Instrumentacin y Equipos de Laboratorio Clnico

III Ciclo de Laboratorio Clnico y Anatoma Patolgica

E.A.P. de Tecnologa Mdica
Facultad de Ciencias de la Salud

ESPECTROFOTOMETRA: CONCEPTOS Y
APLICACIONES

Docente: Lic. TM Manfred Ramrez Agama

 INTRODUCCIN
Es el sistema de deteccin ptico ms usado en
determinaciones bioqumicas.
Se compara la cantidad de luz absorbida o transmitida
por una solucin que contiene una cantidad
desconocida de soluto, contra una que contiene una
cantidad conocida del mismo soluto.
El espectrofotmetro es el instrumento que permite
cuantificar esa radiacin.
 PRINCIPIO DE ESPECTROFOTOMETRA
Todas las sustancias pueden absorber energa radiante, hasta las
transparentes como el vidrio.
La absorcin depende de la estructura molecular de la sustancia.
El agua absorbe luz IR y otras radiaciones menores a 180 nm.
La energa radiante no puede producir ningn efecto sin ser
absorbida.
El color de las sustancias se debe a que stas absorben ciertas
longitudes de onda (l) del espectro visible.
 PRINCIPIO DE ESCTROFOTOMETRA
La espectrofotometra UV-Visible usa haces de radiacin del
espectro electromagntico.
En el laboratorio de bioqumica analtica, se usa principalmente luz
de 200 380 nm (UV) y de 380 700 nm (Visible).
Al campo de luz UV de 200 380 nm se le llama UV cercano.
La absorcin y transmisin de luz depende tanto de la
concentracin como de la distancia recorrida por la luz.
 LEY DE BEER
La cantidad de luz absorbida por un cuerpo depende de la
concentracin en la solucin.
Ej: tenemos la misma cantidad de agua azucarada en dos
vasos, pero uno de ellos contiene ms azcar. Si un rayo
atravesara el vaso diluido, saldra ms luz de l que del ms
concentrado.
LEY DE BEER
 LEY DE LAMBERT
La cantidad de luz absorbida por un objeto
depende de la distancia recorrida por la luz.
Ej: tenemos dos vasos con agua azucarada,
con la misma cantidad de azcar en ambos.
Pero uno de los vasos tiene mayor dimetro
que el otro. ste absorber ms luz que el de
menor dimetro.
LEY DE LAMBERT
 ABSORBANCIA Y TRANSMITANCIA
Ley de Lambert-Beer-Bouguer
Slo es una combinacin de las mencionadas
anteriormente.
Ecuacin simplificada: A = e.d.c
Donde:
A es absorbancia,
e el factor de calibracin,
des la distancia que recorre la luz por la muestra
c es la concentracin.
 ABSORBANCIA Y TRANSMITANCIA
La absorbancia es igual a A, que es el logaritmo del
recproco de la transmitancia (T).
A = log 1/T A = -log T
Las ecuaciones sern vlidas slo si:
La radiacin incidente es monocromtica.
Las especies actan independientemente unas de otras
durante la absorcin.
La absorcin ocurre en un volumen de seccin transversal
uniforme.
 APLICACIONES
Para determinar la cantidad de concentracin en
una solucin de algn compuesto usando las
frmulas ya mencionadas.
Para determinar estructuras moleculares.
Para identificar unidades estructurales especficas
ya que estas tienen distintos tipos de absorbancia
(grupos funcionales).
 EL ESPECTROFOTMETRO
Instrumento usado en la ptica para medir, en funcin a la
l, la relacin entre valores de una misma magnitud
fotomtrica, en cuanto a dos haces de radiaciones.
Tambin sirve para cuantificar sustancias y
microorganismos.
Hay varios tipos, entre ellos el de absorcin atmica y el
espectrofotmetro de masa.
Proyecta un haz de luz monocromtica a travs de una
muestra y mide la cantidad que es absorbida por dicha
muestra.
 PARTES: FUENTE DE LUZ
La misma ilumina la muestra.
Es una lmpara que puede ser de wolframio,
de arco de xenn y de deuterio.
La ms usada actualmente es la de tungsteno-
halgena.
 PARTES: MONOCROMADOR
Asla las radiaciones que incide o se refleja desde
el conjunto.
Se usa para obtener luz monocromtica.
Est constituido por rejilla de entrada y salida,
colimadores y el elemento de dispersin
El colimador que lleva es un lente que hace que el
haz de luz entre con una determinada l hacia un
prisma.
 OTRAS PARTES
Compartimiento de
la muestra.
Detector de seal.
Registrador.
Fotodetectores
Lic. TM Manfred Ramrez Agama
E-mail: manfred_agama@hotmail.com