Preinforme Determinacion de Azucares Reductores

Regional Distrito Capital
Sistema de Gestión de la Calidad
DETERMINACIÓN DE AZUCARES REDUCTORES
INTEGRANTES
DIANA KATHERINE CORTES
LAURA VALENTINA PEÑA
DIANA LORENA CALDERON
JUAN ESTEBAN LOZANO
INSTRUCTOR
JACQUELINE MOJICA GOMEZ
COMPETENCIA:
ASEGURAR LA CALIDAD DE LOS ENSAYOS II
SERVICIO NACIONAL DE APRENDIZAJE

SENA CENTRO DE GESTIÓN INDUSTRIAL
TECNOLOGÍA EN QUÍMICA APLICADA A LA INDUSTRIA
14 DE MARZO DE 2021
FORMATO GUÍA DE APRENDIZAJE
F37-9211-08 Versión 01 , Noviembre de 2010
PROCESO: EJECUCIÓN DE LA FORMACIÓN PROFESIONAL
PROCEDIMIENTO: P01-9211-08 PROCEDIMIENTO PARA DESARROLLAR
ACCIONES DE FORMACIÓN PROFESIONAL TITULADA Centro de Gestión Industrial
Sistema Integrado de Gestión
1. INTRODUCCIÓN
Hoy en día la industria licorera y alimenticia utiliza varios tipos de métodos analíticos
para la determinación de azúcar y alcohol en los licores y/o bebidas a utilizar como
medio de venta.
Uno de los métodos más acordes y con mejor resultados en la determinación de los
azúcares con carácter reductor, es el método (DNS), método que ha sufrido varias
modificaciones a través de los años para adecuarse al análisis de diferentes
materiales y su principal ventaja radica en su alta sensibilidad y productividad debido a
que es un método espectrofotométrico; el procedimiento se basa en una reacción
redox que ocurre entre el DNS y los azúcares reductores presentes en la muestra, sin
embargo a nivel industrial no es recomendable utilizarlo cuando dicha trata sustancias
tales como mieles y caldos de fermentación que lo contengan, esto debido a según
estudios realizados en la materia, a los altos niveles de dispersión.
El presente informe desarrollará el procedimiento respectivo para la determinación de

azúcares reductores a partir de una solución patrón de glucosa de concentración 1g/L,
que permitirá realizar y ajustar una curva de calibración, y una solución desconocida;
por el método del ácido 3,5 dinitro salicílico (DNS).
2. OBJETIVOS
2.1 OBJETIVO GENERAL
Establecer la longitud de onda de la máxima absorción para las diferentes soluciones

coloreadas.
2.2 OBJETIVOS ESPECÍFICOS
● Conocer y aplicar los principios de la curva patrón aplicada a la cuantificación

de azúcares reductores con el reactivo 3,5 dinitro salicílico (DNS).
● Obtener una curva de calibración para azúcares reductores haciendo uso del
método de Miller (DNS) usando Glucosa como estándar.
3. MARCO TEÓRICO
La espectroscopía UV-Vis está basada en el proceso de absorción de la radiación

ultravioleta-visible (radiación con longitud de onda comprendida entre los 160 y 780 nm)
por una molécula. La absorción de esta radiación causa la promoción de un electrón a
un estado excitado. Los electrones que se excitan al absorber radiación de esta
frecuencia son los electrones de enlace de las moléculas, por lo que los picos de
absorción se pueden correlacionar con los distintos tipos de enlace presentes en el
compuesto. Debido a ello, la espectroscopía UV-Vis se utiliza para la identificación de
los grupos funcionales presentes en una molécula. Las bandas que aparecen en un
espectro UV-Vis son anchas debido a la superposición de transiciones vibracionales y
electrónicas.
La biomasa ligno-celulósica de la cual están compuestos los residuos de cáscara de

naranja, tiene una estructura compleja que consta de dos polímeros de carbohidratos, la
celulosa (35-50%) y la hemicelulosa (15-25%), y un polímero fenólico; la lignina (20-
25%). A partir de la celulosa y la hemicelulosa, se pueden obtener unidades
monoméricas de glucosa, lo que le confiere un gran potencial a la biomasa
lignocelulósica como materia prima para la producción de glucosa que puede ser
aprovechada en diversos usos industriales. Se plantean dos tipos de residuos ligno-
celulósicos: cáscara de naranja, por la representatividad en producción que tienen a
nivel mundial, en donde el banano producido en Colombia ocupa el lugar diez a nivel
mundial con 2.034.340 Ton. Por parte de los cítricos, Colombia ocupa el lugar diecisiete
en producción a nivel mundial con 1.257.839 Ton y de los cuales aproximadamente el
70% es de naranja y el 30% restante representa la parte de producción de mandarina y
limón. Además de la producción de estas dos frutas, el estudio surge a partir de la
problemática que abarcan los residuos orgánicos que se generan después del consumo.
En Colombia se producen 27.500 Ton/día de los cuales el 65% son residuos orgánicos y
en Bogotá se producen 6.500 Ton/día de residuos sólidos. A partir de la disposición de
residuos orgánicos, tales como las cáscaras de naranja (Citrus sinensis) y banano
(Musa sapientum) se plantea como alternativa y objetivo de este proyecto la obtención
de azúcares reductores a partir de biomasa ligno-celulósica por medio de la
implementación de hidrólisis ácida, para su posible utilización en diversos usos
industriales como por ejemplo la producción de bioetanol. El bioetanol es el resultado de
la fermentación de materia orgánica por medio de la acción de microorganismos. Este
producto puede ser empleado como biocombustible (como alternativa ante el consumo
energético de combustible fósil en el sector de transporte), además se puede utilizar
para producir subproductos de industrias como la farmacéutica, química, cosmética,
licoreras, entre otras. Las cáscaras con las cuales se trabajó experimentalmente, fueron
recolectadas de la plaza de mercado del barrio Restrepo, debido a la inadecuada
disposición que los residuos orgánicos tienen; en donde debido a la falta de separación
en la fuente por parte de las centrales de abastos, estos residuos son contaminados con
residuos de tipo industrial como pilas, residuos plásticos, entre otros, representando una
pérdida del 90% de materia prima para la posible realización de la producción de

bioetanol. La prueba de Benedict es otra de las reacciones de oxidación, que como
conocemos, nos ayuda al reconocimiento de azúcares reductores, es decir, aquellos
compuestos que presentan su OH anomérico libre, como por ejemplo la glucosa, lactosa
o maltosa o celobiosa, en la reacción de Benedict, se puede reducir el Cu2+ que
presenta un color azul, en un medio alcalino, el ion cúprico (otorgado por el sulfato
cúprico) es capaz de reducirse por efecto del grupo aldehído del azúcar (CHO) a su
forma de Cu+. Este nuevo ion se observa como un precipitado rojo ladrillo
correspondiente al óxido cuproso (Cu2O), que precipita la solución alcalina con un color
rojo-naranja, a este precipitado se lo considera como la evidencia de que existe un
azúcar reductor.
El reactivo de Benedict está compuesto por:
-Sulfato cúprico.
-Citrato de sodio.
-Carbonato anhidro de sodio.
La evidencia de la reacción de Benedict es la formación del precipitado Ion Cuproso
( Cu2O).
El método DNS (ácido dinitrosalicílico) es una técnica colorimétrica que emplea un

procedimiento que se basa en una reacción redox que ocurre entre el DNS y los
azúcares reductores presentes en la muestra, seguido de la determinación
espectrofotométrica a 540 nm de los azúcares reductores. Esta técnica sirve para
cuantificar los azúcares reductores producidos durante una fermentación o para
cuantificar los productos de una reacción enzimática. Este método ha sufrido varias
modificaciones a través de los años para adecuarse al análisis de diferentes materiales
y su principal ventaja radica en su alta sensibilidad y productividad debido a que es un
método espectrofotométrico.
Cuantificación de azúcares reductores por el método de DNS

Este procedimiento se fundamenta en la reacción de los grupos reductores de los
azúcares con el reactivo oxidante ácido dinitrosalicílico (DNS). El reactivo consiste en
una disolución formada por los siguientes compuestos: ácido dinitrosalicílico (ácido 2-
hidroxi-3,5-dinitrobenzoico), que actúa como oxidante; Sal de Rochelle (tartrato sódico-
potásico), que impide la disolución de oxígeno en el reactivo y hidróxido sódico, que
aporta el medio requerido para que se produzca la reacción redox. De esta forma, el
ácido 2-hidroxi-3,5-dinitrobenzoico se reduce, en presencia del grupo reductor de la
glucosa, formando el ácido 3-amino-5-nitrosalicílico, mientras que el grupo aldehído
reductor se oxida, para formar un grupo carboxílico. En este método analítico el DNS
está en exceso frente a los grupos reductores y en todas las muestras se adiciona la
misma cantidad, de tal forma que mayores concentraciones de azúcares reductores

provocan una mayor coloración de la muestra. Estas diferencias de coloración pueden
determinarse por espectrofotometría visible, a la longitud de onda de máxima
absorbancia de 540 nm.
Preparación del reactivo del ácido 3,5 dinitrosalicílico en caliente

Se pesan 5 g de ácido 3,5 dinitrosalicílico (DNS), 150 g de Tartrato de Na-K y 8 g de
NaOH. Se disuelve el NaOH en 200 mL de agua destilada y se añade en agitación el
Tartrato de Na-K lentamente.
Se completa con agua destilada hasta 400 mL y se comienza a añadir lentamente el
ácido 3,5 dinitrosalicílico. Se deja en agitación toda la noche, se enrasa a 500 mL y se
filtra. Se guarda en frasco color ámbar, bajo refrigeración.
La preparación del reactivo DNS en caliente se hace con agitación magnética y
calentamiento.
El método del DNS no es recomendable para la determinación de azúcares reductores

en muestras intensamente coloreadas como mieles y caldos de fermentación que la
contengan. Estudios de 0tero y colaboradores muestran dispersión en la determinación
de azúcares reductores en mieles por el método del DNS con la modificación de Miller.
DNS reacciona únicamente con los azúcares reductores. La sacarosa es un disacárido

no reductor, pero tras su hidrólisis en medio ácido se liberan glucosa y fructosa que sí
son reductores y reaccionan con el DNS generando un producto coloreado. La
intensidad del color, que se puede medir por métodos espectrofotométricos es
proporcional a la concentración de sacarosa.
Es lo suficiente útil en el seguimiento y control del proceso de fabricación de azúcar y

alcohol en la Industria sucro-alcoholera calcula la concentración de azúcares reductores
en distintos materiales.
Para determinar la concentración de azúcares reductores se debe realizar una curva de
calibración o curva patrón que relacione sus concentraciones y antes puedes hacer una
tabla de tus resultados.
4. MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS
4.1 MATERIALES Y EQUIPOS
● Micropipetas de 1000 mL, 200 mL, 20 mL.

● Tubo de microcentrífuga.
● Puntas para micropipetas azules y amarillas.
● Gradillas para microtubos
4.2 MATERIAL DEL APRENDIZ
● Bata de laboratorio.
● Cofia.
● Guantes de nitrilo.
● Gafas de seguridad – monogafas.
● Tapabocas.
● Limpión.
● Papel de cocina.
● Jabón de manos.
● Cinta de enmascarar.
● Marcador indeleble.
4.3 REACTIVOS
● Glucosa.
● Agua destilada.
● DNS.
5. PROCEDIMIENTO
5.1 Azúcares reductores
Una vez que se

Se realizan
Se realiza la curva preparan las
diluciones seriadas
patrón de Glucosa diluciones se debe
teniendo en cuenta
en un rango de realizar el
la concentración
concentración de 0 procedimiento para
que se tendrá en
a 2.0 g/L. azúcares
cada una.
reductores.
5.2 Cuantificación de azúcares reductores totales por el método de (DNS)
Ebullir 5 minutos y
Agregar 500 µL de la
dejar enfriar (10
solución problema Agregar 300 µL del
minutos
(solución de glucosa a reactivo de DNS
0 g/mL a 6 g/mL ya preparado. aproximadamente) en
el recipiente con
digerida, tabla 1).
hielos.
Leer la absorbancia
registrada en el
espectro de UV-Visible Agitar en vórtex a Agregar 600 µL de
a 540 nm (cuidar que temperatura ambiente. agua destilada.
no pase más de 30
min para su lectura).
Elaborar la curva
En el eje de las
patrón en donde se
grafique en el eje de abscisas (eje” x”) el Determina la ecuación
promedio de la de la línea recta que
las ordenadas (eje “y”)
concentración de relaciona a los dos
promedio de la
Glucosa determinada parámetros
absorbancia
determinada a 540 nm en g/L.
Determina la ecuación de la línea recta que relaciona a los dos parámetros:
y = mx + b
En donde “y” representa la absorbancia determinada a 540 nm. “x” representa

la concentración de maltosa determinada en g/L.
La curva patrón será correcta cuando se obtenga una R2 mayor o igual a 0.98,
con lecturas de absorbancia entre 0 y 1.
6. TABLAS DE REGISTRO DE DATOS
Se utilizó una solución patrón de glucosa ( l ) (1g/L)

En la Tabla 1.0 se muestra las cantidades de volumen de solución de glucosa, agua
destilada y solución DNS necesarias para la realización de las 5 soluciones y el blanco
(que es la referencia de 0 para la toma de absorbancia en el espectrofotómetro), para
proceder a la toma de datos en el espectrofotómetro.
Dilución Blanco 1 2 3 4 5
Volumen de solución
I (mL) 0
Volumen de agua
(mL)
Volumen DNS (mL)
Volumen Total (mL) 5 mL 5 mL 5 mL 5 mL 5 mL 5 mL
Tabla No.1 Datos para la preparación de soluciones
Para el estudio de la muestra es necesario hacer una dilución ya que los azúcares
están muy concentrados y se obtendrían resultados que no se ajustan a la curva de
calibración.
Las dos diluciones realizadas para la muestra fueron 1:20 y 1:30
● 1:20 Por 1 mL de muestra, se agregan 19 mL de agua.
● 1:30 Por 1 mL de muestra, se agregan 29 mL de agua.
Para estas dos diluciones se realiza el mismo procedimiento que con las soluciones
anteriores y se mide la absorbancia en el espectrofotómetro, utilizando el mismo
blanco utilizado en las anteriores soluciones. De estos datos tomados se obtiene la
Tabla No. 6, que muestra las absorbancias tomadas para las muestras.
No. De Muestra Dilución Absorbancia (Abs)

1
2
Tabla No. 5 datos de absorbancia tomados para la muestra
7. CÁLCULOS
Para la construcción de la curva de calibración es necesario conocer las

concentraciones de azúcar en cada solución después de haber realizado la dilución
con el agua destilada. Esta concentración se puede determinar con la ecuación:
V 1 C 1=V 2 C2 (Ec. 1)
Esta es la ecuación No. 1 (Ec. 1), despejando de esta ecuación la C 2, que es la de

interés se obtiene
V 1∗C1
C 2=
V2
De esta ecuación se sabe que la C1 es la concentración de la solución patrón de
glucosa (1g/L), y el volumen final (V2) que es 6,5 mL que es el volumen obtenido
después de agregar los 4 mL de agua en todas las soluciones. A partir de esta
ecuación se determinan las concentraciones de la siguiente manera:
● Para la solución No. 1 se obtiene
0.1mL∗1 g/ L 1
C 2= = g/ L
6.5 mL 65
Este proceso se repite hasta obtener las concentraciones de azúcar de las 5

soluciones a estudiar, los cuales están registrados en la Tabla No. 2
Concentración (g/L)
Tabla No. 2 concentración de azúcar de las 5 soluciones.
Después de preparadas las soluciones, se mide la absorbancia con el

espectrofotómetro y se obtiene la tabla No. 3, que muestra las absorbancias medidas
con el espectrofotómetro, tomando como 0 la solución sin concentración de glucosa
(blanco).
Absorbancia (Abs)
Tabla No. 3 datos de absorbancia tomados con el espectrofotómetro.
Con estos datos tomados durante la práctica se construye la curva de calibración, que
relaciona las concentraciones de las diferentes soluciones y la absorbancia medida en
cada una de ellas. La tabla No. 4 nos relaciona estos datos.
No. Concentració
Solución n Absorbancia
Blanco
1
2
3
4
5
Tabla No. 4 datos para la construcción de la curva de calibración
8. BIBLIOGRAFÍA
● https://es.slideshare.net/vegabner/determinacin-de-azcares-reductores-por-
espectrofotometra-mtodo-dns
● http://metodosdeanalisisdealimentos.blogspot.com/2018/04/proposito-elmetodo-
dns-acido.html#:~:text=El%20m%C3%A9todo%20DNS%20(%C3%A1cido
%20dinitrosalicilico,540nm%20de%20los%20azucares%20reductores.
●

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El presente informe desarrollará el procedimiento respectivo para la determinación de

2.1 OBJETIVO GENERAL

Establecer la longitud de onda de la máxima absorción para las diferentes soluciones

2.2 OBJETIVOS ESPECÍFICOS

● Conocer y aplicar los principios de la curva patrón aplicada a la cuantificación

La espectroscopía UV-Vis está basada en el proceso de absorción de la radiación

La biomasa ligno-celulósica de la cual están compuestos los residuos de cáscara de

pérdida del 90% de materia prima para la posible realización de la producción de

El método DNS (ácido dinitrosalicílico) es una técnica colorimétrica que emplea un

Cuantificación de azúcares reductores por el método de DNS

misma cantidad, de tal forma que mayores concentraciones de azúcares reductores

Preparación del reactivo del ácido 3,5 dinitrosalicílico en caliente

El método del DNS no es recomendable para la determinación de azúcares reductores

DNS reacciona únicamente con los azúcares reductores. La sacarosa es un disacárido

Es lo suficiente útil en el seguimiento y control del proceso de fabricación de azúcar y

4. MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS

4.1 MATERIALES Y EQUIPOS

● Micropipetas de 1000 mL, 200 mL, 20 mL.

4.2 MATERIAL DEL APRENDIZ

5.1 Azúcares reductores

Una vez que se

5.2 Cuantificación de azúcares reductores totales por el método de (DNS)

Determina la ecuación de la línea recta que relaciona a los dos parámetros:

En donde “y” representa la absorbancia determinada a 540 nm. “x” representa

6. TABLAS DE REGISTRO DE DATOS

Se utilizó una solución patrón de glucosa ( l ) (1g/L)

No. De Muestra Dilución Absorbancia (Abs)

Para la construcción de la curva de calibración es necesario conocer las

Esta es la ecuación No. 1 (Ec. 1), despejando de esta ecuación la C 2, que es la de

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Después de preparadas las soluciones, se mide la absorbancia con el

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