MACROPROCESO RECURSOS E INFRAESTRUCTURA Y

LABORATORIOS
Nombre del Proceso:
CODIGO: LA-FM-007
GESTIÓN DE LABORATORIOS
Nombre del Documento: VERSION: 5
FORMATO PRACTICAS DE
FECHA: 18/junio/2021
LABORATORIOS

GUÍA DE LABORATORIO DE BIOQUÍMICA

Unidad Temática: Sistemas amortiguadores en sistemas biológicos
COMPETENCIAS DISCIPLINARES
Guía No.

3 Determina el pka de un aminoácido analizando su curva a partir de una

titulación potenciométrica y aplica el concepto a sistemas biológicos
1 3
sesiones Semana
Horas de trabajo
COMPETENCIAS GENÉRICAS
2 horas con X horas
docente Autónomas
Propone y valida representaciones adecuadas de situaciones o
fenómenos, para generar predicciones y contrastarlas a través de
Tipo de trabajo herramientas teóricas y conceptuales

Grupal X Individual
Laboratorio Laboratorio de bioquímica
requerido
Introducción
Sesión 3. ¿Qué haremos en la sesión? ¿Cómo lo haremos?

Para la asignatura de bioquímica se ha establecido para la sesión 3 la práctica de laboratorio

denominada: Titulación de potenciométrica de aminoácidos. En esta sesión se abordará las
subtemáticas; Ecuación de Henderson-Haselbach (pK) y principales sistemas amortiguadores y
Estructuras de aminoácidos, efecto amortiguador y curvas de titulación. En esta práctica el
estudiante realizará una titulación potenciométrica de un aminoácido. Para este fin, se utilizará 30
mL de una solución de un aminoácido desconocido y se adicionará 1 gota de HCl, luego se
determinará el pH. Posteriormente se adicionará 2 mL de NaOH 0.25 y se determinará el pH
nuevamente, este último paso se repetirá repetidamente hasta alcanzar un pH igual a 12. Con los
datos obtenidos se realizará un gráfico que le permitirá determinar el pK y pI y a su vez se podrá
determinar el aminoácido desconocido. A partir de los resultados obtenidos el estudiante resolverá
una serie de preguntas que le permitirán afianzar sus conocimientos en la unidad temática y
subtemáticas de la sesión.

Subtemas:
1)Ecuación de Henderson-Haselbach (pK) y principales sistemas amortiguadores.
2)Estructuras de aminoacidos, efecto amortiguador y curvas de titulación 

Bibliografía recomendada

Tema Subtema Referente bibliográfico

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1)Ecuación  Stryer, L. (1988). Bioquímica. Universidad del Rosario.

de Hernández, A. (2011). Valoraciones potenciométricas ácido-
Henderson- base. Granada, España: Universidad de Granada.
Haselbach  Alişkan, I. y Uysal, M. (2016). State-space approach to pH titration
(pK) y curve. Journal of the Faculty of Engineering and Architecture of Gazi
principales University, 31(3):717-725 (Recurso de internet - Scopus).
sistemas  Pardo, J. P., y Matuz, D. (2014). El uso de la ecuación de
Sistemas amortiguad Henderson-Hasselbalch para el cálculo del pH en sangre. REB.
amortigua ores. Revista de Educación Bioquímica, 1(2): 48 (Recurso de internet).
dores en
sistemas  Muñoz Portero, M. J. (2015). Método de la primera derivada para
biológicos la determinación del punto final en valoraciones potenciométricas.
2)Estructura
 Skoog, D. A., Holler, F. J., Nieman, T. A., & Maria del Carmen
s de
(trad.) Martin G" mez. (2001). Principios de análisis instrumental.
aminoácido
 Quesada, S. (2007). Manual de experimentos de laboratorio para
s, efecto
amortiguad Bioquímica. En S. Quesada, Manual de experimentos de laboratorio
para Bioquímica (págs. 16-17).
or y curvas
de  Wahyuni, T.S. y Purwanto, K.K. (2020). Students' conceptual
titulación  understanding on acid-base titration and its relationship with drawing
skills on a titration curve. Journal of Physics: Conference Series. DOI:
10.1088/1742-6596/1440/1/012018 (Recurso de internet).
Palabras clave
Aminoácidos
Titulacion
Buffers
Amortiguadores fisiólogicos
Marco conceptual o referencial
Una de las características más importantes de los aminoácidos deriva de su capacidad de
comportarse como ácido o base dependiendo del pH del medio (Anfoterismo) ya que les brinda la
posibilidad de funcionar como amortiguadores de pH en sistemas fisiológicos.

1. ECUACIÓN DE HENDERSON-HASSELBACH
Esta ecuación de permite calcular el pH de una mezcla amortiguadora conociendo su composición.
Para un amortiguador compuesto de un ácido débil y una sal de su base conjugada, se considera
que la concentración de ácido libre es aproximadamente igual a la del ácido total, y la
concentración del ion base conjugada coincide con la concentración de la sal. Con ello, La
Ecuación de Henderson-Hasselbach presentada en la (figura 1), expresa que el pH de una
solución amortiguadora se calcula sumando al pK del ácido, el logaritmo de la relación
concentración de sal / concentración de ácido, es decir:

Figura 1. Ecuación Henderson-Hasselbalch

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2. AMINOÁCIDOS

3. DETERMINACIÓN DEL pK DE LOS AMINOÁCIDOS

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Se adicionan sucesivamente cantidades de 2,0 mL de NaOH 0,25 M

midiendo el valor de pH correspondiente hasta obtener valores en un
rango de pH de 1,5 a 12

Presaberes Requeridos.
Para el desarrollo de la práctica es necesario que es estudiante previamente tenga conocimiento
de los siguientes conceptos:

pH
solución amortiguadora
Aminoácido
pKa
Titulación potenciométrica
Ecuación de Henderson-Hasselbach
Solución Buffer
Equilibrio ácido-base
Importancia de los amortiguadores en sistemas biológicos

Actividad de trabajo independiente

Los puntos 1 al 3 son trabajo grupal, y el punto 4 es trabajo individual y se entregará de
acuerdo con las indicaciones del docente

A continuación, se relacionan una serie de preguntas que debe desarrollar previo a la práctica de
laboratorio.

1. En el laboratorio dos de los frascos que contienen los aminoácidos perdieron la etiqueta por lo
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que para su identificación se realiza la titulación potenciométrica de uno de ellos, obteniendo los
siguientes datos:

X Y media X Y´
V NaOH (mL) pH (X2+X1)/2 ΔpH/ΔV
0 1,54
1 1,67 0,5 0,13
2 1,81 1,5 0,14
3 1,92 2,5 0,11
4 2,09 3,5 0,17
5 2,3 4,5 0,21
6 2,53 5,5 0,23
7 2,87 6,5 0,34
8 3,98
9 8,24
10 8,68
Se realiza la titulación
11 8,95
potenciométrica 12 9,15
añadiendo volúmenes 13 9,35
sucesivos de NaOH y 14 9,59
midiendo los respectivos 15 9,86
valores de pH 16 10,2
17 11,04
18 11,83
19 12,09

a. Realice la gráfica de la curva de titulación (pH vs ml NaOH), sobre esta identifique los
valores de pK y pI.

a. Indique cuales son los pK y el Pi según las gráficas.

____________________________________________________________________________
b. Según el aminoácido titulado (glutamina), dibuje las tres especies iónicas.
Catión zwitterion Anión
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2. Mencione las fuentes consultadas para realizar la consulta. Use normas APA
 ____________________________________________________________________________
 ____________________________________________________________________________

3. Complete la información de riesgos y seguridad de los reactivos que utilizará en la práctica

de laboratorio

RIESGOS Y SEGURIDAD: FRASES H & P (Dibuje los pictogramas correspondientes de cada

reactivo)

Frases H
h314:provoca quemaduras graves en la piel y lesiones oculares graves.
h290: puede ser corrosivo para los metales.
h335: puede irritar las vías respiratorias.

Frases P
p280: llevar guantes/prendas/gafas/máscara de protección
p301: en caso de ingestión
p330: enjuagarse la boca
p331: no provocar el vómito
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p305: en caso de contacto con los ojos

p351: aclarar cuidadosamente con agua durante varios minutos
p338: quitar las lentes de contacto, si lleva y resulta fácil. seguir aclarando

4.Desarrolla la actividad de trabajo autónomo individual “Sistemas amortiguadores en

sistemas biólogicos” que se encuentra en el módulo 3 de la plataforma canvas

Procedimiento de la práctica
PROCEDIMIENTO: Titulación potenciométrica de un aminoácido.

Adicionar 2 mLNaOH
0,25 M

INFORME LABORATORIO DE BIOQUÍMICA No 3

Grupo 1. 4. Nota
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Integrantes
2. 5.

3. 6.

Resultados obtenidos
Complete las tablas siguientes de acuerdo con las observaciones realizadas y los
resultados obtenidos.

Tabla 1: Resultados titulación potenciométrica

X Y media X Y´ X Y media X Y´
V NaOH (mL) pH (X2+X1)/2 ΔpH/ΔV V NaOH (mL) pH (X2+X1)/2 ΔpH/ΔV

Análisis e interpretación de resultados

1. Con los datos obtenidos, realice sobre una hoja de papel milimetrado, realice las siguientes
graficas
a. pH vs Volumen de NaOH (mL) adicionado (curva de titulación).
Cada gráfica debe incluir:
 Título de la gráfica.
 Colores para diferenciar la curva de titulación y la primera derivada
 Sobre las gráficas indicar y señalar los valores de pK y pI
Tome como REFERENCIA la gráfica siguiente para ubicar los ejes y el título. Recuerde que
debe usar todo el espacio del que dispone para hacer la gráfica.
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2. De acuerdo con los valores de pK y pI obtenidos indique cual fue el aminoácido titulado.
____________________________________________________________________________

3. Dibuje las tres especies iónicas del aminoácido titulado.

Catión zwitterion Anión

4. Mediante la comparación de la estructura de la lisina y el aminoácido titulado explique por qué

algunos aminoácidos pueden presentar tres valores de pK.
____________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________
5. Con sus propias palabras explique por qué los aminoácidos pueden ejercer acción
amortiguadora de pH.
____________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________

CAUSAS DE ERROR Y ACCIONES PARA OBTENER MEJORES RESULTADOS.

De acuerdo con el error que se menciona a continuación, indique como puede influir este error en
el resultado y en la conclusión final.

Error 1: Un grupo de estudiantes inició tarde su práctica de laboratorio y registró pH hasta cuando
el pH fue igual a 8,5. Respecto a lo anterior complete:
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Como influye el error en la determinación de los valores de pK y pI:

_______________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________
Que conclusión puede obtener a partir de un gráfico obtenido hasta un pH igual a 8,5:
_______________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________

Conclusiones
De forma concreta y coherente escriba dos conclusiones que evidencien el aprendizaje adquirido
en la sesión de clase.
 _________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________
 _________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________

De acuerdo con el trabajo realizado en esta práctica de laboratorio en un párrafo de manera

concreta responda de forma implícita las siguientes preguntas:
¿Cuál fue el problema a solucionar?
¿Qué estrategias utilizó para solucionar el problema?
¿Cuál fue el aprendizaje más significativo que obtuvo en esta práctica?
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Rubrica de evaluación
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NOMBRE ASISTENCIA NOTA

1.
ESTUDIOSOS

2.
3.
4.
5.
6.
CRITERIOS 0,0 – 1,5 1,6 - 2,4 2,5 – 3,5 3,6 – 4,2 4,3 – 5,0 NOTAS
1.
Reconoce y mantiene el No porta E.P.P. Porta de forma Porta de forma
Procedimental

Porta los E.P.P. Porta los E.P.P. 2.

cumplimiento de las Presenta incompleta E.P.P. incompleta E.P.P.
Presenta algunas Presenta
conductas que Presenta conductas Presenta algunas 3.
(5%)

normas de bioseguridad conductas que conductas que

ponen en riesgo su que ponen en riesgo conductas que
en el laboratorio (uso ponen en riesgo su promueven un 4.
integridad y la de su integridad y la de ponen en riesgo su
E.P.P, manipulación integridad y la de trabajo seguro en
sus compañeros. sus compañeros. integridad y la de 5.
sus compañeros. el laboratorio.
reactivos y residuos) sus compañeros
6.
Presenta Presenta algunas 1.
Demuestra manejo No maneja las Presenta errores
INDIVIDUAL

imprecisiones imprecisiones que 2.

Cognitiva

conceptual y temáticas ni conceptuales y Presenta un

conceptuales que corrige
(40%)

procedimientos procedimentales que manejo conceptual 3.

procedimental de las requeridos para la dificultan la
afectan adecuadamente
y procedimental
temáticas desarrolladas moderadamente la para la 4.
comprensión de la comprensión de la adecuado.
en el trabajo autónomo. temática. temática.
comprensión de la comprensión de la 5.
temática. temática.
6.
Demuestra una actitud 1.
acorde al trabajo de Participa
No participa en el Participa de forma Participa 2.
Socio afectiva

laboratorio parcialmente en el Participa en el

desarrollo de la fluctuante en el activamente en el
promoviendo el trabajo desarrollo de la desarrollo de la 3.
practica ni la guía, desarrollo de la desarrollo de la
(5%)

práctica, práctica,
cooperativo (disposición, incumple con las práctica,
incumpliendo incumpliendo
práctica, 4.
normas de convivencia, normas básicas de incumpliendo cumpliendo las
algunas normas algunos aspectos
uso adecuado de convivencia en normas básicas de normas de 5.
básicas de convivenciales.
clase. convivencia. convivencia.
dispositivos convivencia 6.
electrónicos)

CRITERIOS 0,0 – 1,5 1,6 - 2,4 2,5 – 3,5 3,6 – 4,2 4,3 – 5,0 NOTAS
Registran de forma
ordenada los datos Registra resultados
Procedimental

obtenidos en la práctica No registra Registra resultados Registra resultados

Registra resultados de forma
resultados, ni de forma ordenada de forma ordenada
de laboratorio y analizan de forma incompleta, ordenada, explica y
(20%)

evidencia relación y presenta y presenta

los resultados o explicación de los
no presenta
explicaciones explicaciones de
analiza los datos
proporcionando explicación o análisis obtenidos a partir
fenómenos básicas de los los datos
explicaciones lógicas y de los mismos. de cálculos,
observados. datos obtenidos. obtenidos
postulados o leyes.
coherentes de los
mismos.
No reconoce los Explica resultados Analiza resultados
Reconoce los Interpreta
Procedimental

resultados atípicos obtenidos, atípicos, identifica

Evalúan situaciones o resultaos atípicos resultados
inesperados, se le identifica variables variables
obtenidos, identifica atípicos, identifica
(10%)

causas de error
GRUPAL

dificulta identificar que influyen en el estableciendo las

algunas variables sin algunas variables
presentadas en el las variables que proceso realizado relaciones de
atribuir relaciones de estableciendo
desarrollo de la práctica influyen en el estableciendo causalidad
causalidad relaciones de
proceso relaciones de presentes en el
adecuadas. causalidad básicas.
desarrollado causalidad. procedimiento.
Evidencian un
desarrollo total de la
Evidencian un Evidencian un competencia,
No se evidencia el No se evidencia el
desarrollo parcial desarrollo parcial explican
desarrollo de la desarrollo de la
de la competencia, de la competencia, satisfactoriamente
Reflejan el conocimiento competencia, son competencia, son
Cognitiva

son descriptivas y son especificas en los resultados y los

muy generales y descriptivas y
(20%)

adquirido en la evidencian un la temática relaciona con

descriptivas, se evidencian un
construcción de manejo conceptual trabajada, explican postulados y leyes
limitan a relatar manejo conceptual demostrando
conclusiones. que permite satisfactoriamente
hechos que no básico que no explica apropiación del
explicar los los resultados y los
evidencian los fenómenos conocimiento,
fenómenos relaciona con
aprendizaje. estudiados. haciendo
observados. postulados y leyes.
transferencia a otros
fenómenos.
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