INFORME 4: DETERMINACION DE LA CONCENTRACION DE UNA

MEZCLA BINARIA POR ESPECTROSCOPIA DE UV-VISIBLE,

MEDIANTE REGRESION LINEAL MULTIPLE (RLM)

Integrantes
José Pérez
María Codina
Yeisson Cera
Carlos Canencia.

Grupo: 3

Asignatura

Análisis Instrumental

Profesor
Jayson Fals

UNIVERSIDAD DEL ATLANTICO

FACULTAD DE QUIMICA Y
FARMACIA 2020
 INFORME 4: DETERMINACION DE LA CONCENTRACION DE UNA
MEZCLA BINARIA POR ESPECTROSCOPIA DE UV-VISIBLE,
MEDIANTE REGRESION LINEAL MULTIPLE (RLM)
José Pérez, María Codina, Yeisson Cera,
Carlos Canencia
Facultad de Ciencias Básicas, Universidad del
atlántico, Km 7 Via Puerto, Barranquilla, Atlántico.

RESUMEN: Apartir de dos disoluciones madre de KMNO4, 4 mM y K 2 Cr2O7 100 mM

de 25 ml cada una, se preparó 5 disoluciones estándar de KMNO4 y 5 disoluciones
estándar de K2 Cr2O7 (a ciertos volúmenes), para llevarlas a matraces de 25 mL,
también se determinó, y analizó el espectro de absorción para la muestra problema en
el rango de (380 nm- 800nm), que son característicos del KMnO 4 y del K 2 Cr2 O7, esto
se corroboró con el espectro de absorción, en este mismo intervalo de longitud de onda
para un estándar de KMnO4 y K2 Cr2 O7. Seguidamente, Se construyó 3 curvas de
calibrado a las dos longitudes de onda de máxima absorción para los dos componentes
de la muestra. Este procedimiento se presentó en dos momentos, el primero para la
longitud de onda máxima 1 a (440 nm), aquí se midió la absorbancia para los 2 set de
disoluciones estándar, ósea tanto para las disoluciones del KMnO 4, como para las del
K2 Cr2 O7, y también la muestra problema se evaluó a esta longitud de onda, el segundo
paso consistió en realizar el mismo procedimiento anteriormente descrito pero a una
longitud de onda 2 es decir a (560 nm) finalmente se construyó las 2 curvas de
calibrado, y se graficó la absorbancia Versus concentración para los dos componentes.
Mediante la determinación de la ecuación de la recta para la curva de calibrado y
regresión lineal múltiple, se determinó la concentración de la muestra problema.

PALABRAS CLAVES: Solución madre, disoluciones estándar, espectro de

absorción, curvas de calibrado, ecuación de la recta, Regresión lineal simple.

ABSTRACT: From two stock solutions of KMNO4, 4 mM and K2Cr2O7 100 mM of

25 ml each, 5 standard solutions of KMNO4 and 5 standard solutions of K2Cr2O7 (at
certain volumes) were prepared, to be taken into 25 mL flasks, they were also
determined, and analyzed the absorption spectrum for the test sample in the range (380
nm- 800nm), which are characteristic of KMnO4 and K2Cr2O7, this was corroborated
with the absorption spectrum, in this same wavelength interval for a standard of
KMnO4 and K2Cr2O7. Next, 3 calibration curves were constructed at the two
wavelengths of maximum absorption for the two components of the sample. This
procedure was presented in two moments, the first for the maximum wavelength 1 at
(440 nm), here the absorbance was measured for the 2 sets of standard solutions, bone
both for the KMnO4 solutions and for the K2Cr2O7 solutions. and also the test sample
was evaluated at this wavelength, the second step consisted of performing the same
procedure described above but at wavelength 2, that is to say (560 nm), finally, the 2
calibration curves were constructed, and plotted the absorbance Versus concentration
for the two components. By determining the equation of the line for the calibration
curve and multiple linear regression, the concentration of the test sample was
determined.

Key words: Stock solution, standard solutions, absorption spectrum, calibration curves,
equation of the line, Simple linear regression.
1. Introducción: “El Análisis de
Regresión Lineal Múltiple nos permite
establecer la relación que se produce
entre una variable dependiente Y y un
conjunto de variables independientes
(X1, X2, ... XK). El análisis de
regresión lineal múltiple, a diferencia
del simple, se aproxima más a
situaciones de análisis real puesto que
los fenómenos, hechos y procesos
sociales, por definición, son complejos
y, en consecuencia, deben ser
explicados en la medida de lo posible
por la serie de variables que, directa e
indirectamente, participan en su
concreción.”1
“La regresión lineal múltiple representa
una extensión de la regresión lineal
simple en la que podemos incluir más
de un predictor a la vez.” y permite
determinar 2 analitos simultáneamente,
mediante la utilización de operaciones
matemáticas un poco complejas,
adecuación de algunos procesos, pero
sin tener que separar los componentes
de la muestra problema. Es por esta
razón que cuando se desea cuantificar
en un fármaco 2 principios activos
simultáneamente, se puede recurrir a la
regresión lineal múltiple sin separar
dichos analitos, y por tanto sin tener que
recurrir a procesos como la
cromatografía que implica un mayor
gasto y utilización de una cantidad de
disolventes.
La regresión lineal múltiple como
herramienta es fundamental para la
determinación de propiedades de los 2
analitos presentes en las 2 disoluciones,
con esto es probable analizar que está
sucediendo con cada uno de ellos, su
perfil energético, su señal química, en
qué lugar absorbe uno de los
componentes de la muestra, y en qué
lugar lo hace el otro, se puede hacer
análisis por separado para finalmente
obtener una ecuación matemática
fundamental y resolver los dos analitos
simultáneamente. Para el desarrollo del
método analítico, es importante partir
desde la preparación correcta de las
disoluciones madre, continuar con el set
de disoluciones tanto para un
componente como para el otro, hacer las
regresiones lineales, determinar las
ecuaciones, y con ellas llegar a
identificar la concentración de cada uno
de los componentes en la muestra
problema.
Los espectros de absorción, de cada
uno de los compuestos presentes en la
muestra problema deben evaluarse
por separado, para la corroboración la
señal dada por el espectroscopio,
cuando se lo hace con la muestra
problema con los dos componentes
juntos, dicha señal analítica aparecerá
como una señal en conjunto, en la
cual se obtendrá posiblemente 2
máximos de absorción, uno de ellos
asociado al componente 1 y el otro al
componente 2, se debe continuar con
la elaboración de las curvas de
calibrado de los componentes A y B
con la finalidad de determinar las
pendientes, la pendiente se
relacionara íntimamente con el
coeficiente de absortividad molar que
se lo encuentra a partir de regresión
lineal múltiple.
Cabe resaltar la importancia de que
las dos sustancias que están presentes
en la muestra no deben reaccionar
porque el espectro de absorción sería
totalmente diferente, esto implicaría
la formación de nuevos productos y
por tanto la desaparición de las
señales que se necesitaría para el
análisis, cuando las sustancias
reaccionan aparecen nuevas señales
de los productos formados, pero si se
mezclan mantienen los máximos de
los componentes individuales.
Para determinar las absorbancias de
cada uno de los puntos máximos e
igualarlo a la absorbancia de la
mezcla, es necesario comprender que
es lo que está sucediendo en el
máximo de absorción de A y en el de
B, ya que la señal que se obtienen en
cada uno de los componentes va a ser
en caso de que se tratara de A, al
componente A más el componente B
en una longitud de landa de A, y para
el de B, sería el componente B más el
componte de A pero a la longitud de
onda de B, uno de los componentes
puede absorber levemente en la
longitud de onda donde ocurre el
landa máximo del otro componente y
esta pequeña absorción contribuye en
la absorción de la mezcla, por esto la
absorbancia de la muestra va a tener
las dos contribuciones es decir la del
componente A y también la del
componente B, en cada una de las
longitudes de onda máxima donde
absorbe en una máxima o mínima
proporción cada uno de nombrados
componentes. Esto tendrá relación
con las características fisicoquímicas,
formación de enlaces entre otras en
donde un compuesto absorbe mas que
el otro, tanto en el espectro para A,
como en el espectro para B.
El presente laboratorio se realizó con
la finalidad de determinar la
concentración de una muestra
problema, mediante el método de
regresión lineal múltiple, para esto se
estableció 3 espectros de absorción, el
del los compuestos que se utilizó es
decir los del KMnO 4, y del K2 Cr2 O7, y
también el de la muestra problema,
ósea la mezcla de los dos
compuestos, la preparación de 10
disoluciones estándar, 5 para el
KMnO 4, y 5 para el K2 Cr2O7, tomando
alícuotas de disolución madre de los
correspondientes compuestos,
disolviéndolas finalmente en
matraces de 25 mL, fue importante
para la evaluación de las 10
disoluciones tanto para el landa
máximo de absorción de KMnO 4 y
del K2 Cr2O7, también para la
fabricación de las curvas de
calibrado, establecimiento
matemático a partir de la ley de Beer-
Lamber y la relación con todo el
proceso en general, para conocer la
concentración de la muestra
problema… Para el desarrollo de todo
el método fue necesario profundizar
conceptos de regresión lineal
múltiple, correcta elaboración de
gráficos, y la óptima relación de las
ecuaciones con la ley de Beer.
2. PROCEDIMIENTO
EXPERIMENTAL
• Preparación de las disoluciones
madre de KMnO4 y K 2 Cr2 O7
Para la construcción de las curvas de
calibrado de KMnO 4 y K 2Cr2 O7, se
precisó dos sets de disoluciones
madre, una correspondiente al
KMnO 4 y la otra al K2 Cr2O7, para esto
se preparó una disolución madre de 4
mM de KMnO 4 y otra de 100 mM de
K 2 Cr2 O7 cada una de un volumen de
25 ml.
Para realizar el procedimiento
anterior se estableció la cantidad en
gramos que debía utilizarse de
KMnO 4 y de K2 Cr2O7 , teniendo en
cuenta la pureza al 98%, luego se
preparó y determinó la concentración
de las disoluciones estándar, La
dilución de las soluciones estándar a
partir de cada una de las disoluciones
madre se realizó de la siguiente
manera.
 Tabla 1. Relación de 5 disoluciones Se analizó el espectro de absorción de
estándar, preparadas a partir de la muestra problema e identifico las
una solución madre de KMnO4, 4 longitudes de onda donde se
mM en 25 mL. presentaron los máximos de
absorción (landa máxima λ 1 y la
Volumen en mL Volumen landa máxima λ 2), característico del
tomado de la del matraz KMnO 4 y del K2 Cr2 O7, luego se
solución madre de corroboro esta información,
KMnO4 determinando el espectro de
1.0 25 ml absorción, en este mismo intervalo de
longitud de onda para un estándar de
2 25 ml
KMnO 4 y K2 Cr2 O7.
3 25 ml
4 25 ml Fue importante tener en cuenta que
5 25 ml los máximos de absorción en la
muestra problema son característicos
de los componentes puros, si y solo si
Tabla 2. Relación de 5 disoluciones
los componentes no reaccionan,
estándar, preparadas a partir de
mediante esto los coeficientes de
una solución madre de K2Cr2O7,
absortividad molar no cambian y por
100 mM en 25 mL
esto se puede determinar la
concentración de cada uno de los
Volumen en mL Volumen componentes simultáneamente
tomado de la del matraz mediante regresión múltiple.
solución madre de
K2Cr2O7 • Curvas de calibrado y regresión
0.1 25 ml lineal múltiple:
0.2 25 ml
0.3 25 ml Se construyo 3 curvas de calibrado a
0.4 25 ml las dos longitudes de onda de máxima
absorción (landa máxima 1 y landa
0.5 25 ml
máxima 2) para los dos componentes
de la muestra.
Se tomó una alícuota de la muestra
problema, se la llevo a una celda de Primero se seleccionó en el software
plástico de 1 cm de paso óptico, la primera longitud de onda máxima
luego se tomó otra celda y se la lleno (440 nm) y se midió la absorbancia
hasta sus ¾ partes de su capacidad para los 2 set de disoluciones
con agua destilada, para la muestra estándar es decir tanto las
blanco, seguidamente se llevo las disoluciones del KMnO 4, como para
celdas al espectrofotómetro para ello las del K 2 Cr2 O7, también el de la
se colocó la celda con la muestra muestra problema se evaluó a esta
blanco en el compartimiento para este longitud de onda, seguidamente se
tipo de muestra y la celda con la construyó las 2 curvas de calibrado,
muestra problema en su respectivo para ello se graficó absorbancia
compartimiento. Después se Versus concentración para los dos
determino el espectro de absorción componentes.
para la muestra problema en el rango
de (380 nm-800nm) Como segundo paso se seleccionó en
el software la segunda longitud de
 onda máxima (560 nm) y se midió la Cálculos de los gramos de KMnO4
absorbancia para los 2 set de necesarios para preparar la disolución
disoluciones estándar es decir tanto de 4 mM, (25 mL) al 98 % de pureza.
las disoluciones del KMnO 4, como
para las del K 2 Cr2 O7, también la Datos
muestra problema se evaluó a esta Volumen: 25 mL = 0,025 L
longitud de onda, seguidamente se Concentración: 4 mM = 0,004 M
construyó las 2 curvas de calibrado, Pureza 98%
para ello se graficó absorbancia Peso Molecular: 158.034 g/mol
Versus concentración para los dos
componentes.
W= 0,004 molL KMnO4* 158,034 g/1
Como tercer paso, se determinó la mol*0,025L* 98 g/100 g=0.015
ecuación de la recta para cada curva
de calibrado, se tuvo en cuenta que (ε 0,015 g KMnO4
x b), era igual a la pendiente, se
procedió a resolver las siguientes
Concentraciones de las
ecuaciones
disoluciones estándar de K Cr O 2 2 7

100 nM en 25 mL

V1 x C1=V2 x C2

Mediante la regresión lineal múltiple V estándar x C estándar= V disolución

se determino la concentración de la x C disolución
muestra problema y se comparó la
concentración con la teórica C disolución = V estándar x C
entregada por el profesor estándar V disolución 2.
3. RESULTADOS Y DISCUCION
Disolución 1
1. Preparación de la disolución madre
0.1 𝑚𝐿 𝑥100𝑚𝑀
𝐶= = 0.4 𝑚𝑀
de KMnO4 y K Cr O 2 2 7 25 𝑚𝐿

Cálculos de los gramos de K Cr O 2 2 7

Disolución 2
necesarios para preparar la disolución 0.2𝑚𝐿 𝑥 100𝑚𝐿
de 100 mM, (25 mL) al 98 % de pureza. 𝐶= = 0.8 𝑚𝑀
25𝑚𝐿

Datos Disolución 3
Volumen: 25 mL = 0,025 L
0.3 𝑚𝐿 𝑥 100 𝑚𝑀
Concentración: 100 mM = 0,1 M 𝐶= = 1.2𝑚𝑀
25 𝑚𝐿
Pureza 98%
Peso Molecular: 294.185 g/mol Disolución 4
𝑚𝑜𝐿 294.68 𝑔 98
𝑊 = 0.1 . .0.025 L. =0.72 0.4 𝑚𝐿 𝑥 100𝑚𝑀
𝐿 1 𝑚𝑜𝑙 100 𝐶= 25 𝑚𝐿 = 1.6 𝑚𝑀

0.72 g de K Cr O
2 2 7
Disolución 5 4. Espectros de absorción de la
muestra problema (Cr + Mn), del
0.5 𝑚𝐿 𝑥 100𝑚𝑀
𝐶= = 2 𝑚𝑀 dicromato (Cr) y del permanganato
25 𝑚𝐿
(Mn).
2.1. Concentraciones de las
disoluciones estándar de
KMnO4 4 mM en 25 mL

V1 x C1=V2 x C2

V estándar x C estándar= V disolución

x C disolución

Disolución 1
1 𝑚𝐿 𝑥 4 𝑚𝑀 La grafica anterior representa los espectros
𝐶= = 0.16 𝑚𝑀
25 𝑚𝐿 de absorción de la muestra problema (Cr +
Mn), de dicromato (Cr) y de permanganato
Disolución 2 (Mn). En un rango de longitud de onda de
400 nm a 700 nm.
2 𝑚𝐿 𝑥 4𝑚𝑀
𝐶= = 0.32 𝑚𝑀
25𝑚𝐿 5. Curva de calibrado: Abs vs
(estándar) para cada uno de los
Disolución 3 estándar preparados de los
componentes individuales a las dos
3 𝑚𝐿 𝑥 4𝑚𝑀
𝐶= = 0.48 𝑚𝑀 longitudes de onda de máxima
25 𝑚𝐿
absorción (A maxı y Amax2).
Disolución 4 Curva de calibrado para el K Cr O . 2 2 7

4𝑚𝐿 𝑥 4𝑚𝑀 A 440 nm.

𝐶= = 0.64 𝑚𝑀
25𝑚𝐿

Disolución 5
5𝑚𝐿 𝑥 4 𝑚𝑀
𝐶= = 0.8 𝑚𝑀
25𝑚𝐿

El grafico anterior, muestra la relación

Absorbancias vs concentración a 440 nm para el
dicromato de potasio, donde se puede observar
que tiene una tendencia lineal.
 Curva de calibrado para el KMnO . A
440 nm..
El grafico anterior, muestra la relación
Absorbancias vs concentración a 440 nm para el
permanganato de potasio, donde se puede
observar que tiene una tendencia lineal .
Curva de calibrado para el K Cr O . A 2 2 7
560 nm.
El grafico anterior, muestra la relación Absorbancias
vs concentración a 560 nm para el dicromato de
potasio, donde se puede observar que tiene una
tendencia lineal.
6. Determinación de la concentración
de la muestra problema mediante
regresión lineal múltiple, mostrar el
tratamiento matemático utilizado.
𝐴1 = ε𝑥1 𝑥 𝑏 𝑥 𝐶𝑥 + ε𝑦1 𝑥 𝑏 𝑥 𝐶𝑦
𝐴2 = ε𝑥2 𝑥 𝑏 𝑥 𝐶𝑥 + ε𝑦2 𝑥 𝑏 𝑥 𝐶𝑦
𝐴560 = ε𝑥560 𝑥 𝑏 𝑥 𝐶𝑥 + ε𝑦560 𝑥 𝑏 𝑥 𝐶𝑦
𝐴440 = ε𝑥440 𝑥 𝑏 𝑥 𝐶𝑥 + ε𝑦440 𝑥 𝑏 𝑥 𝐶𝑦
4
x = dicromato de potasio (el K 2 Cr2 O7 )
y = permanganato de potasio (KMnO 4 )
Datos:
Absorbancia de MP a 560 nm = 0.15
Absorbancia de MP a 440 nm = 0.56
Coeficiente de absortividad molar del
K2 Cr2 O7 a 560 nm = 0.11
Coeficiente de absortividad molar del
K2 Cr2 O7 a 440 nm = 0.2175
Coeficiente de absortividad molar del
KMnO 4 a 560 nm = no registra
Coeficiente de absortividad molar del
KMnO 4 a 440 nm = 1.1625
Concentración del permanganato de
potasio.
Hallamos la concentración de esta
muestra con el uso de la ecuación de la
gráfica.
y = 1.1625x + 0.036…. la absorbancia
es y que toma un valor para la longitud
de onda 440 nm de 0.56
Despejamos x de la ecuación.
0.56−0.036
𝑥= = 𝟎. 𝟒𝟓𝒎𝑴 Esta es la
1.1652
concentración de la muestra
problema.
Concentración del dicromato de
potasio.
0,2175𝑥 + 0,035𝑦 = 0.56
0.11𝑥 + 0,012𝑦 = 0.15
 0,2175𝑥 + 0,035(0,45) = 0.56
0,11𝑥 + 0,012(0,45) = 0,15
0,275𝑥 + 0.015 = 0,56
0,2359𝑥 + 0,0054 = 0.15
0.5109𝑥 + 0.0204 = 0.71
0,5109𝑥 = 0,71 − 0,0204
0,5109𝑥 = 0.6896
0,6869
𝑥=
0.5109
𝑥 = 1.34 La concentración del
dicromato de potasio en la muestra
problema es de 1. 34mM.
CONCLUSIONES
• La regresión lineal múltiple, permite
determinar 2 analitos
simultáneamente, mediante
utilización de operaciones
matemáticas un poco complejas,
adecuación de algunos procesos,
pero sin tener que separar los
componentes de la muestra
problema.
• Los espectros de absorción, de
cada uno de los compuestos
presentes en la muestra problema
deben evaluarse por separado,
para la corroboración la señal
dada por el espectroscopio,
cuando se lo hace con la muestra
problema con los dos
componentes juntos, dicha señal
analítica aparecerá como una
señal en conjunto.
• las dos sustancias que están
presentes en la muestra no deben
reaccionar porque el espectro de
absorción sería totalmente
diferente, esto implicaría la
formación de nuevos productos y
por tanto la desaparición de las
señales que se necesitaría para el
análisis.
• Para la determinación de la
ecuación matemática y su misma
resolución, debe evaluarse las
disoluciones estándar de KMnO4,
K2 Cr2 O7 y la de la muestra
problema a las dos landas
máximo de absorción, es decir a
440 nm, tomado como landa
máxima 1, y a 560 nm
correspondiente a landa máximo
2 de absorción, estos valores
corresponden respectivamente a
la longitud de onda a la cual se
cumple la ley de Beer en su
máxima expresión para el
KMnO 4, y para el K2 Cr2 O 7.
AGRADECIMIENTO
Agradecimiento a la Facultad de
Ciencias básicas de la Universidad
la
del Atlántico por el préstamo del
laboratorio de análisis instrumental y
de los elementos y equipos que ahí se
encuentran.
BIBLIOGRAFIA
1. MARIA JOSE RODRIGUEZ
JAUME, RAFAEL MORA
CATALA, estadística
informática, casos y ejemplos con
el spss, 2001, Editorial, España,
Universitat d´Alacant
/ Universidad de Alicante, Servicio de
Publicaciones, paginas 1-2.
2. Cristina Gil/ ciencia de datos
R” definición de regresión lineal
múltiple” en línea 8 de julio de
2020/ disponible en
https://rstudio-pubs-
static.s3.amazonaws.com/386777_ce8f
66f8a49a403da721af05d06b2804.html
#introduc ci%C3%B3n

3. Willard, H. H., Merrit, L. Jr., Dean,

J. A. y Settle, F. A. "Métodos
Instrumentales De Análisis". Grupo
Editorial Iberoamérica. México, D.F.
1991.koog.-Holler Nieman, Análisis
Instrumental, quinta edición, Mc Graw
Hill, 2001