UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN CRISTOBAL DE HUAMANGA

FACULTAD DE INGENIERIA QUIMICA Y METALURGIA

ESCUELA DE FORMACION PROFESIONAL EN INGENIERIA EN INDUSTRIAS
ALIMENTARIAS

INFORME Nº 06:
“DETERMINACION DE VITAMINAS DEL COMPLEJO B POR HPLC (Cromatografía liquida
de alta presión)”

ASIGNATURA : NUTRICION (AI- 346)

PROFESOR DE PRACTICA: ING. PANIAGUA SEGOVIA, Jesús
ALUMNO : YUPANQUI MISARAYME, Isaías
GRUPO DE PRÁCTICA : LUNES 2-5 pm
FECHA DE EJECUCION : 17-10-16
FECHA DE ENTREGA : 24-10-16

AYACUCHO-PERU
2016
 DETERMINACION DE VITAMINAS DEL COMPLEJO B POR HPLC:
I. INTRODUCCION:

Se conoce que en los alimentos se encuentran las fuentes tradicionales de

obtención de vitaminas, sin embargo los investigadores continuamente buscan
otras fuentes no convencionales para obtener estos componentes
indispensables en la dieta. Las algas son una importante fuente de vitaminas,
aunque en la actualidad son los países asiáticos los que mayormente la
incorporan en la alimentación (1-3).
En el presente trabajo, se estudian las vitaminas del grupo B presentes en la
Arthrospira máxima cultivada en Cuba con el objetivo de evaluar su potencial
como fuente de suministro de estos nutrimentos. Este trabajo parte de estudios
desarrollados en otros países con semejantes propósitos (4).
La Arthrospira es conocida por su elevado contenido intracelular de proteínas.
También se han reportado importantes niveles de pigmentos y lípidos así como
ácidos grasos. La pared celular de esta alga es frágil lo cual resulta favorable al
evaluarla como posible fuente de vitaminas (5,6).

OBJETIVOS:

 Determinar en forma cualitativa las vitaminas del complejo B de una

muestra alimenticia.
 Determinar las partes del HPLC para la determinación de las vitaminas
 estudiar cómo funcionan los equipos de HPLC y los métodos de
extracción.

II. FUNDAMENTO TEORICO:

HPLC:
PARTES HPLC:
DETERMINACION DE VITAMINAS CON HPLC:
DETERMINACION DE VITAMINA B1 CON HPLC:

La Association of Official Analytical Chemist (7) ha recomendado la

determinación de vitaminas del complejo B mediante métodos microbiológicos,
espectrofotométricos y fluorométricos: estas técnicas también han sido
sugeridas para la cuantificación de vitaminas en la Spirulina platensis (1-3). La
cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) ha sido la principal vía de
análisis de las mezclas de vitaminas (8-10) y más recientemente, la
electroforesis capilar ha sido empleada para llevar a cabo la separación de
mezclas de vitaminas (11-14).
Los detectores flluorométricos y espectrofotométricos acoplados a HPLC han
sido empleados para el análisis de las vitaminas B1, B2, B6, B12 y la
nicotinamida tanto en preparaciones farmacéuticas como en fuentes naturales;
la cromatografía de fase reversa ha sido muy utilizada en el estudio de estos
compuestos (8, 10, 15). Para mejorar los resultados del análisis cromatográfico
se ha incorporado la utilización de pares iónicos (16,17).
La determinación simultánea de vitaminas constituye una vía muy favorable
para el análisis, aplicable en diferentes fuentes naturales. La complejidad de las
matrices naturales, en particular las algas, hace necesario el empleo de
procedimientos de purificación seguidos de lavados exhaustivos para
garantizar una adecuada recuperación de las vitaminas (15, 18, 19). De esta
forma, se encuentran reportes en los cuales se aplica el intercambio iónico, así
como tratamientos químicos y enzimáticos unidos a extracción en fase sólida
para llevar a cabo la preparación de las muestras.
Procedimientos de extracción y purificación de tiamina, riboflavina, piridoxina,
cianocobalamina, nicotinamina y ácido nicotínico en Arthrospira máxima. La
identificación y cuantificación de las vitaminas mediante HPLC es aplicada
después de aislar y purificar los factores vitamínicos.
El equipo de HPLC se usa en la industria farmacéutica, industria bioquímica,
ambiental; para aspectos forenses, toxicológicos, aspecto industrial (en la
síntesis de productos), higiene alimentario.
La HPLC, presenta una de las herramientas más empleadas en el laboratorio
analítico moderno.
La cromatografía es un método, usado principalmente para la separación de los
componentes de una muestra, en la cual los componentes se distribuyen en
dos fases.
Las muestras no necesitan ser vaporizadas para su análisis.
Cualquier sustancia puede ser potencialmente analizada por esta técnica.

III. MATERIALES Y METODOS:

MATERIALES Y REACTIVOS:
 HPLC, detector PDA.
 Ácido fórmico.
 Acetonitrilo y otros.
 Equipo a analizar HPLC (Cromatografía de alta presión)
 sus partes del equipo de HPLC.

PROCEDIMIENTO:

 Encender el equipo (bomba, automuestreador y detector del

HPLC)
 Asimismo el software propio del equipo.
 Configurar las condiciones de trabajo del equipo (fase móvil,
gradiente, etc) – en el informe copiar de la copia que se le
proporciono.
 colocar la columna cromatografica correspondiente.
 colocar la muestra y dar la orden al software para el trabajo
correspondiente.
 esperar el tiempo programado.
 comparar los picos obtenidos con la copia proporcionada.

IV. RESULTADOS:
 Detector PDA (UV)
Automostreador

Detector índice de refracción

Porta columnas
cromatograficas

Bomba cuaternaria
Detector fluorescencia

Partes del equipo HPLC:

 Solventes.- acetonitrilo, metanol, 2-propanol, diclorometileno, hexanos

(2-metilpentanos, etil acetato, acetato de amonio, ácido acético, éter de
etilo dietil éter, isooctano.
 Bomba.-la bomba puede llegar a presiones altas de 400 bares
 Columna cromatografícas.- Provista de columna cambiable para
retener por adsorción las impurezas de forma irreversible. Las fritas de
titanio distribuyen el líquido de forma universal por todo el diámetro de la
columna.
 Las porta columnas cromatograficas que separan los componentes de
acuerdo al tamaño de 5, 10,15 cm de largo, para determinar las
vitaminas y otras sustancias.
 Detector fluorescencia.- que puede cambiar de color
 detector de índice de refracción.- que se emplea para los azucares.
 detector PDA.- Para la determinación de alcoholes.
 Analizador de datos (integrador).-
EN LA DETERMINACION DE LAS VITAMINAS:
Hidrosolubles. - B1, B2, B3, B5, B6, B8, B9, B12
Liposolubles.- A, D, E, K
EN LA OBTENCIÓN DE LAS GRÁFICAS DE VITAMINAS:
Se obtiene por el tiempo vs la concentración del solvente
USOS O APLICACIONES:
 Actualmente se utiliza en varias partes del mundo con distintos
propósitos:
 La producción de aceites comestibles.
 Forraje.
 Biodiesel.
 En la industria alimentaria como aceite para elaboración de frituras.
 En cosmética como emoliente en cremas y base de jabones.
 En la industria farceutica, para la determinación de esteroides,
antibióticos de todo tipo, analgésicos
 En la bioquímica, para la determinación de ácidos nucleicos,
aminoácidos, cerámicas.
 en ambiental, para la determinación de agua, explosivos en agua,
insecticidas en aguas, pesticidas, contaminantes de suelos de agua
 en la industria alimentaria, para la determinación de toxinas,
micotoxina en leche, antocianinas, vitaminas solubles, azucares,
ácidos orgánicos en vinos, vitaminas del complejo B, ácido linoleico,
ácidos grasos esenciales, etc.
EN CUANTO A LA GRAFICA:
se pudo determinar que la gráfica esta en relación de concentración vs el
tiempo; esto depende del tipo de vitamina, para su variación en cuanto al
tiempo y el pico o concentración; que tienen cada vitamina.

TIPOS DE HPLC:
 Fase directa: separa compuestos en base a su polaridad
 Fase estacionaria polar
 Fase móvil de baja polaridad
 el compuesto de interés a analizar es muy polar.
 Fase reversa:
 Fase estacionaria de polaridad baja.
 Fase móvil de polaridad alta.
 El compuesto de interés a analizar es apolar

V. DISCUSIONES:

 EL RUIDO.-Cualquier perturbación en la señal del detector que no esté

relacionada con el pico de la muestra es ruido del detector, el cual puede
ser causado por condiciones experimentales como los cambios de
temperatura, contaminación del gas acarreador, sangrado de columna,
etc.
 SENSIBILIDAD.- Definido como el cambio en la señal del detector con
un cambio en la masa o en la concentración del soluto eluido, el cual
responde a la masa de la muestra que alcanza el detector en una unidad
de tiempo (e.g., ng/s) y detectores sensibles a la concentración el cual
proporciona una salida directamente proporcional a la concentración de
la muestra en la fase móvil e.g.; ng/ml)

VI. CONCLUSIONES:
  se determinó las partes del equipo de HPLC.
 También se determinó los usos en las diferentes áreas de
aplicación.
 se estudió el funcionamiento del equipo de HPLC, sus
métodos de extracción.

VII. BIBLIOGRAFIA:

 FERNÁNDEZ-CÁRDENAS T, GONZÁLEZ-SAN MIGUEL H Y

TRAVIESO. Instituto de Farmacia y Alimentos. Universidad de La
Habana. San Lázaro y L.CP 10400. Ciudad de La Habana. Cuba.
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