LABORATORIO CLINICO

PRACTICAS Nº 01
BIOSEGURIDAD

Conjunto de medidas preventivas de sentido común para proteger la salud y la seguridad del personal
que trabaja en salud.
Complementariamente, normas contra riesgos producidos por agentes físicos, químicos y mecánicos.

AGENTES DE RIESGO

FISICOS Y MECANICOS: QUIMICOS:

BIOLOGICOS:
Temperaturas extremas, Corrosivos.
Ingestión.
radiaciones, Tóxicos.
Inhalación
Contactos eléctricos o Carcinogénicos.
Inoculación a través de piel o conexiones defectuosas Inflamables.
mucosas.
Material de vidrio roto. Explosivos.

NORMAS GENERALES.

ASEPSIA: procedimientos que disminuyen al mínimo la posibilidad de contaminación microbiana.

LIMPIEZA
Proceso físico por el cual se elimina de los objetos en uso, las materias orgánicas y otros elementos sucios,
mediante el lavado con agua con o sin detergente, el objetivo es eliminarlos por arrastre.
La limpieza es indispensable para la preparación del material antes de someterlo a desinfección o
esterilización

ESTERILIZACION
Procedimientos que eliminan toda forma de vida.

DESINFECCION
Proceso intermedio entre limpieza y esterilización. Se efectúa sobre objetos inanimados.
Se efectúa principalmente por agentes químicos (líquidos), pasteurización a 75ºC y luz Ultravioleta.

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MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD:

Del ambiente.
 Ventilación e iluminación adecuados
 servicios básicos funcionales
 Cámaras de bioseguridad, lámparas ultravioleta , equipos de protección al personal
 Las paredes y pisos deben ser lisos, ello facilita la limpieza.
 Determinación de áreas contaminadas
 Mesas de trabajo material que permita una adecuada limpieza
 asignación de materiales a áreas contaminadas
 Los pisos limpios todos los días con soluciones desinfectantes, al final de la jornada de trabajo.
 No se debe barrer el piso en seco ni encerarlo.
 Por el sistema de desagüe sólo deben eliminarse los agentes biológicos o químicos previamente
descontaminados
 Colocación de extinguidores
 Evitar presencia de insectos o roedores. Fumigación
 Se consideran áreas libres de tránsito pasadizos, SS.HH, área de administración
 zonas de aislamiento o contaminadas deben ser debidamente rotuladas.

Del vestido.
 Mandiles limpios de mangas largas.
 No circular con mandil en áreas limpias
 Zonas restringidas uso de mandilones y equipos especiales
 Cabello recogido o corto
 Uso de joya y adornos
 Zapatos deben cubrir completamente los pies

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De las muestras y su procesamiento.

 Toda muestra debe ser manejada como altamente contagiosa
 Usar mascarillas y guantes
 Nunca tomar muestras usando sólo aguja. Eliminación de agujas correcta
 No comer, beber, fumar, guardar alimentos, ni aplicarse cosméticos
 Las manos deben lavarse con abundante agua y jabón, cada vez que se interrumpa el trabajo.
Toallas descartables

ESTERILIZACIÓN

Es la destrucción completa o la separación total de los microorganismos patógenos y saprófitos que se

encuentran en el interior o en la superficie de objetos substancias.

MÉTODOS FÍSICOS:

1. Esterilización por calor:

 Esterilización por calor seco:

 Esterilización por la llama directa: Produce la carbonización de los microorganismos y sus esporas.
 Esterilización por aire caliente: El calor actúa como aire caliente a la temperatura de 165-170º C por
el tiempo de media hora. Sirve para esterilizar objetos resistentes y sólidos como cristalería,
porcelana, instrumentos, etc.
 Esterilización por calor húmedo:
 Esterilización por ebullición: Utilizando agua en ebullición. No elimina las esporas. Se aplica en la
esterilización limitada de jeringas.
 Esterilización por vapor fluente: (Tindalización). Consiste en un calentamiento por vapor de agua
discontinuo a 80-100ºC, y refrigerando después, por tres veces con intervalos de 24 horas. Elimina
gérmenes y esporas. Sirve para esterilizar medios que se descomponen por el calor a más de80-
100ºC como: carbohidratos, gelatina, leche, suero, etc. Suprime la hidrólisis por calentamiento.

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 Esterilización por vapor de agua a presión: (Autoclave). Se basa en que el vapor de agua a presión
es más caliente que el agua en ebullición o el vapor libre. Cuanta más alta es la presión del vapor,
mayor es la temperatura resultante. El vapor penetra por osmosis provocando la coagulación del
protoplasma en las bacterias y esporas.

Las condiciones de esterilización son: 121ºC a 15 libras de presión por pulgada cuadrada por el
tiempo de 15 minutos, utilizando el aparato llamado “Autoclave” cuyo esquema se encuentra a
continuación. En él se esteriliza objetos y sustancias que resisten temperaturas mayores a 100ºC,
tales como: Medios de cultivo en general, solución salina, agua destilada. Sirve también para
esterilizar material desechable como: cultivos usados, medios contaminados, etc.

2. Esterilización por filtración

3. Esterilización por radiación: Los rayos ultravioleta del espectro de una longitud de onda comprendida
entre 200 y 254 nm. poseen un salto poder germicida.

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4. Esterilización por centrifugación: Este método separa los gérmenes del líquido en que se encuentran
suspendidos.

MÉTODOS QUÍMICOS:

Esterilización por agentes químicos: La muerte de los gérmenes se consigue por substancias químicas
que actúan coagulando el protoplasma o interfiriendo el metabolismo bacteriano.

Algunos desinfectantes y antisépticos de mayor uso: desde el punto de vista práctico se les agrupa en:
a. Halógenos y compuestos halogenados: F, Cl, Br, I.
b. Sales de metales pesados: Nitrato de plata, bicloruro de mercurio, sulfato de cobre.
c. Fenol y derivados.
d. Alcoholes
e. Colorantes: Violeta de genciana, azul de metileno, verde de malaquita.
f. Compuestos amónicos cuaternarios.
g. Gases microbicidas.

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MATERIAL Y EQUIPOS DE LABORATORIO

Autoclave: equipo que sirve para esterilizar materiales y medios de cultivo utilizados en laboratorio, cuyo
fundamento es el vapor de agua a presión.

Centrífugas:

Sirven para obtener sedimentos, utilizando la gravedad como fundamento, de este modo las partículas
que hay en lo líquidos se colocan en el fondo de los tubos de centrifugación.

Incubadora:
Se utiliza para incubar medios de cultivo que contienen siembras con bacterias y otros microorganismos
cuya temperatura se regula entre 25ºC-100ºC

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Potenciómetro:
Se usa para medir el pH de las soluciones y/o medios de cultivo en bacteriología.

Espectrofotómetro:
Sirven para medir la intensidad del color de un reactivo químico en solución coloreada, que dan lugar a
productos finales para determinar la concentración de dicha sustancia.

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Analizador bioquímico semiautomático.

- Lector de Elisa para inmunología.
- Destilador.
- Campana de flujo laminar.
- Campana Gaspack
- Baño maría.
- Incubadora.
- Centrífuga para micro hematocrito.
- Coaguló metro.
- Contador hematológico automático
- Pipetas automáticas.
o Rango fijo
o Rango variable.

Material de vidrio:
- Pipetas de vidrio graduadas de 1ml, 2 ml, 5 ml, 10 ml.
o Terminal
o Proximal
- Placas Petri 9.5 mm diámetro
- Láminas porta objetos.
- Láminas cubre objetos.
- Probetas de 50ml, 100 ml, 500 ml y 1000 ml.
- Tubos de ensayo pequeños 7.5 x 1 mm.
- Tubos de ensayo grandes 10 x 1.2 mm.
- Fiolas
- Matraz.

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- Erlenmeyer.
- Vaso de precipitación.
- Vaguetas de vidrio.
- Mortero.
- Frascos de boca ancha.
- Mechero de bunsen.
- Frascos goteros con tapa esmerilada
- Pipetas pasteur
- Cámara de Neubauer
- Cubre Cámara de Neubauer

MICROSCOPIO:
Instrumento destinado a ampliar las imágenes de objetos muy pequeños (Galileo Galiley) (Zacarias
Jansen) (Anthony Van Leeuwenhoek)

Clasificación de los Microscopios:

Según las lentes utilizadas:
- Microscopios simples
- Microscopios compuestos

Según la fuente de energía utilizada

- Microscopios de luz o microscopios ópticos.
o Microscopio de campo luminoso.
o Microscopio de campo oscuro.
o Microscopio de contraste de fase.
o Microscopio de luz polarizada.
o Microscopio de interferencia.
o Microscopio de contraste diferencial
interferencial.
o Microscopio de fluorescencia.
- Microscopios electrónicos:
o Microscopio electrónico de transmisión.
o Microscopio electrónico de barrido.

Partes de un microscopio óptico:

- Parte mecánica:
o Pié: Sirve de base al microscopio.
o Tubo: Soporta los oculares y los objetivos.
o Porta oculares: Es el extremo superior del tubo
o Revólver porta-objetivos: Es el extremo inferior del tubo donde están colocados los
objetivos.

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o Brazo: une el tubo con el pie, parte por la que se debe coger el microscopio para
transportarlo.
o Platina: Placa horizontal que sale del brazo y sirve de soporte a la preparación, tienen un
orificio que permite el paso de la luz procedente del condensador.
o Carro: Dispositivo con el que se puede desplazar la preparación a lo largo y ancho de la
platina.
o
- Sistema de iluminación:
Actualmente la fuente de iluminación es una bombilla incorporada en el microscopio,
generalmente en su pie por donde lo rayos de luz se orientan hacia arriba mediante un espejo
pasan a través del condensador y llegan al objetivo.
o Interruptor de encendido y apagado.
o Lámpara de luz visible.
o Espejo que dirige la luz hacia el condensador.
o Regulador de la intensidad luminosa.

- Parte Óptica:
o Condensador: cuya función es condensar a luz procedente de una fuente de iluminación.
o Diafragma: dispositivo que regula la anchura del haz de rayos que llega al objetivo.
o Objetivos: Tubo que contienen en su interior un sistema de lentes de diferente aumento.
Los microscopios tienen 3 o 4 objetivos colocados en el interior del tubo en el revólver.
o Tornillo macrométrico: sirve para el avance rápido.
o Tornillo micrométrico Sirve para el ajuste fino; permite enfocar con precisión.
o Oculares: Es la parte del microscopio a la que se acercan los ojos para la observación; un
microscopio tienen uno o varios oculares (monocular, binocular o tri ocular)

TOMA DE MUESTRAS DE SANGRE, ORINA Y OTROS

DISPOSICIONES GENERALES

· Ayuno: Para ciertos estudios que requieren muestras sanguíneas, se deben conservar condiciones de
ayuno. Dicho tiempo puede variar entre 8 horas a 12 horas.

· La sangre debe recolectarse en tubos de vidrio o plástico limpios. La contaminación por bacterias
podría acarrear la metabolización de ciertos analitos (ej. glucosa), evitando movimientos bruscos y
posterior hemólisis.

· Luego de la recolección de la sangre, debe permitirse que se coagule antes de la centrifugación y

separación del suero. Para la totalidad de los procedimientos descritos en este manual, bastará con la
utilización de este componente sanguíneo. Sin embargo, para el manejo de muestras para ensayo de
Hemoglobina glicosilada y en la eventualidad de usarse como alternativa el plasma, se recomienda
someter los tubos a maniobras de inversión para lograr el mezclado correspondiente con el

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anticoagulante, evitando la formación de coágulos.

ANTICOAGULANTES PARA RECOLECCION DE MUESTRAS

Los anticoagulantes son sustancias que previenen la formación de coágulos. No siendo necesarios en el
trabajo bioquímico, con excepción de las muestras para ensayos de Hemoglobina glicosilada.

EDTA (Etilen Diamino Tetra Acetato): Usado para estudios elulares, es factible su uso en el trabajo
bioquímico de algunos componentes (ej. glucosa).

Citrato de Sodio: Usado en concentraciones al 3.8%, generalmente para estudios de coagulación.

Heparina: Se utiliza en presentaciones con concentraciones de litio y sodio. Para estudios bioquímicos es
preferible el uso de heparina con litio.

Oxalatos: De menor uso en la actualidad, se restringe a los ensayos de glucosa.

Códigos de colores internacionales:

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Material para Toma de Muestras

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GUIAS BASICAS DE ASEPSIA

 Utilizar siempre guantes y mandil para la

obtención de muestras. Los guantes deben
desecharse y ser cambiados por un nuevo par
después de atender a cada paciente.
 Lavarse prolijamente las manos antes y después
de la atención de un paciente.
 Todas las agujas, jeringas y de preferencia tubos
de recolección deben ser estériles.
 Desinfectar adecuadamente el área de punción
con alcohol 70° u otras soluciones antisépticas
como el yodo.
 No tocar el sitio de punción luego de la
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desinfección.

REVISION DE PETITORIOS U ORDENES MÉDICAS

Examine con cuidado el petitorio u orden, asegurándose haber entendido la solicitud. En caso contrario,
pregunte a su superior o intente comunicarse con el médico tratante.

LOS TIEMPOS EN LA TOMA DE MUESTRAS

Tómese en cuenta las siguientes indicaciones en ambos tipos de tiempos de toma de muestras:

· Las condiciones de preparación del paciente deben ser escrupulosamente respetadas.

· Preguntar por la ingesta de medicamentos; algunos de ellos interfieren en las pruebas.

· En toma de muestras de tiempo múltiple.

. La persona que inicialmente dio las indicaciones al paciente y recolectó la primera muestra, sea la
responsable de respetar los horarios indicados.

RECONOCIMIENTO DEL PACIENTE

Hable con el paciente para averiguar sus nombres y apellidos y anote el número de cama.
Transmita confianza y seguridad, explicando calmadamente el procedimiento que realizará.
Si el paciente tiene dudas, trate de absolverlas: disminuirá su natural temor.
No extienda la conversación más allá de lo pertinente.
Termine su procedimiento, indicando lo necesario frente a segundos muestreos, horarios de entrega de
resultados y todo aquello que Ud. pueda y le sea permitido resolver.

SELECCIÓN DEL SITIO DE PUNCION

Acomode al paciente de forma segura y confortable.

No practique ninguna punción con el paciente en posición de pie.
Elija una extremidad en la que no exista ninguna venoclisis, herida o lesión reciente, comunicaciones
arteriovenosas, heridas o procedimientos quirúrgicos y cualquier eventualidad que le haga dudar de la
necesidad de punzar dicha zona.
Elija una vena que tenga dos características: visible y palpable. Puede ubicarla en la fosa ante cubital del
antebrazo, por donde surcan las venas cefálica y braquial. Si la vena no es muy visible, intente realizar
masajes desde la muñeca hasta el codo.
Ajuste una ligadura unos 2- 4 dedos por encima del sitio elegido. La presión debe ser media, lo suficiente
para evitar presiones mayores que causarían hemólisis, colapso venoso o dolor.
Previa a la punción limpie la zona indicada con movimientos circulares y del centro hacia fuera.
Dirija la aguja en un ángulo de 15-30 ° con respecto a la superficie del brazo. Punce en forma directa a
través de la piel y hasta el lumen de la vena.

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Terminada la colección retire suavemente la aguja del brazo del paciente, aplicando una gasa compresiva o
torunda de algodón en el sitio de punción.
Acabado el procedimiento, indíquele al paciente que debe conservar la presión, ejerciendo hemostasia por
unos 5 minutos. Coloque finalmente una banda adhesiva (vendita o “curita”) sobre la herida de la punción.
Si el sangrado no se detiene, aplique presión sobre la zona durante 10 minutos adicionales. Si el problema
persiste, consulte con el superior inmediato o médico tratante.
Deposite y destruya todo el material desechable en los recipientes diseñados para tal propósito. Este acto
de destruir el material frente al paciente, aumenta su confianza en las bondades y buenas prácticas de
laboratorio.
Finalmente, y muy importante, termine su trabajo etiquetando e identificando los tubos recolectados antes
de atender una nueva tarea.

RECOLECCION DE MUESTRAS EN NIÑOS

Realice el procedimiento con la ayuda de compañeros de trabajo.

Sujete firmemente el brazo del niño, incluso cuando éste no oponga resistencia. La natural reacción del
niño es retirar bruscamente el brazo al sentir la punción, lo cual podría ocasionar heridas en el mismo y
pérdida de la maniobra.

RECOLECCION DE MUESTRAS DE SANGRE EN BEBES

 El sitio recomendado de punción, pertenece al talón del bebé o infante.

 Limpie la zona y mantenga firme el pie del infante para evitar sacudidas bruscas.

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 Use una lanceta estéril y punce en las

porciones laterales del talón (no en el
centro), en sentido contrario a los
pliegues del talón, evitando que la gota
de sangre resbale hacia abajo, usando
estos pliegues como camino.
 Limpie la primera gota de sangre y
permita la salida de las posteriores con
suaves masajes, evitando la dilución con
líquidos tisulares. Llene el capilar o
contenedores con la cantidad necesaria.
 Descarte el material desechable y
etiquete apropiadamente los
contenedores.

PRESERVACION DE LAS MUESTRAS

Mantener como práctica ideal la centrifugación de una muestra, tan pronto como se formó el coágulo.
El tiempo máximo de espera de una muestra de sangre total para su separación es de una hora. Pasado este
tiempo, sufren variaciones significativas la glucosa, el potasio, fósforo, creatinina y transaminasas.
Si se requiriera una conservación superior a 1 hora, se recomienda almacenar la muestra a temperatura
ambiente, antes que a 4°C. Esto retardará discretamente la hemólisis.
En el caso de suero o plasma separado, las muestras que no puedan analizarse dentro de las primeras 4
horas deben ser almacenadas a temperatura de refrigeración (2-8 °C) hasta su proceso.

TRANSPORTE DE MUESTRAS

El tiempo ideal de traslado de un laboratorio

hacia otro centro debiera oscilar entre 45 a 60
minutos.
Utilizar recipientes de material plástico
(polietileno o polipropileno) como
contenedores de las muestras transportadas.
Identificar correctamente las muestras
trasladadas, enviando en formato externo
cualquier dato adicional que no pudiera
escribirse en el tubo o contenedor.
Depositar estas muestras en sobres o cajas que
puedan permitir el uso de unidades o bolsas
refrigerantes (los envases de polietileno son
adecuados para este fin).
Asegurarse que los tubos se encuentren

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perfectamente sellados, evitando derrames o contaminaciones con las soluciones refrigerantes.

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