Preinforme Determinacion de Azucares Reductores

FORMATO GUÍA DE APRENDIZAJE
F37-9211-08 Versión 01 , Noviembre de 2010

PROCESO: EJECUCIÓN DE LA FORMACIÓN PROFESIONAL
PROCEDIMIENTO: P01-9211-08 PROCEDIMIENTO PARA DESARROLLAR
ACCIONES DE FORMACIÓN PROFESIONAL TITULADA Centro de Gestión Industrial
Sistema Integrado de Gestión
Regional Distrito Capital

Sistema de Gestió n de la Calidad
DETERMINACIÓN DE AZUCARES REDUCTORES
INTEGRANTES
DIANA KATHERINE CORTES
LAURA VALENTINA PEÑ A
DIANA LORENA CALDERON
JUAN ESTEBAN LOZANO
INSTRUCTOR
JACQUELINE MOJICA GOMEZ
COMPETENCIA:
ASEGURAR LA CALIDAD DE LOS ENSAYOS II
SERVICIO NACIONAL DE APRENDIZAJE

SENA CENTRO DE GESTIÓN INDUSTRIAL
TECNOLOGÍA EN QUÍMICA APLICADA A LA INDUSTRIA
14 DE MARZO DE 2021
1. INTRODUCCIÓN
Hoy en día la industria licorera y alimenticia utiliza varios tipos de métodos

analíticos para la determinació n azú car y alcohol en los licores y/o bebidas a
utilizar como medio de venta.
Uno de los métodos má s acordes y con mejor resultados en la determinació n de los

azucares con cará cter reductor, es el método (DNS), método que ha sufrido varias
modificaciones a través de los añ os para adecuarse al aná lisis de diferentes
materiales y su principal ventaja radica en su alta sensibilidad y productividad
debido a que es un método espectrofotométrico; el procedimiento se basa en una
reacció n redox que ocurre entre el DNS y los azú cares reductores presentes en la
muestra, sin embargo a nivel industrial no es recomendable utilizarlo cuando dicha
trata sustancias tales como mieles y caldos de fermentació n que lo contengan, esto
debido a segú n estudios realizados en la materia, a los altos niveles de dispersió n.
El presente informe desarrollará el procedimiento respectivo para la

determinació n de azucares reductores a partir de una solució n patró n de glucosa
de concentració n 1g/L, que permitirá realizar y ajustar una curva de calibració n, y
una solució n desconocida; por el método del á cido 3,5 dinitro salicílico (DNS).
2. OBJETIVOS
2.1 OBJETIVO GENERAL
Establecer la longitud de onda de la má xima absorció n para las diferentes

soluciones coloreadas.
2.2 OBJETIVOS ESPECÍFICOS
● Conocer y aplicar los principios de la curva patró n aplicada a la

cuantificació n de azucares reductores con el reactivo 3,5 dinitro salicílico
(DNS).
● Obtener una curva de calibració n para azú cares reductores haciendo uso
del método de Miller (DNS) usando Glucosa como está ndar.
3. MARCO TEÓRICO
La espectroscopía UV-Vis está basada en el proceso de absorció n de la radiació n

ultravioleta-visible (radiació n con longitud de onda comprendida entre los 160 y
780 nm) por una molécula. La absorció n de esta radiació n causa la promoció n de un
electró n a un estado excitado. Los electrones que se excitan al absorber radiació n de
esta frecuencia son los electrones de enlace de las moléculas, por lo que los picos de
absorció n se pueden correlacionar con los distintos tipos de enlace presentes en el
compuesto. Debido a ello, la espectroscopía UV-Vis se utiliza para la identificació n de
los grupos funcionales presentes en una molécula. Las bandas que aparecen en un
espectro UV-Vis son anchas debido a la superposició n de transiciones vibracionales
y electró nicas.
La biomasa ligno-celuló sica de la cual está n compuestos los residuos de cá scara de

naranja, tiene una estructura compleja que consta de dos polímeros de
carbohidratos, la celulosa (35-50%) y la hemicelulosa (15-25%), y un polímero
fenó lico; la lignina (20-25%). A partir de la celulosa y la hemicelulosa, se pueden
obtener unidades monoméricas de glucosa, lo que le confiere un gran potencial a la
biomasa ligno-celuló sica como materia prima para la producció n de glucosa que
puede ser aprovechada en diversos usos industriales. Se plantean dos tipos de
residuos ligno-celuló sicos: cá scara de naranja, por la representatividad en
producció n que tienen a nivel mundial, en donde el banano producido en Colombia
ocupa el lugar diez a nivel mundial con 2.034.340 Ton. Por parte de los cítricos,
Colombia ocupa el lugar diecisiete en producció n a nivel mundial con 1.257.839 Ton
y de los cuales aproximadamente el 70% es de naranja y el 30% restante representa
la parte de producció n de mandarina y limó n. Ademá s de la producció n de estas dos
frutas, el estudio surge a partir de la problemá tica que abarcan los residuos
orgá nicos que se generan después del consumo. En Colombia se producen 27.500
Ton/día de los cuales el 65% son residuos orgá nicos y en Bogotá se producen 6.500
Ton/día de residuos só lidos. A partir de la disposició n de residuos orgá nicos, tales
como las cá scaras de naranja (Citrus sinensis) y banano (Musa sapientum) se
plantea como alternativa y objetivo de este proyecto la obtenció n de azú cares
reductores a partir de biomasa ligno-celuló sica por medio de la implementació n de
hidró lisis á cida, para su posible utilizació n en diversos usos industriales como por
ejemplo la producció n de bioetanol. El bioetanol es el resultado de la fermentació n
de materia orgá nica por medio de la acció n de microorganismos. Este producto
puede ser empleado como biocombustible (como alternativa ante el consumo
energético de combustible fó sil en el sector de transporte), ademá s se puede utilizar
para producir subproductos de industrias como la farmacéutica, química, cosmética,
licoreras, entre otras. Las cá scaras con las cuales se trabajó experimentalmente,
fueron recolectadas de la plaza de mercado del barrio Restrepo, debido a la
inadecuada disposició n que los residuos orgá nicos tienen; en donde debido a la falta
de separació n en la fuente por parte de las centrales de abastos, estos residuos son
contaminados con residuos de tipo industrial como pilas, residuos plá sticos, entre
otros, representando una pérdida del 90% de materia prima para la posible
realizació n de la producció n de bioetanol.
El método DNS (á cido dinitrosalicílico) es una técnica colorimétrica que emplea un

procedimiento que se basa en una reacció n redox que ocurre entre el DNS y los
azucares reductores presentes en la muestra, seguido de la determinació n
espectrofotométrica a 540nm de los azucares reductores. Esta técnica sirve para
cuantificar los azucares reductores producidos durante una fermentació n o para
cuantificar los productos de una reacció n enzimá tica. Este método ha sufrido varias
modificaciones a través de los añ os para adecuarse al aná lisis de diferentes
materiales y su principal ventaja radica en su alta sensibilidad y productividad
debido a que es un método espectrofotométrico.
Cuantificació n de azú cares reductores por el método de DNS

Este procedimiento se fundamenta en la reacció n de los grupos reductores de los
azú cares con el reactivo oxidante á cido dinitrosalicílico (DNS). El reactivo consiste
en una disolució n formada por los siguientes compuestos: á cido dinitrosalicílico
(á cido 2-hidroxi-3,5-dinitrobenzó ico), que actú a como oxidante; Sal de Rochelle
(tartrato só dico-potá sico), que impide la disolució n de oxígeno en el reactivo y
hidró xido só dico, que aporta el medio requerido para que se produzca la reacció n
redox. De esta forma, el á cido 2-hidroxi-3,5-dinitrobenzó ico se reduce, en presencia
del grupo reductor de la glucosa, formando el á cido 3-amino-5-nitrosalicílico,
mientras que el grupo aldehído reductor se oxida, para formar un grupo carboxílico.
En este método analítico el DNS está en exceso frente a los grupos reductores y en
todas las muestras se adiciona la misma cantidad, de tal forma que mayores
concentraciones de azú cares reductores provocan una mayor coloració n de la
muestra. Estas diferencias de coloració n pueden determinarse por
espectrofotometría visible, a la longitud de onda de má xima absorbancia de 540 nm.
Preparació n del reactivo del á cido 3,5 dinitrosalicílico en caliente

Se pesan 5 g de á cido 3,5 dinitrosalicílico (DNS), 150 g de Tartrato de Na-K y 8 g de
NaOH. Se disuelve el NaOH en 200 mL de agua destilada y se añ ade en agitació n el
Tartrato de Na-K lentamente.
Se completa con agua destilada hasta 400 mL y se comienza a añ adir lentamente el

á cido 3,5 dinitrosalicílico. Se deja en agitació n toda la noche, se enrasa a 500 mL y se
filtra. Se guarda en frasco color á mbar, bajo refrigeració n.
La preparació n del reactivo DNS en caliente se hace con agitació n magnética y
calentamiento.
El método del DNS no es recomendable para la determinació n de azucares

reductores en muestras intensamente coloreadas como mieles y caldos de
fermentació n que la contengan. Estudios de 0tero y colaboradores muestran
dispersió n en la determinació n de azú cares reductores en mieles por el método del
DNS con la modificació n de Miller.
DNS reacciona ú nicamente con los azú cares reductores. La sacarosa es un disacá rido
no reductor, pero tras su hidró lisis en medio á cido se liberan glucosa y fructosa que
sí son reductores y reaccionan con el DNS generando un producto coloreado. La
intensidad del color, que se puede medir por métodos espectrofotométricos es
proporcional a la concentració n de sacarosa.
Es lo suficiente ú til en el seguimiento y control del proceso de fabricació n de azú car

y alcohol en la Industria sucro-alcoholera calcula la concentració n de azú cares
reductores en distintos materiales.
Para determinar la concentració n de azucares reductores se debe realizar una curva
de calibració n o curva patró n que relacione sus concentraciones y antes puedes
hacer una tabla de tus resultados.
4. MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS
4.1 MATERIALES Y EQUIPOS
 Micropipetas de 1000 mL, 200 mL, 20 mL.

 Tubo de microcentrífuga.
 Puntas para micropipetas azules y amarillas.
 Gradillas para microtubos
4.2 MATERIAL DEL APRENDIZ
 Bata de laboratorio.
 Cofia.
 Guantes de nitrilo.
 Gafas de seguridad – monogafas.
 Tapabocas.
 Limpió n.
 Papel de cocina.
 Jabó n de manos.
 Cinta de enmascarar.
 Marcador indeleble.
4.3 REACTIVOS
 Glucosa.
 Agua destilada.
 Sacarosa.
 DNS.
5. PROCEDIMIENTO
5.1 Azucares reductores
 Para la obtenció n de la curva de calibració n de azú cares reductores se

utilizará como está ndar la Glucosa para ello se realiza la curva patró n de
Glucosa (o el azú car reductor má s adecuado en funció n de lo que se vaya a
determinar) en un rango de concentració n de 0 a 2.0 g/L.
 Las diluciones se preparará n, por duplicado, de acuerdo a la Tabla 1, o bien,
pueden realizarse diluciones seriadas teniendo en cuenta la concentració n
que se tendrá en cada una.
 Una vez que se preparan las diluciones se debe realizar el procedimiento
para azú cares reductores.
5.2 Cuantificación de azúcares reductores totales por el método de (DNS)
 Agregar 100 µL de la solució n problema (solució n de glucosa a 1 mg/mL o

de sacarosa a 6 mg/mL ya digerida, tabla 1).
 Agregar 300 µL del reactivo de DNS preparado.
 Ebullir 5 minutos y dejar enfriar (10 minutos aproximadamente) en el
recipiente con hielos.
 Agregar 600 µL de agua destilada.
 Agitar en vó rtex a temperatura ambiente.
 Leer la absorbancia registrada en el espectro de UV-Visible a 540 nm
(cuidar que no pase má s de 30 min para su lectura).
 Elaborar la curva patró n en donde se grafique en el eje de las ordenas (eje

“y”) promedio de la absorbancia determinada a 540 nm y en el eje de las
abscisas (eje” x”) el promedio de la concentració n de Glucosa determinada
en g/L.
 Determina la ecuació n de la línea recta que relaciona a los dos pará metros:
y = mx + b
En donde “y” representa la absorbancia determinada a 540 nm. “x”

representa la concentració n de maltosa determinada en g/L.
La curva patró n será correcta cuando se obtenga una R2 mayor o igual a
0.98, con lecturas de absorbancia entre 0 y 1.
6. TABLAS DE REGISTRO DE DATOS
Se utilizó una solució n patró n de glucosa ( l ) (1g/L)

En la Tabla 1.0 se muestra las cantidades de volumen de solució n de glucosa, agua
destilada y solució n DNS necesarias para la realizació n de las 5 soluciones y el
blanco (que es la referencia de 0 para la toma de absorbancia en el
espectrofotó metro), para proceder a la toma de datos en el espectrofotó metro.
Dilución Blanco 1 2 3 4 5
Volumen de solución
I (mL)
Volumen de agua
(mL)
Volumen DNS (mL)
Volumen Total (mL)
Tabla No.1 Datos para la preparació n de soluciones
Para el estudio de la muestra es necesario hacer una dilució n ya que los azucares
está n muy concentrados y se obtendrían resultados que no se ajustan a la curva de
calibració n.
Las dos diluciones realizadas para la muestra fueron 1:20 y 1:30
 1:20 Por 1mL de muestra, se agregan 19mL de agua.
 1:30 Por 1mL de muestra, se agregan 29mL de agua.
Para estas dos diluciones se realiza el mismo procedimiento que con las soluciones
anteriores y se mide la absorbancia en el espectrofotó metro, utilizando el mismo
blanco utilizado en las anteriores soluciones. De estos datos tomados se obtiene la
Tabla No. 6, que muestra las absorbancias tomadas para las muestras.
No. De Muestra Dilución Absorbancia (Abs)

1
2
Tabla No. 5 datos de absorbancia tomados para la muestra
7. CÁLCULOS
Para la construcció n de la curva de calibració n es necesario conocer las

concentraciones de azú car en cada solució n después de haber realizado la dilució n
con el agua destilada. Esta concentració n se puede determinar con la ecuació n:
V 1 C 1=V 2 C2 (Ec. 1)
Esta es la ecuació n No. 1 (Ec. 1), despejando de esta ecuació n la C2, que es la de
interés se obtiene
V ∗C
C 2= 1 1
V2
De esta ecuació n se sabe que la C 1 es la concentració n de la solució n patró n de
glucosa (1g/L), y el volumen final (V 2) que es 6,5mL que es el volumen obtenido
después de agregar los 4mL de agua en todas las soluciones. A partir de esta
ecuació n se determinan las concentraciones de la siguiente manera:
 Para la solució n No. 1 se obtiene
0.1mL∗1 g/ L 1
C 2= = g/ L
6.5 mL 65
Este proceso se repite hasta obtener las concentraciones de azú car de las 5
soluciones a estudiar, los cuales está n registrados en la Tabla No. 2
Concentración
(g/L)
Tabla No. 2 concentració n de azú car de las 5 soluciones.
Después de preparadas las soluciones, se mide la absorbancia con el

espectrofotó metro y se obtiene la tabla No. 3, que muestra las absorbancias
medidas con el espectrofotó metro, tomando como 0 la solució n sin concentració n
de glucosa (blanco).
Absorbancia (Abs)
Tabla No. 3 datos de absorbancia tomados con el espectrofotó metro.
Con estos datos tomados durante la prá ctica se construye la curva de calibració n,
que relaciona las concentraciones de las diferentes soluciones y la absorbancia
medida en cada una de ellas. La tabla No. 4 nos relaciona estos datos.
No. Concentració
Solución n Absorbancia
Blanco
1
2
3
4
5
Tabla No. 4 datos para la construcció n de la curva de calibració n
8. BIBLIOGRAFÍA
 https://es.slideshare.net/vegabner/determinacin-de-azcares-reductores-
por-espectrofotometra-mtodo-dns
 http://metodosdeanalisisdealimentos.blogspot.com/2018/04/proposito-
elmetodo-dns-acido.html#:~:text=El%20m%C3%A9todo%20DNS
%20(%C3%A1cido%20dinitrosalicilico,540nm%20de%20los%20azucares
%20reductores.


Preinforme Determinacion de Azucares Reductores

Cargado por

Información del documento

Título original

Derechos de autor

Formatos disponibles

Compartir este documento

Compartir o incrustar documentos

Opciones para compartir

¿Le pareció útil este documento?

¿Este contenido es inapropiado?

Copyright:

Formatos disponibles

Preinforme Determinacion de Azucares Reductores

Cargado por

Copyright:

Formatos disponibles

FORMATO GUÍA DE APRENDIZAJE

F37-9211-08 Versión 01 , Noviembre de 2010

Regional Distrito Capital

DETERMINACIÓN DE AZUCARES REDUCTORES

SERVICIO NACIONAL DE APRENDIZAJE

Hoy en día la industria licorera y alimenticia utiliza varios tipos de métodos

Uno de los métodos má s acordes y con mejor resultados en la determinació n de los

El presente informe desarrollará el procedimiento respectivo para la

2.1 OBJETIVO GENERAL

Establecer la longitud de onda de la má xima absorció n para las diferentes

2.2 OBJETIVOS ESPECÍFICOS

● Conocer y aplicar los principios de la curva patró n aplicada a la

La espectroscopía UV-Vis está basada en el proceso de absorció n de la radiació n

La biomasa ligno-celuló sica de la cual está n compuestos los residuos de cá scara de

El método DNS (á cido dinitrosalicílico) es una técnica colorimétrica que emplea un

Cuantificació n de azú cares reductores por el método de DNS

Preparació n del reactivo del á cido 3,5 dinitrosalicílico en caliente

Se completa con agua destilada hasta 400 mL y se comienza a añ adir lentamente el

El método del DNS no es recomendable para la determinació n de azucares

Es lo suficiente ú til en el seguimiento y control del proceso de fabricació n de azú car

4. MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS

4.1 MATERIALES Y EQUIPOS

 Micropipetas de 1000 mL, 200 mL, 20 mL.

4.2 MATERIAL DEL APRENDIZ

5.1 Azucares reductores

 Para la obtenció n de la curva de calibració n de azú cares reductores se

5.2 Cuantificación de azúcares reductores totales por el método de (DNS)

 Agregar 100 µL de la solució n problema (solució n de glucosa a 1 mg/mL o

 Elaborar la curva patró n en donde se grafique en el eje de las ordenas (eje

En donde “y” representa la absorbancia determinada a 540 nm. “x”

6. TABLAS DE REGISTRO DE DATOS

Se utilizó una solució n patró n de glucosa ( l ) (1g/L)

No. De Muestra Dilución Absorbancia (Abs)

Para la construcció n de la curva de calibració n es necesario conocer las

 Para la solució n No. 1 se obtiene

Después de preparadas las soluciones, se mide la absorbancia con el

También podría gustarte