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MICROBIOLÓGICOS EN LA CUANTIFICACION DE
BACTERIAS COLIFORMES TOTALES Y Escherichia
coli EN JAMONES DE PLAZAS DE MERCADO
2
AGRADECIMIENTOS
por su experiencia y conocimientos siendo una guía constante, por haberme permitido
3
CONTENIDO
pág
1.INTRODUCCIÓN......................................................................................................7
2. JUSTIFICACIÓN ...............................................................................................9
3. OBJETIVOS .............................................................................................10
4.1.1 GENERALIDADES............................................................................................11
AGAR (VRBA)............................................................................................................28
4
NÚMERO MAS PROBABLE (NMP) ........................................................................29
5 MATERIALES Y METODOS..............................................................................31
5.2 MUESTRAS..........................................................................................................32
5.3.3 SIMPLATE......................................................................................................35
6. RESULTADOS........................................................................................................36
7. ANALISIS ESTADÍSTICOS...................................................................................47
8. DISCUSION DE RESULTADOS.........................................................................51
8.1 SIMPLATE............................................................................................................51
8.2 VRBA....................................................................................................................54
8.3 NMP.......................................................................................................................55
9. CONCLUSIONES.................................................................................................62
10. SUGERENCIAS....................................................................................................64
BIBLIOGRAFÍA.........................................................................................................65
5
ANEXOS......................................................................................................................68
6
1. INTRODUCCIÓN
Conkey, Agar EMB, Agar VRBA, Caldo LMX y Agar Fluorocult entre otros. Desde
hace algunos años, se han incluidos sustratos en el medio de cultivo para detectar de
E. coli es un coliforme que ha sido muy estudiado desde hace muchos años debido
bacilo corto gram negativo, habitante natural del intestino de los seres humanos y de
contaminadas. Fermenta la lactosa, por esta razón el medio VRBA (Violeta Rojo Bilis
7
Agar) es útil para identificarla. Su crecimiento óptimo es a 37 °C, Es glucoroxidasa +,
alimentos, entre ellos el agua, ya que existen algunas cepas altamente patógenas,
esta razón, la legislación Colombiana dicta que no debe estar presente en alimentos
como agua potable, y existen unos rangos de tolerancia para ciertos tipos de
alimentos.
0157:H7 vive en el intestino del ganado vacuno que es saludable y puede contaminar
(hamburguesa), porque al ser molida riega los gérmenes en toda la carne. Estos
nuestro país.
8
2. JUSTIFICACIÓN
Dado que E. coli es una bacteria que además de ser indicador de contaminación fecal,
puede llegar a ser altamente patógena y causar inclusive hasta la muerte, y debido a
que los jamones de cerdo son productos de consumo masivo en las plazas de mercado
de Bogotá, este estudio aporta información clave sobre la circulación de esta bacteria
alimentos en estos lugares. Los costos de los alimentos en plazas de mercado son un
poco más bajos que los precios de los supermercados, y debido a la situación
económica de nuestro país, cada vez son más los clientes de plazas de mercado.
alimentos son más sanos si vienen directamente del campo y si tienen menos
mercado; comprar en la plaza de mercado es una tradición. Sin embargo, se sabe que
no son las ideales. Para evaluar estas condiciones higiénicas, es necesario realizar
análisis microbiológicos a los alimentos. Cada día son más los métodos rápidos de
detección que surgen, no solo para E. coli sino también para otras bacterias y
Técnica Colombiana (NTC) 1325 para coliformes totales y E. coli por tres métodos
9
3. OBJETIVOS
3.1 Generales
3.2 Específicos
Simplate.
10
4. MARCO TEORICO
El género Escherichia comprende bacilos rectos cortos, gram negativos, que ocurren
PRUEBA RESULTADO
OXIDASA -
CATALASA +
ROJO METILO +
VOGES PROSKAUER -
CITRATO Usualmente -
NITRATOS +
L-ARABINOS +
MALTOSA +
D-MANITOL +
D-MANOSA +
L-RHAMNOSA +
TREHALOSA +
D-XILOSA +
O-Nitrofenil-β-D- +
Galactopiranosida
H2S -
UREA -
LIPASA -
Tabla 1. Bioquímicas características del genero Escherichia
Ocurren naturalmente como flora normal en la parte baja del intestino de los animales
de sangra caliente.
11
Existen varias cepas de E. coli, y las que contienen enterotoxinas y/o otros
junto son Shigella representa una sola especie genética, en donde las shigelas son
De las cinco especies de este género, E. coli es la especie que generalmente se aísla de
típicamente son indol positivas y lactosa positivas, se han reportado cepas lactosa
12
Figura 1. Escherichia coli. Imágenes tomadas de www.nirgal.net/graphics/e_coli.jpg
(Izq) http://www.nature.com/genomics/images/e_coli_200.jpg (der).
4.1.2 Ecologia
normal del intestino animales de sangre caliente. El tracto intestinal consiste del
intestino delgado y el intestino grueso (figura 2), cada uno de los cuales esta
13
intestinal (lumen), mezcladas con material digestivo. Números de 105-107 células/g
neutro, pero tiene una ligera tendencia a tolerar pH ácido, y puede tolerar algunos pH
14
90 días, y a través de los sistemas de riego con aguas contaminadas es que
operarios o utensilios(12).
4.1.3 Virotipos
Existen cinco clases de Escherichia coli, clasificados con base en los mecanismos de
coli pueden causar una gran variedad de diferentes tipos de enfermedad, incluyendo
septicemia, pneumonia y meningitis (5) Esta versatilidad se debe a que las cepas han
15
E. coli Es el virotipo más nuevo. Causa una forma de diarrea Diarrea persistente
enteroagregativo persistente en niños. Se unen a las células del
(EAGGEC) intestino delgado, no son invasivas y no causan
cambios histológicos. No se adhieren uniformemente
en la superficie de la mucosa; se agregan. Producen
una toxina ST (termoestable) y una toxina tipo
hemolisina
Tabla 2. Clasificación de las cepas de E. coli con base en los mecanismos de
producción de diarrea. (3).
4.1.4 Patogénesis
cuadros diarreicos que se presentan en los viajeros (1). La infección ocurre por lo
general por ingerir aguas y alimentos contaminados, una vez que pasan el pH ácido
del estómago, las bacterias se establecen en la mucosa del intestino delgado. El paso
colonización de la mucosa intestinal. Una vez se adhiere por medio de los pilis
Debido a que los pilis están codificados en plásmidos, sólo aquellas cepas que los
poseen pueden adherirse a las células intestinales, y por ende causar la enfermedad
agua y electrolitos, pero sin efectos invasivos (3). Como no hay respuesta
16
Las cepas ETEC presentan fimbrias con adhesinas especie específicas, que ayudan a
colonización. (5).
Las enterotoxinas que producen son: la toxina termolábil (LT) que tiene un alto peso
por tener un bajo peso molecular y su capacidad antigénica no es tan fuerte (3).
Existen cepas que pueden producir ambos tipos de toxinas, mientras otras solo pueden
producir una de las dos. En la tabla 3 se resumen las características generales de estas
toxinas.
TOXINA GENERALIDADES
LT (Termolábil) Es inactivada a 65˚C por 30 minutos, su peso molecular es de 100,000Da, es
de naturaleza proteica y su modo de acción es estimular la adenilato ciclasa,
lo cual incrementa el AMP cíclico, lo cual genera poros y ocurre pérdida de
electrolitos y agua
ST (Termoestable) Es estable a 65˚C, se inactiva parcialmente a 100˚C por 30 minutos. Su peso
molecular varia entre 4000-5000Da y es un polipéptido poco antigénico.
Estimula la Guanilato cilcasa, lo cual incrementa los niveles de GMP cíclico,
lo cual también genera poros.
Tabla 3. Generalidades de las Toxinas LT y ST de E. coli(3)
Ambas toxinas están formadas por cinco subunidades B, que unen la toxina a los
activa y es sintetizada como un polipéptido que es activado después para formar los
polipéptidos A-1 y A-2 unidos por puentes disulfuro. Las subunidad B está compuesta
por polipéptidos idénticos y su función es transportar a la toxina activa A-1. Una vez
17
acumulación de estos productos, conlleva a un cambio en la función de las células del
disminuida. Esto causa una diarrea liquida abundante, pero como el transporte de
microvellosidades en sus superficies apicales. (5) Las células a las cuales las cepas de
una estructura tipo pedestal bajo las bacterias. Las cepas de EPEC son más invasivas
que ETEC y EaggEC, y causan una respuesta inflamatoria. (5). Por esta razón, los
síntomas asociados son fiebre, vómito, malestar y diarrea con una cantidad
predominante de moco. Los síntomas son causados por la invasión bacteriana de las
Este serotipo se identificó por primera vez en 1982 (3) como causante de brotes y
18
(16) y se ha observado una fuerte relación de este serotipo con el síndrome urémico
que no poseen un plásmido enteroinvasor como las cepas de EIEC y por lo tanto no
megadaltons (13), que codifica para un tipo distinto de fimbrias, el cual es necesario
para que puedan adherirse a las células epiteliales. Se ha visto que las cepas aisladas
pueden elaborar una citotoxina activa sobre los cultivos de células Hela y Vero. Se le
adultos, tipo disentería, similares a las producidas por Shigella sp. Aunque no causa
bacterias. Los síntomas incluyen fiebre, malestar general, dolor abdominal fuerte y
disentería con heces escasas con sangre y moco. Si se realiza una tinción de gram del
moco fecal, se puede observar una capa de polimorfos nucleares neutrófilos (PMN)
(3).
No son mótiles, y se han reportado cepas que no pueden fermentar la lactosa. Posee
plásmidos de 120 y 140 megadaltons que codifican para los factores de virulencia. Se
19
4.1.4.5 E. coli Enteroagregativa
causa una diarrea persistente en los niños. No son invasivas, se adhieren a las células
controversial(5).
Varias cepas de E. coli han emergido recientemente como patógenos transmitidos por
O157:H7 causa por lo menos 20,000 casos de infección alimentaria y 250 casos de
muerte (tan solo se reporta aproximadamente el 10% de los casos) (3). La EHEC es
una causa común de falla renal en niños, y por lo general su desenlace es fatal ya que
produce una exotoxina potente que causa diarrea hemorrágica y falla renal. La fuente
más común de esta infección es carne contaminada cruda o con procesos deficientes
20
hamburguesas y jamones) (10). La contaminación de los alimentos ocurre por lo
el vehículo de transmisión más común son alimentos como verduras y aguas. Por lo
forma se contaminan los vegetales frescos. Aunque se ha visto que los residentes de
una determinada zona presentan cierta resistencia a las cepas circulantes debido a
anticuerpos, los viajeros que son ajenos a la zona carecen de dichos anticuerpos y por
Puede causar descomposición notoria en los alimentos cárnicos, con cambios notorios
en las propiedades organolépticas de los alimentos. En muchos casos, esto evita que
las personas consuman los alimentos descompuestos, pero cuando contamina otros
los alimentos, aún en los perecederos. Debido a que estos alimentos no presentan
signos de deterioro, las personas los ingieren tranquilamente sin saber que el alimento
en el país ha ido en aumento, aunque debe tenerse presente que se mantiene un amplio
subregistro, si se tienen en cuenta los estimados de la OMS que refieren como entre el
15% y el 70% de los casos de diarrea en menores de cinco años de edad es debida a
21
372.000 casos de diarrea en menores de cinco años.”(28). Si bien existe un sistema de
registro de ETA’s, en muy pocos casos es posible realizar la confirmación del agente
etiológico causante, debido a la demora del reporte por parte de las IPS y EPS que
reciben al paciente. Por ejemplo, en el año 2001, durante las semanas epidemiológicas
salas de retenidos del IMPEC(29). “En los brotes presentados en escolares solo se
los casos fue posible establecer como fuente de común a algunas de las empresas
Es altamente probable que E. coli sea una causa común de infección alimentaria.
inescrupulosas que disfrazan los malos olores de las carnes con condimentos y
22
En las Normas Técnicas Colombianas, específicamente la Norma NTC 1325 se
establece que el nivel máximo tolerable de Coliformes Totales para carnicos cocidos o
23
4.2 Plazas de Mercado
pollos, pescados, plantas y otro tipo de mercancías como son materas, canastos,
bolsas plásticos e inclusivo ropa(26). La regulación de las plazas de mercado está bajo
controlar la gestión eficiente de las plazas de mercado a cargo del Distrito Capital y de
señalar las tarifas por concepto de la utilización de las áreas, espacios y servicios de
Capital, proyecto que tiene por objeto la gestión, el control y supervisión, el estudio
Capital. (26)”
Si bien las plazas de mercado están bajo la supervisión de una entidad gubernamental,
24
de cerdo, por ser productos cárnicos, deben tener una manipulación controlada y un
25
4.3 Jamones de Cerdo
Las clasificaciones de los productos cárnicos son diversas y se basan en criterios tales
como los tipos de materias primas que los componen, la estructura de su masa, si
crudos frescos y crudos madurados (8, 11). Existen varias clases de jamones de cerdo,
de pierna de cerdo, libre de ligamentos, grasa y tendones. El jamón york pasa por un
materia prima. En efecto, su calidad influye sobre la calidad del jamón. Un jamón
fresco debe presentar una buena cohesión de sus músculos, un color rosado y
marcado. Hay una gran cantidad de ingredientes no cárnicos que son importantes en la
26
elaboración de productos cárnicos. Algunos de ellos, como la sal, no pueden omitirse.
fabricar embutidos sin sal. Entre sus funciones básicas está: acción conservante,
coliformes. Este efecto es sólo parcial debido al nivel de uso (generalmente, inferior al
tan solo efectiva contra anaerobios.(27). Los nitratos y los nitritos son los
desconocido, ya que no se conoce a ciencia cierta el control que se ejerce sobre estos
27
productos y no existe información contundente sobre ingredientes reales utilizados.
Los distribuidores son reacios a suministrar cualquier tipo de información sobre éste
tipo de productos.
El medio VRBA es un medio de cultivo que contiene cristal violeta y sales biliares.
mediante el viraje del indicador rojo neutro a rojo. Además ocurre la precipitación de
ácidos biliares alrededor de las colonias. De esta forma, las bacterias coliformes se
ven de un color morado-fucsia con un halo fucsia alrededor, mientras que las no
respectivas de la muestra. Dado que este medio no se autoclava, se sirve 1ml en fondo
por 48 horas. Una vez transcurrido el periodo de incubación, se hace recuento de las
Probable (NMP)
El método del número más probable se emplea para obtener una cantidad estimada de
alcohólica. La técnica emplea tres series de tres tubos cada una, o tres series de cinco
tubos cada una. En cada serie de tubos se siembra 1ml de la dilución del alimento.
Los medios que pueden emplearse para el NMP son: Caldo Bilis Verde Brillante,
Caldo Bilis Verde Brillante mas MUG, Caldo LMX, Caldo Fluorocult, y caldo Lauril
indicado por un viraje del medio a un color azul verdoso, y E. coli se puede ver como
29
Figura 4. Caldo LMX. Tubos negativos para coliformes color amarillo, coliformes
positivos color azul verdoso, E. coli fluoresce con luz UV. Imagen tomada de:
http://service.merck.de/microbiology/tedisdata/prods/4968-1_10620_0500.html
Cada día surgen nuevas innovaciones tecnológicas, y las pruebas de Simplate es una
de ellas. Estas pruebas fueron desarrolladas para sobrepasar las limitaciones de los
busca dar resultados más rápidos y de mayor precisión. El sistema Simplate incluye
sido formulado específicamente para ser sensible y específico. Este método provee un
solo 24 horas. En general, para cada muestra se reconstituye el medio en 9ml de agua
resultados. Los pozos positivos para coliformes tienen un color morado-fucsia, los no
coliformes se ven amarillos, y E. coli fluoresce con luz UV (Figura 5). Se cuenta en
número de pozos y se consulta en la tabla del folleto Simplate para obtener el recuento
en ufc/g.
30
Figura 5. SimPlate Para Coliformes y E. coli. Imagen tomada de
http://www.rapidmethods.com/products/simcoli.html
5. MATERIALES Y METODOS
Se eligieron dos plazas de mercado de Bogotá, para realizar el muestreo (Figura 6).
frías
Posee 252 puestos (26). Posee ocho puestos de expendio de carnes frías,
durante seis semanas, la primera semana se tomaron diez muestras, y las siguientes
Prensado),
un bajalenguas estéril, en una balanza. Se agregaron los 10g del jamón a un vaso de
diluciones seriadas en tubos con 9ml de solución salina estéril al 0.85% hasta la
dilución 10 -4(4). Dado que se realizó un sondeo previo para determinar las diluciones
diluciones 10-2, 10 -3 y 10 -4. Como se podrá observar más adelante, las primeras cinco
muestras se trabajaron con diluciones de 10-4, 10-5 y 10-6 y como no hubo detección,
Todas las diluciones se realizaron con una Micropipeta y puntas de 1000µl estériles
Una vez realizadas las diluciones, se procedió a analizar la muestra por cada uno de
32
5.3.1 Recuento en Placa en VRBA
Se preparó el medio Violeta Rojo Bilis Agar (OXOID) con material completamente
estéril según indicaciones. Una vez hervido el medio, se dejó enfriar a 48˚C antes de
Una vez pasadas las 48 horas se realizó recuento de las colonias tipicas de coliformes
micropipeta de 1000µl para poder obtener una mayor exactitud en las mediciones de
inoculo.
33
5.3.2 NMP en Caldo LMX
fabricante. Para cada muestra, se utilizaron tres series de tres tubos, cada uno con 10
y la tercera 10 -4. De esta forma, para cada muestra se obtuvo un total de nueve tubos
tapa rosca grandes inoculados. Se llevaron a incubar los tubos por 48horas a 37˚C y
En los tubos positivos para coliformes totales se observa un viraje del medio a un
color verde azulado. Con ayuda de Lámpara ultravioleta, se evaluaron los tubos
tabla Anexo 7:
Methilen Blue Agar (EMB, OXOID) para confirmar brillo metálico, antes de
evaluar Indol. Las cajas de EMB se llevaron a incubar a 37˚C por 24-48 horas
• A cada tubo que presentó fluorescencia, se le agregaron dos gotas del reactivo
de Kovac’s para confirmar Indol. Se consideraron Indol positivo los tubos que
34
5.3.3 SimPlate
sondeo, solamente se trabajó cada muestra en la dilución de 10-2 ya que con éste
método fue posible cuantificar en esta dilución. Se rehidrató el medio de SimPlate con
precaución de que todos los pozos quedaran con medio (Figura 8,3). Para eliminar
burbujas se dieron golpes secos suaves y se dejó caer el medio sobrante sobre el cojín
de la placa (Figura 8,4). Se llevaron a incubar las placas a 37˚C por 24 horas(Figura
8,5) y se contaron los pozos positivos para coliformes (morados) (Figura 8,6). y con
lámpara UV, se contaron los pozos fluorescentes (E. coli) Luego, con la tabla de
SimPlate (ANEXO 6) se obtuvo el recuento en cada muestra. Dado que se trabajó con
la dilución 10 -2, se multiplica el resultado de la tabla por 102 (100) según indicaciones
Figura 8. Pasos del Método Simplate. Imágenes tomadas del Folleto de Simplate guia
Rápida (BIOCONTROL)
35
6. RESULTADOS
evaluadas.
Paloquemao, pero por razones de cercanía se decidió trabajar solo con las plazas del
10).
36
6%
Siete de Agosto
41% 53% Doce de Octubre
Paloquemao
26%
Jamon de Cerdo
Jamon Ahumado
Pernil de Cerdo
55%
19%
(Figura 11)
37
25
20
No Muestras
15
10 Siete de Agosto
Doce de Octubre
5 Paloquemao
0
Jamon de Jamon Pernil de
Cerdo Ahumado Cerdo
Tipo de Alimento
48 horas. Los coliformes se pueden observar como pozos color fucsia, y E. coli
fluoresce con luz ultravioleta(Figura 12). Una vez contados los pozos, se consultó en
la tabla de Simplate (Anexo 6) la población total, y éste número fue multiplicado por
coli
Figura 12. Resultados Simplate. Obsérvese los pozos positivos para CT son de
color fucsia y los de E. coli fluorescen con luz UV.
38
En la tabla anexo 2 se presentan los resultados para Coliformes Totales evaluados por
el método Simplate.
de las 85 muestras (Color verde en la tabla). Las muestras en las que no se logró
(color Fucsia en la tabla) que dicta que el nivel máximo tolerable de Coliformes
Totales para Carnicos Cocidos o Escaldados es 1100 ufc/g. Esto representa el 56.47%
80 72.73
70 62.5
55.32
Porcentaje
60 44.68
50 37.5 Fuera Norma
40 27.27
30 Dentro Norma
20
10
0
o
o
rd
rd
ad
Ce
Ce
um
de
de
Ah
on
il
on
rn
m
m
Pe
Ja
Ja
Tipo Alimento
(Color verde en la tabla). Las muestras en las que no se logró detectar E. coli a las 24
dicta que el nivel máximo tolerable de E. coli para Carnicos Cocidos o Escaldados es
100 ufc/g. Esto representa el 51.76% de las muestras fuera de la norma al analizarlas a
horas.
80 72.73
70
Porcentaje
55.32
60 44.68
50 50
50 Fuera Norma
40 27.27
30 Dentro Norma
20
10
0
Pernil de
Ahumado
Jamon de
Cerdo
Jamon
Cerdo
Tipo Alimento
Figura 14. Porcentaje de Muestras Fuera de Norma para E. coli según tipo de
Alimento Evaluado por el Metodo Simplate
40
En general, la incidencia de Coliformes totales (70 de las 85 muestras) a las 24 horas
17.65 14.41
CT
CT
No CT
No CT
82.35 85.89
28.57
37.14 E. coli
E. coli No E.
CTcoli
No E.
CTcoli
62.86
71.43
41
6.4 Resultados Recuento en Placa en VRBA
sembraron tres cajas para cada muestra, las diluciones 10-2, 10 -3 y 10-4(Figura 17). Los
coliformes se pueden observar como colonias color morado-fucsia con halo morado
(Figura 18).
Los resultados del recuento hecho para cada muestra se presentan en la tabla anexo 4.
fucsia se resaltan aquellas muestras que excedieron la NTC 1325 y en verde las
muestras donde se detectaron Coliformes Totales, pero que están dentro de la norma.
las muestras que el método SimPlate no pudo detectar: 5 muestras de Jamón de Cerdo,
1 de Pernil y 4 de Jamón ahumado. Vale la pena recalcar que éste método logró
42
detectar Coliformes totales en 4 muestras que SimPlate no detectó coliformes Totales
90 86.37
80
70 65.96
60 56.25
50 43.75
Porcentaje
40 34.04
30 Fuera de Norma
20 13.63 Dentro de Norma
10
0
Jamon de Pernil de Jamon
Cerdo Cerdo Ahumado
Tipo Alimento
11.76
Coliformes Totales
No Coliformes
88.24
análisis. El viraje del medio a azul verdoso se considera positivo para Coliformes y
Figura 21. NMP Los primeros dos tubos son positivos para Coliformes, pero solo
el primero es positivo para E. coli
visto que puede presentarse fluorescencia por otro tipo de Microorganismos (Como
por ejemplo Pseudomonas). Por esta razón, de cada tubo fluorescente se hizo un pase
a Agar Eosin Methilene Blue (EMB) para observar la presencia del brillo metálico y
44
Solo aquellos tubos que presentaron tanto brillo metálico como Indol + se
donde no se pudo detectar, en Fucsia las muestras que exceden la NTC 1325 y en
verde aquellas donde sí se pudo detectar, pero que están dentro del los limites de la
norma. Este método no detectó coliformes Totales en tan solo 4 muestras (1,3,5,63),
de resto fue posible detectarlos en todas las muestras. De estas muestras analizadas,
57 excedieron la norma NTC 1325, de las cuales eran 7 muestras de jamón ahumado,
Estos resultados coinciden exactamente con los resultados obtenidos por el método
recuento en placa en VRBA, es decir que las muestras fuera de norma por el método
recuento en placa en VRBA fueron las mismas por el método del NMP para
coliformes totales.
90 86.37
80
70 65.96
60 56.25
50 43.75
Porcentaje
40 34.04 Fuera de Norma
30
20 Dentro de Norma
13.63
10
0
Jamon de Pernil de Jamon
Cerdo Cerdo Ahumado
Tipo Alimento
45
4.71%
Coliformes Totales
No Coliformes
95.29%
De estas 46 muestras confirmadas, 26 estaban fuera de norma para E. coli, (figura 25)
90 87.5
80
70.21 68.75
70
59.09
60 54.55
51.0648.94
50 45.45
Porcentaje 40.91
40
29.79 31.25
30
20
12.5
10
0
Jamon de Cerdo Pernil de Cerdo Jamon Ahumado
Alimento
Fuera Norma No Confirmada
Dentro Norma No Confirmada
Fuera Norma Confirmada
D t N C fi d
Figura 25. Porcentaje de Muestras Fuera de Norma para E. coli según tipo de
Alimento Evaluado por el Método NMP
46
7. ANÁLISIS ESTADISTICOS
Se tabuló la incidencia general en porcentaje encontrada por cada método tanto para
Coliformes totales como para E. coli determinada por cada uno de los tres métodos y
se realizo una grafica (Figura 26) comparativa (Debido a que solo se tiene un dato por
100 95.29
95
87.06 88.24
90
85 82.35
80
75
Simplate 24H Simplate 48H VRBA NMP
METODO
INCIDENCIA DE E. coli
80 70.59
Incidencia (%)
58.82 54.12
60 51.76
40
20
0
Simplate 24H Simplate 48H NMP Sin NMP
Confirmar Confirmada
Método
47
También se tabuló el porcentaje de muestras fuera de Norma para Coliformes Totales
y E. coli según tipo de Alimento (Tabla 6) para cada método y se realizó una gráfica
60 55.32 55.32
50 43.75 43.75
37.5
40 31.25
30
20
10
0
Jamon de Cerdo Jamon Ahumado Pernil
Alimento
48
Porcentaje de Muestras Fuera de Norma Segun tipo
de Alimento para E. coli
80 72.73
70 59.09 59.09
60 55.3254.08
Porcentaje
48.94 50 50
45.46
50
40 34.25
29.79
30
20 12.5
10
0
Jamon de Cerdo Jamon Ahumado Pernil
Alimento
Se tomo el diseño de bloques aleatorios para analizar los resultados obtenidos por los
diferentes métodos.
la siguiente forma:
no normales) para los datos con el Shapiro Wilk Normality Test donde se obtuvo un
valor p de 0.000, con lo cual se rechaza Ho. Como los datos no son normales, se
esta razón se procedió a realizar una prueba no paramétrica que es la prueba Friedman
49
Ho: T1= T2= T3= T4
La prueba Friedman arrojó un p=0.000 para los bloques y un p=0.000 para los
tratamientos. Para ambos casos se rechaza Ho, y por lo tanto se concluye que sí
forma:
no normales) para los datos con el Shapiro Wilk Normality Test donde se obtuvo un
valor p de 0.000, con lo cual se rechaza Ho. Como los datos no son normales, se
esta razón se procedió a realizar una prueba no paramétrica que es la prueba Friedman
La prueba Friedman arrojó un p=0.000 para los bloques y un p=0.000 para los
tratamientos. Para ambos casos se rechaza Ho, y por lo tanto se concluye que sí
existen diferencias significativas entre los resultados obtenidos para E. coli por los
diferentes métodos.
50
8. DISCUSIÓN DE RESULTADOS
8.1 Simplate
Paloquemao. Sin embargo, dado que se partió de una dilución muy alta (10-4) no fue
hubiera sido posible detectarlas, ya que éste método muestra una alta sensibilidad. La
razón por la cual se empleó ésta dilución inicialmente, es que en la prueba de sondeo
de esta plaza los recuentos dieron muy altos. Sin embargo, al cambiar de plazas (el
resto de muestras fueron procedentes del Doce de Octubre y del Siete de Agosto) la
Coliformes Totales inferiores a 100ufc/g; por ésta razón ningún pozo dio positivo.
éstas muestras, se puede inferir que éstos productos cumplen con la norma NTC 1325,
muestras que no se habían podido cuantificar a las 24 horas. Aunque éste resultado
sugiere que es recomendable incubar 24 horas adicionales las placas Simplate para
poder cuantificar en aquellos casos donde los niveles son muy bajos, si el objetivo del
que 48 de las 85 muestras analizadas se encontraban fuera de norma para las bacterias
51
coliformes totales. Esto representa un 56.47% de muestras analizadas fuera de norma,
a ningún tipo de cocción posterior. Como se puede ver, esto presenta un riesgo de
salud pública.
coliformes totales en todas las muestras si se hubiera partido de la dilución 10-1, pero
como los recuentos estaban dando muy altos se decidió partir de 10-2. Algunas
muestras tenían niveles de coliformes totales tan altos, que no fue posible determinar
NTC 1325. Las características físicas del producto favorecen la proliferación de las
sumamente alta, es más alta que en jamón de Cerdo y Jamón ahumado. El menor
debido a que éste producto es el que menos favorece a las bacterias coliformes totales
debido a su alto contenido de sal y bajo contenido acuoso. Sin embargo, un 30% de
muestras fuera de norma es un porcentaje muy alto, ya que todos los alimentos deben
52
adicionales, no se encontró un aumento significativo en el porcentaje de muestras
coincide con los resultados obtenidos para coliformes totales, donde el 72.73% de las
muestras fuera de norma de pernil de cerdo era 72.73%. Para Jamón ahumado los
norma aumentó ligeramente a 55.32%. Con estos resultados surge una inquietud muy
grande, debido a que unas muestras que mostraron cumplir con la norma a las 24
horas (ningún pozo fluoresció y por ende los niveles de E. coli eran <100ufc/g), con la
porque sus niveles de E. coli eran >100 ufc/g. Es muy probable que si se hubiera
trabajado con la dilución 10-1 sí hubiera sido posible detectar E. coli en niveles
inaceptables de E. coli por lo cual no eran productos aptos para el consumo humano.
53
las 85 muestras analizadas por éste método. Con las 24 horas de incubación
casos donde E. coli fue indetectable a las 24 horas, con la incubación de 24 horas
incuba la placa 24 horas, lo que presenta un riesgo para la salud del consumidor.
aislarlo en Agar Nutritivo. Sin embargo, este hallazgo presenta una señal de alerta en
el método, ya que hay que tener mucha precaución al contar los pozos fluorescentes
8.2 VRBA
anexo 4, hubo 10 muestras en las cuales no fue posible detectar coliformes totales, las
cuales coinciden con las muestras que el método Simplate no logró detectarlas
dilución más alta que el resto de las muestras). Vale la pena recalcar que éste método
54
logró detectar Coliformes totales en 4 muestras que SimPlate no detectó coliformes
Totales (Muestras No 30, 65, 66, 70), lo cual sugiere que éste método tiene una mayor
detectar Coliformes, el recuento en placa VRBA excedió la norma NTC 1325, lo que
nuevamente refleja que éste método es muy sensible, ya que logra detectar niveles
La incidencia de coliformes totales determinada por éste método (88.24%, Ver tabla
5) fue un poco mayor que la determinada por el método Simplate (82.35% a las 24H),
debido a que este método es un poco más sensible que el método Simplate.
norma más alto se presentó para el pernil de cerdo, donde el 86.37% de las muestras
de pernil analizadas estaban fuera de la norma NTC 1325; el más bajo se presentó en
Vale la pena notar, que aunque el comportamiento fue similar en ambos métodos, se
en placa en VRBA, lo que refleja una mayor sensibilidad ya que logró detectar niveles
la misma dilución).
8.3 NMP
En cuanto a sensibilidad, éste método demostró tener la más alta, debido a que
1,3,5,63), de resto fue posible detectarlos en todas las muestras. Se encontró que 57 de
55
las 85 muestras analizadas estaban fuera de norma para coliformes totales de las
Cerdo.
Hay una alta congruencia de los resultados obtenidos con este método y los resultados
obtenidos por el método recuento en placa en VRBA, debido a que las muestras fuera
de norma por el método recuento en placa en VRBA fueron las mismas por el método
del NMP para coliformes totales, mientras que por el método Simplate se encontró
dos métodos, donde el porcentaje de muestras fuera de norma más alto fue para el
pernil de cerdo (86.37%), lo cual coincide exactamente con los resultados obtenidos
por recuento en placa en VRBA. Lo mismo se observó con los otros dos tipos de
alimento, donde el porcentaje de muestras fuera de norma para coliformes totales fue
las 48 horas fue de 95.29%, lo que representa la incidencia más alta al compararla con
la obtenida por los otros dos métodos. Esta altísima incidencia de coliformes totales
sugiere una altísima sensibilidad del método para detectar bacterias coliformes totales
fluorescencia y viraje del medio, por medio de siembra en EMB en busca de Brillo
56
confirmación de los tubos, el porcentaje de muestras fuera de norme disminuye
muestras de jamón estaban fuera de norma, pero al confirmar los tubos se encontró
que tan solo el 29.79% lo estaba realmente. Si bien el método no sugiere confirmar los
tubos para E. coli, se observó durante el estudio que tubos con fluorescencia y viraje
del medio no presentaban E. coli. Vale la pena recalcar, que el hecho de que no haya
sido posible observar el brillo metálico de E. coli sea certeza de que no esté. En un
alimento puede haber una gran cantidad de bacterias, que pueden ejercer competencia
entre sí, y al sembrar en un medio como el EMB, puede que crezca una lactosa
negativo que está en niveles muy altos (como se observó en muchos casos) y si E. coli
éste método de los tubos confirmados, con los no confirmados, se puede observar que
inferior. Se pudo observar el mismo comportamiento que se observó por los otros dos
métodos empleados, ya que el porcentaje de muestras fuera de norma para E. coli más
NMP en LMX fue el más sensible, ya que no logró detectarlos en tan solo 4 muestras
totales se determinó por el método NMP, siendo ésta 95.29%. Esto indica que casi
57
En lo que respecta a E. coli, el método de recuento en placa en VRBA no se
empleó para detectarla, ya que hubiera sido muy tedioso tener que realizar
a medios como EMB para observar el brillo metálico, y no fue posible emplear el
más alta de E. coli (70.59%); sin embargo, al realizar la confirmación se observó que
la incidencia era menor (54.12%). Tanto por el método Simplate, como por NMP
Se observa que el método Simplate puede ser más sensible con la incubación
para E. coli a las 24 horas, se presentaron como fuera de norma (>100ufc/g) a las 48
horas.
nos permite los otros dos métodos. Sin lugar a dudas, el método Simplate es el más
58
8.5 Calidad Microbiológica de los Jamones
totales, que osciló entre el 80 y el 95%. Si bien es aceptable que los alimentos cocidos
tengan cierta carga de bacterias coliformes totales, es inaceptable que sus niveles sean
bacterias coliformes totales, lo cual refleja una manipulación deficiente del producto
post proceso, aún cuando este tipo de jamón tiene un bajo contenido acuoso. Entre el
Dado que E. coli no es esporulada, es una bacteria que debe ser eliminada
establece que la concentración de E. coli para carnicos escaldados o cocidos debe ser
inferior a 100ufc/g. Sin embargo, más del 50% de las muestras de pernil de cerdo no
eran aptas para el consumo según esta norma. El 35-50% de las muestras de jamón
Cerdo. Los porcentajes de muestras fuera de norma según alimento varían de método
a método, pero para todos coincide que una altísima proporción de muestras
59
analizadas no eran aptas para el consumo humado, por un alto recuento de bacterias
adquiere sus alimentos en las plazas de mercado, incluyendo las plazas del Siete de
Agosto y del Doce de Octubre. Se sabe que las ETA’s son un asunto importante de
salud pública, tanto que han sido incluidas dentro del Sistema de Vigilancia de Salud
mortalidad. De acuerdo con los reportes estadísticos, los alimentos son la vía de
solamente un malestar que causa diarreas, vómitos y fiebre. Se han descrito un listado
permanente, alergias, etc. Por esta razón las ETA’s bien pueden ser consideradas
actualidad.”(30)
60
sintomatología”(29) Sin embargo, en el informe de comportamiento de las ETA’s
mencionado se establece, que en los pocos casos en donde ha sido posible realizar
probable que E. coli, entre otros coliformes, sea el agente causal de ETA’s en una
sus alimentos en plazas de mercado. Son de especial cuidado aquellos alimentos listos
para el consumo, como son los jamones de cerdo, que no son sometidos a ningún
las plazas de mercado, especialmente aquellos listos para el consumo como los
Así mismo, la información que este estudio aporta puede ser útil para el
alarmantemente alta de bacterias coliformes totales que quizás pueden ser causante de
ETA’s en Bogotá. Este trabajo es un pequeño aporte que nos muestra las condiciones
61
9. CONCLUSIONES
para E. coli.)
de norma.
• Con el análisis estadístico se determinó que los resultados para las muestras
diferente.
62
• El método de recuento en placa en VRBA es un método útil para cuantificar
método Simplate).
interferencia.
simplate, por lo cual hay que tener precaución al realizar las lecturas para no
viraron a rojo.
• El método que detectó una mayor cantidad de muestras fuera de norma para
63
coliformes totales (86.37%), y como no presenta interferencia se sugiere como
método de elección.
10. SUGERENCIAS
para el consumo como son los Jamones de Cerdo. De esta forma se puede
• Se sugiere confirmar los tubos de caldo LMX que viren a azul verdoso y
• Dado que los resultados del método NMP para E. coli varían
elegir el método Simplate como método de detección rápida que presenta una
64
BIBLIOGRAFÍA
Bogotá.
Querétaro.
(6) FINEGOLD, SYDNEY; BARON, ELLEN JO. (1986) Bailey and Scott’s
Company
65
(7) HOLT, JHON; KRIEG, NOEL; SNEATH, PETER; STALEY, JAMES;
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America.. 2:607
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66
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(19) http://www.foodprotection.org/imageup/2000%20Annual%20Meeting/
TECHNICALS.pdf
(20) http://www.marion.sa.gov.au/web/WebBulle.nsf/0/C242D20A9B4E39
11E9256D2D0012A051/$file/escherichia_coli.pdf
(21) http://www.state.ma.us/dph/cdc/factsheets/foreign/ecoli.pdf
(22) http://sb.thehartford.com/reduce_risk/loss_library/Food_Safety/Food_P
rocessing--Understanding_and_Controlling_E._Coli_Contamination.pdf
(23) http://sb.thehartford.com/reduce_risk/loss_library/Food_Safety/Food_P
rocessing--Understanding_and_Controlling_E._Coli_Contamination.pdf
(24) http://www.razzeto.com.pe/productos03.htm
(25) http://www.rapidmethods.com/products/simcoli.html
(26) http://www.uesp.gov.co/html/plazas_de_mercado.html.
(27) http://www.virtual.unal.edu.co/cursos/agronomia/2001819/index.html
(28) http://www.col.ops-oms.org/sivigila/2002/BOLE06_02.htm
(29) http://www.col.ops-oms.org/sivigila/2001/bole19_2001.htm
(30) http://www.panalimentos.org/panalimentos/files/Informe%20ETAGene
ral.doc.
(31) http://service.merck.de/microbiology/tedisdata/prods/4968-
1_10624_0500.html
67
ANEXO 1. Codificación de muestras
68
40 Doce Octubre Abril 18/04 Jamon Cerdo
41 Siete Agosto Abril 18/04 Jamon Cerdo Ahumado
42 Siete Agosto Abril 18/04 Pernil Cerdo
43 Siete Agosto Abril 18/04 Jamon Cerdo
44 Siete Agosto Abril 18/04 Pernil Cerdo
45 Siete Agosto Abril 18/04 Jamon Cerdo
46 Siete Agosto Abril 18/04 Jamon Cerdo Ahumado
47 Siete Agosto Abril 18/04 Jamon Cerdo
48 Siete Agosto Abril 18/04 Jamon Cerdo
49 Siete Agosto Abril 18/04 Jamon Cerdo Ahumado
50 Siete Agosto Abril 18/04 Pernil Cerdo
51 Siete Agosto Abril 25/04 Jamon Cerdo
52 Siete Agosto Abril 25/04 Jamon Cerdo
53 Siete Agosto Abril 25/04 Jamon Cerdo
54 Siete Agosto Abril 25/04 Jamon Cerdo
55 Siete Agosto Abril 25/04 Pernil Cerdo
56 Siete Agosto Abril 25/04 Jamon Cerdo
57 Siete Agosto Abril 25/04 Jamon Cerdo Ahumado
58 Siete Agosto Abril 25/04 Pernil Cerdo
59 Siete Agosto Abril 25/04 Jamon Cerdo
60 Siete Agosto Abril 25/04 Pernil Cerdo
61 Doce Octubre Abril 25/04 Jamón Cerdo
62 Doce Octubre Abril 25/04 Jamón Cerdo
63 Doce Octubre Abril 25/04 Jamón Cerdo Ahumado
64 Doce Octubre Abril 25/04 Pernil Cerdo
65 Doce Octubre Abril 25/04 Jamón Cerdo
66 Doce Octubre Abril 25/04 Jamon Cerdo
67 Doce Octubre Abril 25/04 Jamon Cerdo
68 Doce Octubre Abril 25/04 Pernil Cerdo
69 Doce Octubre Abril 25/04 Jamon Cerdo
70 Doce Octubre Abril 25/04 Jamon Cerdo
71 Siete Agosto Mayo 2/04 Jamon Cerdo
72 Siete Agosto Mayo 2/04 Jamon Cerdo
73 Siete Agosto Mayo 2/04 Jamon Cerdo
74 Siete Agosto Mayo 2/04 Pernil Cerdo
75 Siete Agosto Mayo 2/04 Jamon Cerdo
76 Siete Agosto Mayo 2/04 Pernil Cerdo
77 Siete Agosto Mayo 2/04 Jamon Cerdo
78 Siete Agosto Mayo 2/04 Jamon Cerdo
79 Siete Agosto Mayo 2/04 Jamon Cerdo
80 Siete Agosto Mayo 2/04 Jamon Cerdo
81 Siete Agosto Mayo 2/04 Pernil de Cerdo
69
82 Siete Agosto Mayo 2/04 Jamon Ahumado
83 Siete Agosto Mayo 2/04 Pernil de Cerdo
84 Siete Agosto Mayo 2/04 Jamon Cerdo
85 Siete Agosto Mayo 2/04 Jamon Cerdo
70
ANEXO 2. Resultados Simplate para Coliformes Totales
71
49 1 200 1 200
50 68 27600 68 27600
51 85 >73800 85 >73800
52 46 13200 67 26600
53 19 4200 37 9600
54 1 200 2 400
55 2 400 3 600
56 2 400 2 400
57 14 3000 15 3200
58 71 31200 74 35400
59 29 7000 42 11600
60 83 73800 83 73800
61 1 200 2 400
62 3 600 3 600
63 0 <100 0 <100
64 3 600 11 2400
65 0 <100 0 <100
66 0 <100 0 <100
67 6 1200 14 3000
68 11 2400 13 2800
69 78 44000 78 44000
70 0 <100 1 200
71 83 73800 84 >73800
72 9 1800 25 5800
73 85 >73800 85 >73800
74 78 44000 84 >73800
75 66 25600 71 31200
76 85 >73800 85 >73800
77 78 44000 85 >73800
78 85 >73800 85 >73800
79 26 6200 28 6800
80 3 600 20 4600
81 4 800 6 1200
82 82 62400 85 >73800
83 77 41400 85 >73800
84 54 17200 67 26600
85 46 13200 66 25600
72
ANEXO 3. Resultados Simplate para E. coli
Pozos E. coli
No Muestra 24h Recuento E. coli 24h Pozos E. coli 48h Recuento E. coli 48h
1 0 < 10^5 0 < 10^5
2 0 < 10^5 0 < 10^5
3 0 < 10^5 0 < 10^5
4 0 < 10^5 0 < 10^5
5 0 < 10^5 0 < 10^5
6 1 200 2 400
7 0 <100 0 <100
8 0 <100 0 <100
9 6 1200 6 1200
10 0 <100 0 <100
11 85 >73800 85 >73800
12 85 >73800 85 >73800
13 4 800 4 800
14 2 400 2 400
15 85 >73800 85 >73800
16 0 <100 0 <100
17 0 <100 0 <100
18 0 <100 0 <100
19 0 <100 0 <100
20 0 <100 0 <100
21 2 400 2 400
22 1 200 1 200
23 3 600 5 1000
24 0 <100 1 200
25 0 <100 0 <100
26 36 9400 59 20200
27 0 <100 0 <100
28 0 <100 0 <100
29 0 <100 1 200
30 0 <100 0 <100
31 0 <100 0 <100
32 0 <100 0 <100
33 0 <100 1 200
34 1 200 1 200
35 0 <100 0 <100
36 0 <100 0 <100
37 1 200 1 200
38 1 200 2 400
39 0 <100 0 <100
40 0 <100 0 <100
41 0 <100 5 1000
42 5 1000 5 1000
43 5 1000 5 1000
44 3 600 3 600
45 5 1000 16 3600
46 1 200 1 200
47 0 <100 1 200
48 2 400 2 400
73
49 0 <100 0 <100
50 2 400 2 400
51 85 >73800 85 >73800
52 7 1400 15 3200
53 1 200 1 200
54 0 <100 0 <100
55 0 <100 0 <100
56 0 <100 0 <100
57 13 2800 13 2800
58 12 2600 26 6200
59 2 400 4 800
60 83 73800 83 73800
61 0 <100 1 200
62 0 <100 0 <100
63 0 <100 0 <100
64 0 <100 1 200
65 0 <100 0 <100
66 0 <100 0 <100
67 1 200 1 200
68 0 <100 1 200
69 17 3800 20 4600
70 0 <100 0 <100
71 32 8000 33 8400
72 1 200 1 200
73 10 2200 10 2200
74 4 800 4 800
75 5 1000 6 1200
76 6 1200 6 1200
77 5 1000 5 1000
78 1 200 1 200
79 21 4800 21 4800
80 0 <100 0 <100
81 0 <100 0 <100
82 3 600 19 4200
83 2 400 2 400
84 2 400 2 400
85 7 1400 8 1600
74
ANEXO 4. Recuento en UFC/g de Coliformes Totales Por el método Recuento en
Placa en VRBA
75
2
49<10 <100
5019*103 19000
5113*103 13000
4
5214*10 140000
3
5317*10 17000
2
542*10 200
2
559*10 900
2
562*10 200
572*104 20000
3
5880*10 80000
3
593*10 3000
6019*102 1900
3
618*10 8000
2
624*10 400
2
63<10 <100
6416*103 16000
2
651*10 100
2
6611*10 1100
3
679*10 9000
2
684*10 400
4
691*10 10000
702*102 200
4
712*10 20000
4
7228*10 280000
7310*104 100000
4
744*10 40000
3
757*10 7000
7611*105 1070000
4
7724*10 240000
5
7845*10 4520000
7974*102 7400
803*103 3000
2
8122*10 2200
8281*103 81000
8324*104 240000
4
8411*10 105000
4
8510*10 102000
76
ANEXO 5. Resultados NMP Para Coliformes Totales y E. coli
Tubos
Confirmados NMP E. coli
No Muestra Tubos +CT NMP CT Tubos+E.coli NMP E. coli E. coli Conf
1 000 <30 000 <30 000 <30
2 100 40 100 40 000 <30
3 000 <30 000 <30 000 <30
4 100 40 100 40 000 <30
5 000 <30 000 <30 000 <30
6 331 4600 220 210 220 210
7 100 40 000 <30 000 <30
8 320 930 100 40 000 <30
9 331 4600 331 4600 000 <30
10 320 930 100 40 000 <30
11 333 >24000 331 4600 220 210
12 333 >24000 320 930 320 930
13 330 2400 000 <30 000 <30
14 333 >24000 320 930 100 40
15 333 >24000 333 >24000 211 200
16 333 >24000 000 <30 000 <30
17 211 200 000 <30 000 <30
18 220 210 000 <30 000 <30
19 110 70 000 <30 000 <30
20 310 430 100 40 100 40
21 333 >24000 310 430 000 <30
22 333 >24000 330 2400 300 230
23 333 >24000 300 230 200 90
24 333 >24000 301 390 301 390
25 330 2400 100 40 100 40
26 333 >24000 333 >24000 332 11000
27 333 >24000 000 <30 000 <30
28 311 750 200 90 200 90
29 333 >24000 000 <30 000 <30
30 301 390 000 <30 000 <30
31 100 40 000 <30 000 <30
32 320 930 000 <30 000 <30
33 320 930 300 230 100 40
34 310 430 310 430 100 40
35 100 40 000 <30 000 <30
36 000 <30 000 <30 000 <30
37 321 1500 000 <30 000 <30
38 322 2100 010 30 000 <30
39 332 11000 210 150 000 <30
40 333 >24000 120 110 000 <30
41 320 930 010 30 010 30
42 333 >24000 201 140 201 140
43 333 >24000 321 1500 221 280
44 333 >24000 320 930 210 150
45 333 >24000 331 4600 221 280
46 333 >24000 300 230 000 <30
47 333 >24000 300 230 300 230
77
48 333 >24000 321 1500 321 1500
49 120 110 000 <30 000 <30
50 333 >24000 310 430 210 150
51 332 2100 331 4600 010 30
52 333 >24000 332 11000 331 4600
53 332 11000 200 90 000 <30
54 321 1500 000 <30 000 <30
55 330 2400 000 <30 000 <30
56 200 90 000 <30 000 <30
57 331 4600 320 930 310 430
58 333 >24000 301 390 101 70
59 330 2400 310 430 300 230
60 330 2400 320 930 320 930
61 332 11000 300 230 200 90
62 320 930 300 230 000 <30
63 000 <30 000 <30 000 <30
64 333 >24000 000 <30 000 <30
65 110 70 000 <30 000 <30
66 301 390 000 <30 000 <30
67 331 4600 300 230 000 <30
68 330 2400 100 40 100 40
69 333 >24000 333 >24000 312 1200
70 332 1100 200 90 100 40
71 333 >24000 330 2400 220 210
72 333 >24000 100 40 100 40
73 333 >24000 330 2400 100 40
74 333 >24000 300 230 000 <30
75 333 >24000 200 90 200 90
76 333 >24000 211 200 010 30
77 333 >24000 331 4600 331 4600
78 333 >24000 320 930 110 70
79 333 >24000 210 150 210 150
80 331 4600 300 230 100 40
81 330 2400 310 430 210 150
82 333 >24000 310 430 310 430
83 333 >24000 300 230 300 230
84 333 >24000 310 430 310 430
85 333 >24000 310 430 200 90
78
ANEXO 6. Tabla Simplate (Tomada del Folleto de Instrucciones de
BIOCONTROL)
todos los pozos son negativos la población es <1. La población se puede expresar en
UFC/g o NMP.
Una vez obtenida la población, se multiplica por el factor de dilución para determinar
79
ANEXO 7. Tabla del NMP (3)
80