PRACTICA N° 09

DETERMINACION DE BENZODIAZEPINAS , BARBITURICOS Y FENOTIAZINICOS

PROFESOR : Dr. JOSE ALFONSO APESTEGUIA INFANTES

INTRODUCCIÓN
Los tóxicos orgánicos fijos son compuestos orgánicos que no pueden ser aislados por
destilación, ni por destrucción de la materia orgánica. Todos los fármacos entran en
esta categoría, así como las drogas de abuso, los plaguicidas y una gran cantidad de
sustancias utilizadas en síntesis química y en industria alimentaria, pueden tener
carácter ácido, básico y también están los plaguicidas, las vías de absorción
perjudiciales por las cuales estos tóxicos son más afectadas es la vía digestiva,
respiratoria y cutánea.

Los tóxicos están presentes en cualquier ámbito del planeta, pero se están creando
muchos tóxicos nuevos y con el pasar del tiempo pueden aparecer nuevos riesgos
debido a su mal uso y manipulación, como es el caso de los pesticidas,es por eso que
hay que tener las debidas precauciones ante las intoxicaciones que son a corto y
largo plazo ya que hay la capacidad de acumulación de los agentes tóxicos en
diversos órganos y tejidos del organismo, los cuales pueden ser fatales e incluso nos
pueden ocasionar la muerte.

En la presente actividad de laboratorio , se realizara la identificación de Fenotiazinicos,

Barbitúricos y Benzodiacepinas para ello, se utilizara diferentes reacciones tanto de a la
gota en placa de toque tubo de ensayo como cromatografía en capa fina para poder
evidenciar la presencia de estos.

OBJETIVOS

 Determinar la presencia de Fenotiazinicos por reacción a la gota en placa de

toque / tubo de ensayo y cromatografía en capa fina
 Determinar la presencia de Barbitúricos utilizando la reacción de Parry y
Koppany y cromatografía en capa fina.
 Determinar la presencia de Benzodiazepinas por reacción a la gota en placa de
toque / tubo de ensayo y cromatografía en capa fina.

MATERIALES Y REACTIVOS

 Fecl3 5%
 HCl [ ]
  HCL 6 N
 FPN 5%
 Silica Gel G
 Dragendorff
 Popoff (acido pícrico)
 Glicerina
 NaNO2 0.1%
 Sulfamato de amonio 1%
 N-naftiletilendiamina 0.1%
 Nitrato cobaltoso 5%
 Difenilamina 5%
 Piridina 5%
 Placa de toques
 Tubo de ensayo
 Soporte para cromatografía
 Cocinilla
 Beakers

PARTE EXPERIMENTAL

Fenotiazinicos

1) Prueba del cloruro férrico 1

 Fundamento: Formación de complejos fenólicos con Fe(III), el cual es
intensamente coloreado.
 Técnica operatoria: En un capsula de porcelana se colocan 3 gotas de la
muestra problema (R4) y se adicionan entre 2 a 5 gotas de FeCl3 5%. La
coloración azul violaceo es indicio de una reacción positiva; en caso se vea
esta coloración, se adicionarán 1 a 3 gotas de HCl concentrado con el fin de
constatar que efectivamente se trata de un Fenotiazínico ( el color azul
violáceo permanece)

2) Prueba por FPN

 Fundamento: Test sensible a compuestos fenotiazínicos, dando coloración
rosada para fenotiacinas Cloradas, morado para fenotiacinas fluoradas y
azul para Tioridazina.

 Técnica operatoria: En una capsula de porcelana se colocan 3 gotas de la

muestra problema (R4) y se adicionan entre 2 a 5 gotas de FPN . El
resultado positivo será la coloración roja o marrón rojizo lo que indica
posible presencia de fenotiazinas.
3) CCF

 Fundamento: La muestra a analizar se encuentra en un sistema

compuesto por una lámina base cubierta por una fina capa de
adsorbente (fase estacionaria). La lámina es colocada en una cubeta
cerrada, la cual contiene uno o varios disolventes mezclados, los cuales
ascenderán por capilaridad a través del adsorbente, esto produce un
reparto diferencial de los productos presentes en la muestra entre el
disolvente y el adsorbente.

 Técnica operatoria: En una lámina preparada con silicagel G como

adsorbente inmóvil, la muestra problema R4 es sembrada a una
distancia de 2 cm a partir de un extremo de la lámina mediante toques o
sembrado en un mismo punto por 3 veces con ayuda de un microcapilar,
se deja secar después de colocar la gota en el punto de siembra, tanto el
estándar como la muestra problema. El sistema de solvente a usarse es
el MeOH: NH4OH en proporción (100: 1.5) en la cuba cromatografica. Se
deja correr por aproximadamente 30 minutos. Se deja secar y se usa
como revelador el reactivo FPN. La coloración a rojo o rojo violáceo de
la lámina indica presencia positiva de fenotiazínicos.
Benzodiacepinas

1) Reacción general para alcaloides

a) Ensayo de Dragendorff
 Fundamento: La formación de un precipitado por la interacción entre el
anillo benzínico y el yoduro de bismuto, este precipitado es un yoduro
doble insoluble cuya fórmula general es BiI3B.HI y obtiene una
coloración naranja para benzodiacepinas.

 Técnica operatoria: En una capsula de porcelana se colocan de 3 a 5

gotas de muestra problema (R4) y se agregan de 3 a 5 gotas de reactivo
de Dragendorff. La reacción será positiva cuando el precipitado adquiera
una coloración naranja.

b) Ensayo de Popoff
 Fundamento: Formación de cristales por la interacción entre el
trinitrofenol o ácido pícrico y los benzodiacepinas, se observa una
precipitación de color amarilla que indica una reacción positiva.

 Técnica operatoria: En una capsula de porcelana se colocan de 3 a

5 gotas de muestra problema (R4) y se agregan de 3 a 5 gotas de
reactivo de Popoff. La reacción será positiva cuando el precipitado
adquiera una coloración amarilla.

2) Reacción de diazotación con N-naftiletilendiamina

 Fundamento: Por medio del NaNO2 y en un medio ácido ocurre la
copulación entre el N-naftil etilendiamina y las benzodiacepinas,
formándose una sal de diazonio. La reacción es positiva cuando se
evidencia una coloración azul o azul violáceo.

 Técnica operatoria: En un tubo de ensayo se colocan 5 gotas de

muestra problema (R4) y se agregan 5 mL de HCl, el tubo es llevado a
baño de glicerina por 30 minutos a una temperatura de 125° C.
Culminado el tiempo, el tubo es enfriado y se adicionan 0.1 mL de
NaNO2, se deja reposar por 3 minutos. Luego, se adicionan 0.1 mL de
sulfamato de amonio y se deja reposar por 3 minutos, finalmente se
adiciona N-Naftil etilendiamina. La reacción será positiva cuando se
forme un precipitado de color azul o azul violáceo.
 3) CCF
 Fundamento: La muestra a analizar se encuentra en un sistema
compuesto por una lámina base cubierta por una fina capa de
adsorbente (fase estacionaria). La lámina es colocada en una cubeta
cerrada, la cual contiene uno o varios disolventes mezclados, los cuales
ascenderán por capilaridad a través del adsorbente, esto produce un
reparto diferencial de los productos presentes en la muestra entre el
disolvente y el adsorbente.

 Técnica operatoria: En una lámina preparada con silicagel G como

adsorbente inmóvil, la muestra problema R4 es sembrada a una
distancia de 2 cm a partir de un extremo de la lámina mediante toques o
sembrado en un mismo punto por 3 veces con ayuda de un microcapilar,
se deja secar después de colocar cada aplicacion en el punto de siembra
tanto el estandar como la muestra problema. El sistema de solvente a
usarse es el MeOH: NH4OH en proporción (100: 1.5) en la cuba
cromatografica. Se deja correr por aproximadamente 30 minutos. Se
deja secar y se usa como revelador el reactivo de Dragendorff. La
coloración a naranja de la lámina indica presencia positiva de
benzodiacepinas.

BARBITÚRICOS

1) Reacción de Parry y Koppanyi

 Fundamento: Formación de un complejo coordinado estable con el
núcleo barbitúrico. Una reacción positiva se evidencia con la formación
del complejo coloreado azul violáceo o violeta.
 Técnica operatoria: En una capsula de porcelana se adicionan de 3 a 5
gotas de residuo 2 (R2). Se lleva a evaporación y luego se le agregan 3
gotas de nitrato cobaltoso diluido en etanol y 3 gotas de difenilamina o
isopropilamina en etanol. La reacción positiva es la formación del
complejo azul violáceo o violeta.

2) Reacción de Zwiker
 Fundamento: Formación de un complejo coordinado estable con el
núcleo barbitúrico. Una reacción positiva se evidencia con la formación
del complejo coloreado rojo-violaceo a rosado.

 Técnica operatoria: En un tubo de ensayo se agregan 3 a 5 gotas de

residuo 2 (R2) y se adiciona 1 mL de sulfato de cobre, se agita el tubo y
 luego se agrega 1 mL de piridina en cloroformo, se vuelve a agitar el
tubo. La formación del complejo color rojo-violaceo a rosado indica que
la reacción es positiva para oxo-barbitúricos ( tiobarbituricos es verde;
Hidantoina es azul y derivados de la xantinas es verde)

CCF
 Fundamento: La muestra a analizar se encuentra en un sistema
compuesto por una lámina base cubierta por una fina capa de
adsorbente (fase estacionaria). La lámina es colocada en una cubeta
cerrada, la cual contiene uno o varios disolventes mezclados, los cuales
ascenderán por capilaridad a través del adsorbente, esto produce un
reparto diferencial de los productos presentes en la muestra entre el
disolvente y el adsorbente.

 Técnica operatoria: En una lámina preparada con silicagel G como

adsorbente inmóvil, la muestra problema R2 es sembrada a una
distancia de 2 cm a partir de un extremo de la lámina mediante toques y
goteo en un mismo punto por 3 veces con ayuda de un microcapilar, se
deja secar después de colocar cada aplicación en el punto de siembra
tanto el estándar como la muestra problema. El sistema de solvente a
usarse es el cloroformo (CHCl3 ): Acetona en proporción (8:2) en cuba
cromatografica. Se deja correr por aproximadamente 30 minutos. Se
deja secar y se usa como revelador el reactivo AgNO3 al 1%. La
aparición de manchas blancas indica presencia de posibles barbitúricos.
Se rocía con difenilcarbazona 0.5% en CHCl3 para confirmar presencia
de barbitúricos, una coloración violeta o fucsia reafirma la presencia de
barbitúricos. Otra forma de reafirmar presencia de barbitúricos es
rociando permanganato de potasio 1%, la reacción es positiva para la
presencia de tiobarbitúricos al evidenciarse una coloración amarilla.

COLORACIONES
 CUESTIONARIO

1. ¿Cómo se prepara el reactivo Dragendorff?

2. ¿Cómo se prepara el reactivo FPN?
3.- ¿En que residuo encontramos los barbitúricos?
4.- ¿En qué residuo encontramos las benzodiacepinas?
5.- ¿En que residuo encontramos los Fenotiazinicos?
6. Indique Ud. Una técnica para cuantificar fenotiazinicos.
7.- Indique Ud. Una técnica para cuantificar benzodiacepinas.
8.- Indique Ud. Una técnica para cuantificar barbitúricos.
9.- Indique Ud. en que muestra problema es más factible identificar y cuantificar
barbitúricos, benzodiacepinas y fenotiazinicos en caso de intoxicación aguda.
10.- Indique Ud. En que muestra problema es más factible identificar y cuantificar
barbitúricos, benzodiacepinas y fenotiazinicos en caso de intoxicación crónica.
11.- Indicar el mecanismo de reacción química del ensayo de FPN para
fenotiazinicos.
12.- Indicar el mecanismo de reacción química del ensayo de dragendorf para
barbituricos.
13.- Indicar el mecanismo de reacción química del ensayo de AgNO3 y
difenilcarbazona para barbituricos.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1. Silva O. “Determinación de los tóxicos orgánicos fijos presentes en la

diversidad ecuatoriana que ocasionan intoxicaciones al ser humano”.
Bioquímica y Farmacia. Universidad Técnica de Machala. Ecuador. Setiembre
2016. Citado el 20 octubre 2019. Disponible en
http://repositorio.utmachala.edu.ec/bitstream/48000/7771/1/silva.pdf
2. Morales M. Martínez C. Pérez N. “Intoxicación por Barbitúricos, una mirada
toxicológica”. Facultad de Ciencias Médicas. La Habana, Cuba. Horizonte
sanitario. Vol. 18(2). Julio 2018. Citado 20 octubre 2019. Disponible en
http://www.scielo.org.mx/scielo.php?pid=S2007-
74592019000200111&script=sci_arttext
3. Flanagan R. Brown S. “Manual de procedimientos analíticos toxicológicos para
laboratorios de baja complejidad”. Programa Internacional de Química. OMS.
Génova. 1995. Citado 20 octubre 2019. Disponible en
 http://msal.gob.ar/images/stories/ministerio/intoxicaciones/laboratorios/manual-
procedimientos-analiticos.pdf
4. Moran I. Martínez J. “Intoxicaciones medicamentosas por benzodiacepinas y
barbitúricos”. Toxicología Clínica. Universidad Autónoma de Barcelona. Mayo
2007. Citado 20 octubre 2019. Disponible en
http://www.fetoc.es/asistencia/Toxicologia_clinica_libro.pdf
5. Giannuzzi L. Ferrari L. “Recolección y Almacenamiento de las muestras en el
laboratorio de toxicología clínica y en el análisis toxicológico forense”. Manual
de Técnicas Analíticas en el Laboratorio de Toxicología y Química Forense.
Universidad Nacional de La Plata. Buenos Aires, Argentina. 2006. Citado 20
octubre 2019. Disponible en http://cqfp.pe/wp-
content/uploads/pdf/toxicologia_may_2019/Manual_Toxicologia_editado_oct_2
006_Luis_Ferrari.pdf

RESULTADOS PARA REPORTAR EN EL INFORME

BENZODIAZEPINAS

14.9
Rfmuestra problema= =¿
16
15
Rf estandar= =¿
16

FENOTIAZINICOS
12.3
Rfmuestra problema= =¿
14
12.2
Rf estandar= =¿
14

BARBITURICOS

11.4
Rfmuestra problema= =¿
13
11.6
Rf estandar= =¿
13

VIDEO

https://www.youtube.com/watch?v=fTN60KGxdlM Det de barbitúricos y benzodiazepinas

https://www.youtube.com/watch?v=aruaIgmTwLY Promo 2011

https://www.youtube.com/watch?v=w7G-aPvu1bs Porque Farmacia