIÓN ....................................................................................................................... 2
2. OBJETIVOS ............................................................................................................................... 3
Objetivo General ........................................................................................................................... 3
Objetivos Específicos................................................................................................................... 3
3. MARCO TEÓRICO .................................................................................................................... 4
Parámetros importantes en el cultivo de microalgas .............................................................. 4
Iluminación................................................................................................................................. 4
Nutrientes....................................................................................................................................... 5
Sistema de aireación por burbujeo ............................................................................................ 5
Temperatura .................................................................................................................................. 5
4. GENERALIDAD DE CHLORELLA Sp .................................................................................. 6
5. ESTERILIZACIÓN DE LOS MATERIALES USADOS EN EL CULTIVO ........................ 6
Incluir diagrama del método........................................................................................................ 6
6. CONDICIONES Y PREPARACIÓN DEL CULTIVO ............................................................ 8
7. CURVA DE CALIBRACIÓN ABSORBANCIA (ASB) EN FUNCIÓN DE LA
CONCENTRACIÓN ................................................................................................................... 9
8. CURVA DE CALIBRACIÓN ABSORBANCIA EN FUNCIÓN DEL NÚMERO DE
CÉLULAS ................................................................................................................................. 13
9. CURVA DE CRECIMIENTO .................................................................................................. 16
ANÁLISIS DE LAS CURVAS DE CRECIMIENTO PARA LA CHLORELLA Sp ............ 17
Fases de desarrollo del cultivo .................................................... ¡Error! Marcador no definido.
Tasa de crecimiento especifica ................................................... ¡Error! Marcador no definido.
10. CONFIGURACIÓN DEL DISEÑO DEL FOTOBIORREACTOR ...................................... 23
Adaptación en la tapa del tanque cilíndrico y sistema de iluminación. .............................. 25
Sistema de difusores ................................................................................................................. 26
Sistema de administración de CO2 a través de aireación: ................................................... 27
Esterilización del Fotobiorreactor ............................................................................................. 27
Traspaso del medio al tanque acrílico .................................................................................... 27
Disposición de los Sensores en el Fotobiorreactor ............................................................... 28
11. INSTRUMENTACIÓN Y CONTROL DEL FOTOBIOREACTOR ..................................... 30
Control ON-OFF ......................................................................................................................... 30
Sistema de adquisición de datos ............................................................................................. 31
12. INSTRUMENTACIÓN ............................................................................................................. 31
Sensor de temperatura LM35DZ.............................................................................................. 31
Sensor de luminosidad TSL2561 ............................................................................................. 32
Sensor de Gases MQ135 .......................................................................................................... 33
Sensor de presión MPX10DP ................................................................................................... 33
Módulo amplificador operacional HX711 ................................................................................ 34
Arduino Mega 2560 (ADK) ........................................................................................................ 35
Shield Data Logger SD para Arduino ...................................................................................... 36
13. SISTEMA DE MONITOREO .................................................................................................. 38
Control de Temperatura ............................................................................................................ 41
Control de Nivel .......................................................................................................................... 42
14. REFERENCIAS ........................................................................................................................ 44

INTRODUCCIÓN

Los avances en biotecnología se han presentado como respuesta a la necesidad

de alternativas limpias (verdes) ante problemas energéticos y de otra índole. Los
cultivos con microalgas, son un campo de estudio que provee un sinnúmero de
posibilidades, pero que requiere gran dedicación y experimentación para
determinar parámetros de diseño que arrojen los resultados esperados.
El género Chorella ha sido reconocido por estudios por su diversidad en algunos
procesos tales como la generación de una nueva alternativa de energía renovable,
captura de gases de efecto invernadero, como el caso del dióxido de carbono
CO₂, remoción de contaminantes en aguas residuales como nitrógeno y fosforo,
producción de alimentos de origen animal y producción de fertilizantes [1, 2]. Un
fotobiorreactor es un sistema cerrado forzado al máximo en busca de la obtención
del mayor crecimiento de la microalga cultivada, en estos equipos la luz no incide
directamente en las células, sino que atraviesa unas paredes (de acrílico en este
caso) trasparentes para llegar hasta ellas. Los fotobiorreactor se caracterizan por
la medición, regulación y control de parámetros influyentes en el crecimiento del
cultivo.

En este trabajo se presenta la experimentación de la puesta en marcha de un

biorreactor de Chlorella sp con iluminación artificial, medidores de nivel,
concentración de CO2, temperatura e intensidad lumínica, el análisis del
comportamiento del crecimiento del cultivo en función de ciertas variables así
como con un sistema de salida de biomasa que emula el biorreactor en sistema
continuo.

OBJETIVOS

Objetivo General

Determinar experimentalmente la variación de la concentración de biomasa

microalgas en un fotobiorreactor continuo con la velocidad de dilución.

Objetivos Específicos

1. Implementar el uso de luz artificial para el cultivo de microalgas en los

fotobiorreactores continuos de la Universidad del Atlántico.

2. Implementar estrategias de control para las variables críticas en los

fotobiorreactores de la Universidad del Atlántico.

3. Establecer la curva de crecimiento de las microalgas en cultivos por lotes a

escala laboratorio.

4. Determinar la curva de crecimiento de la microalgas en el fotobiorreactor

continuo operado por lote.

5. Evaluar la concentración de microalgas para tres velocidades de dilución en

estado estacionario utilizando los fotobiorreactores continuos con control de
variables e iluminados con luz artificial.
MARCO TEÓRICO

El concepto de microalga incluye a aquellos microorganismos unicelulares

capaces de llevar a cabo la fotosíntesis. Bajo esta categoría quedan agrupadas
tanto las cianobacterias (conocidas tradicionalmente como algas verdeazuladas)
así como las algas eucariotas (tradicionalmente las algas verdes, rojas y doradas).

Las microalgas son generalmente organismos fotoautótrofos, es decir, organismos

que obtienen la energía de la luz proveniente del Sol y se desarrollan a partir de
materia inorgánica. Sin embargo, algunas especies de microalgas son capaces de
crecer empleando la materia orgánica como fuente de energía o de carbono.
Según esto, la producción de microalgas se divide en:

Fotoautótrofa: Las algas obtienen la energía del Sol y el carbono de los

compuestos inorgánicos (sales)

Fotoheterótrofa: Las algas obtienen la energía del Sol y emplean compuestos

orgánicos como fuente de carbono.

Mixotrófica: la fuente de energía es tanto la luz como la materia orgánica. El

carbono lo obtienen, por lo tanto, de compuestos orgánicos y del CO₂.

Heterótrofa: Los compuestos orgánicos proporcionan tanto la energía como la

fuente de carbono de estas algas. Por lo tanto, existen algas que pueden
desarrollarse bajo ausencia de luz. [3]

Parámetros importantes en el cultivo de microalgas

Iluminación

La disponibilidad de luz es el principal factor limitante de los cultivos fotoautótrofos

de microalgas. Teniendo en cuenta que algunos nutrientes se pueden suministrar
en exceso y esperar su consumo para volver a suministrarlo, en el caso de la luz
debe ser suministrada continuamente, debido a que esta no se puede acumular
[4].

La iluminación artificial puede contribuir a una producción continua, pero

generando un coste económico y energético. Es importante considerar el espectro
de absorción de las microalgas cultivadas, previo a la elección de la luz artificial.
Dicho espectro va a depender de los pigmentos con mayor presencia en las
microalgas.

Nutrientes

Entre los principales nutrientes para el desarrollo de las algas están el carbono y
nitrógeno.

Carbono: las microalgas autótrofas pueden emplear como fuente de carbono el

CO₂ presente en la atmosfera o en gases de escape, así como los iones
bicarbonatos (HCO₃⁻). Son capaces de tolerar hasta unas 150000 ppmv de CO₂
en aire de media, aunque hay especies de microalgas como la Chlorella, que han
demostrado que tolerar hasta 400000 ppmv, lo cual puede significar una
interesante alternativa de captura de CO₂.

Nitrógeno: Es uno de los macronutrientes esenciales en el crecimiento de las

microalgas. El contenido en nitrógeno de la biomasa algas se estima entre el 1 –
10%, en función de la disponibilidad y el tipo de fuente de nitrógeno. Las
microalgas pueden tomar el nitrógeno del medio generalmente en forma de urea,
nitrato, nitrito, amonio, nitrógeno gas y óxidos de nitrógeno (comúnmente
identificados como NOx).

Sistema de aireación por burbujeo

Provee agitación que aumenta la eficiencia en el transporte, impidiendo la

sedimentación de las algas y su adherencia a las paredes del reactor, homogeniza
la concentración de nutrientes y otros componentes del medio, así como la
distribución de los gases y la luz.

Temperatura

La temperatura es un factor importante en el crecimiento de las microalgas, debido

a que influye en los coeficientes de velocidad de las reacciones biosintéticas [5].
Pese a que una gran variedad de microalgas son capaces de desarrollarse en un
rango amplio de temperaturas, como la especie Chlorella, que puede crecer entre
5-42°C, todas ellas presentan un rango fuera del cual se ven inhibidas e incluso
mueren.
GENERALIDAD DE CHLORELLA SP

Las microalgas son organismos fotótrofos (logran asimilar el CO₂ mediante un

proceso fotosintético) que poseen una capacidad ficorremediadora (conjunto de
tecnologías que utilizan las plantas para reducir, degradar o
inmovilizar compuestos orgánicos contaminantes) que consiste en la eliminación o
biotransformación de contaminantes de un medio líquido o gaseoso. Estos
compuestos contaminantes son captados por la biomasa algal y pueden ser
recuperados mediante su cosecha. Esta capacidad resulta en un sistema de
cultivo con dos propósitos básicos: eliminación de contaminantes, como lo es el
nitrógeno y producción de biomasa con fines comerciales. [6]
La microalga objeto del estudio es la denominada Chlorella sp., el origen
etimológico del nombre proviene del griego cloros: verde; y del sufijo
diminutivo latino -ela: "pequeño" es un alga verde de forma esférica, de tamaño
aproximado de 2-10 μm de diámetro, la cual crece en forma de células simples.
Pertenece a la división Chlorophyta y a la clase de las Chlorophyceae [7].

Figura 1. Chlorella sp tomada de httpbaninugrahablogger.blogspot.com.co201406chlorella-overview-

information.html

ESTERILIZACIÓN DE LOS MATERIALES USADOS EN EL CULTIVO

Incluir diagrama del método

A fin de que la inoculación se realice en un estado no contaminado, se requiere

que los materiales empleados en el cultivo pasen por un proceso de esterilización.
Los materiales empleados en el cultivo son:
  Frascos de vidrios los cuales contendrán en su interior el cultivo, así como
 Mangueras para la aireación,
 Pipetas para la alimentación del cultivo
 Capilares para mantener la posición del flujo del aire
 Beaker para el traspaso del fluido

Para el proceso de esterilización (1) Se realiza un lavado con agua y jabón, para
ingresar las mangueras, capilares, beaker al autoclave deben ser envueltos en
papel aluminio, los frascos son preparados con 2,6L de agua más el componente
según sea el caso, (Nutrifoliar, Nutrifoliar-Glicerol, Nutrifoliar y Glicerol) y es
sellado con papel aluminio. (2) Se ingresa el utensilio al autoclave (según la
capacidad de este), (3) cuando la presión alcanza los 5psi se abre la válvula de
escape a fin de liberar el aire contenido y que solo permanezca el vapor de agua.
(4) Se mantienen las condiciones del autoclave a 121°C por 15 minutos y (5)
luego se saca del autoclave, se debe tener precaución aquí por el riesgo de
quemaduras por contacto con superficies calientes.

Figura 2. Diagrama proceso de esterilización

 Figura 3. Equipo de autoclave para la esterilización Figura 4. Recipiente esterilizado para los cultivos

CONDICIONES Y PREPARACIÓN DEL CULTIVO

El cultivo puro de la cepa (madre) de Chlorella sp suministrado por el Laboratorio

de Biotecnología de Microalgas de la Universidad del Atlántico. La cepa madre
tenía una absorbancia de 2,875. En la preparación del cultivo se empleó un
fertilizante comercial llamado Nutrifoliar. Se prepara una solución con Nutrifoliar
con 35ml y 500ml de agua destilada, para obtener una concentración de 1M. En
dos frascos (previamente esterilizados) se adicionan 10,4 ml de la solución de
Nutrifoliar 1M para un volumen de 2,5l, obteniendo una concentración final de
4mM de Nitrógeno, estos uno denominado Nutrifoliar y otro de Nutrifoliar de
reserva. En otros dos frascos, a uno se le adiciona 10,4ml de Nutrifoliar y glicerol
con un volumen de ¿?, y tal volumen de glicerol para obtener una concentración
de 4mM. Se inoculó la cepa madre (100ml a cada uno), los cuatro medios
distintos presentaron la siguiente absorbancia: Nutrifoliar 0.115, Nutrifoliar +
Glicerol 0.144, Nutrifoliar (reserva) 0,093 y Glicerol 0,131.
Todo este proceso es realizado en un ambiente estéril para evitar la
contaminación del cultivo. Los las microalgas se cultivaron desde el 19 de
septiembre de 2016 hasta el 21 de octubre del mismo año, 33 días, con
temperaturas oscilantes, debido a que la temperatura del laboratorio no se puede
controlar por diversas razones, se estima que la temperatura de cultivo fue 25±2
°C. La agitación y la aireación suministrada por una bomba de aire resun air 8000,
al sistema de le suministra luz visible 24 horas (exceptuando los casos de
interrupciones en el suministro eléctrico del alma mater) generados por dos
lámparas de 32 Watt. La alimentación se suministró cada 15 días, que consistía
en 10ml de nutrifoliar. Se hizo un nuevo cultivo basado en el de mejor
rendimiento, es decir el cultivo con medio de Nutrifoliar.

Figura 5. Preparación de los distintos medios utilizados.

CURVA DE CALIBRACIÓN ABSORBANCIA (ASB) EN FUNCIÓN DE LA

CONCENTRACIÓN

Para conocer el crecimiento del cultivo es necesario cuantificar la concentración,

de los distintos escenarios propuesto en el ensayo, lo cual se realiza de manera
indirecta a través de la medición de la absorbancia. Para esto se elabora una
curva de calibración que permite relacionar la absorbancia y la concentración.
El proceso de la construcción de la curva de calibración es el siguiente:

1. Determinación de la longitud de onda. Se determinó la longitud de onda en

la que se obtiene una mayor absorbancia con el objetivo de utilizarla en las
mediciones posteriores. Lo anterior se logra haciendo un barrido en el
espectrofotómetro UV-VIS evolution 60S, utilizando un blanco de medio de
cultivo y 2 ml de la cultivo de microalga.
 El barrido se realiza en un rango entre 400-900nm. Esto resulta en que la
Chlorella sp presenta dos picos de absorción en el espectro visible, uno entre
longitudes de onda de 400-500nm (luz azul) y otro entre 600-700nm (luz roja)

Figura 6. Barrido Chlorella sp rango 400-900nm

Tomando como referencia el pico entre 600-700nm (zona roja), se observa que
este posee un máximo de absorción a 683.7 nm, longitud de onda que será
utilizada como parámetro para la medición de la absorbancia en el desarrollo
del trabajoFuente especificada no válida..

2. Preparación de diluciones en serie de la cepa madre. Partiendo de 10ml de

la cepa madre en el tubo de ensayo #1 (T1), se extraen 5ml, que se adicionan
a un segundo tubo de ensayo, al tubo de ensayo #2 (T2) se le adicionan 5 ml
de una solución de Nutrifoliar de 4nM, completando un 10ml, posteriormente se
extraen 5ml del tubo de ensayo #2 y se depositan en el tubo de ensayo #3
(T3). El procedimiento se repitió hasta completar seis disoluciones añadiendo
respectivamente un volumen de 5ml de la solución de Nutrifoliar 4nm (N).
 Antes de cada disolución se realizaba agitación por inversión a fin de
homogenizar la muestra.

Figura 7. Preparación de disoluciones en serie de la cepa madre

3. Medición de la absorbancia. Se toman muestras de los 6 tubos de ensayo

para medir la absorbancia en el espectrofotómetro UV-VIS evolution 60s.

4. Medición de la cepa en base húmeda. Se toman volúmenes de 2.5, 5, 7,5 y

10ml de la sepa madre. Se depositan en cuatro cajas de Petri y se realiza su
pesaje de las cajas de Petri.

5. Medición de la cepa en base seca. Se realiza Se realiza el proceso de

secado, para retirar la humedad de las muestras a en un horno a una
temperatura de 105 °C por un periodo de 1 hora. L se pesa por diferencia con
respecto a la base húmeda. La diferencia obtenida corresponde al peso de
microalgas contenidas en el respectivo volumen. Con estos datos se obtiene la
concentración de microalgas expresada en gramos de microalga por litros de
cultivo. (Tabla 2)

Tabla 1. Absorbancia medida para las distintas muestras.

Longitud de Onda(λ)= 683,7A

No. Muestra. Corrida #1 Corrida #2 Corrida #3 Promedio
1 2,417 2,594 2,648 2,553
 2 1,203 1,501 1,577 1,427
3 0,689 0,716 0,76 0,721666667
4 0,367 0,344 0,362 0,357666667
5 0,132 0,169 0,163 0,154666667

Tabla 2. Determinación concentración en base seca de la cepa madre

Base seca de la madre

volumen masa masa Petri masa Concentración concentración
[ml] Petri [g] + alga [g] alga [g] [g/ml] [g/l]
Caja de Petri 1 2,5 93,9843 93,9891 0,0048 0,00192 1,92
Caja de Petri 2 5 95,7226 95,7321 0,0095 0,0019 1,9
Caja de Petri 3 7,5 93,9846 93,9992 0,0146 0,001946667 1,946666667
Caja de Petri 4 10 95,7028 95,722 0,0192 0,00192 1,92
1,921666667

6. Elaboración de la curva de calibración. Asumiendo volúmenes aditivos en

los cálculos, se aplica la relación C1V1=C2V2, y utilizando un factor de dilución
de 1 (paso 1), se generan los valores presentados en la tabla 3 donde se
relaciona la absorbancia con la concentración.

Tabla 3. Datos para la curva de calibración

Concentración
No. muestra Absorbancia
[g/l]
1 2,553 1,921666667
2 1,427 0,960833333
3 0,721666667 0,480416667
4 0,357666667 0,240208333
5 0,154666667 0,120104167
 CALIBRACIÓN ABSORBANCIA EN FUNCIÓN DE LA
CONCENTRACIÓN
1,6
1,4
y = 1,5041774x - 0,0122174
1,2 R² = 0,9995459
Absorbancia

1
0,8
0,6
0,4
0,2
0
0 0,2 0,4 0,6 0,8 1 1,2
Concentración [g/l]

Gráfico 1. Curva de calibración absorbancia en función Concentración [g/L] para longitud de onda de 683.7
nm

A partir del grafico 1 obtenemos la ecuación Y =1,5041774X - 0,01222. Donde Y

representa la absorbancia y X la concentración de Chlorella sp en g/L. Del gráfico
anterior podemos inferir que la absorbancia y la concentración se correlacionan
linealmente con un coeficiente de determinación R2 =0,999 el cual me indica que
los datos se ajustan a una línea recta. La ecuación determinada con los datos de
la tabla 3 me permitirá obtener los valores de concentración de microalgas
Chlorella sp a partir de la absorbancia medida diariamente y que se utilizara para
realizar la curva de crecimiento.

CURVA DE CALIBRACIÓN ABSORBANCIA EN FUNCIÓN DEL NÚMERO DE

CÉLULAS

Para evaluar la tasa de microalgas es se realiza el conteo de microalgas, de

manera análoga al proceso anterior se realiza una curva de calibración que
relacione la absorbancia medida en el espectrofotómetro y el número de células
presentes (obtenidas por el conteo). Se aplicó el conteo a las tres corridas.
El procedimiento seguido consistió en:
 1. Limpiar con agua destilada de la cámara de Neubauer y el cubre objetos,
este procedimiento debe realizarse de manera cuidadosa.
2. Colocar el cubre objetos sobre la cámara de forma vertical y centrado
3. Llenar la cámara con la micropipeta de 1 μl
4. Realizar el conteo para lo cual llevo la cámara a un microscopio y se enfocó
el cuadro con el ocular 4X y luego se pasó al ocular 40X, después de este
ajuste se les tomo a cada muestra una fotografía para realizar el respectico
conteo.
Se delimita previamente la región de estudio a contar, esta se encuentra formada
por 6 líneas verticales (tres a la derecha y tres a la izquierda) y dos líneas
horizontales una en la región superior y otra en la región inferior, dando la
formación de un polígono regular con sus lados fijos este contiene 16 cuadros
internos, donde se contará los puntos asimétricos presentes en ella desde la parte
superior izquierda hasta la derecha como muestra la figura 8.

Figura 8. Método de conteo

Se realizaron tres conteos por fotos para corroborar la veracidad de los resultados
y se realizó una comparación de ellos, posteriormente se realizó un promedio de
los resultados obtenidos.
 Figura 9. Fotografías para el conteo

Tabla 4. Datos curva de calibración absorbancia [ABS] en función Concentración [ N°cel/ml] .

Longitud de Onda(λ)= 683,7ª Conteo de Microalgas

No. Corrida Corrida Corrida Concentración
absorbancia Dilución Promedio
Muestra. No.1 No.2 No.3 [cel/ml]
1 2,553 0,4687 510 504 503 505,666667 674294,1469
2 1,427 0,4687 300 299 294 297,666667 396931,2282
3 0,721666667 0,4687 160 157 164 160,333333 213800,5832
4 0,357666667 0,4687 99 95 97 97 129347,1304
5 0,154666667 0,4687 56 60 55 57 76008,10753

5. Teniendo el conteo de algas de cada una de las muestras se debe calcular

la concentración de cada una de las muestras. Para determinar la
concentración de las muestras se utilizará la siguiente formula:
 6. Con la concentración (# cel/ml) de cada una de las muestras y la
absorbancia obtenida con el espectrofotómetro ultravioleta UV-VIS se
procede a la construcción de la curva de calibración.

CALIBRACIÓN ABSORBANCIA EN FUNCIÓN DEL NÚMERO

DE CELULAS
4,5
4
3,5
Absorbancia

3
2,5
y = 4E-06x - 0,1511
2 R² = 0,9999
1,5
1
0,5
0
0 100000 200000 300000 400000 500000 600000 700000 800000
Concentración

Gráfico. 1. Curva de calibración absorbancia en función N°cel/ml para una longitud de onda de 683.7 nm

7. Con la curva construida se obtiene la ecuación Y=4e-6X-0.1511; que

representa el comportamiento de la concentración de las muestras, por lo
general este comportamiento sigue el de una línea recta.

CURVA DE CRECIMIENTO

Para el análisis del crecimiento de este cultivo, así como el de cualquier otro
cultivo de microalgas, es necesario contar con una expresión de la cinética de su
crecimiento de la especie de interés en un volumen determinado. A través de
dicha expresión es posible monitorear la producción de microalgas, tu tasa de
crecimiento y el tiempo en que estas se duplican.
Estos nuevos cultivos se alimentaron con 10 ml de Nutrifoliar a 1M para obtener
una concentración 4 mM como se mencionó anteriormente cabe recordar que todo
el proceso de inoculación y alimento se hace en bajo un medio estéril. La
mediciones se realizaron cada 24h, entre la a 1:30pm-2:00pm. Los datos
obtenidos se presentan a continuación:

Tabla 5. Medidas diarias de absorbancia.

Día Mes N N+G Nr G

Medida 1 19 Septiembre 0,115 0,144 0,093 0,131
Medida 2 21 Septiembre 0,576 0,605 0,532 0,429
Medida 3 22 Septiembre 0,768 0,802 0,652 0,421
Medida 4 23 Septiembre 0,932 0,987 0,404
Medida 5 26 Septiembre 1,533 1,125 1,295 0,498
Medida 6 28 Septiembre 1,7 1,045 1,449 0,45675
Medida 7 29 Septiembre 1,944 1,0754 1,687 0,5
Medida 8 30 Septiembre 2,06 1,112 1,757 0,513
Medida 9 3 Octubre 2,409 0,488 2,109 0,549
Medida 10 4 Octubre 2,567 0,851 2,249 0,557
Medida 11 5 Octubre 2,6926 0,910667 2,294333 0,573
Medida 12 10 Octubre 2,8526 2,51825 3,1074 0,753
Medida 13 12 Octubre 2,5665 2,469 0,735
Medida 14 13 Octubre 2,276 2,131 0,712
Medida 15 14 Octubre 2,079 1,715 0,692
Medida 16 18 Octubre 1,711 1,879 0,745
Medida 17 19 Octubre 1,579 1,8465 0,722
Medida 18 20 Octubre 1,802 2,141 0,726
Medida 19 21 Octubre 1,95 2,469 0,73

ANÁLISIS DE LAS CURVAS DE CRECIMIENTO PARA LA CHLORELLA Sp

A partir de los datos que suministra la tabla 5 y las ecuaciones obtenidas de las
curvas de calibración se puede determinar la relación entre absorbancia diaria, en
número de células y la concentración. A continuación, se presentan los gráficos
para la curva de crecimiento de la microalga en los tres cultivos, tomando como
criterios de crecimiento la concentración en base seca, absorbancia y conteo
celular, para así determinar la cinética de crecimiento y las fases de desarrollo del
cultivo.
 COMPORTAMIENTO DE CULTIVOS
3
2,8
2,6
2,4
2,2
2
Adsorbancia

1,8
1,6
Nutrifoliar
1,4
1,2 Nutrifoliar + Glicerol
1 Glicerol
0,8
0,6
0,4
0,2
0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10111213141516171819202122232425
Tiempo (días)

Gráfica 3. Curvas de crecimiento de en los medios de Nutrifoliar, Nutrifoliar + Glicerol y Glicerol.

En la Grfica 3 se observa el comportamiento de los cultivos de Chlorella sp, donde

se infiere que el de mejor rendimiento es el cultivo en medio de Nutrifoliar ya que
presenta todas las fases de manera clara, mayor producción de biomasa y un
periodo de tiempo manejable. Por otra parte, el cultivo en Nutrifoliar + Glicerol
presenta una menor cantidad de biomasa producida aunque la fase de estabilidad
es visible, por último el cultivo en Glicerol presentó el peor comportamiento con
una baja producción de biomasa en corto tiempo y muerte.

A continuación se muestra a detalle el comportamiento del cultivo con Nutrifoliar,

el cual fue elegido para el montaje del Biorreactor, dada sus características.
 CURVA DE CRECIMIENTO EN FUNCIÓN DE LA
CONCENTRACIÓN
2
1,8
1,6
Concentración (g/L)

1,4
1,2
1
0,8
0,6
0,4
0,2
0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25
Tiempo (días)

Gráfica 4. Curva de crecimiento de Chlorella sp en funcion de la concentración.

CURVA DE CRECIMIENTO EN FUNCIÓN DE LA ABSORBANCIA

3
2,7
2,4
2,1
Adsorbancia

1,8
1,5
1,2
0,9
0,6
0,3
0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25
Tiempo (días)

Gráfica 5. Curva de crecimiento de Chlorella sp en dunción de la adsorbancia.

 CURVA DE CRECIMIENTO EN FUNCIÓN DEL NUMERO DE
CELULAS
800000
700000
600000
Número de celulas

500000
400000
300000
200000
100000
0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25
Tiempo (días)

Gráfica 6. Curva de crecimiento de Chlorella sp en función del número de células.

Fases de desarrollo del cultivo

Fase de adaptación o inducción:

En esta etapa, justo después de la inoculación las células crecen y se dividen
cada vez más deprisa conforme se van aclimatando a las condiciones del cultivo,
por esto es la etapa más sensible a cambios en el medio. En la figura X se aprecia
el crecimiento de las micro algas en términos de la concentración en base seca, y
se puede determinar que esta fase está comprendida del día 1 al 3, iniciando con
una concentración de 0,06858 g/L hasta 0,37622 g/L , donde posteriormente se da
inicio a la etapa exponencial.

Fase de crecimiento exponencial:

Una vez las algas se adaptan a las condiciones, la velocidad de división celular se
acelera y el crecimiento del número de células en el cultivo se hace exponencial.
En la figura X se determina que esta fase esta comprendida del dia 4 al 13 con
una concentración de 0,50435 g/L y 1,78866 g/L respectivamente.

Fase de declinación relativa de crecimiento:

La luz y los nutrientes son limitantes para la velocidad de división celular. Al llegar
al punto máximo de la etapa de crecimiento exponencial una celula se sobrepone
a otra reduciendo así la cantidad de luz del medio y la disponibilidad de nutrientes,
lo que da paso a una declinación relativa de crecimiento.

Fase estacionaria:
Se presenta un equilibrio entre la concentración máxima de biomasa en el cultivo y
las pérdidas del mismo debido a su degradación. Esta fase no se aprecia muy bien
en la curva de crecimiento.

Fase de muerte:
En esta etapa la tasa de muerte de las células supera la de crecimiento. Se
evidencia en esta fase que la luminosidad y los nutrientes no son suficientes para
la cantidad de biomasa presente. En la figura X donde se observa la curva de
crecimiento en función de la medida de absorbancia se puede notar que en esta
etapa el valor medido es menor. Esta fase se observa desde el día 16 donde la
concentración es de 1,89545 g/L.

Tasa de crecimiento especifica

En la fase exponencial de crecimiento representa la tasa de crecimiento máxima,
si X representa la concentración de biomasa en un reactor discontinuo, la
acumulación de biomasa con el tiempo (dX/dt) viene dado por la tasa de
crecimiento (rx) menos la tasa de muerte (rd):

Remplazando:

Como se sabe que en la fase de crecimiento exponencial la tasa de crecimiento de

biomansa es mucho mayor que la de muerte te tiene que , por tanto:

Al resolver la ecuación diferencial se tiene que:

( ) ( )
A partir de la ecuación anterior se determina la tasa de crecimiento , en donde al
linealizar los datos de la fase exponencial de crecimiento, se obtiene una ecuación
lineal, en la cual la pendiente 0,1504 dia-1 corresponde al valor de la tasa de
crecimiento.

1
0,8
0,6
0,4
ln(Concentración)

0,2
0
-0,2 0 2 4 6 8 10 12 14

-0,4
-0,6
-0,8
-1
-1,2
Tiempo (días)

Para verificación del valor de la tasa de crecimiento se grafican los datos de

concentración vs el tiempo y se obtiene una ecuación exponencial con una tasa de
crecimiento de 0,1504 dia-1.
 y = 0,2998e0,1504x
concentración vs. tiempo R² = 0,9188
2,5

1,5

0,5

0
0 2 4 6 8 10 12 14

El tiempo de duplicación se obtuvo una vez calculado el valor de mediante la

siguiente formula
( )

Remplazando en valor de la tasa de crecimiento, se tiene que:

( )

Donde el tiempo de duplicación del cultivo es de 4,608 días.

CONFIGURACIÓN DEL DISEÑO DEL FOTOBIORREACTOR

El tanque de trabajo está diseñado en material acrílico transparente y es de forma

cilíndrica para mejorar las condiciones hidrodinámicas y la incidencia de la luz
sobre el sistema. Posee una altura de 90 cm y un diámetro de 30 cm.
En la parte superior, sobre la tapa del tanque, hay una abertura en el centro, sobre
la que yace una barra en acrílico de 60cm que permite introducir una lámpara y la
aísla del medio húmedo.

Entretanto, en la parte inferior del reactor, se adaptó un gotero para regular la

salida de la biomasa y poder recolectar las muestras, las cuales diariamente se les
mide la absorbancia, la cual permite determinar la curva de crecimiento en el
biofotorreactor.

El tanque esta soportado sobre una base de hierro cuadrada con unas
dimensiones tanto de ancho como de alto de 50 cm, la cual tiene barras ubicadas
lateralmente donde reposan lámparas con efectos de suministrar luz permanente
al cultivo de algas.

En general, el tanque conserva la estructura diseñada por el anterior grupo, en la

que se tiene un sistema de cuatro difusores que permiten que el aire suministrado
a las microalgas sea distribuido uniformemente y permita su constante mezclado.

Figura 10. Vista lateral y frontal de la base que soporta al biorreactor

 Figura 11. Vista frontal y lateral del biorreactor

Sistema de iluminación

La iluminación del Fotobiorreactor se basa en el uso de cinco lámparas Led que

inciden de manera constante sobre el biorreactor, durante las 24 horas del día
(omitiendo las fallas técnicas presentadas por el servicio de energía en las
instalaciones de la Universidad del Atlántico). Como ya se mencionó en el inciso
anterior, en el centro de la tapa del tanque se hizo una abertura y se incrustó un
tubo de acrílico de sección cuadrada de 60 cm de largo y 3,5 cm de ancho para la
posterior introducción de una lámpara marca Philips, permitiendo así, que la luz se
distribuyera de manera uniforme, desde el interior del tanque. Así mismo, se
colocaron otras cuatro lámparas ubicadas en cada una de las esquinas de la base
cuadrada que soporta al tanque y que apuntan hacia el centro, permitiendo
también, la iluminación directa del tanque desde el exterior.

Este diseño, se conserva del montaje anterior, sin embargo, se utilizaron desde
cableado, mejoramiento de los soportes y lámparas nuevas en busca de optimizar
el sistema de alumbrado. También se adaptó un balasto el cuál es un aparato que
sirve para mantener estable y limitar la intensidad de la corriente suministrada a
las lámparas y alcanza a soportar un voltaje de 120 hasta 277 voltios para evitar
que éstas se quemen debido a las irregularidades que puedan haber en el sistema
eléctrico por daños o por cortes constantes en el abastecimiento de energía.
 Figura 12. Biorreactor con las lámparas Philips adaptadas.

Sistema de difusores

En el biorreactor utilizado en este proceso (biorreactor de columna de burbujeo), la

inyección del aire es un factor importante ya que además de suministrar el CO 2
que es la fuente principal de carbono para el crecimiento celular, sirve para el
mezclado que requiere la chorella sp; Ambos parámetros son importantes para el
biofotorreactor.

Los difusores conservaron su ubicación en la parte inferior del biorreactor ya que

permite así una mejor distribución del aire hacia todas las zonas del biorreactor. La
inyección de aire a partir de los cuatro difusores permite la distribución y
transferencia de los nutrientes, conservando homogeneización de las condiciones
de las microalgas en el interior del tanque.
Sistema de administración de CO2 a través de aireación:

El sistema de aireación está constituido por las mangueras, los cuatro difusores y
el compresor cuyas especificaciones son:
571 GPH, 120 voltios, 0,22 amperios y 20 watts.

A la salida del extremo opuesto de la manguera que está conectada al compresor

ingresa por la parte superior del biorreactor por una entrada circular y se conecta
con un divisor de aire de 6 salidas de ¼ de pulgada de diámetro, de esa forma
entra el aire al biorreactor. Para regular el flujo de aire que distribuyen los
difusores se colocó un filtro de algodón a la entrada del compresor, con la finalidad
de evitar la infiltración de componentes contaminantes al tanque y por
consiguiente patógenos que pudieran afectar a las microalgas.

Esterilización del Fotobiorreactor

Para llevar a cabo la esterilización se realizaron los siguientes pasos:

1. Se hizo un lavado con detergente líquido, hipoclorito y agua del grifo en

varias repeticiones.

2. Se llenó el tanque con agua hasta una altura aproximada de 15cm tomando
como punto referente la base del fotobiorreactor, se calentó,
implementando una tetera, hasta llegar a una temperatura aproximada a su
punto de ebullición, para que el vapor que ascendiera bajara por las
paredes del fotobiorreactor y así matar los microorganismos presentes.

3. Las mangueras, y equipamiento externo al tanque se esterilizaron en un

autoclave.

Traspaso del medio al tanque acrílico

Es importante tener el menor contacto posible entre el cultivo y el aire circundante

del recinto el cual contiene muchas impurezas, esporas y en general
microorganismos que pueden afectar la vitalidad de las algas, entonces, bajo esas
circunstancias la idea era evitar la contaminación del cultivo. Para ello fue
necesario esterilizar el suelo de la zona con hipoclorito y alcohol en un perímetro
de 3 metros cuadrados y se utilizaron unos mecheros de alcohol para esterilizar el
aire; y una vez se fue a adicionar el cultivo al fotobiorreactor se hizo despacio y
con mucho cuidado para evitar que chocaran con medio presente.

Figura 13. Mechero implementado

Disposición de los Sensores en el Fotobiorreactor

Para llevar a cabo un registro de datos de las variables a considerar pertinentes

para el crecimiento de las microalgas, se utilizaron 4 sensores fijados de forma
estratégica en el fotobiorreactor (sensor de luz, nivel de líquido, de dióxido de
carbono y de temperatura).

El sensor de luz (1) se encuentra ubicado en el lado externo - posterior del tanque
donde es perceptible a la luz proveniente de las cuatro lámparas dispuestas
alrededor del fotobiorreactor; el sensor de concentración de CO 2 (2), se encuentra
en la parte superior del tanque y en contacto con el medio a través de un pequeño
orificio en la tapa del fotobiorreactor; el sensor de nivel (3) se ubica en la parte
inferior de la tapa del fotobiorreactor, y se encuentra conectado a una sonda que
se introdujo a la parte media de éste; el sensor de temperatura (4) fue introducido
dentro en la parte media inferior de la pared del tanque para que estuviese en
contacto con el medio y así monitorear los posibles cambios de temperatura del
cultivo en crecimiento. En la Figura 14 se evidencia la localización de cada uno de
los sensores implementados.
 Figura 14. Disposición de los sensores en el fotobiorreactor y zona oscura.

El sensor de luminosidad TSL2561 es un sensor digital avanzado, que permite

cálculos exactos de Lux, se puede configurar a diferentes ganancias/tiempo para
detectar rango de luz de 0.1 a 65536 lux. El rango de lux artificial aportado por las
lámparas en el fotobiorreactor se encuentra dentro de este rango, por lo que se
justifica el uso de este tipo de sensor, asimismo, las condiciones de ambiente y
operación son adecuadas para su utilización. El sensor de temperatura
seleccionado fue el transistor LM35DZ, dado que es un sensor resistente a la
oxidación, económico y además cuenta con buenas mediciones de temperaturas y
alta precisión especialmente dentro del rango en el que trabajó el fotobiorreactor
en el cual la temperatura del medio normalmente no excedía los 33 grados
centígrados. El sensor de presión MPX10DP, está configurado de tal manera que
registra el nivel de vacío dentro del tanque a partir de un diferencial de presión en
éste tomando como referencia la presión atmosférica y posteriormente la presión
ejercida por altura de líquido, a través de una sonda introducida en la parte media
de la pared del fotobiorreactor. Es importante resaltar que aunque se cuenta con
un sistema de burbujeo constante, este no incide de forma significativa en las
lecturas de dicho sensor. A partir del sensor de gases MQ135 se obtienen los
mediciones concernientes a la concentración de dióxido de carbono (CO 2) dentro
del medio en unidades de partes por millón (ppm).

Por otro lado, se dispuso de una zona oscura (5) para emular el ciclo nocturno de
las microalgas en el medio, para ello se utilizó una banda hecha en material Foami
(Etilvinilacetato o E.V.A), de color negro y con dimensiones de 15 cm de alto y una
circunferencia de 115 cm; esta se ubicó en la parte inferior del fotobiorreactor. El
periodo de exposición a la luz al que es sometido el cultivo es importante para el
crecimiento y el metabolismo de las microalgas debido a que en la fotosíntesis que
éstas llevan a cabo, ocurren reacciones en entornos de luz y de oscuridad para la
producción de biomasa y absorción de CO2.

INSTRUMENTACIÓN Y CONTROL DEL FOTOBIOREACTOR

Los reactores de columna de burbuja son fotobiorreactores de columna sencilla sin

partición interna. Las burbujas se elevan a través de difusoras y se dispersan a su
debido tiempo con el tamaño de burbujas decreciente y finalmente se explotan
completamente en el líquido. Estos reactores son de bajo coste ya que carecen de
complejidad de las partes del instrumento, así como proporcionan una
transferencia de calor y masa relativamente satisfactoria [8].

El papel del sistema de control en el fotobiorreactor es facilitar el funcionamiento

del reactor y suprimir la fluctuación del medio ambiente. El cultivo al aire libre
tiende a tener condiciones ambientales fluctuantes tales como temperatura,
irradiancia y contaminación. El funcionamiento del sistema de control depende del
número, así como del tipo de las variables controladas y manipuladas [9].
Las variables importantes para mantener los valores óptimos incluyen la
temperatura, la concentración de CO2, la alimentación del sustrato para el modo
de funcionamiento continuo y semicontinuo, la intensidad y frecuencia de la
iluminación y nivel en el biorreactor.

Control ON-OFF

Este tipo de control puede ser considerado como un control discontinuo o sea un
control donde el elemento final puede tomar solamente dos posiciones, activo
(ON) o desactivo (OFF). En el control ON-OFF la variable manipulada se cambia
de forma brusca entre su valor máximo y mínimo o viceversa, dependiendo si la
variable controlada es mayor o menor que el punto de ajuste. Generalmente, el
valor mínimo de la variable manipulada es el de cero (OFF) [10].

Sistema de adquisición de datos

Las aplicaciones en tiempo real (ATR) son aquellas que interaccionan

rápidamente con el entorno físico y responden a estímulos dentro de un plazo
determinado (generalmente muy corto). La activación de estos estímulos se puede
hacer de manera periódica (intervalos regulares) o aperiódica (responde a
sucesos determinados) con plazos de respuesta absolutos (tiempo límite para
terminar) o relativos (intervalo desde la activación). Por otro lado una característica
esencial de los sistemas en tiempo real es que se deben diferenciar en dos tipos:
Determinísticos y no Determinísticos [11].

En nuestro caso, que tenemos un sistema de adquisición de datos con un control

On/ Off, el sistema en tiempo real para el registro de datos es de tipo
determinístico ya que para cada estado y cada conjunto de entradas, se quiere
determinar un único conjunto de salidas y el próximo estado del sistema.

INSTRUMENTACIÓN

El Biorreactor está compuesto por cuatro sensores entre los que se incluyen:
Sensor de temperatura, Sensor de luminosidad, Sensor de CO 2 y Sensor de
presión (nivel). Adicionalmente cuenta con un sistema de adquisición de datos
adaptado a Arduino para el registro de mediciones reportados por los sensores.
Para el funcionamiento de este sistema se utilizaron otros instrumentos
electrónicos integrados para el diseño del sistema de control.

A continuación se describen las características generales de cada sensor y de los

instrumentos utilizados para el sistema de adquisición de datos:

Sensor de temperatura LM35DZ

El LM35DZ es un sensor de temperatura con una precisión calibrada de 0.5 ºC. Su

rango de medición abarca desde -55 °C hasta 150 °C [12]. La salida es lineal y
cada grado Celsius equivale a 10 mV, por lo tanto:
150 ºC = 1500 mV
-55 ºC = -550 mV

Opera de 4v a 30v.

Características relevantes:

 Está calibrado directamente en grados Celsius.

 La tensión de salida es proporcional a la temperatura.
 Tiene una precisión garantizada en el rango de 0.5 °C a 25 °C.
 Baja impedancia de salida.
 Baja corriente de alimentación (60 μA).

El LM35 no requiere de circuitos adicionales para calibrarlo externamente. La baja

impedancia de salida, su salida lineal y su precisa calibración hace posible que
éste integrado sea instalado fácilmente en un circuito de control. Debido a su baja
corriente de alimentación se produce un efecto de auto calentamiento muy
reducido. Se encuentra en diferentes tipos de encapsulado (Figura 1), el más
común es el TO-92, utilizada por transistores de baja potencia.

Figura 15. Sensor LM35

Sensor de luminosidad TSL2561

El sensor de luminosidad (intensidad luminosa) es un sensor de luz digital

avanzado, ideal para usar en una gran cantidad de aplicaciones.

Comparado con las fotoresistencias de bajo costo, éste sensor es mucho más
exacto para medir la iluminación y puede configurarse con diferentes ganancias y
tiempos de adquisición para medir desde 0.1 hasta más de 40000 Luxes en
tiempo real [13].
La parte más interesante es que puede medir intensidad luminosa de luz visible y
de luz infrarroja algo que para la mayoría de los sensores es imposible.

Figura 16. Sensor TSL2561

Sensor de Gases MQ135

Usado en equipos controladores de calidad de aire en edificios/oficinas, ideal para

detectar NH3, NOx, alcohol, benceno, humo, CO2, etc. Rápida respuesta y alta
sensibilidad [14]. Se puede calibrar para cada uno de los compuestos individuales.
Posee dos terminales de salida: Análogo y Digital (TTL).
Voltaje de operación: 5VDC.

Figura 17. Sensor de gases MQ135

Sensor de presión MPX10DP

Sensor de presión piezorresistivo (principio de transductores resistivos) de silicio el

cual proporciona una salida de tensión muy precisa y lineal, la salida diferencial de
voltaje es directamente proporcional a la diferencia de presión aplicada, es decir, a
cualquier cambio en el valor medido se traduce en un cambio de resistencia. Para
llevar a cabo la medición de presión se implementa el puente de Wheatstone,
siendo el circuito de detección para este transductor [15].
Características relevantes:
Tipo de presión: Diferencial
Presión de trabajo: 0kPa de 10 kPa
Tamaño de la conexión: 4.928 mm
La sensibilidad, V/P: 3.5 mV / kPa
Corriente de suministro: 6 mA

Figura 18. Sensor de presión MPX10DP

Módulo amplificador operacional HX711

Este amplificador se basa en el sensor HX711, que consiste en un amplificador y

convertidor analógico a digital (Figura 5) con una precisión de 24 bits
diseñado para sopesar aplicaciones a escala y de control industrial,
proporcionando un excelente rendimiento, alta sensibilidad con una muy buena
velocidad de medición, cuyo principio de funcionamiento es el de convertir los
niveles de tensión medidos (variaciones) de la resistencia (carga), a datos digitales
mediante este circuito de conversión [16].

Este producto es ampliamente utilizado en la industria aeroespacial, mecánica,

eléctrica, química, construcción, medicina y muchos otros campos, que se utiliza
para medir la fuerza, presión, desplazamiento, presión, par, aceleración, entre
otros.

Características relevantes:
Modelo: HX711
Voltaje operacional: 5V
Voltaje de entrada diferencial: ±40mV
Corriente de operación: <10mA
Conversión: 24 Bits
Frecuencia de operación: 80Hz
Interfaz: TTL232 serial

Figura 19. Módulo amplificador operacional HX711

Arduino Mega 2560 (ADK)

El Arduino Mega 2560 es un tablero de microcontrolador basado en el

ATmega2560 (datasheet). Cuenta con 54 pines de entrada / salida digital (de los
cuales 14 se pueden utilizar como salidas PWM), 16 entradas analógicas, 4 UART
(puertos serie de hardware), un oscilador de cristal de 16 MHz, una conexión USB,
una toma de alimentación, una cabecera ICSP y un botón de reinicio [17].

Características relevantes:
Microcontrolador: ATmega2560
Voltaje de funcionamiento: 5V
Voltaje de entrada (recomendado): 7-12V
Tensión de entrada (límite): 6-20V
Pines de E/S digitales: 54
Pines de entrada analógica: 16
Corriente CC por Pin de E/S: 20 mA
Corriente CC para 3.3V Pin: 50 mA
Velocidad de reloj: 16 MHz
Longitud: 101.52 mm
Ancho: 53.3 mm

Figura 20. Arduino Mega 2560 basado en ATmega2560

Shield Data Logger SD para Arduino

La SD Shield para Arduino de Adafruit, que permite grabar datos en una tarjeta SD
en FAT-16 y FAT-32 y leerlos con cualquier plotting o programa de análisis. La SD
Shield incluye un RTC (Real Time Clock) con lo que todos los datos llevarán la
hora exacta a la que fueron obtenidos [18]. Incluye un bloque de reloj de tiempo
real o RTC, cuya finalidad es la de almacenar la información de hora y fecha
reales y proporcionarla cuando el escudo este trabajando automáticamente.

Es compatible con Arduino Uno, sin embargo, en nuestro caso, se realizaron

algunas conexiones de cableado para adaptar la SD Shield con el Arduino Mega.
Además incluye una amplia área de prototipo para el montaje de componentes,
sensores, etc.
 Figura 21. Adafruit data logging SD shield para arduino

Además de todos estos dispositivos anteriormente expuestos, se hizo uso de

varios instrumentos para la implementación del sistema de control en el
biorreactor, tales como:

 Relevador LIMING JQC -3F-1C -12VDC (Accionamiento de bovina 9v). 10A

(5pines)
 Terminales electricos (H - M)
 Jumpers 170 mm F/M, M/M y F/F
 Soldadura eléctrica
 Fusible 1A
 Porta Fusible
 Juego de Abrazaderas - correas de poliuretano (amarres plásticos).
 Pines arduino
 1 Borneras en L
 Adaptador 9V. 1A
 Adaptador 5V. 1A
 Resistencia de 1K
 Manguera crystal 1/8"
 Bisagras 1"Común
 Ventilador 12V
 Interruptor de codillo 2 Posiciones (3 pines)
 Suiche de codillo 3 Posiciones (3 pines)
 Cables multifilamento "para vehículo". C - 22
 LEDS 5V
  Conectores Headers
 Porta pilas triple (AA)
 Plug macho DC
 Monitor LCD2X16
 Card SD 16GB

SISTEMA DE MONITOREO

Arduino es una plataforma de hardware y software libre basada en los chips de la

marca Atmel®. En los últimos años esta plataforma se ha ganado muchos
seguidores debido a un lenguaje de programación de alto nivel basado en C que
permite la programación del microcontrolador de una manera muy sencilla [19].

Una de las ventajas que nos ofrece Arduino es que todos los pines que podemos
utilizar están numerados haciendo así más fácil interactuar con la plataforma y
facilitándonos así la forma de programar. Primero que todo tenemos dos grandes
grupos de pines, los pines digitales y los pines analógicos. Una característica muy
útil, sobretodo, para el control de motores o actuadores son los pines PWM, tienen
la ventaja que pueden ser modulados en frecuencia, de momento nos basta con
saber que con estos pines seremos capaces de sacar voltajes intermedios entre
0V y 5V [19].

En este proyecto se utilizó una placa de Arduino Mega 2560 (ADK) para el diseño
de un sistema de monitoreo de diferentes parámetros en el biorreactor
(temperatura, luminosidad, concentración de CO2 y nivel) junto con el montaje de
la instrumentación. Se realizó un montaje con conexiones de cableado para
adaptar la tarjeta Shield del data logger con el Arduino Mega. El módulo
amplificador HX711, permite amplificar la señal que reporta el sensor de presión,
la cual es una señal en milivoltios y amplificar dicha señal con un valor de
ganancia para que el Arduino Mega registre la señal del sensor en voltios en un
rango de 0 a 5V y lo reporte en la tarjeta SD.

Se utilizaron las librerías disponibles para realizar el enlace a Arduino y realizar la

programación para la adquisición de datos en tiempo real, el código básico de la
tarjeta SD toma los valores de los canales analógicos de la tarjeta Arduino y los
guarda en archivo formato txt, en la tarjeta micro SD.
En la carpeta Códigos_Arduino se encuentran los archivos con la programación
del sensor de temperatura LM35DZ (Archivo Sensor_de_T.ino), sensor de
luminosidad TSL2561 (Archivo Sensor_TSL2561_Lux.ino), MQ135 (Archivo
sensor_mq135.ino), MPX10DP (Archivo Sensor_Mpx10dp.ino). Además, se
encuentra el código en Arduino para registrar en el Data Logger los valores
reportados por los sensores (Archivo Datalogger.ino) y el código para guardar los
datos tabulados en tiempo real en la tarjeta SD (Archivo cardinfo_up.ino). En estos
archivos se incluyen las funciones para la detección de los valores arrojados por
cada sensor, define la función para el registro en tiempo real de las cuatro valores
reportados por los sensores en una sola línea (el tiempo de captura de datos es de
1 segundo) y los pines para el registro de datos en la tarjeta SD.

En caso de riesgo eléctrico, se implementó un sistema como una función

preventiva para cuando no haya fluido eléctrico en el sistema, este pueda seguir
registrando los datos en tiempo real con una fuente de energía alterna. En el
montaje, se cuenta con 6 baterías en series que suministran un diferencial de
voltaje de 9.5V para trabajar el Arduino, la utilización de un relé permite que se
cierre el paso (lazo normalmente abierto) de la corriente alterna del toma y se abre
el paso para la corriente directa de las baterías, Arduino la convierte en corriente
alterna para seguir trabajando sin ningún problema con respecto al registro de
datos en tiempo real.

Calibración del sensor MPX10DP (Nivel)

Para la calibración del senSe tomaron varios valores que arrojaba el sensor en
milivoltios, a medida que se variaba la altura del nivel de agua en el biorreactor

Bueno lo que se hizo fue tomar 2 datos reportados por el datalogger (mayor y
menor registrados) y promediarlos cada vez que se aumentaba el nivel del liquido
0,5 cm para luego hacer la curva de calibración
De 25 cm a 42cm creo que fue que se hicieron las mediciones aquella vez. No sé
si por debajo de ese rango Lawer las hizo también
Los del N, luego del llenado pasados unos 10 segundos se tomaban las
mediciones aleatoriamente porque hasta ese momento era muy variable

Altura mV Altura mV Altura mV

58,5 -2029,296 40,5 510,13 22,5 3054,3
 58 -1958,873 40 570,5 22 3119,2
57,5 -1888,451 39,5 626,8 21,5 3206,2
57 -1818,028 39 712,5 21 3278,4
56,5 -1747,606 38,5 774,2 20,5 3337,6
56 -1677,183 38 853,2 20 3393,7
55,5 -1606,761 37,5 917,4 19,5 3465,5
55 -1536,338 37 982,6 19 3514,8
54,5 -1465,915 36,5 1064,3 18,5 3590,8
54 -1395,493 36 1128,9 18 3670,4
53,5 -1325,07 35,5 1199,8 17,5 3763,8
53 -1254,648 35 1274,1 17 3827,3
52,5 -1184,225 34,5 1345,7 16,5 3893,3
52 -1113,803 34 1412,9 16 3961,2
51,5 -1043,38 33,5 1485,0 15,5 4032,4
51 -972,9577 33 1555,4 15 4101,9
50,5 -902,5352 32,5 1604,6 14,5 4165,6
50 -832,1127 32 1678,8 14 4236,3
49,5 -761,6901 31,5 1748,3 13,5 4301,2
49 -691,2676 31 1817,5 13 4374,4
48,5 -620,8451 30,5 1895,6 12,5 4443,2
48 -550,4225 30 1954,7 12 4511,6
47,5 -480 29,5 2027,5 11,5 4584,7
47 -409,5775 29 2105,5 11 4647,5
46,5 -339,1549 28,5 2183,4 10,5 4718,6
46 -268,7324 28 2262,4 10 4793,2
45,5 -198,3099 27,5 2334,7 9,5 4860,6
45 -127,8873 27 2403,5 9 4914,6
44,5 -57,46479 26,5 2482,5 8,5 4984,4
44 12,957746 26 2550,6 8 5044,3
43,5 83,380282 25,5 2628,9 7,5 5118,6
43 153,80282 25 2710,6 7 5179,7
42,5 229,5 24,5 2777,5 6,5 5250,6
42 288,5 24 2853,7 6 5336,5
41,5 359,4 23,5 2920,3 5,5 5387,5
41 453,5 23 2999,6 5 5471,9
 Calibracion_Sensor_N
45
40
35
30
Nivel (cm)

25
20
15
10
5
0
0 1000 2000 3000 4000 5000 6000
Título del eje

Control de Temperatura

Para el control de temperatura se establece un condicional en la programación de

Arduino, cuando los valores de temperatura superen un valor de 35.0°C se apaga
la lámpara interna que se encuentra en el biorreactor, se escoge la temperatura de
35.0°C ya que a temperaturas superiores se puede ver afectado el crecimiento.
Este control de temperatura se basa teniendo en cuenta la radicación lumínica ya
que dependiendo su intensidad, puede aumentar o disminuir la temperatura en el
biorreactor.

Temperaturas inferiores a 16°C disminuirá la actividad de crecimiento de forma

lenta y progresiva, mientras que a temperaturas superiores a 35°C, son letales
para cierto número de especies. La Chlorella es un género de climas templados
por lo que normalmente se desarrolla a temperaturas entre 25°C y 30°C, en el
caso de la Chlorella vulgaris, a la que se ha logrado cultivar con temperaturas de
hasta 36°C; con una temperatura óptima de 32.4°C [20]. En los datos reportados
mediante la adquisición de datos, en el monitoreo de temperatura se registró una
temperatura mínima de 29.06°C y una máxima de 32.69°C, por tanto el
crecimiento de Chlorella sp en el biorreactor se ha mantenido en un rango de
temperatura que con respecto a la literatura es el rango en que normalmente se
desarrolla el crecimiento de la Chlorella, sin llegar a temperaturas que generen un
lento crecimiento o que generen la muerte de las misma por temperaturas
extremas.
Control de Nivel

El control de nivel en el biorreactor se realiza de manera indirecta mediante la

medición de un diferencial de presión que se puede usar como transmisor de nivel,
ya que el nivel del líquido se refleja como una presión equivalente a la altura del
líquido asociado con la densidad del cultivo, la cual se asume igual a la densidad
del agua. El nivel en el biorreactor se registra con una función de calibración con
ajuste lineal para convertir la señal que reporta el sensor de presión en mili voltios
a una señal de nivel y reportarlo en la SD, ya que para un valor de presión, hay un
nivel específico del biorreactor.
Se establece un control básico de nivel con condicionales en la programación para
la activación de un relé, que a niveles superiores a 16.5cm (altura de vacío del
biorreactor), el relé inicie el llenado con la alimentación para equilibrar el nivel en
biorreactor.

Del sistema de adquisición de datos, se tomaron algunos datos reportados del día
27 de noviembre para mostrar la manera en que los registran los datos guardados
en la tarjeta SD, dichos datos se pueden observar en la siguiente tabla:

Fecha Hora Temperatura Luminosidad Concentración Nivel

CO2
27/11/2016 22:24:07 32.00 C 3918.00 Lux 126.0 ppm(CO2) 17.17 cm
27/11/2016 22:24:09 32.00 C 3918.00 Lux 126.0 ppm(CO2) 17.17 cm
27/11/2016 22:24:10 32.00 C 3932.00 Lux 125.0 ppm(CO2) 17.17 cm
27/11/2016 22:24:12 32.00 C 3918.00 Lux 125.0 ppm(CO2) 17.17 cm
27/11/2016 22:24:14 32.00 C 3875.00 Lux 126.0 ppm(CO2) 17.17 cm
27/11/2016 22:24:16 32.00 C 3918.00 Lux 126.0 ppm(CO2) 17.19 cm
27/11/2016 22:24:17 32.00 C 3918.00 Lux 125.0 ppm(CO2) 17.18 cm
27/11/2016 22:24:19 32.00 C 3903.00 Lux 126.0 ppm(CO2) 17.18 cm
27/11/2016 22:24:21 32.00 C 3889.00 Lux 125.0 ppm(CO2) 17.18 cm
27/11/2016 22:24:23 32.00 C 3903.00 Lux 125.0 ppm(CO2) 17.17 cm
27/11/2016 22:24:25 32.00 C 3932.00 Lux 126.0 ppm(CO2) 17.18 cm
27/11/2016 22:24:26 32.00 C 3861.00 Lux 125.0 ppm(CO2) 17.17 cm
27/11/2016 22:24:28 32.00 C 3875.00 Lux 125.0 ppm(CO2) 17.18 cm
27/11/2016 22:24:30 32.00 C 3889.00 Lux 125.0 ppm(CO2) 17.18 cm
27/11/2016 22:24:32 32.00 C 3889.00 Lux 125.0 ppm(CO2) 17.18 cm
27/11/2016 22:24:33 32.00 C 3903.00 Lux 125.0 ppm(CO2) 17.17 cm
27/11/2016 22:24:35 32.00 C 3918.00 Lux 126.0 ppm(CO2) 17.19 cm
27/11/2016 22:24:37 32.00 C 3903.00 Lux 124.0 ppm(CO2) 17.18 cm
27/11/2016 22:24:39 32.00 C 3875.00 Lux 125.0 ppm(CO2) 17.18 cm
27/11/2016 22:24:41 32.00 C 3875.00 Lux 126.0 ppm(CO2) 17.17 cm
27/11/2016 22:24:42 32.00 C 3875.00 Lux 125.0 ppm(CO2) 17.16 cm
27/11/2016 22:24:44 32.00 C 3889.00 Lux 125.0 ppm(CO2) 17.17 cm
27/11/2016 22:24:46 32.00 C 3889.00 Lux 125.0 ppm(CO2) 17.19 cm
27/11/2016 22:24:48 32.00 C 3903.00 Lux 125.0 ppm(CO2) 17.18 cm
27/11/2016 22:24:49 32.00 C 3903.00 Lux 125.0 ppm(CO2) 17.18 cm
27/11/2016 22:24:51 32.00 C 3875.00 Lux 125.0 ppm(CO2) 17.17 cm
27/11/2016 22:24:53 32.00 C 3875.00 Lux 125.0 ppm(CO2) 17.17 cm
27/11/2016 22:24:55 32.00 C 3875.00 Lux 125.0 ppm(CO2) 17.18 cm
27/11/2016 22:24:56 32.00 C 3875.00 Lux 125.0 ppm(CO2) 17.19 cm
27/11/2016 22:24:58 32.00 C 3875.00 Lux 126.0 ppm(CO2) 17.18 cm
27/11/2016 22:25:00 32.00 C 3875.00 Lux 125.0 ppm(CO2) 17.17 cm
27/11/2016 22:25:02 32.00 C 3918.00 Lux 125.0 ppm(CO2) 17.17 cm
27/11/2016 22:25:04 32.00 C 3903.00 Lux 126.0 ppm(CO2) 17.17 cm
27/11/2016 22:25:05 32.00 C 3875.00 Lux 126.0 ppm(CO2) 17.17 cm
27/11/2016 22:25:07 32.00 C 3875.00 Lux 125.0 ppm(CO2) 17.17 cm
27/11/2016 22:25:09 32.00 C 3889.00 Lux 125.0 ppm(CO2) 17.17 cm

1. Determinar la curva de crecimiento de la microalgas en el fotobiorreactor

continuo operado por lote.

Resultados y discusión en el fotobiorreactor

RECOMENDACIONES

CONCLUSIONES
REFERENCIAS

[1] L. Xin, H. Hong-ying, G. Ke y S. Ying-xue, «Effects of different nitrogen and phosphorus

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[4] Molina y G. , «A study on simultaneous photolimitation and photoinhibition in dense

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para vehículos aéreos no tripulados,» UNIVERSITAT POLITÉCNICA DE CATALUNYA, 2013.

[20] M. A. Sandoval Riofrio, «Diseño, Construcción y puesta en Marca de un Fotobioreactor Piloto

para el Crecimiento de la Microalga Chlorella Sp,» Escuela Politécnica Del Ejército, Sangolquí,
2013.