EXTENSIONES O FROTIS

SANGUÍNEO
 Consiste en recubrir parcialmente un porta con
una gota de sangre, de tal manera que las células
de ésta se dispongan formando una sola capa de
ellas.
UTILIDAD DE LAS EXTENSIONES
 El estudio de las extensiones sanguíneas es
esencial para:
 El análisis morfológico de las células hemáticas
 Realización del recuento diferencial leucocitario
 Distinción de una auténtica trombopenia de una
pseudotrombopenia producida por agregados
plaquetarios.
 Comprobación de las alarmas que proporcionan los
autoanalizadores hematológicos
PARTES DE UNA EXTENSIÓN

 CABEZA
 Es la zona inicial de la extensión.
 Es la región más gruesa.
 En ella se encuentra una mayor proporción de
linfocitos, y los hematíes forman aglomerados (pilas
de monedas).
PARTES DE UNA EXTENSIÓN

 CUERPO
 Es la zona media del frotis.
 Su espesor es el apropiado.
 En ella existe una adecuada proporción entre los
distintos tipos de leucocitos.
 Contiene la "zona ideal" de observación, que
corresponde a la porción que limita con la cola
PARTES DE UNA EXTENSIÓN
 COLA.
 Es la zona final de la extensión.
 Suele tener un aspecto redondeado.
 Es la región más fina.
 En ella se encuentra una mayor proporción de leucocitos
grandes (granulocitos y monocitos), y además. los
hematíes están deformados y presentan una tonalidad
uniforme.
 En su porción terminal suelen ser más abundantes las
plaquetas, sobre todo si son grandes.
 BORDES.
 Contienen una mayor proporción de leucocitos grandes.
 Si están deshilachados, en ellos las células son difíciles
de reconocer por estar deformadas o destruidas
PARTES DE UNA EXTENSIÓN
 COLA.
CARACTERÍSTICAS DE UNA
BUENA EXTENSIÓN.

 La cabeza ha de estar cerca de uno de los

extremos del porta.
 La cola debe estar cercana al otro extremo del
porta, pero sin llegar a él.
 El borde de la cola tiene que estar finamente
deshilachado. Ese fino deshilachamiento recibe el
nombre de "barbas".
 Toda la extensión ha de ser fina y homogénea.
DEFECTOS DE UNA EXTENSIÓN
 Excesiva longitud y escaso grosor o escasa
longitud y excesivo grosor:
 Inadecuado tamaño de la gota de sangre
 Un error en la velocidad
 Un fallo en el ángulo de extensión de la misma.

 Presencia de escalones o estrías

 Falta de uniformidad en el deslizamiento de la gota.
 Existencia de abundantes zonas
redondeadas que carecen de sangre
 Presencia de restos de grasa o de suciedad en el porta
 Extremo final excesivamente dentado.
REALIZACIÓN DE UNA
EXTENSIÓN SANGUÍNEA
TINCIONES
HEMATOLÓGICAS
 Son un conjunto de procesos que conducen a la
coloración de las estructuras que componen las
células sanguíneas
 Aumentar el contraste entre esas estructuras y el
medio que las rodea
 Permite que las células sean visualizadas
microscópicamente con mayor facilidad
TIPOS DE TINCIONES
Pueden clasificarse :
 Atendiendo al nivel de vitalidad de las células
que se pretende colorear
 Vitales
 No vitales

 Atendiendo la frecuencia con la que se hacen

dividen en:
 Tinciones tradicionales
 Tinciones especiales
TINCIONES VITALES Y NO
VITALES
 Las tinciones vitales y supravitales se practican
sobre células que están vivas.
 Las Tinciones Vitales
 La introducción de un colorante en la circulación de
un organismo vivo.
 El verde Jano
 El azul de metileno.

 Las Tinciones Supravitales

 Practicada en Células aislados del organismo del que
proceden
 Las Tinciones no Vitales:
 Se realizan sobre células muertas
TINCIONES TRADICIONALES Y
ESPECIALES.
 Colorantes que derivan de la Anilina. Estos
colorantes se reúnen en 4 grupos:
 Colorantes ácidos:
 Tienen afinidad por las estructuras alcalinas de las
células
 El principal de ellos es la eosina.

 Colorantes básicos:
 Tienen una especial afinidad por las estructuras
ácidas de las células,
 Uno de ellos es el Azul de Metileno.
 Colorantes neutros:
 son sales de un ácido y de una base coloreados.
 Tiñen el núcleo de un color y el citoplasma de otro.
 Uno de ellos es el eosinato de azul de metileno.

 Colorantes indiferentes:
 Son los que no tienen afinidad por estructuras ácidas
o básicas.
 Son insolubles en el agua
 Tiñen a aquellas sustancias que tienen un poder de
disolución superior al del líquido empleado para
preparar la solución colorante.
 Uno de ellos es el Sudán III
También
 Hay combinaciones de colorantes que dan lugar a
tinciones Polícromas.

 Panóptica cuando se utilizan sucesivamente

sustancias colorantes neutras
 Pancrómica cuando se aplican todas las
sustancias colorantes neutras juntas
ROMANOWSKY:
 Fue el primero que tuvo la idea de realizar una
de estas combinaciones.
 Constan :

 Colorante ácido (eosina)

 Colorantes básicos (tiacinas).

 Las Tiacinas son el azul de metileno y sus

derivados obtenidos por Desmetilación
Oxidatiya (colorantes tipo azur).
 Las tinciones realizadas con colorantes de tipo
Romanowsky, que más frecuentemente se
emplean en el diagnóstico hematológico
 Wright
 Giemsa
DENOMINACIÓN DE LAS
ESTRUCTURAS COLOREADAS.
 Atendiendo a sus apetencias tintoriales. De las
células
 Estructuras acidófilas u oxifilas:
 Fijan colorantes de naturaleza ácida
 Si captan la eosina, se dice que son eosinófilas
 Adquieren un color rosado.

 Estructuras basófllas
 Fijan colorantes de naturaleza alcalina
 Adquieren un color azulado
CAUSAS DE ERROR EN LAS
TINCIONES REALIZADAS A
FROTIS SANGUÍNEOS
 Si la tinción es demasiado Rosa
 Un pH bajo del colorante.
 Un tiempo de coloración insuficiente.
 Un lavado excesivamente prolongado

 Si la tinción es demasiado Azul

 Un grosor excesivo de la extensión
 Un pH alto del colorante.
 Una coloración excesivamente prolongada.
 Un lavado insuficiente.
 Si tras la tinción aparecen artefactos o/y
precipitados en la extensión:
 Un empleo de portaobjetos sucios.
 Una falta de filtración del colorante.
 Una coloración excesivamente prolongada.
 Un secado del colorante durante la tinción.
 Un lavado insuficiente
TINCIONES
TRADICIONALES
TINCIÓN GIEMSA
 Es una tinción diferencial:
 Utilizan azul de metileno y sus productos de
oxidación (azur A, azur B y azur C) como
colorantes básicos,
 Utiliza eosina como colorante ácido

 Requiere que la muestra sea fijada previamente

con alcohol metilico
TINCIÓN DE WRIGHT.
Es una solución de:
 Eosina

 Una mezcla de:

 Azul de metileno (del 50 al 75%)
 Azur B (del 10 al 25%)

 Alcohol Metílico.
 No requiere que la muestra sea fijada
previamente con alcohol metilico
TINCIÓN PANÓPTICO RÁPIDO
 Este método de tinción diferencial es un sistema
que aúna:
 La policromía
 la calidad que proporcionan los métodos clásicos
(Giemsa y Wright)
 Rapidez de ejecución (15 segundos solamente).

 Es un método de inmersión
 Usa:
 Solución nº 1: Solución alcohólica de triarilmetano.
 Solución nº 2: Solución tamponada de xanteno.
 Solución nº 3: Solución tamponada de tiazina.
 Agua destilada.

 Las coloraciones obtenidas en las células

sanguíneas son similares a las de la tinción de
Wright y Giemsa.
NOTA:
 Según la proporción de azul de metileno y de
eosina que compongan el colorante tendremos
distintos métodos de tinción.
 Entre ellos, los más conocidos son:
 El de Giemsa,
 El de Wright,
 El de Leishman
 El pan óptico de Pappenheim
TINCIONES ESPECIALES
TINCIONES ESPECIALES
 Peroxidaza
 Sudan Black B

 Esteraza Especifica

 Esteraza Inespecifica

 Fosfataza Alcalina Leucocitaria

 Fosfataza Acida

 Acido Periodico de Schiff

 Perls o Azul de Prusia

PEROXIDAZA
 Neutrofilos y eosinofilos (mieloperoxidaza)
 Monocitos apenas positivos

 Lifocitos y hematies nucleados negativos

 Se usa para diferenciar las LL de LM

 La enzima es sensible a la luz el calor y el

metanol
 La peroxidasa no reacciona en cortes parafinados
SUDAN BLACK B
 Detecta los fosfolopidos y los lipidos
intracelulares
 Neutrofilos y eosinofilos positivo

 Monocitos apenas positivos

 Lifocitos negativos

 Se usa para diferenciar las LL de LM

 Se usa e frotis de sangre periferica y medula osea

frescos
 La peroxidasa no reacciona en cortes parafinados
ESTERASA ESPECIFICA
 Permite identifica los granulocitos
 Los monocitos y linfocitos son negativo

 Reacciona bien en cortes parafinados

 Se usa para diferenciar entre el sarcoma

granulocitico y el linfoma de celulas grandes
(histiocitos) de aspecto similar.
 Tmb identifica en hematopoyesis extramedular

 Identificacion de mastocitos
ESTERASA INESPECIFICA
 Identifica monocitos
 Negativo en neutrofilos y eosinofilos

 Histiocitos, macrofagos, megacariocitos: positivos

 Algunos carcinomas de celulas epiteliales son

positivos
 Se usa para identificar monocitos en LM y de
histiocitos tisulares
 No reacciona en cortes parafinados

 Tendria valos en leucemias megacariociticas.

FOSFATASA ALCALINA LEUCOCITARIA
 Tiene actividad en los tejidos hematopoyeticos, en
el citoplasma de los neutrofilos, los osteoblastos,
las celulas endoteliales vasculares, y algunos
linfocitos.
 Presente en patologias como:
 En los neutrofilos de pacientes con LMC
 Hemoglobiniria paroxistica nocturna
 Purpura trombocitopenica idiopatica
 Mononucleosis infeccionsa
 La sarcoidiosis
 La anemia pernisiosa
 Sindrome mielodisplasico
FOSFATASA ACIDA
 Se encuentra en todas las células hematopoyeticas
 Mayor actividad en los macrofago y osteoclastos
 Identifica leucemia de células vellosas
 Acido Periodico de Schiff
 Detecta glucógeno intracelular
 La mayoría de las células hematopoyeticas son PAS
positivas
 No sirve para detectar LLA de la LMA
 Podría ser útil para detectar Eritroleucemia
 Perls o Azul de Prusia
 El hierro celular se dispone en forma de ferritina y
hemosiderina
 Permite reconocer el hierro en los hematíes nucleados
(Sideroblastos), los histiocitos y los cuerpos de
Pappenheimer eritrocitario.
 Se aplica a los cortes y extendidos de medula ósea
OTRAS TINCIONES

 Azul de toluidina

 Verde metilo-pironina

 Desoxinucleotidil tranferaza terminal.

ESO ES TODO