ANALISIS QUIMICO

INSTRUMENTAL
TEMA 7:
REFRACTOMETRIA Y REFLECTANCIA
REFRACTOMETRIA
 PRINCIPIOS BASICOS DE LA
REFRACTOMETRIA
INDICE DE REFRACCION (n)
ANGULO DE REFRACCION
De una solución, es la relación entre la velocidad
Es un fenómeno de desvío que experimenta el haz
dela luz en el aire y la velocidad de la luz a su paso
incidente al atravesar una solución, ocasionado por
por esta solución. Su valor es directamente
la diferente naturaleza del aire y de la solución sobre
proporcional a la cantidad de sustancias disueltas en
la que incide.
la misma.
REFRACTOMETROS
TIPOS DE REFRACTOMETROS
SISTEMA TRANSPARENTE
PROCEDIMIENTO DE MEDIDA
EN EL REFRACTOMETRO
 USOS
• En la actualidad se usa poco, ya que sus medidas están incluidas en otros
sistemas analíticos mas sencillos, rápidos como la tira reactiva y
automatizados como los autoanalizadores
• En laboratorios clínicos se emplean para la medición de la concentración
de solutos, como de albumina en muestras séricas y/o plasmáticas y la
medida del peso especifico en la orina.
• En la industria vitivinícola, se usa para determinar los azucares totales de
un mosto y a partir de ahí poder hacer una estimación del grado alcohólico
• En los laboratorios de bromatología, el la industria alimenticia
• También se utiliza en veterinaria
REFLECTOMETRIA
¿QUE ES REFLEXION?

Cuando la luz incide sobre un cuerpo, éste la

devuelve al medio en mayor o menor proporción
según sus propias características. Este fenómeno
se denomina REFLEXION y gracias a él podemos
ver las cosas.
El rayo incidente y el rayo reflejado se encuentran
en el mismo plano.
La perpendicular (N) al espejo en el punto de
incidencia se llama normal.
El ángulo de incidencia (i) es el ángulo que forma
el rayo incidente con la normal.
El ángulo de reflexión (r) es el que forma el rayo
reflejado con la normal.
TIPOS DE REFLEXION
ESPECTROFOTOMETRO DE REFLEXION
 FUENTE DE LUZ
Pueden ser lámparas de
haluro, tungsteno o xenón
ESPECTROFOTOMETRO
COMPONENTES DEL

SISTEMAS OPTICOS
Son combinaciones de
DE REFLEXION

lentes, espejos y filtros

REACTIVO DE FASE SOLIDA
La muestra se sitúa en los
reactivos de fase solida (tiras
reactivas o multicapa)
El color resultante se
LECTURA determina midiendo la
SOBRE LA reflectancia sobre la
SUPERFICIE superficie. Se emplea en
sistemas que utilizan
tiras reactivas.

DETECTOR Y
PROCESADOR DE DATOS La lectura se hace por el
LECTURA POR reverso de la superficie
EL REVERSO DE de la muestra. Se
LECTURA LA SUPERFICIE emplea en sistemas que
Se puede realizar de dos utilizan multicapas
formas:
 QUIMICA SECA

Es una técnica que consiste en el empleo de reactivos

previamente deshidratados en una matriz porosa,
generalmente tiras de papel o plástico.

La muestra que tiene el analito a determinar (suero, sangre,

orina, etc) se aplica sobre la superficie del reactivo en fase
sólida, aquí comienza a difundirse en la matriz disolviendo los
reactivos en el proceso, ocurriendo consecuentemente la
reacción que cuantificara el analito.
 SISTEMAS REACTIVOS
En química seca, los reactivos se denomina como "reactivos de unidad"
debido a que son preparados para una determinación única reacción y
no requieren una preparación previa al análisis.

Actualmente los sistemas reactivos incluyen:

• Tiras reactivas
• Películas multicapa (slides)
TIRAS REACTIVAS
Son un soporte de plástico con una matriz de celulosa
que contiene los reactivos. Se utilizan para pruebas
de orina, embarazo, glucosa, HIV (con un buffer), etc.
Sistema Seralyzer (Ames): Es una matriz de celulosa
impregnada en reactivos secos que se une a una
lámina o soporte de plástico, sobre ella lleva un
código para ser leído al introducirse en el
instrumento.
Sistema Reflotron (Boheringer Mannheim): Es un
sistema reactivo dividido en 2 zonas, permite
preincubar la muestra y/o eliminar interferencia. Las
2 partes se ponen en contacto para realizar la
reacción por presión.
PELICULAS MULTICAPA O SLIDES
Esta constituido por diferentes capas muy finas, que son:
• Capa difusora: es porosa que distribuye uniformemente la
muestra, funciona como filtro (no deja pasar moléculas como
proteínas, lípidos, hemoglobina, o bilirrubina). Sirve también
como pantalla para la reflexión de la luz.
• Capa de reacción: contiene sustancias que pueden ser
enzimas o cualquier sustancia química, que se encuentra en
condiciones muy controladas que intervienen en la reacción.
• Capa indicadora: contiene el colorante para formar un
complejo colorido, que será proporcional a la concentración
del analito, la cual se cuantifica por espectrofotometría de
reflexión.
• Capa de soporte: es la base de la laminilla donde están
depositadas las demás capas. Está fabricada con un material
de plástico transparente que permite que pase la luz para que
la reacción pueda ser medida