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Turbidimetria y Nefelometria
Turbidimetria y Nefelometria
TURBIDIMETRÍA
Y
NEFELOMETRÍA
INGENIERÍA BIOQUÍMICA
5st SEMESTRE
MARÍA CRISTINA VIEYRA BRAVO
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Contenido
INTRODUCCIÓN...................................................................................................................3
DEFINICIONES......................................................................................................................6
Turbidimetría................................................................................................................6
Nefelometría........................................................................................................................6
TURBIDIMETRÍA..................................................................................................................8
Turbidimetría fundamento............................................................................................8
Turbidímetros...............................................................................................................9
NEFELOMETRÍA.................................................................................................................10
Procedimiento analítico.........................................................................................................11
Relación matemática..........................................................................................................12
Nefelómetro.......................................................................................................................13
TURBIDIMETRÍA VS NEFELOMETRÍA.........................................................................................14
Preparación de la muestra...........................................................................................14
APLICACIÓN.......................................................................................................................15
Imunoprecipitación............................................................................................................15
Inmunodifusión radial........................................................................................................15
CONCLUSIÓN.....................................................................................................................17
REFERENCIAS....................................................................................................................17
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INTRODUCCIÓN
Los métodos no espectroscópicos son aquellos en los que no hay intercambio de energía, sino
cambios en la dirección o en las propiedades físicas de la radiación electromagnética
Cuando un haz de luz choca con una partícula en suspensión parte de la luz se dispersa, parte
de la luz se refleja y parte de la luz se absorbe. La dispersión de la luz depende de: la
longitud de onda de la luz, del tamaño de la partícula y del índice de refracción de la
partícula en relación con el medio que la rodea.
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La nefelometría: mide la luz dispersada en dirección distinta a la luz emitida (generalmente
con ángulos que oscilan entre 15 y 90°). Utiliza como instrumento el nefelómetro en el que
el detector se ubica con un ángulo que oscila entre 15 y 90° ejemplo:
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las dos técnicas se usan para determinar la transparencia y controlar el tratamiento de
aguas potables, efluentes de plantas de tratamiento de aguas y otros tipos de aguas
ambientales.
Cuando la luz atraviesa un medio transparente en el que existe una suspensión de partículas
sólidas, se dispersa en todas direcciones y como consecuencia se observa turbia La turbidez
es la propiedad óptica de una muestra que hace que la radiación sea dispersada y absorbida
más que transmitida en línea recta a través de la muestra. La turbidez es ocasionada por la
presencia de materia suspendida en un líquido. Hay dos métodos para medir la turbidez de
una muestra, la turbidimetría y la nefelometría. Son dos técnicas complementarias que se
utilizan para el análisis cuantitativo de disoluciones coloidales, emulsiones, humos o nieblas.
En la turbidimetría se compara la intensidad del rayo de luz que emerge con la del que llega
a la disolución. En cambio, en la nefelometría la medida de la intensidad de luz se hace con
un ángulo de 90º con respecto a la radiación incidente. El instrumento usado en la
nefelometría, el nefelómetro se asemeja al fluorómetro. En cambio en turbidimetría se utiliza
el turbidíemetro que es un fotómetro de filtro.
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DEFINICIONES
Turbidimetría
Siendo la concentración de las partículas dispersantes expresada como masa por unidad de
volumen; es la longitud del camino óptico y es una constante que depende de
varios factores: tamaño, forma de las partículas dispersantes y la longitud de onda.
Nefelometría
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Elección entre turbidimetría y nefelometría
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TURBIDIMETRÍA
Cuando un haz de luz monocromática, de longitud de onda no absorbible choca contra las
partículas de una sustancia que está en suspensión, cambia la dirección de propagación del
haz de luz (en realidad sólo cambian de dirección algunos fotones del haz). Este efecto es
usado para determinar la presencia de un analito en suspensión ya que ese cambio de
dirección del haz y de su intensidad depende de muchos factores que una vez relacionados y
cuantificados permiten obtener los valores buscados.
Turbidimetría fundamento
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Existe una relación matemática determinada experimentalmente:
Donde:
Turbidímetros
Diagrama esquemático de un
trubidímetro Du Pont modelo
430.
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El haz incidente se convierte en luz polarizada en un plano mediante el polarizador primario.
Después de atravesar la muestra el haz se divide en dos, mediante un espejo semi-plateado, y
se detecta con dos fototubos separados. Cuando la disolución de la muestra no tiene
partículas en suspensión, la fotocélula 1 da una respuesta máxima y la fotocélula 2 da una
respuesta mínima nula. La relación entre la señal 2 y la señal 1 es una media de la
concentración de las partículas en suspensión. Al aumentar la concentración de las partículas
en suspensión en la muestra, aumenta la señal de la fotocélula 2 y disminuye la de la
fotocélula 1 y por esto la razón de las dos señales permite una medida sensible de la turbidez.
Este sistema de doble haz minimiza el problema debido a la absorción por las partículas de la
disolución pero tiene el inconveniente de que no puede usarse cuando la disolución contiene
sustancias ópticamente activas. Este instrumento puede usarse tanto para muestras
individuales como para control en continuo de corrientes de fluidos.
NEFELOMETRÍA
Se basa en la detección de los complejos Ag-Ab, por la refracción que dichos complejos
producen sobre rayos de luz que se hacen pasar por el tubo con el antígeno y el anticuerpo
correspondiente. Habitualmente se utilizan rayos láser y se establece una relación entre la
cantidad de luz que llega y la cantidad de complejos formados.
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El procedimiento generalmente es empírico y sólo se consideran 3 factores:
3. Longitud de onda: Generalmente las muestras se iluminan con luz blanca, pero si
están coloreadas, se debe escoger una porción del espectro electromagnético en la
que la absorción del medio se reduzca al mínimo.
Procedimiento analítico
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Este consiste en un tubo largo y estrecho en el cual se introduce una mezcla de gas formada
por 7 partes de helio y 1 parte de neón al que se le aplica un voltaje para producir una
descarga eléctrica.
Relación matemática
La relación matemática entre la intensidad de dispersión, S y la concentración de partículas
suspendidas es raramente utilizada es suficiente con saber que existe una relación lineal
entre ellas a bajas concentraciones. Sin embargo la relación matemática que cumplen es
Donde:
: es la radiación dispersada
C P
Fuente Cu Cr
Ángulo
S
Tf
C: filtro
Cu: cubeta (v. superior)
Cr: colector de radiaciones negro
Tf: tubo fotomultiplicador
El valor del ángulo oscila entre 30 y 70, su valor depende de la aplicación específica
seleccionada.
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Nefelómetro
A los nefelómetros usados en las pruebas de calidad del agua, comúnmente se les
llaman turbidímetros. Sin embargo, pueden haber diferencias entre los modelos de
turbidímetros, dependiendo del arreglo geométrico de la fuente luminosa con respecto a
la fotocelda. Un turbímetro nefelométrico siempre monitorea la luz reflejada por las
partículas y no la atenuación debida a la turbidez.
Nefelómetro C-102
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TURBIDIMETRÍA VS NEFELOMETRÍA
Preparación de la muestra
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APLICACIÓN
Imunoprecipitación
- Tanto en los reactivos como en el suero pueden existir partículas que produzcan una
dispersión de luz no deseada ej. lipoproteínas, quilomicrones También puede
interferir la suciedad. ·
- La intensidad de la luz dispersada. Las proteínas suelen tener un pico de absorción en
el ultravioleta y los cromógenos del suero entre 400-425nm; por todo ello se suele
trabajar a frecuencias que oscilen entre 320-380nm y 500-600nm.
Inmunodifusión radial
En este caso se añade un antisuero específico a la agarosa que, a su vez, se vierte sobre
placas. Se forman pozos en el gel y se colocan en ellos estándares de proteínas y problemas
(antígenos). El antígeno difunde en el gel durante varias horas y va reaccionando con el Ac.
En la zona de equivalencia se produce un anillo de precipitación
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Inmunodifusión doble o técnica de Ouchterlony
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CONCLUSIÓN
Los métodos ópticos de análisis cubren un amplio campo de aplicaciones dentro de las
Técnicas basadas en la dispersión de radiación tenemos la turbidimetría y la nefelometría.
Las cueles nos regularmente utilizadas en control de calidad, pero gracias al avances de
diversas maquinarias, nos es posible poder aplicar estos métodos de análisis dentro de otras
ramas científicas, ya sean salud o investigación.
Estas dos técnicas están basadas generalmente en la formación de un precipitado, del cual
se parte para el análisis.
Ambas técnicas permiten la descripción y análisis óptico una muestra. Y el uso de estas
técnicas de investigación depende de las necesidades del investigador. Las diferencias entre
las dos técnicas son especificas y permiten le análisis desde dos campo de la óptica muy
importante dentro de los laboratorios. La turbidimetría y la nefelometría se acoplan para un
mejor enfoque del análisis.
REFERENCIAS
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