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NDICE.
Pagina.
1. Introduccin..3
2. Turbidimetra....6
2.1. Fundamento.6
2.2. Equipo...7
2.3. Muestras Analizables y Aplicaciones...9
3. Nefelometra..9
3.1. Fundamento9
3.2. Relacin matemtica..10
3.3. Procedimiento analtico..11
3.4. Equipo..12
a) Fuentes de radiacin..12
b) Sistema monocromador.13
c) Cubeta de lectura...13
d) Detector13
3.5. Tipos de Nefelometros...14
3.6. Aplicacin15
4. ANEXO. Tcnicas..17
4.1. Ensayo De Turbidimetra18
4.2. Determinacin Turbidimtrica De Sulfato..20
4.3.
TURBIDIMETRA Y NEFELOMETRIA.
1. INTRODUCCIN.
Por lo que se refiere a mtodos fotomtricos podramos enlistar un nmero
considerable de ellos; pero en el contenido que se presentara a continuacin solo
mencionaremos dos tipos de mtodos: Turbidimetra y Nefelometra, los cuales
nos son tiles para medir la turbidez de una muestra, generalmente nefelometra y
turbidimetra se utilizan en el anlisis de la calidad qumica del agua para
determinar la claridad y para el control de los procesos de tratamiento.
Si bien, ambos mtodos tienen un mismo propsito; tal es el caso de la claridad y
control del agua, pero tanto turbidimetra como nefelometra cumplen con
diferentes funciones.
Los mtodos pticos de anlisis cubren un amplio campo de aplicaciones debido
a su rapidez a la gran gama de instrumentacin disponible y sus grandes
posibilidades de automatizacin.
Los mtodos no espectroscpicos son aquellos en los que no hay intercambio de
energa, sino cambios en la direccin o en las propiedades fsicas de la radiacin
electromagntica.
La dispersin de radiacin es un fenmeno fisicoqumico al incidir una radiacin
sobre una superficie slida, lquida o gaseosa y ser dispersa en diferentes
direcciones debido a la difraccin y reflexin de la radiacin por la distribucin y
orientacin de las molculas sobre las cual incide la radiacin.
Cuando un haz de luz choca con una partcula en suspensin parte de la luz se
dispersa, parte de la luz se refleja y parte de la luz se absorbe. La dispersin de la
luz depende de: la longitud de onda de la luz, del tamao de la partcula y del
ndice de refraccin de la partcula en relacin con el medio que la rodea.
La dispersin de la luz se puede medir por turbidimetra o por nefelometra.
2. TURBIDIMETRA.
2.1. Fundamento.
Cuando un haz de luz monocromtica, de longitud de onda no absorbible choca
contra las partculas de una sustancia que est en suspensin, cambia la direccin
de propagacin del haz de luz (en realidad slo cambian de direccin algunos
fotones del haz). Este efecto es usado para determinar la presencia de un analito
en suspensin ya que ese cambio de direccin del haz y de su intensidad depende
de muchos factores que una vez relacionados y cuantificados permiten obtener los
valores buscados.
Cuando un haz de radiacin monocromtica de una longitud de onda
determinada
, es enfocado sobre un medio que contiene partculas de
dimensiones menores a 3/2
, se observa dispersin de radiacin en todas las
direcciones del espacio. Si la partcula presenta mayores tamaos, la radiacin
puede ser reflejada o refractada. Existen dos tipos de dispersin:
1. Elstica: radiacin es absorbida por el analito y remitida sin cambios en la
energa de la radiacin, es decir, se genera cuando la radiacin incidente
tiene la misma longitud de onda que la dispersada.
Dispersin de partculas pequeas o Reyleigh: se produce cuando
el tamao mximo de las partculas que producen la dispersin es
menor al 5% de la longitud de onda de la radiacin. La intensidad
de la luz dispersada se distribuye de manera simtrica.
Dispersin de grandes partculas: la distribucin de la luz
dispersada disminuye en sentido retrgrado, debido a las
interferencias constructivas y destructivas.
2. Inelstica: la radiacin es absorbida y remitida con cambios en su
energa, es decir, se produce cuando el fotn emitido tiene una longitud de
onda diferente.
La turbidimetra puede realizarse en espectrofotmetros de visible o violeta.
Cuando la concentracin de partculas en suspensin se mide por turbidimetra, la
suspensin se pone en una cubeta similar a un tubo de ensayo, que permite
realizar las medidas de las energa incidentes y transmitidas. La fuente de
radiacin ms frecuentemente usadas es la lmpara de wolframio, pero pueden
utilizarse otras fuentes de radiacin visible. Si ponemos en la cubeta suspensiones
coloreadas se debe usar un filtro para evitar que influya sobre los resultados
dando valores excesivamente altos. Los Turbidmetros pueden incorporar
cualquier detector que sea sensible a la longitud de onda transmitida.
Donde:
P: es la energa de la radiacin transmitida.
: es la energa de la radiacin incidente.
v: espesor de la cubeta.
C: concentracin de partculas disertantes por unidad de volumen.
f: constante que depende del tamao partcula y longitud de onda.
Si aplicamos logaritmos, el trmino
2.2.
EQUIPO.
2.3.
MUESTRAS ANALIZABLES.
Muestras gaseosas, lquidas e incluso con slidos transparentes.
APLICACIN.
Generalmente, la turbidimetra se utiliza en el anlisis de la calidad qumica del
agua para determinar la claridad y el control de los procesos de tratamiento.
Tambin se utilizan para la determinacin de iones sulfato. Al igual que en los
siguientes:
Suelos.
Agua natural, residuales, y residuales tratadas.
Lodos o fangos.
3. NEFELOMETRA.
3.1 Fundamento.
Se basa en la deteccin de los complejos Ag-Ab, por la refraccin que dichos
complejos producen sobre rayos de luz que se hacen pasar por el tubo con el
antgeno y el anticuerpo correspondiente. Habitualmente se utilizan rayos lser y
se establece una relacin entre la cantidad de luz que llega y la cantidad de
complejos formados.
La nefelometra es un procedimiento analtico que se basa en la dispersin de la
radiacin que atraviesan las partculas de materia. Cuando la luz atraviesa en
medio transparente en el que existe una suspensin de partculas slidas, se
dispersa en todas direcciones y como consecuencia se observa turbia. La
dispersin no supone la prdida neta de potencia radiante, solo es afectada la
direccin de la propagacin, porque la intensidad de la radiacin es la misma en
cualquier ngulo. La intensidad depende de: el nmero de partcula y del medio
dispersante, y la longitud de onda de la radiacin dispersada. La radiacin entre
variables y es ms factible un tratamiento terico, pero debido a su complejidad
rara veces se aplica a problemas analticos especficos.
El procedimiento generalmente es emprico y slo se consideran 3 factores:
1. La concentracin: mayor sea el nmero de partculas, mayor es la
dispersin.
Relacin matemtica.
Dnde:
C: es la concentracin en %.
: es la radiacin dispersada.
: es la radiacin de la fuente incidente.
: es una constante.
Procedimiento analtico.
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3.4.
EQUIPO.
a) Fuentes de radiacin.
Existen diferentes tipos:
Tiene una elevada potencia radiante, lo que propicia que incida mucha
ms radiacin en un espacio de la cubeta de reaccin extremadamente
pequeo (de 0.5 a 0.8nm de dimetro, aproximadamente).
Es una radiacin monocromtica y altamente colimada, ya que la
radiacin lser por definicin es un haz de radiacin coherente: las ondas
del haz se propagan en la misma direccin, tienen la misma longitud de
onda y estn en la misma fase. Todo ello permite medir la radiacin a
ngulos ms prximos al eje de 0, ngulos en los que la potencia
radiante detectada es mayor.
Por el contrario, el empleo de los tubos de radiacin lser posee una serie de
inconvenientes:
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b) Sistema monocromador.
En nefelometra, al ser la radiacin incidente de igual longitud de onda que la
detectada, slo es necesario que el nefelmetro posea un nico sistema
monocromador, aunque la mayora tiene dos. Si el monocromador se sita entre la
fuente de radiacin y la cubeta, se evita la incidencia sobre la cubeta de
radiaciones de diferente longitud de onda a la deseada que pueden provocar
efectos de calentamiento, reacciones fotoqumicas o de fluorescencia en la
solucin o suspensin. Si se coloca entre la cubeta y el detector, se reducen los
errores provocados por la fluorescencia de molculas inespecficas de la reaccin.
c) Cubeta de lectura.
Pueden tener diferentes formas y tamaos. Generalmente prismticas o
cilndricas. El principal inconveniente de las primeras es que slo permiten la
deteccin de la radiacin en determinados ngulos, y en el caso de las segundas,
que la superficie curva acta como una lente, desviando el haz radiante que las
atraviesa.
d) Detector.
La mayora de los nefelmetros utiliza tubos fotomultiplicadores.
El detector debe estar situado muy cerca de la cubeta de reaccin, ya que la
potencia radiante de la radiacin dispersada es inversamente proporcional a la
segunda potencia de la distancia al detector. Algunos nefelmetros tienen el
detector situado en un ngulo de 90 respecto a la direccin de la radiacin
incidente, pero actualmente los modernos nefelmetros tienden a situar el detector
en ngulos entre 30 y 70. Algunos, incluso logran situarlo entre 13 y 24. El
sistema lser es el que permite ngulos de medicin menores (entre 5 y 12).
La calidad metrolgica de los resultados depende de la inexistencia de
fluctuaciones de la radiacin emitida y de la ausencia de ruidos o corrientes
pticas que afectan al receptor.
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Tipos de Nefelmetros.
Nefelmetro C-102.
Este nefelmetro realiza un anlisis de agua casi completo: cloro libre y total,
bromo, pH, hierro, yodo y cido cianrico. En el modo de medicin de turbiedad
13
3.6.
APLICACIN.
Imunoprecipitacin.
La imunoprecipitacin cuantificada por turbidimetra o nefelometra se emplea
hoy en Ios laboratorios de autoinmunidad para determinar el factor reumtide.
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Inmunodifusin radial.
En este caso se aade un antisuero especfico a la agarosa que, a su vez, se
vierte sobre placas. Se forman pozos en el gel y se colocan en ellos estndares de
protenas y problemas (antgenos). El antgeno difunde en el gel durante varias
horas y va reaccionando con el Ac. En la zona de equivalencia se produce un
anillo de precipitacin.
Inmunodifusin doble o tcnica de Ouchterlony.
Se forman pozos en el gel de agarosa, generalmente en patrn de roseta. Se
depositan antisueros especficos en los pozos centrales y los estndares de
protenas y los problemas en los pozos circundantes. Al difundir las muestras en el
gel, donde el anticuerpo y el antgeno alcanzan la equivalencia, se forman bandas
de precipitados insolubles. La posicin y forma de la banda se determinan segn
la concentracin del antgeno y del anticuerpo, y sus tamaos. La distancia de las
bandas con respecto al anticuerpo es directamente proporcional a la cantidad de
antgeno presente.
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ANEXO. TECNICAS.
ENSAYO DE TURBIDIMETRA.
Toma de muestras:
PROTOCOLO
Determinacin de turbidez STM 2130.
Principio del mtodo:
Este mtodo de prueba es aplicable para la medicin de turbidez en muestras
de agua de uso domestico industrial y residual. El intervalo de medicin es de
0.05 a 40 NTU; los valores mayores a 40 NTU se pueden determinar, diluyendo
la muestra proporcionalmente, con agua destilada.
Algunos de los instrumentos de medicin de la turbidez dependen de la
comparacin visual, otros emplean celdas fotoelctricas que miden la luz
dispersa a 90 a la trayectoria del rayo de luz en la muestra conocida como
nefelometra. Dichos aparatos son los que en la actualidad se estn utilizando
debido a su mayor precisin.
El turbidimetro es de tipo nefelometrico y se basa en el efecto de tyndall. Se
compara un rayo de luz que se hace pasar hacia arriba por la muestra con la luz
dispersada hacia arriba por las partculas suspendidas por la solucin turbia, la
cual es iluminada lateralmente a 90.
La unidad de turbiedad, fue definida como la obstruccin optima de la luz,
causada por una parte por milln de slice en agua destilada,1 unidad
nefelometrica de turbiedad (NTU) = 7.5 ppm de SiO2.
Actualmente la unidad utilizada es la NTU, unidad nefelometrica de turbidez y
que equivale a: 1 unidad nefelometrica de turbidez (NTU) = 1 ppm de formalina
estndar.
Los valores de turbiedad pueden variar desde cero hasta varios miles de
unidades en aguas altamente turbias, consecuentemente no hay un mtodo de
determinaciones que abarque tan amplio intervalo.
Existen tres mtodos comnmente empleados:
1 Mtodo de hellige.
2 Mtodo del nefelmetro fotoelctrico.
3 Mtodo buja de Jackson.
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Bioseguridad de protocolo:
Equipos:
Turbidimetro.
Materiales:
1. Beakers.
2. Pipetas de 10 ml.
3. Probeta de 100 ml.
Reactivos:
1. Agua destilada libre de turbidez.
2. Solucin patrn de 40 NTU.
Procedimiento:
1. Durante la toma de muestra verificar que la muestra est fresca con
temperatura de almacenamiento (20 C de temperatura adecuados).
2. Conectar el aparato a la corriente elctrica.
3. Calibrar el equipo con la solucin patrn.
4. Verificar la calibracin de acuerdo a la desviacin permitida por la ficha
tcnica del equipo.
5. Agitar la muestra problema y llevar el tubo hasta 120 ml.
6. Prender el foco, mover la escala y observar por el visor hasta que
desaparezca el punto central negro.
anlisis de la muestra:
Tome la muestra y de acuerdo con la escala y con la carta de turbidez
determina las unidades de turbidez reales.
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Reactivos.
Calibrado y Medida.
El intervalo de linealidad depende de la longitud de onda de trabajo. A 420nm
est comprendido entre aproximadamente 5 y 30mg ml/L de anin sulfato.
Para obtener la recta de calibrado, se prepara, en primer lugar, dos diluciones
intermedias de 100 y 200mg/L, se introducen en sendos matraces aforados de 250
ml y se enrasan con agua desionizada. Para preparar los patrones de medida, se
pipetean los volmenes que se indican en el cuadro de la derecha. Se introducen
en matraces de 100ml, se aaden 10ml del reactivo HCl/NaCl y 20ml de la mezcla
glicerina/etanol, y se diluye con agua desionizada hasta casi la marca de enrase;
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Concentracin de los
patrones de
medida(mg ml/L)
Volumen de la
disolucin patrn
intermedia (mL)
Concentracin
disolucin patrn
intermedia
(mg/L)
100
10
200
15
15
100
20
20
200
25
25
100
30
15
200
Observaciones.
La muestra debe ser incolora y perfectamente transparente, ya que la existencia
de coloracin o turbidez puede provocar errores. Si es necesario, debefiltrarse
previamente a travs de un filtro con un tamao de poro de 0,45 mm. Las aguas
naturales no suelen contener ms aniones capaces de formar compuestos
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insolubles con iones Ba (II) en medio cido que el sulfato, por lo que el mtodo no
tiene interferencias.
La adicin de BaCl2 en forma cristalina (no en disolucin) es necesaria
para controlar la velocidad del precipitado de BaSO4. La presencia de una mezcla
glicerina/etanol estabiliza y mantiene elprecipitado de sulfato de bario en
suspensin, lo que ayuda a obtener unaturbidez homognea.
A fin de obtener resultados reproducibles, es imprescindible mantener siempre
elmismo orden de adicin de reactivos y controlar rigurosamenteel
tiempotranscurrido entre la adicin del cloruro de bario y la lectura de absorbancia.
Normalmente bastan cuatro patrones para construir una recta de calibrado, pero
eneste caso se proponen seis. La razn radica en que las dificultades
para mantener el sulfato de bario en suspensin homognea hacen que con
frecuencia la lectura de absorbancia de alguna de las diluciones se aparte
claramente del valor esperado; con slo cuatro patrones sera necesario
prepararla de nuevo, mientras que con seis es posible rechazar este resultado y
construir la recta con los restantes. Por la misma razn, es conveniente preparar
varias diluciones dela muestra para la medida.
Seguridad.
El cido clorhdrico concentrado es corrosivo ylas disolventes orgnicos son
txicos y inflamables.
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GLOSARIO
1. Analito.- un analito es el componente (elemento, compuesto o ion) de
inters analtico de una muestra. Son especies qumicas cuya presencia o
concentracin se desea conocer. El analito es una especie qumica que
puede ser identificado y cuantificado, es decir, determinar su cantidad y
concentracin en un proceso de medicin qumica, constituye un tipo
particular de mensurando en la metrologa qumica.
2. Anticuerpo.- son glicoprotenas del tipo gamma globulina. Pueden
encontrarse de forma soluble en la sangre u otros fluidos corporales de los
vertebrados, disponiendo de una forma idntica que acta como receptor de
los linfocitos B y son empleados por el sistema inmunitario para identificar y
neutralizar elementos extraos tales como bacterias, virus o parsitos.
3. Antgeno.- La definicin moderna abarca todas las sustancias que pueden
ser reconocidas por el sistema inmune adaptativo, bien sean propias o
ajenas.
22
23
22. Roseta.- En botnica, una roseta es una disposicin circular de hojas en las
que todas se encuentran a la misma altura. Muchas plantas perennes
aparentemente caducifolias mantienen una roseta basal, es decir, ubicada a
ras de suelo, durante el invierno.
23. Transmitancia.- La transmitancia o transmitencia es una magnitud que
expresa la cantidad de energa que atraviesa un cuerpo en la unidad de
tiempo (potencia).
La transmitancia ptica que se define como la fraccin de luz incidente, a
una longitud de onda especificada, que pasa a travs de una muestra.
24. Tensoactivos.- Los tensoactivos o tensioactivos (tambin llamados
surfactantes) son sustancias que influyen por medio de la tensin
superficial en la superficie de contacto entre dos fases (p.ej., dos lquidos
insolubles uno en otro). Cuando se utilizan en la tecnologa domstica se
denominan como emulgentes o emulsionantes; esto es, sustancias que
permiten conseguir o mantener una emulsin.
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BIBLIOGRAFA.
http://es.scribd.com/doc/54885577/Turbidimetria-y-Nefelometria
http://books.google.com.mx/books?id=ZF9jSBZCghAC&pg=PA276&dq=tur
bidimetria&hl=es&sa=X&ei=QmF2T6LfAbDjsQKAdChBA&ved=0CDUQ6AEwAQ#v=onepage&q=turbidimetria&f=false
http://videntequimico.blogspot.mx/2008/03/ensayo-de-turbidimetra.html.
http://www.xtec.cat/~gjimene2/llicencia/students/08turbi.html
http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003545.htm
http://www.efreekontrol.com/pdf/nsc/SEQC-02_VHebron_ES.pdf
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