CRITERIOS CLSI EN LA

PREPARACIÓN DEL FROTÍS DE

SANGRE
„ CONTEO DIFERENCIAL DE
LEUCOCITOS
„ Visual
„ Automatizado
„ Cuando mayor sea el número de
células contadas, mayor es la
presición.
„ En 100 células: 5% y 10% de
monocitos. Al azar
„ En 500 células: 5% y 10% de
monocitos. Existe diferencia
significativa, es real y no al azar
 RECOLECCIÓN DE LA
MUESTRA
„ K3EDTA (1.5 +/- 0.15 mg por mL de
sangre
„ Condiciones de la muestra: coagulos,
hemólisis, lipemia
„ Alteraciones degenarativas:
„ El grado de alteración varia según las
células e individuos.
„ En media hora el núcleo de los Neutrofilos
puede empezar a hincharse
„ Vacuolas citoplasmaticas en monocitos y
neutrófilos
„ Lobulación nuclear en mononucleares:
Células de Reider
„ Perdida de citoplasma.
PREPARACIÓN DEL FROTÌS DE
SANGRE

„ Importante en la evaluación
hematologica
„ La fiabilidad de la información
obtenida depende de lo bien hechas
y teñidas que estan las extensiones
„ Dentro de las 4 horas de recolección
„ Homogenizar: 20 veces
„ Preparar 3 laminas de cada muestra
„ Seco, libre de polvo

„ 5 x 75 mm ; 0.8 a 1.2 mm

„ Aproximadamente 0.05 mL de
muestra
PREPARACIÓN DEL FROTÌS DE
SANGRE
„ Metodo en cuña: Angulo
de 45 grados
„ Lamina extensora, borde
liso
„ Cuanto mas rápido se
seca al aire mejor,
secado lento da lugar a
artefactos.
„ Colororear dentro de la
hora de realizada la
extension o fijar con
metanol.
 REQUISITOS PARA UN
EXTENDIDO SANGUÍNEO
„ Mínimo 2.5 cm de
longitud
„ Debe llegar antes de
1 cm del final de la
lamina
„ Transición gradual del
espesor
„ Morfología acepatable
 REQUISITOS PARA UN
EXTENDIDO SANGUINEO
ERRORES
„ Artefactos producido
por la técnica o por la
muestra (excluir:
anemia, PTV, MM,
autoaglutinacion)
 Coloración de Romanowsky

„ Colorantes básicos (azul de metileno) y

ácidos (eosina)
„ La mayoría de las tinciones de
Romanowsky se disuelven en alcohol
metílico y combinan la fijación con la
tinción: Giemsa, Wright, etc.
 Coloración de Romanowsky
„ Ph 6.0 a 7.0
„ Colorantes básicos.
Basofilos (núcleo)
„ Colorantes ácidos.
Acidófilas o eosinófilas.
„ Combinación.
Neutrofilas.
 Coloración de Romanowsky
„ Tinción excesivamente azulada:
„ Gruesas
„ Tiempo prolongado
„ Lavado inadecuado
„ Alcalinidad alta
„ GR, de color azul o verde
„ Cromatina de color azul oscuro o negro
„ Gránulos de los neutrofilos fuertemente teñido, grandes y
prominentes.
„ Eosinófilos, granulos oscuros.
 Coloración de Romanowsky
„ Tinción excesivamente rosada:
„ Tinción insuficiente
„ Tiempo de lavado prolongado
„ Acidez alta del colorante o del
tampón
„ GR, de color rojo brillante o naranja
„ Cromatina de color azul palida
„ Gránulos de los eosinófilos rojo
brillante fuertemente teñido, grandes y
prominentes.
 Coloración de Romanowsky
„ Precipitado:

„ Portaobjetos sucios
„ Filtración inadecuada
„ Polvo
 PROTOCOLO PARA LA
OBSERVACIÓN DEL FROTIS
SANGUÍNEO
„ Primero: Lente de inmersión de
10x y 40x:
„ Distribución de las celulas
„ Lente de inmersión de 100x,
presencia de granulaciones
toxicas, Cuerpos de Howell
Jolly, Anillos de Cabott, etc
„ Se debe realizar un conteo de
300 leucocitos
„ Menos de 2 a 3 Leuc. a 100x en
pacientes normales.