Cromatografa de Lquidos de

Alto y Ultra Alto Rendimiento

De los orgenes a la actualidad

http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/
CROMATOFRAFIADELIQUIDOSDEULTRAALTORENDIMIENTO_9441.pdf

Tcnica
Instrumental

La herramienta analtica
de mayor importancia

Componentes bsicos

Horno

Fase
mvil

Control
de flujo

Introduccin
de muestra

Columna

Deteccin

Registro
y proceso

Instrumentacin
Fase mvil

Bomba de
alta presin

Muestra

Inyector

Control de
temperatura

Gradiente
de elucin

Columna
Detector

Registro

Efecto del dimetro de partcula

Digestin de enolasa.
Efecto del tamao de partcula
en N y P

COLUMNAS EN HPLC

Columnas
Tubo de acero inoxidable, vidrio o capilar de
slice fundida
Dimensiones
Longitud: 25 a 300 mm
Dimetro: 25 m a 100 mm
Tamao de partcula: 1.7 a 10 m

Empaques de UHPLC
Images of current 1.9um particles

Tipos de fases estacionarias

Cromatografa de intercambio inico

Cromatografa en fase normal
Cromatografa en fase inversa
Cromatografa de exclusin por tamao

Tipos de CL
Cromatografa de intercambio inico
Adsorcin: lquido-slido
Particin: lquido-lquido
Cromatografia en fase normal
Cromatografia en fase inversa
Cromatografia de exclusin por tamao

Cromatografa
Fase Normal
FE polar
FM No-polar
Fase Inversa
FE No-polar
FM polar

Cromatografa
de fase inversa
FE
Slica qumicamente modificada con
grupos no-polares: hidrocarburos
saturados: C18 octadecil, C8 octil,
C4 tetrametil, C2 dimetl
FM
Mezclas: agua/disolventes orgnicos
H2O +(CH3OH, THF, CH3CN)

Cromatografa de fase inversa

Retencin por solvofobicidad

Habr mayor retencin conforme:
Parte apolar de la molcula del soluto es mayor
% C en la FE es mayor
Polaridad de la FM es alta (mayor % de H2O)

Fase mvil

Disolventes grado cromatogrfico

Agua de 18 m
Baja viscosidad
No vlatil
Miscibilidad
Filtrada
Sin oxgeno disuelto (degasificada)

Fuerza del eluyente

Viscosidad del eluyente

GRADIENTE DE ELUCIN

Anlisis Isocrtico

Fase inversa, 10% CH3CN

Anlisis Isocrtico

Fase inversa, 80% CH3CN

Anlisis Isocrtico

Fase inversa, 50% CH3CN

Anlisis por gradiente

Gradiente de acetonitrilo

T t

Elucin por gradiente

Detectores

Indice de refraccin
Ultravioleta-Visible
Fluorescencia
Electroqumico
Dispersin de luz,
viscosmetro
Radioactividad
Infrarrojo
Espectrmetro de masas

Protenas por 2D nano UPLC

Cromatogramas de digestin de E. Coli

Fabricantes de Equipo HPLC

Agilent Technologies
Beckman Coulter
Cecil Instruments
Dionex Corp
Hitachi
PerkinElmer, Inc.
Shimadzu Scientific Instruments
Thermo Fisher Scientific
Waters Corporation

Columnas para HPLC

Agilent Technologies
AkzoNobel
Beckman Coulter
Dionex Corp
Merck KGaA
Micro-Tech
Phenomenex
SGE Analytical Science
Shimadzu Scientific Instruments
Shodex
Sigma-Aldrich
Thermo Fisher Scientific
Tosoh Corporation
Waters Corporation
W. R. Grace and Company (Vydac)