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UNIDAD ACADEMICA MULTIDICIPLINARIA MANTE-CENTRO

NDICE.
Pagina.
1. Introduccin..3
2. Turbidimetra....6
2.1. Fundamento.6
2.2. Equipo...7
2.3. Muestras Analizables y Aplicaciones...9
3. Nefelometra..9
3.1. Fundamento9
3.2. Relacin matemtica..10
3.3. Procedimiento analtico..11
3.4. Equipo..12
a) Fuentes de radiacin..12
b) Sistema monocromador.13
c) Cubeta de lectura...13
d) Detector13
3.5. Tipos de Nefelometros...14
3.6. Aplicacin15
4. ANEXO. Tcnicas..17
4.1. Ensayo De Turbidimetra18
4.2. Determinacin Turbidimtrica De Sulfato..20
4.3.

Utilidad De La Determinacin De Cadenas Ligeras Libres En Orina


Por Nefelometra Para El Estudio De La Proteinuria De Bence
Jones.22
Glosario23
Bibliografia27

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TURBIDIMETRA Y NEFELOMETRIA.

1. INTRODUCCIN.
Por lo que se refiere a mtodos fotomtricos podramos enlistar un nmero
considerable de ellos; pero en el contenido que se presentara a continuacin solo
mencionaremos dos tipos de mtodos: Turbidimetra y Nefelometra, los cuales
nos son tiles para medir la turbidez de una muestra, generalmente nefelometra y
turbidimetra se utilizan en el anlisis de la calidad qumica del agua para
determinar la claridad y para el control de los procesos de tratamiento.
Si bien, ambos mtodos tienen un mismo propsito; tal es el caso de la claridad y
control del agua, pero tanto turbidimetra como nefelometra cumplen con
diferentes funciones.
Los mtodos pticos de anlisis cubren un amplio campo de aplicaciones debido
a su rapidez a la gran gama de instrumentacin disponible y sus grandes
posibilidades de automatizacin.
Los mtodos no espectroscpicos son aquellos en los que no hay intercambio de
energa, sino cambios en la direccin o en las propiedades fsicas de la radiacin
electromagntica.
La dispersin de radiacin es un fenmeno fisicoqumico al incidir una radiacin
sobre una superficie slida, lquida o gaseosa y ser dispersa en diferentes
direcciones debido a la difraccin y reflexin de la radiacin por la distribucin y
orientacin de las molculas sobre las cual incide la radiacin.
Cuando un haz de luz choca con una partcula en suspensin parte de la luz se
dispersa, parte de la luz se refleja y parte de la luz se absorbe. La dispersin de la
luz depende de: la longitud de onda de la luz, del tamao de la partcula y del
ndice de refraccin de la partcula en relacin con el medio que la rodea.
La dispersin de la luz se puede medir por turbidimetra o por nefelometra.

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La turbidimetra mide la disminucin de la luz transmitida a travs de una


suspensin de partculas utilizando para ello un espectrofotmetro (detector en la
misma direccin del haz de luz, se mide A o T) se suele utilizar para soluciones
concentradas (para que haya una buena disminucin de la luz transmitida)
ejemplo:
Determinacin de protenas totales en suero, LCR u orina (haciendo que
las protenas precipiten con YCA o cido sulfosaliclico).

La nefelometra: mide la luz dispersada en direccin distinta a la luz emitida


(generalmente con ngulos que oscilan entre 15 y 90). Utiliza como instrumento
el nefelmetro en el que el detector se ubica con un ngulo que oscila entre 15 y
90 ejemplo:
A 90). Se suele utilizar para concentraciones ms diluidas.

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La turbidimetra y la nefelometra tienen una gran variedad de aplicaciones y


permite trabajar con muestras gaseosas, lquidas e incluso con slidos
transparentes. La formacin de precipitados difciles de filtrar, como por ejemplo
los gelatinosos o los de tamao de partcula muy pequeo, suelen proporcionar
suspensiones ideales para la aplicacin de tcnicas basadas en la dispersin de la
luz que sustituye a las tcnicas gravimtricas. Este tipo de aplicaciones son
frecuentes en laboratorios analticos, laboratorios clnicos y en plantas de
procesos. Uno de los principales campos de aplicacin reside en estudios de
polucin de aire y agua, donde las dos tcnicas se usan para determinar la
transparencia y controlar el tratamiento de aguas potables, efluentes de planta de
tratamiento de aguas y otros tipos de aguas ambientales.
Las medidas de dispersin de la luz se utilizan tambin para determinar la
concentracin de humos, polvo, niebla, aerosoles, etc.
A pesar de que los trminos turbidimetra y nefelometra suelen restringirse a
aquellas aplicaciones en las que se mide la concentracin de partculas en
suspensin existen tambin otros tipos de aplicaciones basados en las medidas
de dispersin de la luz. Entre ellas podemos citar la determinacin de la forma y
tamao de las partculas as como la de los pesos, moleculares (especialmente en
el caso de polmeros).

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2. TURBIDIMETRA.
2.1. Fundamento.
Cuando un haz de luz monocromtica, de longitud de onda no absorbible choca
contra las partculas de una sustancia que est en suspensin, cambia la direccin
de propagacin del haz de luz (en realidad slo cambian de direccin algunos
fotones del haz). Este efecto es usado para determinar la presencia de un analito
en suspensin ya que ese cambio de direccin del haz y de su intensidad depende
de muchos factores que una vez relacionados y cuantificados permiten obtener los
valores buscados.
Cuando un haz de radiacin monocromtica de una longitud de onda
determinada
, es enfocado sobre un medio que contiene partculas de
dimensiones menores a 3/2
, se observa dispersin de radiacin en todas las
direcciones del espacio. Si la partcula presenta mayores tamaos, la radiacin
puede ser reflejada o refractada. Existen dos tipos de dispersin:
1. Elstica: radiacin es absorbida por el analito y remitida sin cambios en la
energa de la radiacin, es decir, se genera cuando la radiacin incidente
tiene la misma longitud de onda que la dispersada.
Dispersin de partculas pequeas o Reyleigh: se produce cuando
el tamao mximo de las partculas que producen la dispersin es
menor al 5% de la longitud de onda de la radiacin. La intensidad
de la luz dispersada se distribuye de manera simtrica.
Dispersin de grandes partculas: la distribucin de la luz
dispersada disminuye en sentido retrgrado, debido a las
interferencias constructivas y destructivas.
2. Inelstica: la radiacin es absorbida y remitida con cambios en su
energa, es decir, se produce cuando el fotn emitido tiene una longitud de
onda diferente.
La turbidimetra puede realizarse en espectrofotmetros de visible o violeta.
Cuando la concentracin de partculas en suspensin se mide por turbidimetra, la
suspensin se pone en una cubeta similar a un tubo de ensayo, que permite
realizar las medidas de las energa incidentes y transmitidas. La fuente de
radiacin ms frecuentemente usadas es la lmpara de wolframio, pero pueden
utilizarse otras fuentes de radiacin visible. Si ponemos en la cubeta suspensiones
coloreadas se debe usar un filtro para evitar que influya sobre los resultados
dando valores excesivamente altos. Los Turbidmetros pueden incorporar
cualquier detector que sea sensible a la longitud de onda transmitida.

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Existe una relacin matemtica determinada experimentalmente:

Donde:
P: es la energa de la radiacin transmitida.
: es la energa de la radiacin incidente.
v: espesor de la cubeta.
C: concentracin de partculas disertantes por unidad de volumen.
f: constante que depende del tamao partcula y longitud de onda.
Si aplicamos logaritmos, el trmino

, es lo que se conoce como

turbidez. Si a ese logaritmo se le denomina como T, sabiendo que

entonces, deduciendo de la expresin anterior, y tomando K como una constante,


tenemos que:

2.2.

EQUIPO.

Casi todas las medidas turbidimetricas se realizan con colormetros o


espectrofotmetros ordinarios. Tambin pueden usarse instrumentos visuales
sencillos, tales como el trubidimetroParr o el colormetro Duboscq.
La presente imagen representa el esquema de un turbidimetro, el Du Pont
Modelo 430. Este turbidimetro, que es mucho ms sensible que los Turbidmetros
ordinarios para concentraciones bajas de materia en suspensin, se basa en el
hecho de que la dispersin provoca un cambio en el plano de polarizacin de la
luz.

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El haz incidente se convierte en luz polarizada en un plano mediante el


polarizador primario. Despus de atravesar la muestra el haz se divide en dos,
mediante un espejo semi-plateado, y se detecta con dos fototubos separados.
Cuando la disolucin de la muestra no tiene partculas en suspensin, la fotoclula
1 da una respuesta mxima y la fotoclula 2 da una respuesta mnima nula. La
relacin entre la seal 2 y la seal 1 es una medida de la concentracin de las
partculas en suspensin. Al aumentar la concentracin de las partculas en
suspensin en la muestra, aumenta la seal de la fotoclula 2 y disminuye la de la
fotoclula 1 y por esto la razn de las dos seales permite una medida sensible de
la turbidez. Este sistema de doble haz minimiza el problema debido a la absorcin
por las partculas de la disolucin pero tiene el inconveniente de que no puede
usarse cuando la disolucin contiene sustancias pticamente activas. Este
instrumento puede usarse tanto para muestras individuales como para control en
continuo de corrientes de fluidos.

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2.3.

Muestras Analizables y Aplicacin.

MUESTRAS ANALIZABLES.
Muestras gaseosas, lquidas e incluso con slidos transparentes.
APLICACIN.
Generalmente, la turbidimetra se utiliza en el anlisis de la calidad qumica del
agua para determinar la claridad y el control de los procesos de tratamiento.
Tambin se utilizan para la determinacin de iones sulfato. Al igual que en los
siguientes:

Suelos.
Agua natural, residuales, y residuales tratadas.
Lodos o fangos.

3. NEFELOMETRA.
3.1 Fundamento.
Se basa en la deteccin de los complejos Ag-Ab, por la refraccin que dichos
complejos producen sobre rayos de luz que se hacen pasar por el tubo con el
antgeno y el anticuerpo correspondiente. Habitualmente se utilizan rayos lser y
se establece una relacin entre la cantidad de luz que llega y la cantidad de
complejos formados.
La nefelometra es un procedimiento analtico que se basa en la dispersin de la
radiacin que atraviesan las partculas de materia. Cuando la luz atraviesa en
medio transparente en el que existe una suspensin de partculas slidas, se
dispersa en todas direcciones y como consecuencia se observa turbia. La
dispersin no supone la prdida neta de potencia radiante, solo es afectada la
direccin de la propagacin, porque la intensidad de la radiacin es la misma en
cualquier ngulo. La intensidad depende de: el nmero de partcula y del medio
dispersante, y la longitud de onda de la radiacin dispersada. La radiacin entre
variables y es ms factible un tratamiento terico, pero debido a su complejidad
rara veces se aplica a problemas analticos especficos.
El procedimiento generalmente es emprico y slo se consideran 3 factores:
1. La concentracin: mayor sea el nmero de partculas, mayor es la
dispersin.

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2. Tamao de partcula: factores como el pH, la velocidad y orden de la


mezcla, concentracin de los reactivos, duracin del estado de reposo y la
fuerza inica.
3. Longitud de onda: generalmente las muestras se iluminan con luz
blanca, pero si estn coloreadas, se debe escoger una porcin del
espectro electromagntico en la que la absorcin del medio se reduzca al
mnimo.
En las muestras se agregan agentes tensoactivos (como gelatina), para prevenir
la coagulacin del coloide. Slo se obtienen datos confiables si se controlan
escrupulosamente las variables que afectan el tamao de partculas.
3.2.

Relacin matemtica.

La relacin matemtica entre la intensidad de dispersin, S y la concentracin de


partculas suspendidas es raramente utilizada es suficiente con saber que existe
una relacin lineal entre ellas a baja concentraciones. Sin embargo la relacin
matemtica que cumplen es:

Dnde:
C: es la concentracin en %.
: es la radiacin dispersada.
: es la radiacin de la fuente incidente.
: es una constante.

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El valor del ngulo oscila entre 30 y 70, su valor depende de la aplicacin


especfica seleccionada.
3.3.

Procedimiento analtico.

Se basa en la dispersin de la radiacin que atraviesan las partculas de materia.


Cuando la luz atraviesa un medio transparente en el que existe una suspensin de
partculas slidas, se dispersa en todas direcciones y como consecuencia se
observa turbia. La dispersin no supone la prdida neta de potencia radiante, solo
es afectada la direccin de la propagacin, porque la intensidad de la radiacin es
la misma en cualquier ngulo. La intensidad depende de: el nmero de partculas
suspendidas, su tamao, su forma, los ndices refractivos de la partcula y del
medio dispersante, y la longitud de onda de la radiacin dispersada. Cuando la
concentracin de una suspensin de partcula es baja es preferible medirla por
este mtodo. En este caso la suspensin se coloca en una cubeta colocada como
se muestra en la figura siguiente:

El instrumento permite la medida de la intensidad de la dispersin S, la cual est


relacionada con la concentracin. Las fuentes de radiacin que se utilizan son de
lser helio-nen, lmparas de halgenos y lmparas de xenn, siendo el ms
frecuente el primero.
Este consiste en un tubo largo y estrecho en el cual se introduce una mezcla de
gas formada por 7 partes de helio y 1 parte de nen al que se le aplica un voltaje
para producir una descarga elctrica.

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3.4.

EQUIPO.

a) Fuentes de radiacin.
Existen diferentes tipos:

Lmpara de xenn y de vapor de mercurio. En nefelometra se utilizan


en emisiones de una longitud de onda cercana a 340nm.
Lmpara halgena de wolframio. Emite entre 400 y 500nm.
Diodo fotoemisor. Emite a longitudes de onda entre 650 y 840nm.
Tubos lser con mezcla de helio-nen o helio-cadmio. Que emiten a
632.8 y 441.6nm, respectivamente.

En nefelometra es importante disponer de una fuente de radiacin de gran


potencia radiante; sta es la razn de la incorporacin de las fuentes de radiacin
lser en la instrumentacin nefelomtrica.
La radiacin lser posee las siguientes caractersticas:

Tiene una elevada potencia radiante, lo que propicia que incida mucha
ms radiacin en un espacio de la cubeta de reaccin extremadamente
pequeo (de 0.5 a 0.8nm de dimetro, aproximadamente).
Es una radiacin monocromtica y altamente colimada, ya que la
radiacin lser por definicin es un haz de radiacin coherente: las ondas
del haz se propagan en la misma direccin, tienen la misma longitud de
onda y estn en la misma fase. Todo ello permite medir la radiacin a
ngulos ms prximos al eje de 0, ngulos en los que la potencia
radiante detectada es mayor.

Por el contrario, el empleo de los tubos de radiacin lser posee una serie de
inconvenientes:

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Emiten a longitudes de onda largas y la radiacin es altamente polarizada,


lo cual va en detrimento de la potencia radiante de dispersin detectada.
Las longitudes de onda son fijas e inmodificables, lo cual es un
inconveniente importante cuando se trabaja en reacciones de
inmunoprecipitacin, en las que el tamao de la partcula cambia durante
el curso de la reaccin.

b) Sistema monocromador.
En nefelometra, al ser la radiacin incidente de igual longitud de onda que la
detectada, slo es necesario que el nefelmetro posea un nico sistema
monocromador, aunque la mayora tiene dos. Si el monocromador se sita entre la
fuente de radiacin y la cubeta, se evita la incidencia sobre la cubeta de
radiaciones de diferente longitud de onda a la deseada que pueden provocar
efectos de calentamiento, reacciones fotoqumicas o de fluorescencia en la
solucin o suspensin. Si se coloca entre la cubeta y el detector, se reducen los
errores provocados por la fluorescencia de molculas inespecficas de la reaccin.
c) Cubeta de lectura.
Pueden tener diferentes formas y tamaos. Generalmente prismticas o
cilndricas. El principal inconveniente de las primeras es que slo permiten la
deteccin de la radiacin en determinados ngulos, y en el caso de las segundas,
que la superficie curva acta como una lente, desviando el haz radiante que las
atraviesa.
d) Detector.
La mayora de los nefelmetros utiliza tubos fotomultiplicadores.
El detector debe estar situado muy cerca de la cubeta de reaccin, ya que la
potencia radiante de la radiacin dispersada es inversamente proporcional a la
segunda potencia de la distancia al detector. Algunos nefelmetros tienen el
detector situado en un ngulo de 90 respecto a la direccin de la radiacin
incidente, pero actualmente los modernos nefelmetros tienden a situar el detector
en ngulos entre 30 y 70. Algunos, incluso logran situarlo entre 13 y 24. El
sistema lser es el que permite ngulos de medicin menores (entre 5 y 12).
La calidad metrolgica de los resultados depende de la inexistencia de
fluctuaciones de la radiacin emitida y de la ausencia de ruidos o corrientes
pticas que afectan al receptor.

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La sensibilidad metrolgica de un nefelmetro puede incrementarse aumentando


la seal detectada por medio de un sistema amplificador, siempre y cuando no
existan sustancias interferentes, ya que se podra estar amplificando el error de
lectura.
Otras caractersticas a tener en cuenta al escoger un sistema nefelomtrico son:

La posibilidad de lectura a un solo punto y de forma contina.


La existencia de un sistema refrigerador y de un controlador de la
temperatura.
La dispensacin y dilucin automtica de muestras y reactivos.
La incorporacin de un ordenador que permita al usuario el seguimiento
de las reacciones.
3.5.

Tipos de Nefelmetros.

Un nefelmetro es un instrumento para medir


partculas suspendidas en un lquido. Esto lo
hace empleando una fotocelda colocada en un
ngulo de 90 con respecto a una fuente
luminosa. La densidad de partculas es entonces
una funcin de la luz reflejada por las partculas a
la fotocelda. Cuanta ms luz se refleje en una
determinada densidad de partculas depende de
las propiedades de las partculas como su forma,
color y reflectividad. Estableciendo a una
correlacin de trabajo entre turbidez y slidos suspendidos (que ms til, pero
generalmente una ms difcil de cuantificacin de partculas) debe ser establecido
independiente para cada situacin.
A los nefelmetros usados en las pruebas de calidad del agua, comnmente se
les llaman turbidmetros. Sin embargo, puede haber diferencias entre los modelos
de turbidmetros, dependiendo del arreglo geomtrico de la fuente luminosa con
respecto a la fotocelda. Un turbidimetronefelometrico siempre monitorea la luz
reflejada por las partculas y no la atenuacin debida a la turbidez.

Nefelmetro C-102.
Este nefelmetro realiza un anlisis de agua casi completo: cloro libre y total,
bromo, pH, hierro, yodo y cido cianrico. En el modo de medicin de turbiedad

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puede elegir entre los valores de calibracin dados o los


valores definidos por el usuario. Por medio del reloj de
tiempo real integrado puede recuperar presionando la
tecla los ltimos datos de calibracin. En el rango de
medicin de turbiedad se puede poner un punto de
calibracin libre entre 0.0 y 50.0 NTU (NTU
NephelometricTurbidityUnit = FTU FormazinTurbidityUnit/
Ratio 1:1). La turbiedad se mide con el mtodo USEPA.

3.6.

APLICACIN.

Imunoprecipitacin.
La imunoprecipitacin cuantificada por turbidimetra o nefelometra se emplea
hoy en Ios laboratorios de autoinmunidad para determinar el factor reumtide.

Tanto en los reactivos como en el suero pueden existir partculas que


produzcan una dispersin de luz no deseada, ej. Lipoprotenas,
quilomicrones. Tambin puede interferir la suciedad.
La intensidad de la luz dispersada. Las protenas suelen tener un pico de
absorcin en el ultravioleta y los cromgenos del suero entre 400-425nm;
por todo ello se suele trabajar a frecuencias que oscilen entre 320-280nm
y 500-600nm.

Muy frecuentemente, para cuantificar protenas concretas, se utilizan anticuerpos


que reaccionan con dichas protenas de la muestra, en este caso se habla de
inmunoturbidimetra e inmunonefelometra.
Cuando se ponen en contacto un Ag y un Ac especfico contra ese antgeno
ambos reaccionan y forman un complejo Ag-Ac. Inicialmente los complejos se
forman rpidamente pero, existe una segunda fase de crecimiento de complejos
ms lenta y, es precisamente en sta fase en la que aparece la dispersin de la
luz. As, en la inmunoturbidimetra e inmunonefelometra se mide la dispersin fr la
luz provocada por los complejos Ag-Ac. En ocasiones los Ac se unen a bolitas de
ltex para aumentar el tamao de los complejos (inmuno-anlisis potenciados).
La inmunoprecipitacin, se utilizan partculas de ltex recubiertas con IgG.
Existen muchos equipos comerciales para como analizadores automticos de
bioqumica o nefelmetros automticos, y sus mtodos estn estandarizados con
calibradores que se basan en preparaciones de referencia.

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Inmunodifusin radial.
En este caso se aade un antisuero especfico a la agarosa que, a su vez, se
vierte sobre placas. Se forman pozos en el gel y se colocan en ellos estndares de
protenas y problemas (antgenos). El antgeno difunde en el gel durante varias
horas y va reaccionando con el Ac. En la zona de equivalencia se produce un
anillo de precipitacin.
Inmunodifusin doble o tcnica de Ouchterlony.
Se forman pozos en el gel de agarosa, generalmente en patrn de roseta. Se
depositan antisueros especficos en los pozos centrales y los estndares de
protenas y los problemas en los pozos circundantes. Al difundir las muestras en el
gel, donde el anticuerpo y el antgeno alcanzan la equivalencia, se forman bandas
de precipitados insolubles. La posicin y forma de la banda se determinan segn
la concentracin del antgeno y del anticuerpo, y sus tamaos. La distancia de las
bandas con respecto al anticuerpo es directamente proporcional a la cantidad de
antgeno presente.

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ANEXO. TECNICAS.
ENSAYO DE TURBIDIMETRA.

Toma de muestras:

Determine la turbidez en el mismo da que fue muestreada, si esto no es posible


las muestras se pueden conservar hasta las 24 horas refrigeradas a 4 C; para
tiempos ms prolongados las muestras se pueden preservar con la adicin de un
gramo de cloruro mercrico por litro siendo esto no una tcnica recomendada para
que los ensayos sean de la mejor calidad.

PROTOCOLO
Determinacin de turbidez STM 2130.
Principio del mtodo:
Este mtodo de prueba es aplicable para la medicin de turbidez en muestras
de agua de uso domestico industrial y residual. El intervalo de medicin es de
0.05 a 40 NTU; los valores mayores a 40 NTU se pueden determinar, diluyendo
la muestra proporcionalmente, con agua destilada.
Algunos de los instrumentos de medicin de la turbidez dependen de la
comparacin visual, otros emplean celdas fotoelctricas que miden la luz
dispersa a 90 a la trayectoria del rayo de luz en la muestra conocida como
nefelometra. Dichos aparatos son los que en la actualidad se estn utilizando
debido a su mayor precisin.
El turbidimetro es de tipo nefelometrico y se basa en el efecto de tyndall. Se
compara un rayo de luz que se hace pasar hacia arriba por la muestra con la luz
dispersada hacia arriba por las partculas suspendidas por la solucin turbia, la
cual es iluminada lateralmente a 90.
La unidad de turbiedad, fue definida como la obstruccin optima de la luz,
causada por una parte por milln de slice en agua destilada,1 unidad
nefelometrica de turbiedad (NTU) = 7.5 ppm de SiO2.
Actualmente la unidad utilizada es la NTU, unidad nefelometrica de turbidez y
que equivale a: 1 unidad nefelometrica de turbidez (NTU) = 1 ppm de formalina
estndar.
Los valores de turbiedad pueden variar desde cero hasta varios miles de
unidades en aguas altamente turbias, consecuentemente no hay un mtodo de
determinaciones que abarque tan amplio intervalo.
Existen tres mtodos comnmente empleados:
1 Mtodo de hellige.
2 Mtodo del nefelmetro fotoelctrico.
3 Mtodo buja de Jackson.

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Bioseguridad de protocolo:

Para este tipo de anlisis es recomendada la utilizacin de los siguientes


implementos de seguridad en el laboratorio:
Gafas de seguridad
Bata
Guantes de laboratorio

Materiales equipos y reactivos:

Equipos:
Turbidimetro.
Materiales:
1. Beakers.
2. Pipetas de 10 ml.
3. Probeta de 100 ml.
Reactivos:
1. Agua destilada libre de turbidez.
2. Solucin patrn de 40 NTU.
Procedimiento:
1. Durante la toma de muestra verificar que la muestra est fresca con
temperatura de almacenamiento (20 C de temperatura adecuados).
2. Conectar el aparato a la corriente elctrica.
3. Calibrar el equipo con la solucin patrn.
4. Verificar la calibracin de acuerdo a la desviacin permitida por la ficha
tcnica del equipo.
5. Agitar la muestra problema y llevar el tubo hasta 120 ml.
6. Prender el foco, mover la escala y observar por el visor hasta que
desaparezca el punto central negro.
anlisis de la muestra:
Tome la muestra y de acuerdo con la escala y con la carta de turbidez
determina las unidades de turbidez reales.

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DETERMINACIN TURBIDIMTRICA DE SULFATO.


La determinacin de ion sulfato en concentraciones del orden de miligramos por
litrose puede llevar a cabo mediante una turbidimetra basada en la formacin de
BaSO4.
La medida de la turbidez puede llevarse a cabo con instrumentos diseados a tal
fin,comolosturbidmetros o los nefelmetros, pero no hay ningn inconveniente en
utilizarlosdatosproporcionados por espectrmetros UV/Vis o colormetros.
Instrumentacin.
1.
2.

Espectrmetro UV/Vis o colormetro.


Cubeta de 1cm de camino ptico.

Reactivos.

Disolucin patrn de sulfato de 1.00g/L, aproximadamente: se pesan del


orden de 1.814g de sulfato de sodio anhdrido, se disuelve en agua
desionizada y se completa el volumen a 1L en un matraz aforado.
Alternativamente es posible preparar una disolucin patrn de H 2SO4
0.01mol/L por dilucin del cido concentrado y posterior estandarizacin a
un patrn primario adecuado.
Reactivo NaCl/HCl: se disuelven 60g de cloruro de sodio, en 200ml de agua
desionizada, se aaden 5ml de cido clorhdrico concentrado y se diluye
hasta 250ml.
Cloruro de bario, en forma cristalina, de tamao de partculas comprendido
entre 20 y 30 mallas.
Disolucin de gliceria-etanol (1:2): se mezcla un volumen de glicerina, con
dos volmenes de etanol absoluto.

Calibrado y Medida.
El intervalo de linealidad depende de la longitud de onda de trabajo. A 420nm
est comprendido entre aproximadamente 5 y 30mg ml/L de anin sulfato.
Para obtener la recta de calibrado, se prepara, en primer lugar, dos diluciones
intermedias de 100 y 200mg/L, se introducen en sendos matraces aforados de 250
ml y se enrasan con agua desionizada. Para preparar los patrones de medida, se
pipetean los volmenes que se indican en el cuadro de la derecha. Se introducen
en matraces de 100ml, se aaden 10ml del reactivo HCl/NaCl y 20ml de la mezcla
glicerina/etanol, y se diluye con agua desionizada hasta casi la marca de enrase;

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finalmente, se aaden 0.3g de cloruro de bario a cada aforado, se agita durante un


minuto y se enrasa.
Tambin se prepara un blanco (10ml de reactivo HCl/NaCl, 20ml de la mezcla
glicerina/etanol y 0.3g de cloruro de bario diluidos a 100ml en un matraz aforado),
que se utiliza para ajustar el cero de absorbancia en el instrumento.
Transcurridos cinco minutos (controlados con un cronometr) desde la adicin
del cloruro de bario, se miden las absorbancias de los distintos patrones y se
construye la recta de calibrado.
Para la cuantificacin, se pipetea un volumen de muestra que contenga entre 0.5
y 3mg de anin sulfato, se introduce en un matraz aforado de 100ml y se produce
como se ha descrito para los patrones. La interpolacin en la recta de calibrado
permite obtener su concentracin y, a partir de ese valor, calcular el contenido de
sulfatos de la muestra original.
Volmenes de las diluciones patrnintermedias de sulfato para preparar
lasdiluciones de medida.

Concentracin de los
patrones de
medida(mg ml/L)

Volumen de la
disolucin patrn
intermedia (mL)

Concentracin
disolucin patrn
intermedia
(mg/L)
100

10

200

15

15

100

20

20

200

25

25

100

30

15

200

Observaciones.
La muestra debe ser incolora y perfectamente transparente, ya que la existencia
de coloracin o turbidez puede provocar errores. Si es necesario, debefiltrarse
previamente a travs de un filtro con un tamao de poro de 0,45 mm. Las aguas
naturales no suelen contener ms aniones capaces de formar compuestos

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insolubles con iones Ba (II) en medio cido que el sulfato, por lo que el mtodo no
tiene interferencias.
La adicin de BaCl2 en forma cristalina (no en disolucin) es necesaria
para controlar la velocidad del precipitado de BaSO4. La presencia de una mezcla
glicerina/etanol estabiliza y mantiene elprecipitado de sulfato de bario en
suspensin, lo que ayuda a obtener unaturbidez homognea.
A fin de obtener resultados reproducibles, es imprescindible mantener siempre
elmismo orden de adicin de reactivos y controlar rigurosamenteel
tiempotranscurrido entre la adicin del cloruro de bario y la lectura de absorbancia.
Normalmente bastan cuatro patrones para construir una recta de calibrado, pero
eneste caso se proponen seis. La razn radica en que las dificultades
para mantener el sulfato de bario en suspensin homognea hacen que con
frecuencia la lectura de absorbancia de alguna de las diluciones se aparte
claramente del valor esperado; con slo cuatro patrones sera necesario
prepararla de nuevo, mientras que con seis es posible rechazar este resultado y
construir la recta con los restantes. Por la misma razn, es conveniente preparar
varias diluciones dela muestra para la medida.
Seguridad.
El cido clorhdrico concentrado es corrosivo ylas disolventes orgnicos son
txicos y inflamables.

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UTILIDAD DE LA DETERMINACIN DE CADENAS LIGERAS LIBRES EN


ORINA POR NEFELOMETRA PARA EL ESTUDIO DE LA PROTEINURIA
DE BENCE JONES.
INTRODUCCIN.
El procedimiento para la deteccin de la proteinuria Bence Jones (PBJ),
clsicamente utilizado en los laboratorios clnicos, es la inmunofijacin en gel de
agarosa (IF) utilizando orina concentrada. Sin embargo, la laboriosidad, coste
delprocedimiento y el moderado porcentaje de resultados positivos sobre las
peticiones solicitadas, aconsejan la utilizacin de un procedimiento de cribaje
previo como puede ser la cuantificacin por nefelometra (NF) de cadenas ligeras
libres (CLL)kappa (K) y lambda (L) en orinas no concentradas.
OBJETIVO.
Evaluar la validez de integrar en el algoritmo de laboratorio para el estudio de la
PBJ, la cuantificacin por nefelometra decadenas ligeras libres kappa y lambda
en muestras de orinas no concentradas, comparando dichos resultados con
losobtenidos mediante la tcnica de inmunofijacin en las mismas orinas pero
concentradas.
MATERIAL Y MTODOS
Material.
60 muestras de orina de 24 horas, seleccionadas aleatoriamente de entre todos
aquellos pacientes a los que se les habasolicitado un estudio de PBJ
Mtodos.
Determinacin por nefelometra (BN II, DadeBehring) de la concentracin
de CLL kappa y lambda en orinas sin concentrar.Se han empleado
anticuerpos anti-cadenas K y L libres (New ScientificCompany).
Estudio por inmunofijacin (Paragon, BeckmanCoulter) de dichas
orinas concentradas. Antisueros empleados: anti-Ig (G,A, M), anti-cadenas
K y L ligadas y anti-cadenas K y L libres (New ScientificCompany).

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GLOSARIO
1. Analito.- un analito es el componente (elemento, compuesto o ion) de
inters analtico de una muestra. Son especies qumicas cuya presencia o
concentracin se desea conocer. El analito es una especie qumica que
puede ser identificado y cuantificado, es decir, determinar su cantidad y
concentracin en un proceso de medicin qumica, constituye un tipo
particular de mensurando en la metrologa qumica.
2. Anticuerpo.- son glicoprotenas del tipo gamma globulina. Pueden
encontrarse de forma soluble en la sangre u otros fluidos corporales de los
vertebrados, disponiendo de una forma idntica que acta como receptor de
los linfocitos B y son empleados por el sistema inmunitario para identificar y
neutralizar elementos extraos tales como bacterias, virus o parsitos.
3. Antgeno.- La definicin moderna abarca todas las sustancias que pueden
ser reconocidas por el sistema inmune adaptativo, bien sean propias o
ajenas.

4. Coloide.- (Del gr. , cola2, y -oide). m. Qum. Dispersin de partculas o


macromolculas en un medio contino.
5. Detrimento.- Dao moral o material (dao)
6. Disertantes.- (Del ant. part. act. de disertar). adj. Que diserta.
7. Dispersante.- que se dispersa. Dispersar; Separar y diseminar lo que
estaba o sola estar reunido.
8. Efluentes.- (Del ant. part. act. de efluir). m. Lquido que procede de una
planta industrial.
9. Espectrofotmetro.- Un espectrofotmetro es un instrumento usado en la
anlisis qumico que sirve para medir, en funcin de la longitud de onda, la
relacin entre valores de una misma magnitud fotomtrica relativos a dos
haces de radiaciones y la concentracin o reacciones qumicas que se
miden en una muestra. Tambin es utilizado en los laboratorios de qumica
para la cuantificacin de sustancias y microorganismos.

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10. Fluctuaciones.- Diferencia entre el valor instantneo de una cantidad y su


valor normal.
11. Inmunopresipitacion (cromatina).- La estructura de la cromatina
desempea un papel fundamental en la funcin del ADN. Regula procesos
que se dan sobre la estructura nucleosomal como la transcripcin, la
replicacin y la recombinacin. Por lo tanto, determinar la distribucin de las
modificaciones especficas de las histonas y sus variantes, as como la de
otros componentes de la cromatina sobre en secuencias especficas del
ADN puede proporcionar informacin valiosa acerca de cmo funcionan
estas protenas (y sus modificaciones) dentro del contexto de la cromatina.
La Inmunoprecipitacin de Cromatina (ChIP) es un mtodo bioqumico
usado principalmente para determinar la localizacin en el genoma de
histonas modificadas y de otras protenas in vivo. Esta tcnica consiste en el
uso de un anticuerpo que reconozca la protena de inters no solamente en
disolucin sino tambin en la cromatina.
12. Incide.- Caer en un error, falta o delito.
Influir en un asunto o negocio o causar un efecto en l.
13. Metrologa.- es la ciencia e ingeniera de la medida, incluyendo el estudio,
mantenimiento y aplicacin del sistema de pesas y medidas.
14. Nefelometra.- La nefelometra es un procedimiento analtico que se basa
en la dispersin de la radiacin que atraviesan las partculas de materia.
Cuando la luz atraviesa un medio transparente en el que existe una
suspensin de partculas slidas, se dispersa en todas direcciones y como
consecuencia se observa turbia.
15. NTU.- El acrnimo NTU puede referirse a las siguientes acepciones:
NTU (o NephelometricTurbidityUnit), unidad de medicin para la turbidez.
16. Oscila (oscilar).- Moverse alternativamente de un lado para otro un cuerpo
que est colgado o apoyado en un solo punto.
17. Polucin.- (Del lat. polluto, -nis). f. Contaminacin intensa y daina del
agua o del aire, producida por los residuos de procesos industriales o
biolgicos.

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18. Quilomicrones.- Los quilomicrones son lipoprotenas sintetizadas en el


epitelio del intestino caracterizadas por poseer baja densidad (inferior a
0,94) y gran dimetro, entre 75 y 1.200 nm. Son grandes partculas esfricas
que recogen desde el intestino delgado los triglicridos, los fosfolpidos y el
colesterol ingeridos en la dieta llevndolos hacia los tejidos a travs del
sistema linftico. Estn compuestos en un 90% por triglicridos, 7% de
fosfolpidos, 1% colesterol, y un 2% de protenas especializadas, llamadas
apoprotenas.
19. Radiacin.- El fenmeno de la radiacin consiste en la propagacin de
energa en forma de ondas electromagnticas o partculas subatmicas a
travs del vaco o de un medio material.
20. Reumatide.- El factor reumatoide (FR) es una prueba que mide la presencia
y nivel de la IgM especfica contra las inmunoglobulinas IgG anormales,
producidas por los linfocitos de la membrana sinovial, de las articulaciones
de personas afectadas por la Artritis Reumatoide.
21. Soslayarse.- Poner una cosa ladeada, atravesada u oblicua para que pase
por un lugar estrecho

22. Roseta.- En botnica, una roseta es una disposicin circular de hojas en las
que todas se encuentran a la misma altura. Muchas plantas perennes
aparentemente caducifolias mantienen una roseta basal, es decir, ubicada a
ras de suelo, durante el invierno.
23. Transmitancia.- La transmitancia o transmitencia es una magnitud que
expresa la cantidad de energa que atraviesa un cuerpo en la unidad de
tiempo (potencia).
La transmitancia ptica que se define como la fraccin de luz incidente, a
una longitud de onda especificada, que pasa a travs de una muestra.
24. Tensoactivos.- Los tensoactivos o tensioactivos (tambin llamados
surfactantes) son sustancias que influyen por medio de la tensin
superficial en la superficie de contacto entre dos fases (p.ej., dos lquidos
insolubles uno en otro). Cuando se utilizan en la tecnologa domstica se
denominan como emulgentes o emulsionantes; esto es, sustancias que
permiten conseguir o mantener una emulsin.

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25. Turbidimetra.- La turbidimetra mide la reduccin de la transmisin de luz


debido a partculas de una suspensin y cuantifica la luz residual
transmitida.

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BIBLIOGRAFA.

http://es.scribd.com/doc/54885577/Turbidimetria-y-Nefelometria

BIOQUIMICA CLNICA Y PATOLOGA MOLECULAR, VOLUMEN I,


SEGUNDA EDICIN/ X. FUENTES ARDERIU, M. J. CASTIEIRAS
LACAMBRA, J. M. QUERALT COMPAO/ EDITORIAL REVERT, S. A.

http://books.google.com.mx/books?id=ZF9jSBZCghAC&pg=PA276&dq=tur
bidimetria&hl=es&sa=X&ei=QmF2T6LfAbDjsQKAdChBA&ved=0CDUQ6AEwAQ#v=onepage&q=turbidimetria&f=false

INTRODUCCIN AL ANLISIS INSTRUMENTAL/ L. HERNNDEZ, C.


GONZLEZ/ EDITORIAL ARIEL CIENCIA (2002).

ANLISIS DE LOS ALIMENTOS/ R. MATISSEK, F. M. SCHNEPEL, G.


STEINER/ EDITORIAL ACRIBIA, S. A.

http://videntequimico.blogspot.mx/2008/03/ensayo-de-turbidimetra.html.

http://www.xtec.cat/~gjimene2/llicencia/students/08turbi.html

http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003545.htm

http://www.efreekontrol.com/pdf/nsc/SEQC-02_VHebron_ES.pdf

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