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Fosforo en Pescado
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COLOMBIANA 1322
2007-12-12
PRODUCTOS DE LA PESCA.
MÉTODOS DE ANÁLISIS FÍSICOS Y QUÍMICOS
CORRESPONDENCIA:
I.C.S.: 67.120.30
ICONTEC es una entidad de carácter privado, sin ánimo de lucro, cuya Misión es fundamental
para brindar soporte y desarrollo al productor y protección al consumidor. Colabora con el
sector gubernamental y apoya al sector privado del país, para lograr ventajas competitivas en
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La NTC 1322 (Segunda actualización) fue ratificada por el Consejo Directivo de 2007-12-12.
Esta norma está sujeta a ser actualizada permanentemente con el objeto de que responda en
todo momento a las necesidades y exigencias actuales.
ICONTEC cuenta con un Centro de Información que pone a disposición de los interesados
normas internacionales, regionales y nacionales y otros documentos relacionados.
DIRECCIÓN DE NORMALIZACIÓN
NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 1322 (Segunda actualización)
CONTENIDO
Página
1. OBJETO .......................................................................................................................1
Página
FIGURAS
ANEXO A (Normativo)
SEGURIDAD EN LABORATORIO ........................................................................................38
NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 1322 (Segunda actualización)
PRODUCTOS DE LA PESCA.
MÉTODOS DE ANÁLISIS FÍSICOS Y QUÍMICOS
1. OBJETO
Esta norma establece los métodos de ensayo que deben seguirse para comprobar las
características físicas y químicas de los productos a base de pescado incluidas las conservas
de pescado.
2. REFERENCIAS NORMATIVAS
Official Method AOAC, 937.07, Fish and Marine products Treatment and Preparation of Sample
Official Method AOAC, 962.16, Sulfurous Acid (total) in Food. Modified Monier Williams Method.
Official Method AOAC, 963.20, Sulfurous Acid (total) in dried fruit. Colorimetric Method.
Official Method AOAC, 972.23, Lead in fish Atomic Absorption Spectrophotometric Method.
Official Method AOAC, 977.15, Mercury in Fish Alternative Flameless Atomic Absorption
Spectrophotometric Method.
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NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 1322 (Segunda actualización)
Official Method AOAC, 985.16, Tin in Canned Foods Atomic Absorption Spectrophotometric
Method.
Official Method AOAC, 985.35, Minerals in Ready to Feed Milk- Based Infant Formula and Pet
Foods Atomic Absorption Spectrophotometric Method.
Official Method AOAC, 986.15, Arsenic, Cadmium, Lead, Selenium and Zinc in Food
Multielement Method.
CODEX ALIMENTARIUS COMMISSION. Norma del Codex para el atún y el bonito en conserva
(CODEX STAN 70-1981), REV.1-1995.
3.1 TRATAMIENTO
Se deben usar muestras tan grandes como sea posible, para prevenir la pérdida de agua
durante la preparación y el manejo posterior.
Se deben comenzar los ensayos tan pronto como sea posible. Si ocurre cualquier retraso, se
refrigera la muestra para inhibir la descomposición. En general, se prepara la muestra de la
misma forma que lo hace usualmente el consumidor, incluyendo la piel y desechando los
huesos, pero sujeto a las reglas de consumo, por ejemplo: la piel de pez gato no es comestible
y se desecha; los huesos del salmón enlatado son blandos y se incluyen; las sardinas se
analizan enteras. Las instrucciones se pueden modificar de acuerdo con el propósito específico
del análisis.
Para un pescado de tamaño mediano, se remueven y descartan las cabezas, las escamas, la
cola, aletas, vísceras y huesos no comestibles; se cortan filetes de pescado obteniendo toda la
carne y piel desde la cabeza hasta la cola y desde la parte superior de la espalda hasta el
vientre sobre ambos lados.
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NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 1322 (Segunda actualización)
Para la determinación de la grasa y de los componentes solubles grasos, se debe incluir la piel,
debido a que algunos peces almacenan grandes cantidades de grasa por debajo de la piel.
Se pasa la muestra rápidamente tres veces a través de un picador de carne, de manera que no
haya pérdida de material sólido y líquido durante el proceso de molienda.
El picador de carne debe tener unos orificios tan pequeños como sea posible (1,5 mm a 3 mm
de diámetro). Como alternativa para el pescado blando, se puede usar una licuadora de alta
velocidad. Se licúa por algunos minutos, se detiene la licuadora frecuentemente para raspar el
fondo y los lados del recipiente de licuado.
Para las latas pequeñas se saca el contenido completo de la conserva (carne y líquido) y se
vierte en una licuadora. Se licúa hasta obtener una mezcla homogénea o se pica tres veces en
una picadora de carne. Para latas grandes, se drena la carne durante 2 min en un tamiz No. 8
a No. 12 y se recolecta todo el líquido. Se determinan el peso de la carne y el volumen del
líquido. Se recombina una porción de cada uno en cantidades proporcionales. Se licúan las
porciones recombinadas en una licuadora (o picador) hasta obtener una mezcla homogénea.
Se drena y se descarta la salmuera y se enjuagan los cristales de sal adherida con una
solución saturada de cloruro de sodio. Se drena otra vez por dos minutos y se procede como
en el numeral 3.2.1.
Se lavan las conchas con agua potable para remover todos los sedimentos y la suciedad suelta
y se escurren bien. Se retira de la concha suficiente cantidad de carne hasta obtener un
volumen adecuado de muestra drenada según se requiera para efectos analíticos, teniendo en
cuenta de retirar completamente los fragmentos de conchas. Se prepara la muestra según el
numeral 3.2.2.
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4.1.1 Método A
b) Balanza analítica
c) Erlenmeyer de 100 ml
4.1.1.2 Reactivos
4.1.1.3 Procedimiento
Se filtra y luego se lava el filtro con agua destilada. El filtrado y las aguas de lavado se recogen
en un balón volumétrico de 100 ml y se lleva a volumen con agua destilada.
Se toma una alícuota de 10 ml y se titula con la solución de nitrato de plata AgNO3, usando
como indicador 1 ml de la solución de cromato de potasio K2CrO4 hasta cuando la solución
presente una coloración roja amarillenta. Se debe hacer un blanco con agua destilada.
5,85 x ( V − Vo ) x N x F
% Na Cl =
m
en donde
F = factor de dilución
4.1.2 Método B
a) Erlenmeyer de 100 ml
d) Probetas de 10 ml
4.1.2.2 Reactivos
a) Solución patrón 0,1 N de nitrato de plata AgNO3, valorado por titulación con tiocianato
de amonio o potasio frente a cloruro de potasio.
e) Ácido nítrico HNO3 exento de óxidos de nitrógeno. Se diluye el ácido concentrado con
aproximadamente 1/4 de su volumen de agua. Se hierve hasta decolorarlo.
4.1.2.4 Procedimiento
( V A − VB ) x N x 5,85
% m / m de Na Cl =
m
en donde
4.2.1 Método A
4.2.1 1 Principio
a) Balón volumétrico de 50 ml
b) Centrífuga (opcional)
d) Buretas y pipetas
4.2.1.3 Reactivos
4.2.1.4 Procedimiento
Se destilan en 15 ml de HCl 0,01 N que contienen 0,1 ml de ácido rosólico como indicador.
Después de la destilación se titula el exceso de ácido usando NaOH 0,01 N hasta el punto final,
que se detecta con un viraje a color rosado.
N ( VB − Vs ) (14 ) 10
Nitrógeno de TVB ( mg / 100 g muestra ) = x 100
m
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en donde
NOTA No lave los tubos con jabón o detergente, enjuague con agua y ocasionalmente limpie con HNO3
b) Erlenmeyers de 500 ml
c) Probeta de 300 ml
d) Balanza analítica
4.2.2.2 Reactivos
4.2.2.3 Procedimiento
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4.2.2.4 Cálculos
( Vs − Vb ) x 14 x N x 100
mg de BVT / 100 g de muestra =
m
en donde
NOTA No lave los tubos con jabón o detergente, enjuague con agua y ocasionalmente limpie con HNO3.
d) Balanza analítica
e) Pipetas graduadas de 10 ml
g) Pipeta automática
h) Cabina de extracción
i) Licuadora
4.3.1.2 Reactivos
b) Tolueno. Se seca sobre sulfato de sodio anhidro Na2SO4. Para remover las
interferencias, se agitan 500 ml de tolueno con 100 ml de H2SO4 1N, se destilan y se
secan con sulfato de sodio anhidro
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c) Soluciones de ácido pícrico (1) Solución inicial. Se disuelven 2 g de ácido pícrico en 100
ml de tolueno libre de agua (2) solución de trabajo.- Se diluye 1 ml de solución madre de
ácido pícrico en 100 ml con tolueno libre de agua.
4.3.1.4 Determinación
Se toma con una pipeta una alícuota (preferiblemente que contenga 0,01 mg - 0,03 mg de
TMA) dentro de un tubo de ensayo de vidrio Pyrex 20 mm x150 mm o equivalente, con tapa y
se diluye a 4 ml con agua. Para los patrones se usa 1 ml, 2 ml y 3 ml de solución de trabajo de
TMA, se diluye a 4 ml con agua, para el blanco se usan 4ml de agua. Se adiciona 1 ml de
formaldehído al 20 %, 10 ml de tolueno con pipeta automática y 3 ml de solución de K2CO3. Se
tapa el tubo y se agita vigorosamente aproximadamente 40 veces.
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Se toma con una pipeta de 7 ml a 9 ml de la capa de tolueno en un tubo pequeño que contenga
aproximadamente 0,1 g de Na2SO4. Se recomienda evitar remover gotas de la capa acuosa. Se
tapa el tubo y se agita bien para secar el tolueno. Se toma con una pipeta 5ml de la capa de
tolueno en un tubo seco. Se adicionan 5 ml de solución de ácido pícrico y se mezcla por
agitación. Se determina la absorbancia a 410 nm contra el blanco realizado en la
determinación. El color es estable. Si la alícuota contiene más de 0,3 mg de TMA, se disuelve
el extracto con solución de ácido tricloroacético y se repite la determinación.
4.3.1.5 Cálculos
en donde
A = Absorbancia de la muestra
4.4.1.2 Reactivos
a) Resina de intercambio iónico (Bio-Rad AG-1 X8, 50 mallas - 100 mallas) o Dowex 1-X8,
50 mallas - 100 mallas, o equivalente. Se convierte la resina intercambiadora de iones a
la forma OH, añadiendo aproximadamente 15 ml de solución de hidróxido de sodio
NaOH 2 N por g de resina en un vaso de precipitado. Se mezcla y luego se deja reposar
por un tiempo menor de 30 min. Se decanta el líquido y se repite el proceso con una
segunda adición de hidróxido de sodio NaOH. Luego se lava muy bien la resina con
agua destilada y finalmente se deja decantar. Posteriormente se pasa a través de papel
de filtro (S&S No 588 o equivalente) y se lava nuevamente con agua. La resina se
prepara semanalmente y se almacena suspendida en agua en un recipiente con tapa.
La resina de las columnas se cambia frecuentemente (por lo menos dos veces por
semana), guardándola para regeneración según lo descrito en el literal a).
2) Solución intermedia: 10 μg /ml. Se toma con una pipeta 1ml de la solución madre
en un balón volumétrico de 100 ml y se lleva a volumen con HCl 0,1 N. Se debe
preparar semanalmente.
3) Soluciones de trabajo. 0,5 μg, 1,0 μg, 1,5 μg de histamina/5ml. Se toman con
una pipeta 1,0 ml, 2,0 ml y 3,0 ml de solución intermedia en balones volumétricos
de 100 ml y se diluyen a volumen con HCl 0,1 N. Estas soluciones se deben
preparar diariamente.
Se toman por duplicado alícuotas de 5 ml de cada una de las soluciones patrón de trabajo en
erlenmeyers (de vidrio o polipropileno) que contengan 10 ml de HCl 0,1 N y se mezcla. Se
adicionan 3 ml de hidróxido de sodio NaOH 1 N y se mezcla. Se dejan en reposo durante 5min
y se adiciona 1 ml de solución de OPT agitando inmediatamente. Pasados exactamente 4min
se adicionan 3 ml de ácido fosfórico (H3PO4) 3,57 N y se mezcla inmediatamente. Es muy
importante mezclar muy bien cada vez que se adiciona uno de los reactivos y, al menos una
vez, durante la reacción con el OPT (se corren simultáneamente de 6 a 10 reacciones con OPT
adicionando reactivos a los erlenmeyers en el orden establecido.
Se deja en reposo 1,5 h y luego se mide la intensidad de la fluorescencia (I) de las soluciones
patrón de trabajo, utilizando agua en la celda de referencia y una longitud de onda de
excitación de 350 nm y otra de emisión de 444 nm. Se hace una gráfica de I (corregida para el
blanco) contra μg de histamina/5ml de alícuota.
4.4.1.4 Determinación
se lleva a volumen con metanol y se filtra a través del papel de filtro rápidamente. El filtrado
alcohólico puede almacenarse en refrigeración en un recipiente tapado para posteriores
determinaciones, teniendo en cuenta que la evaporación del metanol puede llevar a resultados
incorrectos.
4.4.1.5 Cálculos
La gráfica de la intensidad (I) (medida por medio de la desviación o respuesta del registrador y
corregida para el blanco) contra μg de histamina en 5 ml de alícuota, debe dar una línea recta
que pasa por el origen, con una pendiente m = [(Ia /1,5) + Ib + 2Ic ]/3.
en donde
Is = fluorescencia de la muestra.
en donde
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Si la gráfica de calibración no es una recta, se usa directamente una curva de referencia para
hacer la cuantificación. Cada subdivisión de la escala de las abscisas debe ser menor o igual a
0,1 μg de histamina/5 ml de solución. Se deben leer todos los valores de la curva con
aproximación a 0,05 μg de histamina/5 ml de solución.
en donde
(Se usa agua redestilada para la preparación de reactivos y para las determinaciones. No se
debe limpiar el material de vidrio con jabón, se usa una solución fresca de ácido crómico para
la limpieza, se enjuaga bien con agua del grifo y después 3 veces con agua destilada y 3 veces
con agua redestilada, se puede usar alcohol para humedecer o enjuagar el material de vidrio).
a) Espectofotómetro
b) Pipeta volumétrica de 5 ml
d) Estufa de vacío
e) Baño de maría
4.4.2.2 Reactivos
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j) Hidróxido de sodio al 20 %.
Se prepara la columna colocando firmemente pequeños tacos succinato ácido de algodón (CAS)
de más o menos 50 mg en la microcolumna (puede utilizarse una jeringa desechable), preparada
cortando o soplando hacia el fondo. Se lavan los tapones con 3 porciones de 15 ml de agua y
2 porciones de alcohol de 3 ml. Se dejan gotear los solventes a través de la microcolumna CAS,
ayudando a eliminar las últimas gotas con aire comprimido accionando lentamente el émbolo
hasta que no quede solvente empapado en la microcolumna CAS. Los tacos de CAS se pueden
reutilizar durante meses lavando brevemente con H2O y alcohol después del uso, como se indicó
antes y protegiéndolo del polvo con un vaso de precipitados invertido.
4.4.2.4 Determinación
Se diluyen 5 ml de filtrado a 100 ml con agua (se pasa por alto la turbidez). Se toman con una
pipeta 5 ml de alícuota en un tubo de ensayo de vidrio de 16 mm X 150 mm con tapa y se agrega
1 gota de benzaldehido (libre de Cl) y 0,2 ml de NaOH al 20 %. (El pH después de agregar NaOH
debe estar entre 12,4 a 12,5). Se agita vigorosamente aproximadamente 25 veces. Se deja
reposar 2 min y se agregan 5 ml de mezcla de benceno-n-butanol. Se agita vigorosamente
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aproximadamente 25 veces y se deja reposar 5 min para separar. Si se forma una emulsión se
centrifuga.
Se transfiere la capa superior con pipeta de punta fina equipado con pera de caucho a la
microcolumna de CAS preparada previamente, evitando transferir cualquier fase acuosa. Se
extrae nuevamente la solución acuosa con 5 ml de mezcla de benceno-butanol como antes,
agitando, dejando reposar 5 min y transfiriendo la capa superior a la columna. Se enjuaga la tapa
y los lados de la columna con un flujo fino de alcohol de un frasco lavador, dejando drenar a
través de la CAS se lava la columna con 3 ml de alcohol, se deja drenar, se lava con 2 porciones
de 3 ml de H2O y se vuelve a dejar drenar. Se descartan los solventes y los lavados.
Se enfría el eluído en un baño de hielo asegurando el frasco con un aro de plomo o mordaza
para evitar el volcamiento y se deja reposar 5 min a 10 min; se agregan 0,5 ml de reactivo
diazonio frío y se deja reposar 5 min en baño de hielo. Se agregan 0,50 ml de solución
reguladora de pH de acoplamiento (el volumen es crítico; es conveniente el uso de pipeta de
Ostwald o una equivalente) agitando continuamente para evitar zonas alcalinas localizadas (el
pH después de agregarlo debe estar entre 5-6). Se deja reposar 5 min en el baño de hielo. Se
satura la solución con adición de aproximadamente 0,25 g de tetraborato de sodio
decahidratado Na2B4O7 .10 H2O agregada de una sola vez. Se agita inmediatamente la
solución y en forma continua por aproximadamente 30 s, para asegurar la saturación rápida y
completa (el pH final es de 8,6). Se deja reposar 15 min en baño de hielo.
Se transfiere la capa superior con pipeta de punta fina a una celda de 1 cm y se determina la
absorbancia a 475 nm contra metil isobutil cetona, como blanco. Se repite la determinación en
muestras cuyos valores de absorbancia sean superiores al patrón de 25 µg por dilución de 1 ml
del filtrado metanólico a 100 ml con agua. Paralelamente, la dilución acuosa se puede diluir 1 +
4 (o más veces) con agua.
Se elabora el patrón y el blanco a través del siguiente procedimiento: se toman con una pipeta
5 ml de solución de histamina patrón de 5 µg/ml en un tubo de ensayo de vidrio de 16 mm x
150 mm con tapa y se toman con una pipeta 5 ml de metanol al 5 % en un tubo similar para el
blanco. Se procede como en la determinación, al comienzo, párrafo 2, renglón 2 (véase el
numeral 4.4.2.4)
Se calcula:
mg de histamina en la alícuota=(ΔA/ΔA’) x 25
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NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 1322 (Segunda actualización)
en donde
Método por espectrofotometría por absorción atómica utilizando una llama de óxido nitroso-
acetileno (véase el Anexo A).
4.5.1 Principio
La muestra es digerida con HNO3 y luego digerida con HCl, se adiciona solución acuosa de KCl
a las muestras y a los patrones para reducir las interferencias instrumentales. Luego se
determina por absorción atómica λ = 235,5 nm, con llama oxidante acetileno óxido-nitroso.
Con aproximación de ± 0,01 g se pesa en un erlenmeyer de 250 ml, una cantidad de muestra
teniendo en cuenta lo siguiente: 20 g si contiene entre 50 % y 75 % de agua y 5 g a 10 g si son
muestras sólidas o semisólidas, teniendo en cuenta que no se sobrepase un límite de 2 g a 4 g
de grasa y un máximo de materia orgánica de 5 g. Se seca en estufa a 120 °C.
Se toma con una pipeta 1 ml de la solución de KCl en cada balón volumétrico, se enfría a
temperatura ambiente y se diluye a volumen con agua. Se coloca agua adicional en cantidad
aproximada para compensar el volumen de grasa en el balón.
4.5.4 Determinación
Se debe tener especial cuidado en el cero del equipo con la aspiración del agua evitando
ajustarlo cada vez, pues se reduce la precisión. Se aspira el agua antes y después de cada
muestra patrón o blanco de reactivos. Se toman 3 lecturas leídas en 5 s para cada solución, se
promedian y se referencian todas a la medida del agua.
en donde
Se mide la absorbancia para el blanco de muestra como se hizo para el blanco de patrones y
se calcula:
Blanco de muestra (μg/ml) A0/A’ x concentración verdadera del patrón de 50 μg/ml
en donde
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NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 1322 (Segunda actualización)
Se determina la concentración de las soluciones de la muestra por una de las dos vías:
en donde
b) Se calibra utilizando el blanco y patrónes de 50 μg/ml, 100 μg/ml y 150 μg/ml. Se corren
los blancos de muestra y las muestras y se calcula la concentración de las soluciones
utilizando el procesador del instrumento o la curva de calibración. Se calcula el
promedio de la concentración de los blancos de muestra, B. Se calcula la concentración
de la solución del blanco corregido en μg/ml sustrayendo B de las concentraciones de
las soluciones.
Método por espectrofotometría por absorción atómica utilizando generador de hidruros en frío
(véase el Anexo A).
Se lava todo el material de vidrio antes de su uso con ácido nítrico (1 + 9).
4.6.1 Equipos
b) Lámpara de cátodo hueco para mercurio o lámpara de descarga sin electrodo para Hg
4.6.2 Reactivos
a) Solución reductora
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NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 1322 (Segunda actualización)
4.6.3 Determinación
NOTA Se puede hacer uso de otras alternativas: para la digestión de la muestra, por ejemplo con pentóxido de
vanadio, ácido sulfúrico y ácido nítrico (método AOAC 977.15 capítulo 9 edición de 2005 ) y para el sistema de
digestión en recipiente cerrado en material inerte como teflón (método AOAC 974.14 ).
- Preparación del hidruro de mercurio, según los accesorios con que cuente cada equipo.
Se partirá de la solución digerida de la muestra y del agente reductor para obtener el
hidruro de mercurio en fase de vapor sobre el cual se realizará la lectura
correspondiente en unidades de absorbancia utilizando un λ de 253,7 nm y los ajustes
necesarios de resolución dependiendo de cada equipo.
- Se prepara un blanco de reactivos y una curva patrón por adición de 0,2 μg Hg; 0,4 μg
Hg; 0,6 μg Hg; 0,8 μg Hg y 1μg Hg en una serie de balones de digestión, aforando a
100 ml con la solución diluyente, finalmente se adiciona la solución reductora y se
procede como en la muestra. Se ajusta la curva con regresión lineal absorbancia contra
μg. Se determinan los μg de Hg en la alícuota con base en la curva. Si los μg de
mercurio determinados estuvieran por fuera del rango de la curva de calibración, se
repite la determinación con una alícuota menor de la solución de la muestra de tal
manera que la lectura quede dentro de la curva.
ppm Hg = μg Hg / g de muestra
Método por espectrofotometría por absorción atómica utilizando una llama de aire-acetileno
(véase el Anexo A).
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NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 1322 (Segunda actualización)
4.7.1 Equipos
4.7.2 Reactivos
Antes de proceder con el análisis. Se prueba la pureza de los reactivos como se indica a
continuación: se evaporan 4 ml HNO3 en un crisol sobre un baño caliente de vapor o placa de
calentamiento, se disuelve el residuo en HCI 1N, y se transfiere a un balón volumétrico de 25
ml. El residuo se calienta con dos porciones de 5 ml de ácido clorhídrico 1 N. Se enfría, se
diluye a volumen con HCl 1 N y se mezcla. Luego se procede con la determinación. El blanco
debe tener menos de 10 μg de Pb (equivalente a 0,4 ppm en la muestra), para determinar
niveles mayores o iguales a 1 ppm. Para determinaciones menores o iguales a 1 ppm, se
purifican los reactivos para conseguir un blanco con menos de 50 % del nivel límite.
Se pesan 25 g (con una precisión de 0,1 g) en un crisol, y se seca por 2 h a 135 °C - 150 °C.
Se transfiere en frío, se controla la temperatura – de la mufla y lentamente se aumenta la
temperatura a 500 °C. Se controla y verifica para el mantenimiento de 500 °C. (Temperaturas
por debajo de 550 °C causan pérdida de Pb). Para obtener las cenizas se deja durante toda la
noche (16 h). Se retira la muestra, se deja enfriar a temperatura ambiente, se agregan
cuidadosamente 2 mI de HNO3, y se agita. Se evapora cuidadosamente hasta que quede seco
sobre un baño caliente de vapor. Se transfiere frío y se va aumentando la temperatura a 500 °C,
durante 1 h. Se retira el crisol y se enfría.
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NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 1322 (Segunda actualización)
Se toman los registros de la concentración después de la calibración del equipo. Para la lectura
del registrador, se regula la amplificación para que dé una lectura de absorción > 1 % para una
solución de trabajo de 0,2 µg Pb/ ml y se prepara la curva patrón de A contra = [(µg Pb/ ml)]
4.7.6 Determinación
NOTA Se puede hacer uso de otras alternativas: método polarográfico AOAC 972.24 capítulo 9 edición de
1995 y otro método de espectrofotometría de absorción atómica AOAC 974.14 capítulo 9 edición de 1995).
ppm Pb= [(µg Pb/ ml en la muestra diluída) x ( ml de muesra diluída/ ml de alícuota original) x 25] / g de muestra
Método por espectrofotometría por absorción atómica utilizando una llama de aire acetileno.
(Véase el Anexo A)
Se debe limpiar todo el material de vidrio que se use dejándolo sumergido toda la noche en una
solución de ácido nítrico al 20 %.
4.8.1 Equipos
a) Plancha de calentamiento.
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NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 1322 (Segunda actualización)
4.8.2 Reactivos
Se retira la muestra de la mufla, se deja enfriar a temperatura ambiente. La ceniza debe ser
blanca libre de carbón. Si contiene partículas de carbón (es decir, es gris), se humedece con
agua destilada y desionizada y se añaden de 0,5 ml a 3,0 ml de HNO3.
4.8.4 Determinación
El cálculo es el siguiente:
ppm Cu = μg Cu / g de muestra x F
en donde
F = Factor de dilución
Método por espectofotometría por absorción atómica utilizando generador de hidruros (véase el
Anexo A).
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NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 1322 (Segunda actualización)
4.9.1 Principio
4.9.2 Equipos
Cabeza del quemador 10 cm para aire-acetileno y llama de aire N2-H2 y deuterio que
son correctores de fondo
b) Recipiente de descomposición 70 ml
4.9.3 Reactivos
Se utiliza agua bidestilada, se lava todo el material de vidrio en HNO3 (1+1) seguido por lavado
con agua. Se descontaminan los recipientes de digestión y se lavan cuidadosamente con agua.
a) Ácidos
b) Solución equimolar de nitratos de potasio y sodio (Se disuelven 54,3 g de KNO3 y 45,7 g
NaNO3 (preferiblemente Suprapur Nos 5065 y 65461 respectivamente, EM Science) en
agua aforando a 200 ml y se mezcla bien.
Para lograr una pureza mayor, se toma una alícuota de 25 ml y se adiciona 1 a 2 gotas
de NH4OH, se extrae con 2 ml de ditizona (10 µg/ml) en tetracloruro de carbono hasta
que la capa del solvente inferior sea incolora.
c) Soluciones de magnesio
1
Suprapur Nos 5065 y 6546 EM Science, son ejemplos de productos adecuados disponibles
comercialmente. Esta información se da para comodidad de los usuarios de ésta norma, y no constituye
respaldo de ICONTEC a este producto.
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NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 1322 (Segunda actualización)
Se toma con una pipeta una alícuota de la solución de muestra digerida en un balón de fondo
redondo de borosilicato de 50 ml, se adiciona 1 ml de solución de Mg(NO3)2. Se calienta en
plancha a baja temperatura hasta sequedad y luego se incrementa el calentamiento al máximo
(375 °C) aproximadamente. Se coloca el balón en una mufla a 450 °C para oxidar toda la
materia carbonada y se descompone el exceso de Mg(NO3)2 (por más de 30 min). Se enfría y
se disuelve el residuo en 2 ml de HCl 8 M, se adicionan 0,1 ml de KI al 20 % para reducir el
As+5 a As+3 y se deja en reposo por más de 2 min. Se lleva un blanco de reactivos con la
muestra.
Se preparan patrones como sigue: en 6 balones de 50 ml (del mismo tipo que las de la
muestra) se adicionan 2 ml de la solución de MgCl2; y para 5 balones se añaden alícuotas de
50 µl de cada una de las soluciones de trabajo para que la serie contenga 0 µg de arsénico;
0,05 µg de arsénico; 0,1 µg de arsénico; 0,15 µg de arsénico; 0,20 µg de arsénico; y 0,25 µg de
arsénico (Se pueden usar otras cantidades dependiendo de la sensibilidad del sistema). Se
adiciona 0,1 ml de KI a cada balón, se mezcla y se deja en reposo por más de 2 min.
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Método por espectofotometría por absorción atómica utilizando una llama de aire (véase el
Anexo A).
4.10.1 Principio
La muestra se digiere con HNO3, H2SO4 y H2O2. Todos los metales reactivos son extraídos de
la solución, posteriormente se ajusta el pH con ditizona-cloroformo. El Cadmio es removido de
la solución clorofórmica con HCl y se determina por espectrofotometría de absorción atómica a
228,8 nm.
Se lava cuidadosamente todo el material de vidrio nuevo o que ha sido utilizado con soluciones
de cadmio con HNO3 8 N y se lava con agua. Se debe mantener cubierto el recipiente durante
todo el proceso.
d) Indicador azul de timol: se colocan 0,1 g de azul de timol en un balón volumétrico con
4,3 ml de NaOH 0,05 N, se diluye en 200 ml de agua.
e) Soluciones de ditizona
1) Solución inicial 1 mg/ml (se disuelve 1,000 g de Cd (Método AOAC 945.58 B (h),
15 edición) con pureza de 99,9 % en 165 ml de HCl en un balón volumétrico de
1 L y se lleva a volumen con agua.
(g) Espectrofotómetro de absorción atómica con: lámpara de cátodo hueco para cadmio,
quemador de 10 cm para llama aire-acetileno, λ = 228,8 nm, rango 0 μg/ml a 2,0 μg/ml.
4.10.3 Digestión
calienta para iniciar la reacción. Cuando la reacción decae, se adicionan otros 25 ml de HNO3 y
se calienta nuevamente, se continúa el proceso hasta que se completen 100 ml de HNO3,
teniendo precaución durante el tratamiento en cada adición, luego se deja en reposo durante
toda la noche a temperatura ambiente. Se calienta hasta que no se liberen vapores controlando
la formación excesiva de espuma con enfriamiento o adicionado agua de un frasco lavador.
Solamente permanece celulosa y materiales grasos obviamente sin disolver.
Para remover la grasa visible en la solución caliente, se procede como sigue: se enfría el balón
en hielo y se decanta la solución acuosa clara de los aceites coagulados sólidos a través de
lana de vidrio en un vaso de precipitados de 1 L, se adicionan 100 ml de agua al vaso de
precipitado de 1,5 L con la grasa, se calienta, se agita vigorosamente para lavar la grasa
suspendida y se filtra como antes. Se lava el embudo y la lana de vidrio con 20 ml de agua.
Se prepara el blanco de reactivos con 100 ml, HNO3, 20 ml H2SO4 y la misma cantidad usada
de H2O2 en la digestión de la muestra. Cuidadosamente adicione las mismas cantidades de
H2O2 del 50 % hasta remover todo el HNO3 del blanco, corra el blanco a través de todo el
proceso de la muestra.
4.10.4 Extracción
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4.10.5 Determinación
Se enjuaga el quemador con agua entre lecturas. Se usa control de expansión de la escala
para obtener de 4 a 10 veces la expansión conveniente. Se determina el Cd de la curva de
absorbancia en μg de cadmio /ml (ppm).
Para concentraciones mayores a 2,0 μg Cd /ml se diluye la solución con HCl 2N.
4.11.1 Reactivos
4.11.2 Procedimiento
Se transfieren 10 g de la muestra a un erlenmeyer que se tapa con papel de filtro doble, el cual
ha sido previamente embebido en la solución de plumbito de sodio o en la solución de acetato
de plomo.
Se coloca el erlenmeyer en un baño María de modo que el fondo quede a 3 cm del nivel del
agua. Se calienta durante 10 min. La aparición de una mancha plateada (color metálico
brillante) indica la presencia de gas sulfhídrico.
4.12.1.1 Reactivos
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4.12.1.3 Determinación
4.12.2.1 Reactivos
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4.12.2.2 Equipo
Se conecta una de las bocas esmeriladas de un balón de un litro de tres bocas de tamaño
24/40 (A), a través de un tubo de entrada, con unión esmerilada 24/40, doblado de manera que
penetre casi hasta el fondo del balón, a un frasco lavador de gases, de 250 ml (B), conectado a
su vez a un depósito de nitrógeno. Se acopla a otra boca del balón un condensador vertical
Allihn de 30 cm (C). Se conecta este condensador, a través de un tubo de silicona de 15 cm, a
dos tubos en U (55 mm ± 5 mm de longitud y 20 mm de diámetro) con juntas en bola 35/20 (D),
colocados en serie, acoplados a través del tubo de empalme con juntas de bola 35/20;
distancia entre los centros de (55 ± 5) mm. Se acopla a la boca central de balón un embudo de
decantación cilíndrico (E) de 125 ml con juntas de 24/40. (Véase la Figura 1).
Se repite la operación con otras dos porciones de 5 ml de agua, se arrastra succionando por
una trompa de agua, nitrógeno procedente del depósito provisto de un regulador de dos
etapas, al frasco lavador de gases, expulsando el aire del mismo. Se añade al frasco lavador
de gases, a través de un embudo de cuello largo, una solución recientemente preparada y fría,
constituida por 65 g de KOH y 85 ml de agua. Se cierra la entrada de nitrógeno y se conecta el
tubo de salida del frasco lavador de gases al de entrada de gases al matraz por medio de un
tubo de silicona de 0,62 cm por 15 cm. Se ajustan los extremos de entrada y salida de (B).
Se introduce una pieza de tubo de goma en el extremo de un pequeño tubo de vidrio en U, que
penetra por el otro extremo, a través de un tapón de goma, hasta el cuello del embudo de
decantación (E). Se sopla a través del tubo de goma y se cierra la llave de paso del embudo de
decantación. Se esperan unos minutos para controlar si hay fugas, lo que se pondría de
manifiesto por las modificaciones experimentadas por los niveles del líquido contenido en los
tubos en U.
Se coloca el balón de destilación (A) sobre un manto de calentamiento (F) controlado por un
transformador variable.
(C) con los tubos en U (C), debe haberse hervido previamente en HCl (1+20) y lavados con agua. Trasher
simplificó el dispositivo de la Figura 1 sustituyendo las trampas por el sistema ilustrado en la Figura 2.
4.12.2.3 Determinación
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Se hace una determinación al blanco de reactivos, tanto por titulación como por gravimetría y
se corrigen los resultados de acuerdo con los valores obtenidos.
Método colorimétrico
4.13.1 Principio
NOTA El material de vidrio y los crisoles deben ser lavados con detergentes libres de fosfatos
b) Celdas de 1 cm
c) Balanza analítica
f) Mufla
g) Papel filtro
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4.13.3 Reactivos
b) Óxido de zinc
NOTA Esta solución no es estable, deberá prepararse fresca en el momento y día de uso
h) Solución patrón de fósforo 1,0 mg P/ ml. Para prepararla se seca durante 2 h. Fosfato
diácido de sodio a 101 °C (KH2PO4) y se disuelve 1,0967 g de la sal seca en un balón
volumétrico de 250 ml diluyendo a volumen con agua. Se mezcla bien.
NOTA Se almacenan las soluciones patrón de fósforo a 5 ºC para minimizar el riesgo de aparición de
microorganismos. Se descarta la solución si se presenta turbidez.
NOTA No se requiere precalcinar si se dispone de una mufla con regulador de temperatura y tiempo.
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Se coloca el crisol en la mufla a temperatura ambiente y se ajusta a 525 °C, manteniendo esta
temperatura 4 h o durante la noche. Cuando se utiliza una mufla equipada con regulador de
temperatura y tiempo, se utiliza un incremento pequeño de temperatura para evitar el riesgo de
salpicado en muestras líquidas. Se remueve el crisol del horno y se deja enfriar a temperatura
ambiente. Una vez frío se adiciona al crisol 5 ml de agua y 5 ml de HCl. Se cubre el crisol con
un vidrio de reloj y se coloca en una placa caliente para ebullición cuidadosamente, durante 5
min.
Se filtra el contenido del embudo en un balón volumétrico de 100 ml, se lava la superficie
interna del vidrio de reloj con 5 ml de agua caliente. Se repiten los lavados 4 veces con 5 ml de
agua caliente y se reúnen todos en el balón volumétrico. Se enfría a temperatura ambiente, se
neutraliza la solución adicionando solución de KOH al 50 %, hasta que la solución se torne
opaca [Zn(OH)2 ]. Se adiciona HCl gota a gota hasta que desaparezca la turbidez. Se adicionan
2 gotas extras de HCl. Se deja en reposo la solución a temperatura ambiente, luego se diluye a
volumen con agua.
Dependiendo del contenido esperado de fósforo, se toma con una pipeta exactamente entre
1,00 ml y 10,00 ml de solución tratada a un balón volumétrico de 50 ml y se diluye la solución
con 15 ml de agua, se adicionan 20 ml de solución ascórbico molibdato a la solución de ensayo
en el balón volumétrico de 50 ml y también a las soluciones de la curva de fósforo, se agita el
contenido cuidadosamente. Se colocan los balones en una canastilla, tapados insertando un
trozo de papel de filtro para evitar que se quede pegada la tapa y se fijan con una nuez de
plomo que le de peso al balón y se coloca en un baño maría a ebullición vigorosa durante
exactamente 15 min. Se enfrían los balones con agua corriente a 20 °C ó 30 °C y se diluye a
50 ml con agua desionizada, se mezcla bien.
4.13.5 Determinación
4.13.6 Cálculos
Se calcula el contenido de fósforo como fósforo en la muestra de ensayo (g/100 g) como sigue:
en donde
El resultado se reportará con 2 cifras significativas g/ 100 g (ej. 1,2 g/100 g; 0,56 g/100 g;
0,067 g/100 g)
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Calculo para el fósforo como pentóxido de fósforo (P2O5) g/100 g = 2,29 x fósforo (g/100g)
Pentóxido de fósforo g/100 g = 2,29 x Fósforo (g/100 g)
Por inspección visual se determina la presencia de los siguientes defectos en el exterior del
envase:
4.14.6 Corrosión
Por inspección visual se determina la presencia de los siguientes defectos en el envase interior
4.15.3 Corrosión
4.16.1 Equipos
4.16.2 Procedimiento
A todos los envases se les determina el espesor y la altura del cierre en la tapa del fondo, por
lo menos en cuatro puntos equidistantes. En los envases con costura o soldadura lateral, estas
medidas se deben efectuar a más de 2,5 cm de la costura. En los envases no cilíndricos, se
debe tomar además medidas en las zonas de mayor curvatura.
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4.17.1 Aparato
4.17.2 Procedimiento
Se limpia la superficie del envase y con el vástago del punzón, protegido por un empaque
hermético, se perfora la superficie de la lata, manteniendo el manómetro perpendicular al
envase.
4.18.1 Equipos
a) Abrelatas
b) Tornillo micrométrico para medir profundidad o una regla y una reglilla, graduadas en
milímetros.
4.18.2 Procedimiento
Con el abrelatas se corta la lata y se levanta en forma cuidadosa para que no se deforme el
borde superior del envase
Método A
Se coloca la regla transversal y de perfil, sobre el borde superior del envase y la reglilla se
apoya perpendicularmente a la regla; se desliza la reglilla de tal manera que su extremo inferior
roce la superficie del material envasado y se lee la distancia entre la superficie del líquido y la
regla. se repite el procedimiento en cuatro sitios diferentes del recipiente.
Método B
Se coloca la parte plana del tornillo micrométrico sobre el borde superior del envase y
perpendicularmente a este. Se ajusta el tornillo hasta que su extremo toque la superficie del
material envasado y se efectúa la lectura.
Informe: el espacio libre comprendido entre la superficie del contenido y el borde superior del
envase se expresa como el promedio de las cuatro lecturas obtenidas, en milímetros, para
ambos métodos.
El peso neto de todas las unidades de muestra se determinará mediante el procedimiento que
se indica a continuación:
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- Se resta el peso del envase vacío del peso del envase sin abrir. El resultado será el
contenido neto.
4.20.1 Principio
Se considera como contenido neto a la diferencia entre las masas del envase lleno y vacío y
como contenido drenado a la diferencia entre las masas del envase con el producto drenado y
el envase vacío. El contenido de producto es establecido como un porcentaje del producto en
relación con el contenido drenado.
4.20.2 Aparato
a) Balanza analítica
4.20.3 Procedimiento
- Se determina el peso del pescado escurrido, restando el peso del tamiz del peso del
tamiz con el producto escurrido.
- Se lava el contenido del tamiz con agua caliente hasta eliminar totalmente la salsa
adherida.
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En caso necesario, separar con unas pinzas los ingredientes facultativos (especias, hortalizas,
frutas). Se inclinar el tamiz con un ángulo de 17° a 20° aproximadamente y se deja escurrir el
pescado durante dos minutos a partir del momento en que se haya completado el lavado.
B
A
A Tubo de dispersión de gases, tamaño 2, porosidad C (Scietific Glass Apparatus Co. No. G-5420,
equivalente)
B Matraz de condensación Kuderna Danish, bocas normalizadas 225 (Kontes Glass Co. No. K57.000 BC)
Tubo de concentración; boca 24/(Kontes Glass Co. No. 57.000 C);
Figura 1. Aparato para la determinación del dióxido de azufre por el método Monier-Williams modificado
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N C
F
B
A Matraz de destilación
C Refrigerante de Allihn
F Manta calefactora
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ANEXO A
(Normativo)
SEGURIDAD EN LABORATORIO
Para el uso de espectrofometría de absorción atómica síganse las instrucciones del fabricante
para la instalación, operación, seguridad y mantenimiento. Se utiliza solamente la tubería o los
ductos de conducción de gases que suministra el fabricante. Se deben remover en forma
efectiva los residuos de los gases de las líneas o las trazas de las muestras del quemador. Se
debe usar solamente acetileno suspendido en solventes recomendados para el fabricante. Se
debe abrir la válvula de acetileno solamente 1/4 de vuelta y se cambia la bala cuando la
presión está entre 75 lb y 100 lb. Si el equipo cuenta con trampas de drenado, se debe
asegurar que se limpia y se lava con agua antes de prender el quemador. Se deben chequear
los manómetros de dosificación de los gases y las líneas de conducción para asegurarse que
no hay fugas.
Cuando se aspiran soluciones con altas cantidades de cobre, plata, mercurio, se deben utilizar
sprays para lavar con agua antes de que aspiren por el sistema de succión de aire.
1) Para el manejo de gases comprimidos en cilindros, se deben seguir las instrucciones del
distribuidor.
2) Se debe tener especial cuidado con las soluciones oxidantes, mezclas de ácidos
concentrados, como HNO3, H2SO4, HClO4 y peróxido.
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