PRCTICA N 1: ESPECTROFOTOMETRA

INTRODUCCIN:
La Espectrofotometra es una de las tcnicas experimentales ms utilizadas
para la deteccin especfica de molculas. Se caracteriza por su precisin, sensibilidad y su
aplicabilidad a molculas de distinta naturaleza (contaminantes, biomolculas, etc) y estado
de agregacin (slido, lquido, gas). Los fundamentos fsico-qumicos de la
espectrofotometra son relativamente sencillos.
Las molculas pueden absorber energa luminosa y almacenarla en forma de energa
interna. Esto permite que se inicien ciclos vitales de muchos organismos, entre ellos el de la
fotosntesis en plantas y bacterias. La mecnica cuntica nos dice que la luz est compuesta
de fotones cada uno de los cuales tiene una energa:
Efotn =h.v =h.c/ ,
Donde c es la velocidad de la luz, v es su frecuencia, su longitud de onda y h= 6.6 x 10-34 J.s
es la constante de Planck. Cuando decimos que una sustancia qumica absorbe luz de
longitud de onda , esto significa que las molculas de esa sustancia absorben fotones de
esa longitud de onda.
OBJETIVOS:

OBJETIVO GENERAL:
Conocer y aplicar los fundamentos de la Espectrofotometra para
la determinacin de concentraciones en soluciones.

OBJETIVOS PARTICULARES:
Conocer los fundamentos de la espectrofotometra y las variables
involucradas en la ley de Lambert-Beer-Bourger.
Seleccionar la longitud de onda apropiada para Determinacin de
absorbancia
Construir una curva patrn de la solucin a diferentes
concentraciones.
MARCO TERICO:
La Espectrofotometra es el mtodo de anlisis ptico ms usado en el rea
de investigacin. Los trminos: ESPECTRO = Espectro de radiacin electromagntica, FOTO
= Luz visible, METRA = Medicin. Es la medida de la cantidad de energa radiante
absorbida por las molculas de una muestra en funcin de las longitudes de onda
especficas.
Comprende una serie de tcnicas analticas usadas para anlisis cuali y cuantitativo.
Una radiacin electromagntica se puede describir como un flujo de partculas llamadas
fotones, o bien como una onda propagndose en el espacio. De esta ltima descripcin se
toma el concepto de longitud de onda, definindolo como la distancia entre dos mximos
consecutivos de la onda.
Esta es inversamente proporcional a la energa de la misma, de tal manera que el espectro
de radiaciones electromagnticas abarca un amplio rango de energas, las de menor energa
son las ondas de radio y las de mayor energa son las llamadas radiacin gamma.
Las molculas tienen un estado energtico que se puede alterar por la absorcin de
radiacin electromagntica a determinada longitud de onda, lo que se puede medir para
realizar un estudio cuali o cuantitativo.

Las principales ventajas de la espectrofotometra son:

Sensibilidad relativa elevada.

Facilidad para realizar mediciones rpidas.
Grado de especificidad relativamente elevado.

Para obtener la mxima sensibilidad en una determinacin debe conocerse la longitud de

onda de mayor absorcin de la sustancia analizada, que no deber coincidir con una alta
absorcin de otras sustancias presentes en la reaccin.
Cuando una radiacin electromagntica de intensidad I atraviesa un medio homogneo,
parte de la radiacin es absorbida por la muestra y otra parte es transmitida con una
intensidad i, de tal manera que se define transmitancia de una muestra como la relacin
entre la radiacin transmitida i versus la intensidad luminosa incidente I, multiplicado x 100:
% T = i x 100
I:
La absorbancia es una medida de la cantidad de Energa luminosa incidente absorbida por
una sustancia en solucin. Est relacionada con Transmitancia por medio de:
A = - Log T A = log (100 / %T)

La Ley de Lambert y Beer expresa que la absorbancia de una solucin es directamente

Proporcional al camino recorrido por la radiacin electromagntica y a la concentracin de
la solucin.
A = abc
A: absorbancia
a: absortividad especfica de cada soluto
b: distancia recorrida por el haz de luz en cm
c: concentracin de la solucin
La absortividad es la constante de proporcionalidad que nos permite igualar la ecuacin,
sus unidades dependern de b y c, ya que la absorbancia no tiene unidades; si b est en
centmetros y c en moles por litro, la absortividad estar en litros / mol centmetro y se
denomina coeficiente de absorcin molar (E).

Requerimientos para poder aplicar la Ley:

- La medicin del % de T es realizada con luz monocromtica
- La medicin del % de T es realizada a una regin de absorcin del componente a estudiar.
- La referencia es elegida de tal manera que C=0 cuando T= 100% o A= 0%
- La naturaleza de la solucin debe ser tal que su transmisin responda a variaciones de C.

Espectrofotmetro
Los aparatos de medida de la absorcin de la radiacin electromagntica se denominan
Espectrofotmetros y pueden representarse de forma sencilla mediante el siguiente
esquema:

La luz procedente de la fuente se hace pasar a travs del monocromador, que la desdobla en
haces monocromticos. El colimador tiene una rendija de ajuste variable, y segn su
abertura se obtiene luz de una determinada longitud de onda. La longitud de onda que se
desee utilizar se selecciona variando la posicin del monocromador. La luz que sale del
colimador se hace pasar por la solucin y luego incide sobre el fototubo, donde se detecta.
La seal se enva a un registrador, el cual puede ser la escala de un galvanmetro calibrado.

Calibracin del espectrofotmetro

Prender el equipo llevando la llave hacia arriba. Esperar 15 minutos para que los circuitos
alcancen temperatura.
Elegir la longitud de onda deseada con el selector.
Verificar 0% de T. Se realiza en modo transmitancia y colocando un cuerpo negro en
reemplazo del tubo
Ajustar con el blanco el 0% de absorbancia trabajando con la tapa cerrada.
Reemplazar el blanco de reactivos por la muestra a analizar y leer el valor correspondiente
de absorbancia.

Espectro de absorcin
Consiste en un grfico que representa el % T o la Absorbancia en funcin de la Longitud de
onda a la cual se realiza la medicin, para un amplio rango de longitudes de onda y para una
misma concentracin c de la muestra.
Permite determinar las longitudes de onda ptimas de absorcin y las concentraciones
adecuadas de trabajo.
Pasos para realizar un espectro de absorcin:

Prender el equipo y dejar estabilizar.

Seleccionar la longitud de onda.
Ajustar 100 % T o 0 % A con el Blanco de reactivos.
Reemplazar el blanco por la muestra y leer absorbancia.
Seleccionar una nueva longitud de onda y repetir las operaciones.
Graficar Absorbancia vs longitud de onda y seleccionar aquella donde la A sea
mxima.

Curva de calibracin Absorbancia vs Concentracin

Permite determinar la concentracin de una muestra incgnita
Preparar unas muestras de concentracin conocida y creciente utilizando los mismos
diluyentes y reactivos que se emplear en la preparacin de la muestra incgnita.
Medir la absorbancia de estas muestras.
Medir la absorbancia de la muestra problema.
Graficar Absorbancia vs concentracin.
Si la sustancia cumple con la Ley de Lambert y Beer el grfico ser una recta y ser posible
sacar un factor ya que la pendiente de la recta ser la misma en todos los puntos. As se
podr calcular la concentracin de la muestra problema.
Si la sustancia no cumple la Ley, el grfico ser una curva y se extrapolar dentro de un
rango apropiado para calcular el valor de la muestra problema.

MATERIALES:

Espectrmetro
Papel Milimetrado

PARTE EXPERIMENTAL:

Representamos grficamente las longitudes de onda (abscisas) en funcin de las

absorbancias (ordenada) trazando una curva suave que una todos los puntos. Indicndose
el punto de mxima absorcin.

RESULTADOS:
El punto de mxima absorcin fue de
DISCUSIN:

Qu de interesante tiene el espectrmetro que es una herramienta

de mucha relevancia que se hace uso en este proceso?

Lo interesante de este aparato es que detecta la cantidad de Luz

transmitida y/o absorbida a travs de la solucin en la celda y la
compara con la que se transmite o absorbe a travs de una solucin
de referencia o blanco.

Qu diferencia existe entre transmitancia y absorbancia de una

solucin?

Que a diferencia de la transmitancia, la absorbancia de una solucin

aumenta a medida que aumenta la atenuacin del haz de luz.

CONCLUSIN:

Se Conoci los fundamentos de la Espectrofotometra para la

determinacin de concentraciones en soluciones y las variables
involucradas en la ley de Lambert-Beer-Bourger.
Se Seleccion la longitud de onda apropiada para Determinacin
de absorbancia
Se grafic una curva de longitudes de onda en funcin de las
absorbancias, trazndose una curva suave que una todos los
puntos.

BIBLIOGRAFA:

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