Métodos

Espectrofotométricos U3
Bioq. Julieta Martín
2023
Temas de la clase

Espectrofotometría
Espectro electromagnético y fenómenos de absorción de
la luz.
Ley de Lambert y Beer
Partes de un espectrofotómetro.

2
Espectroscopía
 Es una técnica científica que se
utiliza para estudiar las interacciones
de la materia con la radiación

“
electromagnética, como la luz visible,
los infrarrojos, los rayos X y otros
tipos de radiación. Se utiliza para
medir y analizar las propiedades
físicas y químicas de los materiales y
sustancias en función de su
respuesta a diferentes longitudes de
onda de la radiación
electromagnética.

4
 Radiación electromagnética

Es una forma de energía que se propaga en el espacio a

través de ondas electromagnéticas, sin necesidad de
un medio material para su transmisión. Esta radiación
es producida por cargas eléctricas en movimiento.
Las radiaciones electromagnéticas se clasifican en
función de su frecuencia, desde las de menor energía a
las de mayor energía: radiofrecuencia, microondas,
infrarrojos, luz visible, ultravioleta, rayos X y rayos
gamma

5
Históricamente, las interacciones de interés
se producían entre la radiación y la materia,
sin embargo, ahora el término espectroscopía
se ha ampliado para incluir las interacciones
entre la materia y otras formas de energía…

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Según el fenómeno, es el tipo de análisis
espectroscópico

▸ Espectroscopía molecular de Absorción Infrarroja.

▸ Espectroscopía molecular de Fluorescencia y
Fosforescencia.
▸ Espectroscopía de Absorción Atómica.
▸ Espectroscopía de absorción UV- Visible.
▸ Espectroscopía de Emisión Atómica. (Fotometría
de llama)
▸ Espectroscopía de Fluorescencia Atómica.
▸ Espectroscopía Raman.
▸ Espectroscopía de Resonancia Magnética Nuclear.
(R.M.N)
▸ Espectroscopía de electrones.
▸ Espectroscopía de Rayos X.

7
 Radiación electromagnética- energía
radiante -onda

Para explicar parte de sus

propiedades se la
considera como una ONDA.

Para explicar su
interacción con la materia
se la considera como una
PARTÍCULA ALTAMENTE
ENERGÉTICA; conocida
como FOTÓN.

Por lo tanto; la radiación electromagnética tiene doble naturaleza de

onda-partícula.
8
 Propiedades de las Ondas

La longitud de onda es la distancia entre dos máximos de un ciclo

completo del movimiento ondulatorio. Su unidad en el Sistema
Internacional (SI) es nm (nanómetro). Se simboliza λ (lambda).
La frecuencia de una onda es el número de ciclos que se producen en un
segundo y se mide en unidades de Hertz (Hz). Un ciclo se refiere a una
oscilación completa de la onda, desde una cresta hasta la siguiente cresta.
La amplitud de una onda se refiere a la altura de la cresta o la profundidad
del valle de la onda. Se mide en unidades de amplitud, como metros,
centímetros, etc. La amplitud de una onda representa la cantidad de
energía que se transporta a través de la onda, y a menudo se utiliza como
medida de la intensidad de la onda.

9
¿Qué pasa con la interacción de la radiación
electromagnética con la materia?

Los tipos de interacción dependen de la energía y la longitud de onda de la

radiación, así como de las propiedades de la materia en cuestión.
10
11
 Fenómeno de la absorción

La absorción ocurre cuando la energía de la radiación

electromagnética se transfiere a un átomo, una molécula o
un sólido, y se convierte en otra forma de energía, como la
energía térmica o la energía química.
La absorción puede ser selectiva, es decir, ciertos materiales
absorben sólo ciertas longitudes de onda, como los
pigmentos en la retina del ojo que absorben solo la luz
visible.

12
Ley de
Lambert-Beer

13
La Ley de Lambert y Beer

“Cuando una radiación incide sobre un medio

homogéneo (que absorbe luz a una determinada
longitud de onda), es parcialmente absorbida y
parcialmente transmitida. O sea; tiene menor
intensidad que la del haz incidente.”

Sea una solución de concentración C

contenida en un recipiente de espesor b. Si
sobre dicha disolución incide una radiación
monocromática de intensidad Io, y parte de la
radiación se ha absorbido, la intensidad que
se transmite I, será menor que Io.

14
 La Ley de Lambert y Beer

A= a*b*C
Donde: A: Absorbancia de la muestra
a: coeficiente de coeficiente de absorción molar, una constante que
depende de la sustancia y de la longitud de onda de la luz utilizada
b: espesor del recipiente
C: concentración de la sustancia absorbente

Absorbancia (A) que es la fracción de la luz absorbida por

la disolución.
La absorbancia va a depender de la naturaleza del medio,
es decir de la composición y de la longitud de la
trayectoria de la luz en el medio. Va desde 0 a infinito
(1,500 o 2,000 o 2,500 UA) 15
 La Ley de Lambert y Beer

Otro parámetro es la transmitancia (T) que se define como la

relación entre la luz incidente y la luz transmitida, es decir la
fracción de luz transmitida por la disolución

En la práctica se utiliza el porcentaje de transmitancia (%T). Va

desde 0 a 100%T.

Tanto la absorbancia como la transmitancia

son parámetros adimensionales y por lo tanto
no llevan unidades.

16
La relación entre la absorbancia y la transmitancia
es inversa. A medida que la transmitancia
disminuye, la absorbancia aumenta. Una muestra
completamente transparente y que no absorba luz
tendría una transmitancia de 1 y una absorbancia de
0, mientras que una muestra que absorbe toda la luz
tendría una transmitancia de 0 y una absorbancia
infinita.

17
 RELACION ENTRE A/C o T/C

Normalmente el espesor de la cubeta b se mide en centímetros. ES

CONSTANTE!!! (cubeta)

La relación entre la concentración de una solución y su

transmitancia es inversa y logarítmica, mientras que su relación
entre la absorbancia y la concentración es directamente
proporcional.

18
Cansancio
Entendimiento
Atención
19
 ¿Cómo es el equipo de laboratorio?

En la actualidad son muchos los tipos y modelos de

espectrómetros UV y/o Visible; pero generalmente poseen
estos componentes en este orden:
▸ Fuente de Radiación
▸ Selector de longitud de onda o analizador.
▸ Recipiente para contener las muestras.
▸ Detector de energía radiante.
▸ Sistema de registros de datos.

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Fuente de Radiación (luz)

FUENTES DE EMISIÓN:
Se utilizan fuentes continuas y su función es emitir a alta intensidad sin
que se produzca fluctuaciones

PORCION UV-Visible DEL ESPECTRO:

De todo el espectro electromagnético; solo nos interesa una porción;
Ultravioleta =180 a 340nm (aprox.)
Visible =325 a 780nm (aprox.)

21
 Tipos de Lámparas

Lámparas de Lámparas de Deuterio Lamparas de Xenon

Tungsteno ▸ Amplio rango UV ▸ Amplio rango UV-visible
▸ Amplio rango de ▸ Estabilidad y ▸ Alta intensidad
longitud de precisión ▸ Costo
onda ▸ Cobertura ▸ Calentamiento
▸ Larga vida útil limitada del ▸ Amplio rango de longitud
▸ Baja intensidad espectro de onda, cubriendo tanto
en el rango UV. ▸ Emiten luz el rango ultravioleta como
▸ Emisión de calor principalmente el visible. La emisión se
▸ Emite en el en el rango de extiende desde 190 nm
rango visible 190 nm a 400 hasta 1000 nm. Fuente de
que abarca nm, intensidad luz adecuada para
aprox desde 350 en el rango UV mediciones en todo el
nm hasta 800 rango UV-visible.
nm

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Selector de longitud de onda

A esta parte del equipo se le conoce con el nombre genérico de

MONOCROMADOR o ANALIZADOR.
Es un conjunto de elementos ópticos que se encargan de separar y
seleccionar la radiación de la longitud de onda analítica bajo estudio.
Presenta los siguientes elementos ópticos:
▸ Lentes y Espejos.
▸ Ranuras de Entrada y Salida (SLIT).
▸ Dispersor (Filtro, Prisma o Red de Difracción).

23
Selector de longitud de onda: PRISMA

Son piezas de cuarzo con dimensiones y

formas específicas y con índice de
refracción característico.

24
Selector de longitud de onda: RED DE DIFRACCIÓN

Utiliza una pequeña placa (x lo gral. 1x1cm2).

Esta placa presenta en su superficie una serie de dientes
escalonados, uno tras otro, de tal manera que forman
una superficie densamente poblada (cerca de 500 a
2000 dientes por milímetro cuadrado). Estos dientes
presentan una posición y ángulo específico.

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Selector de longitud de onda: FILTROS

Son placas de vidrio (simples o en combinación),

que se encuentran recubiertas con sustancias
colorantes o pigmentos que absorben radiación en
determinados rangos de longitudes de onda,
dejando pasar solo bandas estrechas de radiación.

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Sistema PORTA MUESTRA: CUBETAS

Deben ser de un material que permita el paso de

la radiación de la región espectral de interés.
▸ Cuarzo o sílice fundido para 180- 2000nm
▸ Vidrio de Silicato de 350 a 2000nm.
▸ Plástico o Acrílico en el visible.
▸ Cloruro de Sodio Cristalino, en la región
infrarroja.

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DETECTOR

Es básicamente un transductor; traduce energía lumínica en energía eléctrica

(esta puede ser una tensión, corriente o variación de resistencia específica).
El detector ideal sebe:

▸ Responder a un amplio rango de longitudes de onda.

▸ Poseer alta sensibilidad.
▸ Elevada relación señal/ruido.
▸ Respuesta constante.
▸ La señal producida debe ser proporcional a la potencia y amplificable.

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 DETECTORES

Fotomultiplicador Celda fotovoltaica Fotodiodo

▸ Alta ▸ Amplio rango de ▸ Alta sensibilidad
sensibilidad detección. ▸ Pequeño tamaño
▸ Amplio rango ▸ Baja ▸ Bajo consumo de energía
dinámico sensibilidad al ▸ Limitación de longitud de
▸ Alta velocidad ruido. onda
de respuesta ▸ Robustez. ▸ Menor rango dinámico
▸ Costo y tamaño ▸ Baja
▸ Fragilidad sensibilidad

29
SISTEMA DE REGISTRO DE DATOS

Transforman este flujo de electrones que puede ser registrada por un

amperímetro (metro de los equipos viejos) o tomada por un convertidor
analógico digital y mostrada en una pantalla.

30
ESQUEMA
DEL EQUIPO

31
MUCHAS GRACIAS!

32
CREDITS

Special thanks to all the people who made and released these
awesome resources for free:
▸ Presentation template by SlidesCarnival
▸ Photographs by Death to the Stock Photo (license)

33
 You don’t need to keep this
slide in your presentation.
It’s only here to serve you
as a design guide if you
need to create new slides
or download the fonts to
edit the presentation in
PowerPoint®

PRESENTATION DESIGN

This presentations uses the following typographies and colors:

▸ Titles: Montserrat
▸ Body copy: Karla
You can download the fonts on these pages:
https://www.fontsquirrel.com/fonts/montserrat
https://www.fontsquirrel.com/fonts/karla

Red #F44336 Deep orange #FF5722 Orange #FF9800 Amber #FFC107

Yellow #FFEB3B Lime #CDDC39 Green #8BC34A Dark green #4CAF50
Teal #009688 Cyan #00BCD4 Blue #03A9F4 Dark blue #2196F3
Indigo #3F51B5 Deep Purple #673AB7 Purple #9C27B0 Magenta #E91E63
Blue gray #607D8B

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2. For Business Plans,
Marketing Plans, Project
Extra Resources Proposals, Lessons, etc
 TIMELINE

Blue is the colour of Black is the color of Yellow is the color of Blue is the colour of
the clear sky and the Red is the colour of ebony and of outer gold, butter and ripe White is the color of the clear sky and the
deep sea danger and courage space lemons milk and fresh snow deep sea

JAN FEB MAR APR MAY JUN JUL AUG SEP OCT NOV DEC

Yellow is the color of White is the color of Blue is the colour of Red is the colour of Black is the color of Yellow is the
gold, butter and ripe milk and fresh snow the clear sky and the danger and courage ebony and of outer color of gold,
lemons deep sea space butter and ripe
lemons

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ROADMAP

Blue is the colour of the Black is the color of

clear sky and the deep Red is the colour of ebony and of outer
sea danger and courage space

1 3 5

2 4 6

Yellow is the color of White is the color of Blue is the colour of the
gold, butter and ripe milk and fresh snow clear sky and the deep
lemons sea

37
GANTT CHART

Week 1 Week 2

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14

Task 1

Task 2 ◆

Task 3

Task 4 ◆

Task 5 ◆

Task 6

Task 7

Task 8

38
SWOT ANALYSIS

STRENGTHS WEAKNESSES
Blue is the colour of Yellow is the color of
the clear sky and gold, butter and ripe
the deep sea lemons

Black is the color of White is the color of

ebony and of outer milk and fresh
space snow
OPPORTUNITIES THREATS

39
BUSINESS MODEL CANVAS

Key Partners Key Activities Value Propositions Customer Relationships Customer Segments
Insert your content Insert your content Insert your content Insert your content Insert your content

Key Resources Channels

Insert your content Insert your content

Cost Structure Revenue Streams

Insert your content Insert your content

40
FUNNEL

AWARENESS Insert your content

DISCOVERY Insert your content

EVALUATION Insert your content

INTENT Insert your content

PURCHASE Insert your content

LOYALTY Insert your content

41
 TEAM PRESENTATION

Imani Jackson Marcos Galán Ixchel Valdía Nils Årud

JOB TITLE JOB TITLE JOB TITLE JOB TITLE
Blue is the colour of the Blue is the colour of the Blue is the colour of the Blue is the colour of the
clear sky and the deep sea clear sky and the deep sea clear sky and the deep sea clear sky and the deep sea

42
 COMPETITOR MATRIX
HIGH VALUE 2

Competito
r
Compe
titor
Our company

Competitor

HIGH VALUE 1
LOW VALUE 1

Competito
r

Competito
Competitor
r

LOW VALUE 2
43
WEEKLY PLANNER

SUNDAY MONDAY TUESDAY WEDNESDAY THURSDAY FRIDAY SATURDAY

09:00 - 09:45 Task Task Task Task Task Task Task

10:00 - 10:45 Task Task Task Task Task Task Task

11:00 - 11:45 Task Task Task Task Task Task Task

12:00 - 13:15 ✔ Free time ✔ Free time ✔ Free time ✔ Free time ✔ Free time ✔ Free time ✔ Free time

13:30 - 14:15 Task Task Task Task Task Task Task

14:30 - 15:15 Task Task Task Task Task Task Task

15:30 - 16:15 Task Task Task Task Task Task Task

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SlidesCarnival icons are editable shapes.

This means that you can:

● Resize them without losing quality.
● Change line color, width and style.

Isn’t that nice? :)

Examples:

45
Diagrams and infographics

46
You can also use any emoji as an icon!
And of course it resizes without losing quality.
How? Follow Google instructions
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