Jueves - Grupo 4 - Informe 11

UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS
(Universidad del Perú, DECANA DE AMÉRICA)

Facultad de Farmacia y Bioquímica
Escuela Profesional de Farmacia y Bioquímica
Departamento Académico de Farmacología,
Bromatología y Toxicología
TOXICOLOGÍA Y QUÍMICA LEGAL
PRÁCTICA N° 11
DETERMINACIÓN DE INSECTICIDAS
ORGANOFOSFORADOS, ORGANOCLORADOS Y
CARBAMATOS
INTEGRANTES:
CARAZAS RANILLA, Zurisadai 14040075
GRANADOS CONDE, Linsay 15040062
HINOSTROZA LORENZO, Monica 16040031
MEDRANO MIRANDA, Danna 16040021
SALAS MENDOZA, Gian 15040074
SIMON RIOS, Joaquín 15040077
DOCENTE: Dr. JOSÉ ALFONSO APESTEGUIA INFANTES

HORARIO: JUEVES 10:00 – 13:20 h (Grupo 4)
Lima 02 de septiembre del 2020
LIMA – PERÚ
INFORME N°11 TOXICOLOGÍA Y QUÍMICA LEGAL UNMSM | 2020
1. INTRODUCCIÓN
Los plaguicidas son el resultado de un proceso industrial de síntesis química, y se han
convertido en la forma dominante del combate a las plagas después de la Segunda Guerra
Mundial gracias al desarrollo de la industria química y al tipo de agricultura dependiente de
estos insumos.1Los plaguicidas son una de las familias de productos químicos más
ampliamente empleadas por el hombre. Se han usado sobre todo para combatir plagas por su
acción sobre las cosechas o como vectores de enfermedades transmisibles. Los plaguicidas
pueden clasificarse en función de su empleo (insecticidas, fungicidas, herbicidas, raticidas…)
o de su familia química (organoclorados, organofosforados, carbamatos, piretoides,
compuestos bipiridílicos, sales inorgánicas, etc).2
Todos ellos son biocidas lo que implica, habitualmente una alta toxicidad humana que ha sido
motivo de preocupación desde mitad del siglo XX debido al amplio e indiscriminado empleo
de estos productos. La exposición a los plaguicidas puede tener efectos agudos, crónicos y a
largo plazo. El uso de los plaguicidas no sólo entraña beneficios sino que también conlleva
diversos riesgos para el medio, así como para la salud, tanto de los trabajadores expuestos como
de la población en general. Entre los efectos adversos a la salud, se consideraban
principalmente los de tipo agudo, debido a los aspectos médicos que representan y por su
impacto directo en la morbi-mortalidad.1,2 Algunos compuestos organoclorados (como el DDT)
fueron los primeros en ser empleado en fumigaciones masivas para combatir la malaria y han
debido ser prohibidos debido a su capacidad de bioacumulación y persistencia
medioambiental.2
2. PARTE EXPERIMENTAL
a. Objetivos
● Realizar la identificación de Carbamatos, organoclorados y organofosforados.
● Interpretar los resultados obtenidos en práctica.
b. Materiales, equipos y reactivos
b.1. Reactivos
-Residuo o extracto -R3
-p-dimetilaminobenzaldehido 1%
-Metanol
-Acetona
-Etanol
-Cloruro de paladio (PdCl2 1%)
-Difenilamina 1%
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-Ácido sulfúrico (H2SO4 7%)

-Cloroformo (CHCl3)
-Ácido clorhídrico (HCl 1%)
b.2. Equipos
-Cámara cromatográfica o Cuba cromatográfica.
-Placas cromatográficas con silicagel G
-Rociador/pulverizador
-Campana extractora
-Cámara de luz UV – Onda corta y larga
b.3. Materiales
-Beakers
-Buretas
-Microcapilares
-Tubos de ensayo
-Pipetas pasteur
3. METODOLOGÍA Y RESULTADOS
3.1. ENSAYO A LA GOTA/TUBO DE PRUEBA
3.1.1. INSECTICIDAS ORGANOCLORADOS
Reacción de Fujiwara3, 4
Nombre de la Reacción de Fujiwara

reacción
Fundamento Esta reacción es característica de los derivados polihalogenados en donde influye

en el carbono terminal de una cadena hidrocarbonada. Cuando una mezcla del
compuesto y la piridina se calientan durante unos minutos en un medio
fuertemente alcalino, un intenso color rojo se desarrolla.

Técnica
Operatoria
Mecanismo de
reacción
Ecuación N2-[(1E,3D)-1,3-BUTADIENYL]-N1-(1,3-BUTADIENYL) BENZMIDINE

Química
Resultados Color rojo o púrpura en la capa superior

(de piridina) del tubo “a” y del tubo “c”
indica la presencia de un compuesto que
posee al menos dos átomos halógenos
unidos a un átomo de carbono como el
cloroformo, tetracloruro de carbono,
hidrato de cloral, DDT, ácido
tricloroacético e hidrocarburos
policlorados. El tubo b no debe presentar
coloración.

3.1.2. INSECTICIDAS CARBAMATOS

Reacción de Furfuraldehído5, 6
Nombre de la Reacción de Furfuraldehído

reacción
Fundamento Está basada en la reacción general de los carbamatos con el furfuraldehído en

presencia de cloruro de hidrógeno, la oxidación del furfural produce ácido
furoico que se aplica en la industria agroquímica, donde comúnmente se
transforma en cloruro de furoilo que finalmente se usa en la producción de drogas
e insecticidas.
Técnica
Operatoria
Mecanismo de
reacción

Resultados En presencia de carbamatos se observa

una mancha negra.
3.1.3. INSECTICIDAS ORGANOFOSFORADOS

Reconocimiento del p-nitrofenol (solo paration)7
Nombre de la
reacción Reacción general del paratión con el p-nitrofenol
Fundamento La unión del paraoxón con la acetilcolinesterasa hace que se libere metabolitos
como el p-nitrofenol lo que nos permite realizar la identificación preliminar de
compuestos organofosforados. El p-nitrofenol es incoloro en disolución ácida,
pero se vuelve de intenso color amarillo cuando la disolución se alcaliniza.Esto
debido a que la molécula original no ionizada es incolora, pero el ión negativo
correspondiente es coloreado. En disolución alcalina el exceso de base separa
el ión H+ de la molécula y la disolución se vuelve amarilla a causa del anión
liberado.
Técnica a) Adicionar, en un tubo de ensayo, una gota de muestra de orina.

Operatoria b) Luego, agregar 1 mL de hidróxido de sodio (NaOH) al 10%.
c) Finalmente se lleva a baño Maria x 5 minutos.
Mecanismo de
reacción

Resultados Rx positiva para p-nitrofenol y, por lo tanto,

para organofosforados si se observa
coloración amarillo intenso.
3.2. MÉTODO CCF

3.2.1 INSECTICIDAS ORGANOCLORADOS 8, 9
Nombre de la
reacción Cromatografía en capa fina de organoclorados
Fundamento La estabilidad de los compuestos organoclorados va depender del pH del

medio, que a pH fuertemente alcalino se descompone para su identificación.
Técnica
Operatoria a. Muestra: La muestra puede ser contenido estomacal, restos de la escena
(extracción etérea). Se usará R3 a sequedad, luego esta se reconstituye con 20
gotas de cloroformo o metanol.
b. Realización de cromatografía:
Sembramos 04 veces en la cromatoplaca de sílica gel G. Preparamos el sistema

de solventes (metanol: acetona- 1:1) en la cámara cromatográfica. Colocamos
la cromatoplaca de silicagel G en la cámara cromatográfica y dejamos correr
la fase móvil. Elusión de la fase móvil.
Resultados Luego retirar la placa

de la cámara
cromatográfica y
atomizar el reactivo
revelador
(Difenilamina al
1%), se observarán
claramente color
(manchas verdes o
marrones/Rx
positiva), luego se
observa el tamaño
de la mancha, y Revelado cromatográfico de los residuos
calcular el (Rf). organoclorados.

3.2.2. INSECTICIDAS CARBAMATOS 10

Nombre de la
reacción Cromatografía en capa fina de carbamatos
Fundamento Los carbamatos al separar se desplazan en una dirección predeterminada por

medio de un material sólido insoluble inorgánico: Silicagel G 60 (fase
estacionaria) y la fase móvil (metanol - acetona - alcohol isopropílico) que
migra a través de la superficie de la placa. La fase móvil arrastra los carbamatos
por un proceso de reparto múltiple o uno continuo de absorción - desorción
que se da en toda sustancia de mediana o baja polaridad.
Técnica
Operatoria a. Muestra: La muestra puede ser contenido estomacal, restos de la escena
(extracción etérea). Se usará R3 a sequedad, luego esta se reconstituye con 20
gotas de cloroformo o metanol.
b. Realización de cromatografía: Utilizar placas de silicagel G60 Merck y

placas cromatográficas de vidrio revestidas con Silicagel G como fase
estacionaria y 100 mL de una mezcla de (metanol: acetona—1:1) como fase
móvil. Aplicar, con ayuda de capilares de vidrio, las 4 muestras y las 4
diluciones de los estándares (metamidofos, clorpirifos, dimetoato y metomilo,
en ese orden) haciendo un total de 8 puntos de aplicación sobre la placa, todos
espaciados aproximadamente 2 cm entre sí. Para las muestras realizar 8
aplicaciones, y para las diluciones de los estándares 5 aplicaciones. Colocar la
placa dentro de la cámara cromatográfica de manera inclinada y dejar correr
hasta un frente de solvente aproximadamente de 3/4 partes (15 cm) de la placa
cromatográfica.

de la cámara
cromatográfica y
revelador (p-
dimetilaminobenzal
dehído al 1% en
solución H2SO4 al
7%.), se observarán
claramente color
(manchas amarillas
oscuras/Rx positiva),
luego se observa el
tamaño de la mancha,
y calcular el (Rf).

3.2.3. INSECTICIDAS ORGANOFOSFORADOS11
Nombre de la
reacción Cromatografía en capa fina de organofosforados.
Fundamento Los organofosforados a separar se desplazan en una dirección predeterminada

por medio de un material sólido insoluble inorgánico: Silicagel G 60 (fase
estacionaria) y la fase móvil (metanol - acetona - alcohol isopropílico) que
migra a través de la superficie de la placa. La fase móvil arrastra los
organofosforados por un proceso de reparto múltiple o uno continuo de
absorción - desorción que se da en toda sustancia de mediana o baja polaridad
(como el caso de los organofosforados)
Técnica
Operatoria a. Procesamiento de la muestra.
La muestra fue triturada con ayuda de un mortero y pilón. Luego se colocó en

un vaso de precipitación de 250 mL, donde se adiciona agua destilada c.s.p. Se
calentó por 5 minutos en plancha metálica a 50°C agitando constantemente. Se
dejó reposar por 15 minutos. Se filtró en vaso de precipitación.
b. Extracción de la muestra:
El filtrado se trasvasa a una pera de bromo de 250 mL utilizando H2SO4, la

solución fue llevada a pH ácido. Se agregó 20 mL de éter. Se agitó por 2
minutos y reposar 1 minuto; repitiendo este proceso por tres veces. La fase
acuosa fue desechada, y la fase orgánica (éter) trasvasada a un vial en el cual
se evaporó hasta quedar pequeñas trazas, que para poder acelerar este proceso
se contó con la ayuda de una plancha metálica. El residuo obtenido se diluyó
con 2 a 3 gotas de éter para realizar el análisis correspondiente.
c. Análisis por Cromatografía en Capa Fina
Las placas cromatográficas fueron de sílica gel en soporte de vidrio (Fase

Estacionaria), donde se aplicó la muestra (esta etapa también es llamado
“sembrado”); se utilizó como blanco agua ultra pura y como estándar 2-
dimetoxifosfinoiltio-N-metilacetamida, en concentración de 0,3 ppm.
Posteriormente la Fase Estacionaria (FE) fue introducida en una cuba en la que
previamente se acondicionó la Fase Móvil (FM) o eluyente, consistente en 100
mL de solventes orgánicos cloroformo y propanona, produciéndose la elución.
Finalmente, previo al secado, en la cámara extractora de gases, utilizando el
atomizador, se procedió a la aplicación del revelador que fue PdCl2.


de la cámara
cromatográfica y
revelador (cloruro de
paladio (PdCl2 al
1%) en HCl al 1%.),
se observará
claramente color
(manchas rojas
anaranjadas/Rx
positiva), luego se
observa el tamaño de
la mancha, y calcular
el (Rf).
4. DISCUSIÓN
4.1. Insecticidas organoclorados
Reacción de fujiwara
En el Manual de procedimientos analíticos toxicológicos de Flanagan R. para esta reacción
caracterizada por ser de compuestos triclorados como el Hidrato de cloral, cloroformo,
diclorofenazona y tricloroetileno se sigue el procedimiento de:
A tres tubos de 10 ml agregar respectivamente, en el tubo a: 1 ml de orina o desproteinizado
de sangre, en el tubo b: 1 ml de agua destilada (blanco) en el tubo c: 1 ml de ácido
tricloroacético diluído. A cada tubo se le agrega 1 ml de hidróxido de sodio y 1 ml de piridina.
Se mezcla cuidadosamente y se deja calentar en un baño de agua hirviente durante 2 minutos.
Entre los resultados se obtendrá un color rojo o púrpura en la capa superior (de piridina) del
tubo a y del tubo c indica la presencia de un compuesto que posee al menos dos átomos
halógenos unidos a un átomo de carbono como el cloroformo, tetracloruro de carbono, hidrato
de cloral, DDT, ácido tricloroacético e hidrocarburos policlorados. En el tubo b no debe
presentar coloración.12
Los carbamatos utilizados con insecticidas son compuestos anticolinesterasa con diversos
grados de toxicidad para los seres humanos. La mayoría de las intoxicaciones por estos agentes
ocurren debido a la exposición accidental de la dermis. Sin embargo, también ocurren ingestas
accidentales y suicidas. El mecanismo de toxicidad de los insecticidas organofosforados y
carbamatos conlleva la inhibición de la AChEasa, interaccionando con el grupo OH de la SER

del centro activo. Se forma un intermediario de la enzima fosforilada o carbamoilada, y es la

salida de estos grupos (fosfato o carbamato) del centro activo de la enzima lo que limita la
velocidad del proceso.12
4.2. Insecticidas carbamatos
Reacción de furfuraldehído
En el Manual de procedimientos analíticos toxicológicos de Flanagan R. para el ensayo
cualitativo se utilizan tales muestras: contenido estomacal y residuos de la escena. Reactivos
Solución de ácido clorhídrico (2 mol/l). Solución de Furfuraldehído (100 ml/l) en metanol,
recientemente preparado. Ácido clorhídrico concentrado (densidad relativa 1,18).
Procedimiento: Acidificar 1 ml de muestra con 0,5 ml de dilución de ácido clorhídrico, extraer
con 4 ml de cloroformo mezclando cuidadosamente por 5 minutos. Centrifugar durante 5
minutos, desechar la capa superior acuosa y filtrar el extracto de cloroformo a través de un
papel de filtro en un tubo limpio; se evaporar el extracto a sequedad bajo una corriente de aire
o nitrógeno a 40°C; se disuelve el residuo en 0,1 ml de metanol, se aplica una porción del
extracto en un papel de filtro, se deja secar. Se agrega al extracto 0,1 ml de la solución de
furfuraldehído, se deja secar y exponer el papel a los humos del ácido clorhídrico concentrado
por 5 minutos bajo campana. 12
Químicamente, el furfural posee dos grupos funcionales, aldehído y aromático, que le
proporcionan reactividad, esto lo convierte en un material muy versátil en síntesis orgánica y
una opción en la obtención de biocombustible 13
La oxidación del furfural produce ácido furoico que se aplica en la industria agroquímica,
donde comúnmente se transforma en cloruro de furoilo que finalmente se usa en la producción
de drogas e insecticidas. La oxidación y reducción de furfural puede llevarse a cabo mediante
catálisis heterogénea y homogénea, y biocatálisis. La selectividad es un tema importante en las
reacciones de hidrogenación y oxidación furfural ya que se pueden obtener diferentes
productos usando catalizadores monometálicos o bimetálicos y / o diferentes soportes de
catalizador. En el enfoque de biocatálisis, se utilizan diferentes enzimas, células completas,
herramientas de biotecnología moderna, secuenciación de ADN, regulación de redes
metabólicas, sobreexpresión de genes que codifican enzimas de interés y optimización de las
propiedades celulares del microorganismo. 13
4.3. Insecticidas organofosforados
Reconocimiento del p-nitrofenol (solo paration)
El paratión está estrechamente relacionado con insecticidas altamente tóxicos para los
animales, ya sea por inhalación, por absorción a través de la piel, o por la boca.14 Los pesticidas

organofosforados reaccionan con la zona esterásica de la enzima colinesterasa formando una

unión estable que si no se rompe mediante el tratamiento, se hace irreversible, quedando la
enzima inhabilitada para su función normal.15 La pérdida de la función enzimática permite la
acumulación de acetilcolina en las uniones colinérgicas neuroefectoras (efectos muscarínicos),
en las uniones mioneurales del esqueleto y los ganglios autónomos (efectos nicotínicos) y en
el sistema nervioso central.16 El cuadro de intoxicación por organofosforados genera un
espectro de signos y síntomas característico, conocido como síndrome colinérgico el cual se
presenta como la excesiva estimulación de los receptores de acetilcolina, y se caracteriza
principalmente por cambios en el estado de conciencia, debilidad muscular y excesiva actividad
secretora.17
4.4. Método de cromatografía en capa fina (CCF)
Se identificó a través del método de cromatografía en capa fina, los diferentes pesticidas y sus
distintos Rf (factor de retención), obteniéndose los siguientes Rf: Insecticidas organofosforados
0.64, Carbamatos 0.72, Insecticidas organoclorados 0.55.18
Para la determinación de pesticidas organofosforados se usa como estándar clorpirifós y
metamidofos, para ello, en la presente practica se utilizó como fase móvil de (metanol:
acetona—1:1) y revelador de cloruro de paladio dio como resultado unas manchas rojas-
anaranjadas, mancha visible a un factor de retención “Rf” de 0.64, en el caso de carbamatos se
usa la misma fase móvil, obteniendose un Rf de 0.72 en donde se usó carbofuran y aldicarb
como estándares, Torres indica que los Rf van a depender de la polaridad del solvente, en el
caso de organoclorados se obtuvo un Rf de 0.55 y en este caso es muy dependiente del pH.19
5. CONCLUSIONES
● Se realizó la identificación de Carbamatos, organoclorados y organofosforados
mediante el ensayo de gota/tubo de prueba y el método de cromatografía en capa fina.
● Los resultados obtenidos en práctica fueron positivos para organofosforados,
carbamatos y organoclorados.

6. CUESTIONARIO
1. Indique otro ensayo cualitativo a la gota o tubo de ensayo para la identificación de
organofosforados
Un método alterno es la detección mediante una tarjeta de doble película, que contiene
acetilcolinesterasa (AChE) y acetato de indoxilo. El fundamento comprende en la
descomposición de acetato de indoxilo por la AChE para producir un compuesto azul verdoso.
La velocidad del desarrollo del color es directamente proporcional a la velocidad de inhibición
de la actividad AchE por los pesticidas organofosforados y carbamatos. Cuando se deja caer
una solución de muestra con pesticidas en la ventana de prueba, esta reacción de AChE se
inhibe de manera rápida y eficiente en un grado que depende del nivel de pesticida. La
detección cualitativa y cuantitativa de residuos de plaguicidas se logra en función de la
intensidad del color.20
Figura N°1. Identificación de organofosforados.

2. Indique otro ensayo cualitativo a la gota o tubo de ensayo para la identificación de

organoclorados.
El método EPA utiliza un cromatógrafo de gases equipado a un detector de captura de
electrones, inyector automático y columna capilar, la metodología indica la calibración de
pesticidas con patrón mixto de pesticidas organoclorados disueltos en tolueno: hexano (1:1),
un patrón interno (pentacloronitrobenceno) y como patrones subrogados (decaclorobifenilo y
2, 4, 5, 6-tetracloro-m-xyleno), Los disolventes empleados fueron tolueno, n-hexano y metanol.
El objetivo radica en calcular los intervalos de calibración adecuados para cumplir con los NGR
del grupo de pesticidas, establecidos en los cuales están comprendidos entre 0.01 µg/mL y 80
µg/mL.21
3. Indique un ensayo cualitativo a la gota o tubo de ensayo para la identificación de
carbamatos
La reacción de furfuraldehido consiste en acidificar 1 ml de muestra con 0,5 ml de dilución de
ácido clorhídrico, extraer con 4 ml de cloroformo mezclando cuidadosamente por 5 minutos.
Dentro de la metodología se debe centrifugar durante 5 minutos, desechar la capa superior
acuosa y filtrar el extracto de cloroformo a través de un papel de filtro en un tubo limpio.
Evaporar el extracto a sequedad bajo una corriente de aire o nitrógeno a 40°C. Disolver el
residuo en 0,1 ml de metanol, aplicar una porción del extracto en un papel de filtro, dejar secar.
Agregar al extracto 0,1 ml de la solución de furfuraldehído, dejar secar y exponer el papel a los
humos del ácido clorhídrico concentrado por 5 minutos bajo campana.22
4. Clasificación de las lámparas UV (identificación de IOCL y cual se utiliza) 23
 Lámparas de ultravioleta A (UV-A): Radiación entre 315 y 400 nanómetros. El UVA
se utiliza en la industria para procesos fotoquímicos.
 Ultravioleta B (UV-B): Radiación entre 280 y 315 nanómetros. El UVB se utiliza para
aplicaciones médicas
 Ultravioleta C (UV-C): Radiación entre 100 y 280 nanómetros. Se utiliza para
desinfección y esterilización de agua, aire o materiales, exposición de placas, curado de
masillas, secado de lacas, bronceado, usos médicos.
 La identificación por CCF de compuestos organoclorados se realiza con radiación UV-
C a 254 nm.

5. Indique otros reveladores (02 – específicos y 01 - general) para la identificación por

cromatografía en capa fina para los insecticidas organofosforados. 23
REVELADORES PARA INSECTICIDAS ORGANOFOSFORADOS
GENERALES ESPECÍFICOS
Cloruro de paladio en ClH al Colocar 4-nitro-benceno-diazonio-tetrafluor-borato al

10% V/V (0,5 en 100 ml). 1% en mezcla de etanol:etilenglicol (8:2).
● Los organosforados
dan una coloración ● El malathion da color violáceo.
amarilla.
Agregar KOH 10 N Solución de acetato de b-naftol y de Fast Blue

● Los organofosforados
dan una coloración ● Aparecen manchas blancas sobre fondo de
amarilla. color liliáceo.

cromatografía en capa fina para los insecticidas organoclorados. 23
REVELADORES PARA INSECTICIDAS ORGANOCLORADOS
Revelador: difenilamina en Agregar difenilamina en alcohol al 1%. Exponer a luz

alcohol al 1%. Exponer a luz ultravioleta 10 minutos.
UV 10 minutos ● Se observará aumento de fluorescencia para
● Los organoclorados piretrinas.
revelan verdes y grises
Agregar KOH 10 N
Reveladores: Permanganato de ● Se observa aumento de fluorescencia para
potasio,2-aminoetanol, y el organoclorados.
reactivo de nitrato de plata.
Exponer a la luz ultravioleta
(UV) (254 nm) por 15 minutos
● La aparición de color
marrón-negro indica la
presencia de
plaguicidas
organoclorados.


cromatografía en capa fina para los insecticidas carbamatos. 24
REVELADORES PARA INSECTICIDAS CARBAMATOS
Vainillina al 1% en ácido Revelador : Fast Blue

sulfúrico concentrado. Rociar KOH 15% dejar secar, luego añadir ácido
● Manchas lilas a acético en metanol 1N y finalmente se rocía el Fast
violetas azuladas Blue.
dependiendo del ● Manchas anaranjadas rojizas: presencia de
carbamato órgano carbámico.
Rociar KOH al 15% para alcalinizar la placa; dejar

secar.
Posteriormente rociar con 4-Nitro benceno diazonio-
tetrafluoroborato en Dietilenglicol/ Alcohol absoluto
(1/ 9).
● Dando una variedad de colores que van del
naranja, al rojo, violeta y azul.
8. Indique el procedimiento para la determinación de la Pseudocolinesterasa

plasmática.25
La colinesterasa del suero o plasma (Che) o pseudocolinesterasa está asociada a las siguientes
condiciones clínicas:
1) Constituye un índice de función hepática, especialmente en hepatopatías crónicas.
2) Su disminución indica intoxicación por insecticidas organofosforados, inhibidores de la Che.

9. Indique el procedimiento para la determinación de la Colinesterasa eritrocitaria. 26

Bajo las condiciones de reacción, a partir de acetiltiocolina, la AColE libera tiocolina, la cual
reacciona inmediatamente con el DTNA formando ácido tionicotínico, que presenta un pico
máximo de absorbancia a 340 nM, permitiendo así el monitoreo directo de la reacción:

10. Indique cual es la diferencia entre la determinación de la pseudocolinesterasa

plasmática y la Colinesterasa eritrocitaria.25
La diferencia las podemos encontrar en las muestras que se usan:
● Pseudocolinesterasa plasmática: que se encuentra en plasma, hígado, músculo liso y
adipocitos.
● Colinesterasa Eritrocitaria: que se encuentra en eritrocitos y terminaciones de nervios
colinérgicos
11. Indique un ensayo confirmatorio para los carbamatos.27
Además de los ensayos mencionados en la práctica, también se puede confirmar por
Cromatografía Líquida de Alta eficiencia.
12. Indique un ensayo confirmatorio para los organofosforados.27
La determinación de Colinesterasa Eritrocitaria y nivel de plaguicida Organofosforado en
sangre. Para la determinación de insecticidas organofosforados se puede usar cromatografía de
gases con detector de nitrógeno fósforo y confirmación por espectrometría de masas.
13. Indique un ensayo confirmatorio para los organoclorados.28
Se realiza el ensayo confirmatorio por medio de cromatografía en capa fina, en el cual, se utiliza
como revelador Spray A (nitrato de plata 0,5 g en 100 mL de etanol), el cual se rocía y se deja
secar por unos minutos. Luego se rocía el revelador Spray B (Azul de bromofenol 0,2 g, nitrato
de plata 0,15 g, etanol 50 mL y acetato de etilo 50 mL) y se deja secar por unos minutos. Al
final, se obtienen manchas de color amarillo en fondo azul que indica la presencia de
organoclorados.
14. Indique un ensayo cuantitativo para la carbamatos.29
Para la cuantificación de carbamatos previa extracción en fase líquida o sólida se realiza por
medio de HPLC con espectrometría de masas, pero también se pueden utilizar detectores más
sencillos como el de fluorescencia o enzimas con buena correlación de resultados al
compararlas con técnicas de espectrometría de masas. También se puede realizar la
cuantificación por medio de cromatografía líquida de ultra performance (UPLC).
15. Indique un ensayo cuantitativo para los organofosforados.30
Para determinar cuantitativamente la posible presencia de plaguicidas organofosforados se
puede realizar previamente una extracción del plaguicida en fase líquida-líquida o fase sólida,
y seguidamente utilizar la técnica HPLC con detector de longitud de onda variable.

16. Indique un ensayo cuantitativo para los organoclorados.31

Para determinar cuantitativamente la posible presencia de plaguicidas organoclorados se puede
utilizar la técnica de microextracción dispersiva en fase líquida asistida por sonicación, en
conjunto con cromatografía de gases y un detector de microcaptura de electrones.
17. Indique el procedimiento de la identificación de paranitrofenol en tubo de ensayo para
insecticidas organofosforados (Paratión).7
Reacción general del paration con el p-nitrofenol
Fundamento:
La unión del paraoxon con la acetilcolinesterasa hace que este último libere metabolitos como
el p-nitrofenol lo que permite realizar la identificación preliminar de compuestos
organofosforados. El p- nitrofenol es incoloro en disolución acida, pero se vuelve de intenso
color amarillo cuando la disolución se alcaliniza. Esto debido a que la molécula original no
ionizada es incolora, pero el ion negativo correspondiente es coloreado. En disolución alcalina
el exceso de base separa el ion H+ de la molécula y la disolución se vuelve amarilla a causa
del anión liberado.
Reacción química:
Figura N°2. Reacción química para la identificación de p-nitrofenol
Método operatorio:
a. Adicionar, en un tubo de ensayo, una gota de muestra de orina.
b. Luego, agregar 1 mL de hidróxido de sodio (NaOH) al 10%.
c. Finalmente se lleva a baño Maria x 5 minutos.
Resultado:
Rx positiva para p-nitrofenol y, por lo tanto, para organofosforados si se observa coloración
amarillo intenso.

7. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
1. Karam M, Ramírez G, Bustamante P, Galván J. Plaguicidas y salud de la población.
Ciencia Ergo Sum [Internet] 2004; 11(3): 246-254. Toluca, México. Disponible en:
https://www.redalyc.org/pdf/104/10411304.pdf
2. Ferrer A. Intoxicación por plaguicidas. Sis San Navarra [Internet] 2003; 26 (1): 155-
171. Zaragoza, España. Disponible en:
http://scielo.isciii.es/pdf/asisna/v26s1/nueve.pdf
3. Mauricio F. Adaptación de la reacción de fujiwara a la determinación de metilcetonas
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28042014000300002

Jueves - Grupo 4 - Informe 11

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UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

(Universidad del Perú, DECANA DE AMÉRICA)

TOXICOLOGÍA Y QUÍMICA LEGAL

DOCENTE: Dr. JOSÉ ALFONSO APESTEGUIA INFANTES

Lima 02 de septiembre del 2020

Facultad de Farmacia y Bioquímica Página | 2

-Ácido sulfúrico (H2SO4 7%)

Nombre de la Reacción de Fujiwara

Fundamento Esta reacción es característica de los derivados polihalogenados en donde influye

Facultad de Farmacia y Bioquímica Página | 3

Ecuación N2-[(1E,3D)-1,3-BUTADIENYL]-N1-(1,3-BUTADIENYL) BENZMIDINE

Resultados Color rojo o púrpura en la capa superior

Facultad de Farmacia y Bioquímica Página | 4

3.1.2. INSECTICIDAS CARBAMATOS

Nombre de la Reacción de Furfuraldehído

Fundamento Está basada en la reacción general de los carbamatos con el furfuraldehído en

Facultad de Farmacia y Bioquímica Página | 5

Resultados En presencia de carbamatos se observa

3.1.3. INSECTICIDAS ORGANOFOSFORADOS

Técnica a) Adicionar, en un tubo de ensayo, una gota de muestra de orina.

Facultad de Farmacia y Bioquímica Página | 6

Resultados Rx positiva para p-nitrofenol y, por lo tanto,

3.2. MÉTODO CCF

Fundamento La estabilidad de los compuestos organoclorados va depender del pH del

Sembramos 04 veces en la cromatoplaca de sílica gel G. Preparamos el sistema

Resultados Luego retirar la placa

Facultad de Farmacia y Bioquímica Página | 7

3.2.2. INSECTICIDAS CARBAMATOS 10

Fundamento Los carbamatos al separar se desplazan en una dirección predeterminada por

b. Realización de cromatografía: Utilizar placas de silicagel G60 Merck y

Resultados Luego retirar la placa

Facultad de Farmacia y Bioquímica Página | 8

3.2.3. INSECTICIDAS ORGANOFOSFORADOS11

Fundamento Los organofosforados a separar se desplazan en una dirección predeterminada

La muestra fue triturada con ayuda de un mortero y pilón. Luego se colocó en

El filtrado se trasvasa a una pera de bromo de 250 mL utilizando H2SO4, la

c. Análisis por Cromatografía en Capa Fina

Las placas cromatográficas fueron de sílica gel en soporte de vidrio (Fase

Facultad de Farmacia y Bioquímica Página | 9

Resultados Luego retirar la placa

Facultad de Farmacia y Bioquímica Página | 10

del centro activo. Se forma un intermediario de la enzima fosforilada o carbamoilada, y es la

Facultad de Farmacia y Bioquímica Página | 11

organofosforados reaccionan con la zona esterásica de la enzima colinesterasa formando una

Facultad de Farmacia y Bioquímica Página | 12

Figura N°1. Identificación de organofosforados.

Facultad de Farmacia y Bioquímica Página | 13

2. Indique otro ensayo cualitativo a la gota o tubo de ensayo para la identificación de

Facultad de Farmacia y Bioquímica Página | 14

5. Indique otros reveladores (02 – específicos y 01 - general) para la identificación por

REVELADORES PARA INSECTICIDAS ORGANOFOSFORADOS

Cloruro de paladio en ClH al Colocar 4-nitro-benceno-diazonio-tetrafluor-borato al

Agregar KOH 10 N Solución de acetato de b-naftol y de Fast Blue

6. Indique otros reveladores (02 – específicos y 01 - general) para la identificación por

REVELADORES PARA INSECTICIDAS ORGANOCLORADOS

Revelador: difenilamina en Agregar difenilamina en alcohol al 1%. Exponer a luz

Facultad de Farmacia y Bioquímica Página | 15

7. Indique otros reveladores (02 – específicos y 01 - general) para la identificación por

REVELADORES PARA INSECTICIDAS CARBAMATOS

Vainillina al 1% en ácido Revelador : Fast Blue

Rociar KOH al 15% para alcalinizar la placa; dejar

8. Indique el procedimiento para la determinación de la Pseudocolinesterasa