Guia de Laboratorio

Guía de Practicas de Biología Celular y Molecular FAMURP
PRACTICA Nº 5

Movimiento de Cilios y Flagelos

Introducción:

Los flagelos y cilios son estructuras piliformes ancladas por uno de sus extremos y capaces de
ejecutar diversos movimientos con su extremo libre, desempeñan un importante papel en la
locomoción. Se originan a partir de los cuerpos basales que están formados por nueve tripletes
fusionados de microtúbulos sin ningún microtúbulo central, denominándose centriolos; a partir de
los cuales se proyectan nueve pares de microtúbulos fusionados formando un anillo, cuya parte
central esta formado por un par que no se encuentra fusionado. La energía requerida para el
movimiento la proporciona la molécula de ATP que son producidas por las mitocondrias que se
encuentran cerca de los cuerpos basales.

Las células epiteliales que presentan cilios en su parte apical, les permite mover el liquido y
partículas sobre la superficie del tejido. En la mayoría de los epitelios ciliados las células pueden
tener hasta varios centenares de cilios dispuestos en hileras de manera ordenada. Un ejemplo donde
podemos encontrar cilios es en el área traqueobronquial en donde barren moco y partículas
atrapadas hacia la orofaringe, en donde son deglutidos por la saliva y eliminados del organismo. En
las trompas uterinas los cilios ayudan a transportar óvulos y líquido hacia el útero.

Cuando los cilios son dañados o las células epiteliales que los poseen pueden impedir el movimiento
ciliar, para el caso del tracto respiratorio, la parálisis del epitelio ciliado que lo recubre puede
contribuir a una mayor incidencia de infecciones respiratorias debido a que los cilios no pueden
movilizar el moco que atrapa a las bacterias.

En cuanto a las células que poseen flagelo encontramos a los espermatozoides que se forman en los
túbulos seminíferos.
Dentro de los protozoarios que presentan estas estructuras tenemos el Paramecium y Balantidum,
que presentan cilios y los tripanosomas y la Euglena que poseen flagelos.

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II) OBJETIVOS

Al finalizar la práctica el alumno será capaz de:
• Describir el movimiento de cilios y flagelos.
• Explicar las funciones de cilios y flagelos.

III) MATERIALES:

Muestra de semen.
Agua estancada.
Material audiovisual.

IV) PROCEDIMIENTO:

a) Observación de flagelos
1. Se diluye el semen humano con suero fisiológico, mezclando una gota de semen y tres de
suero.
2. Se coloca una gota de la dilución anterior en el portaobjeto y cubra con una laminilla.
3. Observe al microscopio a 10 y 40 la forma y el movimiento de los espermatozoides.
4. Regule la entrada de luz, para mejorar el contraste.

b) Observación de cilios
1. Se coloca una gota de agua estancada en una lamina portaobjeto y cubrir con un cubreobjeto.
2. Llevar al microscopio y observar con el objetivo de 40 el movimiento de los cilios de los
protozoarios.
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V) CUESTIONARIO:

1. ¿Qué función tiene el flagelo en el movimiento de los espermatozoides?
2. De ejemplos de células humanas que presentan cilios y flagelos. ¿En que tipo de tejidos se
localizan y cual es la función que tienen este tipo de células?
3. ¿Cómo se llaman las proteínas que forman parte de los cilios y flagelos?

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PRACTICA Nº 6

GLICOCALIX: GRUPOS SANGUÍNEOS

I) INTRODUCCION

Receptores de membrana:
Para la captación y transmisión de las señales las células disponen de proteínas receptoras. Muchas
de estas proteínas integran la membrana plasmática, desde donde captan las señales que llegan de
los alrededores. Los receptores de hormonas lipófilas son los únicos que actúan en forma disuelta.

Fundamento de la acción de los receptores:
Los receptores ubicados en las membranas pueden subdividirse en tres segmentos con diferentes
funciones.
El dominio receptor: reacciona específicamente ante una señal determinada. Esa señal puede ser de
naturaleza puramente física.
Los receptores mecánicos: participan entre otras cosas en la audición y en la regulación de la
presión.
Los canales iónicos que reaccionan ante potenciales de acción.
Sin embargo la mayor parte de los receptores no reaccionan ante estímulos físicos sino ante
moléculas señal. Los receptores de dichas señales químicas contienen en su porción receptora sitios
de unión que son complementarios de los respectivos ligandos.

La Aglutinación es cuando la acción del anticuerpo está dirigida a antígenos que están en la
superficie o forman parte de la membrana de una célula, el anticuerpo produce su agregación, dando
lugar al fenómeno visible denominado aglutinación.

Reacción de Aglutinación

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Grupos Sanguíneos: tanto los eritrocitos como los leucocitos poseen en su membrana glucoproteínas
que son antígenos de grupos sanguíneos. Se han encontrado en la membrana de los eritrocitos
humanos, un mínimo de 30 antígenos comunes y varios ciento de antígenos menos frecuentes. La
mayoría de estos últimos son débiles y su importancia principal radica en el estudio de la herencia de
los genes ya que se encuentran bajo estricto control genético transmitiéndose de padres a hijos de
acuerdo con las leyes de Mendel. Por esto se emplean para: el establecimiento de la paternidad e
investigaciones semejantes en medicina legal, antropología, en los transplantes de órganos y en
terapéutica transfusional. De todos los sistemas sanguíneos hay dos grupos importantes de
antígenos: el sistema ABO y el sistema Rh.

El tipo de sangre A tiene la proteína A sobre sus eritrocitos, el tipo B tiene la proteína B y el tipo O no
tiene ninguna. Además cada tipo sanguíneo lleva anticuerpos en el plasma para las proteínas que no
están presentes en sus propios eritrocitos por ejemplo: Una persona con sangre tipo A tiene
anticuerpos para la proteína B. Si una persona con sangre tipo A recibe en donación sangre tipo B,
los anticuerpos para B atacan a los eritrocitos de la sangre donada ocasionando que se aglutinen y
tapen pequeños vasos sanguíneos, en ocasiones con resultados fatales.

Un ANTIGENO es toda sustancia que al introducirse en un organismo viviente lo induce a formar
anticuerpos que reaccionan específicamente con los antígenos que provocaron su síntesis.
En la membrana de los eritrocitos y leucocitos encontramos antígenos que nos ayudaran a definir el
grupo sanguíneo.

Los ANTICUERPOS son proteínas pertenecientes al grupo de las gamma-globulinas o
inmunoglobulinas, constituidas por la asociación de cuatro cadenas polipeptídicas unidas entre sí
mediante puentes disulfuro, dos cadenas se denominan pesadas y las otras dos ligeras. A su vez,
cada una de las cadenas ligeras y pesadas, incluye una región variable, cuya secuencia de
aminoácidos es peculiar de cada anticuerpo, y una región constante, con la misma secuencia en
todos los anticuerpos. Estos al reaccionar con un antigeno bloquea la acción de este constituyendo un
mecanismo de defensa contra agentes extraños al mismo.

Clases de inmunoglobulinas: gamma (Ig G), alfa (IgA), delta (Ig D), épsilon (Ig E) y mu (Ig M).
Ig G:
§ Se encuentran abundantes en el suero.
§ Promueven la fagocitosis en el plasma.
§ Activan el sistema del complemento.
§ Son los únicos que atraviesan la placenta.
Ig A:
§ Se encuentran en las secresiones mucosas, lagrimas, calostro y leche materna.

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Ig M:
§ Se presenta en la superficie de los linfocitos y en el plasma.
§ Promueven la fagocitosis.
§ Activan el sistema de complemento.

Ig E:
§ Reacciones parasitarias y alergias.

Grupo sanguíneo A B AB O
Glóbulos rojos

En la membrana Antígeno B No antígenos

Antígeno A Antígenos A y B
Anti-A y
En el plasma Anticuerpo B Anticuerpo A No anticuerpos
Anti-B

El sistema ABO o grupos sanguíneo se detecto y estudio hace mucho tiempo debido a que provocaba
aglutinación de las células sanguíneas al realizar una transfusión entre individuos genéticamente
distintos..

Landsteiner en 1901, descubrió el primer sistema de grupos sanguíneos al estudiar los problemas de
incompatibilidad que surgían durante las transfusiones de sangre. Posteriormente Berstein en 1925,
determino su transmisión hereditaria.
De manera que un individuo tendrá grupo sanguíneo A si sus glóbulos rojos tienen la glicoproteína A
en su membrana, siguiendo el mismo criterio para el resto de los grupos (si no existe proteína,
entonces será de grupo sanguíneo O). Estas proteínas corresponderían a lo que denominan
antígenos.

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En el plasma sanguíneo tenemos anticuerpos. Evidentemente, un individuo del grupo A no podrá

tener anticuerpos anti-A, pues esto no sería viable (la sangre coagularía Y MORIRIA).
Así:
§ los individuos A tendrán anticuerpos anti-B
§ los individuos B tendrán anticuerpos anti-A
§ los individuos AB no tendrán anticuerpos de este tipo
§ los individuos O tienen los dos tipos de anticuerpos

De la misma manera, el factor Rh es otra proteína que existe en los glóbulos rojos de algunas
personas. Su nombre viene del mono en el que fue descubierta, el macacco rhesus.

El sistema RH : En 1940 , Landsteiner y Wiener descubrieron otra diferenciación hereditaria en la
sangre: EL FACTOR RH.
Inyectaron sangre de mono Macacus rhesus en conejos y cobayos, luego observaron que el suero que
contenía los anticuerpos resultantes aglutino no solo a los glóbulos rojos de Macacus rhesus sino
también al 85% de la población de blancos neoyorquinos, mientras que el 15% restante no reacciono
con el antisuero.

Aparentemente la sangre de la mayoría de los seres humanos contiene un antigeno denominado Rh
que es semejante al antigeno presente en los monos Macacus rhesus de ahí el nombre de Rh, de tal
manera que todos los individuos se pueden clasificar en Rh positivo(Rh + ) o Rh negativo ( Rh - )
según presente o no el antigeno. Siendo el factor Rh positivo un factor hereditario dominante. Por
ejemplo:
§ Si una persona tiene los genes + +, el factor Rh en la sangre será positivo.
§ Si una persona tiene los genes + -, el factor Rh en la sangre será positivo.
§ Si una persona tiene los genes - -, el factor Rh en la sangre será negativo.
Un bebé recibe un gen del padre y uno de la madre.

Levine reconoció que dicho factor esta involucrado en la producción de la enfermedad hemolítica
del recién nacido( Eritroblastosis fetal) que ocasiona ictericia. Normalmente la sangre humana no
contiene anticuerpos específicos contra el antigeno Rh, pero estos pueden producirse solo en las
persona s Rh – desde que son sensibilizadas.
Si una mujer no se ha sensibilizado en un anterior embarazo sus anticuerpos anti -Rh pueden cruzar
la placenta hacia la circulación fetal produciendo destrucción de los glóbulos rojos (hemólisis)
generándose anemia en el feto. La anemia es responsable de una deficiente oxigenación fetal, pueden
ser responsables de daño neurológico en el recién nacido. El hígado fetal se transforma en un órgano
formador de glóbulos para compensar esa anemia y disminuye la formación de proteínas entre ellas
la albúmina.
Esto determina en el feto acumulación anormal de líquidos en diferentes lugares como por ejemplo
en la piel (edemas), en el abdomen (ascitis) en el tórax (derrame pleural - hidrotórax) y
eventualmente en la membrana que recubre al corazón (derrame pericárdico)
El análisis detallado de la genética, el factor RH ha puesto de manifiesto que se trata algo mas de un
gen de dos alelos , posiblemente de una serie de tres genes íntimamente ligados que fueron
denominados C,D y E ( dominantes ) y c,d,e, ( recesivos) dándose 8 posibles combinaciones en un
mismo cromosoma.

III) MATERIALES

1. Palitos mondadientes (01 Caja por mesa)
2. Material obligatorio.
3. Suero anti A, suero anti B y suero anti D (RH)
4. Alcohol
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5. Algodón
6. Laminas escavadas
7. Lancetas.
IV) PROCEDIMIENTO

1. Con un algodón empapado en alcohol se desinfecta la punta del dedo índice y haz una
punción con la lanceta.
2. Coloca separadamente 3 gotas de sangre sobre una lamina portaobjeto limpia o lamina
escavada
3. Agregar l gota de reactivo Anti A, Anti B y Anti D sobre cada una de las gotas de sangre, sin
que la punta del gotero tenga contacto directo con la muestra de sangre para que no se
contamine el reactivo.
4. Homogeniza cada preparado con un palillo de mondadientes : un palillo por cada preparado
5. Rotar la lamina suavemente por l minuto y realizar la lectura.

Reacción de Aglutinación

• Si aglutina con AntiA y no con anti B: Es el tipo A
• Si aglutina con anti B y no con anti A: Es el tipo B
• Si aglutina con Ambos sueros es el tipo AB
• Si no aglutina con ningún suero es del tipo O
• Si aglutina con Anti. RH: es del grupo Rh +´
• Si no aglutina con anti Rh : Es del grupo Rh -

6. Se recomienda trabajar con rapidez para que la sangre no coagule antes que reaccione con el
suero específico. Para leer: inclina ligeramente la lámina. Si no se ve con nitidez obsérvalo al
microscopio.
7. Anota los resultados y dibuja las reacciones.

V) CUESTIONARIO

1. Haz un esquema que muestre todas las posibilidades de donación y recepción de sangre de los
diversos grupos.
2. A quienes se les llama Donadores universales? ¿Explique por que?
3. A quienes se les llama Receptores Universales? Explique por qué?
4. Por que los individuos Rh+ pueden recibir indistintamente sangre Rh+ o Rh - y porque los
individuos Rh - no pueden ?
5. Por que son importantes los antigenos de los grupos sanguíneos.

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VI) BIBLIOGRAFIA

AUDESIRK, T G. AUDESIRK 1996. Biología. 4º Edición.. Prentice _ Hall Hispanoamericana S.A

PRACTICA N° 7

PERMEABILIDAD DE MEMBRANA CELULAR

I) INTRODUCCIÓN:

El interior hidrófobo de la bicapa lipídica crea una barrera para el paso de la mayoría de las
moléculas hidrófilas, incluidos los iones. Sin embargo, la velocidad de este proceso varía en forma
notable según el tamaño y las características de solubilidad de la molécula. En general, cuanto
menor sea el tamaño de la molécula y mayor sea la solubilidad en aceite(es decir, cuanto más
hidrófoba o no polar sea) mayor será su velocidad de difusión a través de la membrana.

La bicapa lipídica de las membranas celulares es permeable a moléculas pequeñas no polares como
el oxígeno molecular y el dióxido de carbono y a moléculas polares muy pequeñas como las moléculas
del agua y el etanol. La bicapa lipídica es sumamente impermeable a la mayoría de las moléculas
hidrosolubles de gran tamaño y a todos los iones. La transferencia de nutrientes, metabolitos e iones
a través de la membrana plasmática y las membranas internas de las células depende de proteínas
de transporte de membrana.
Las membranas celulares contienen una diversidad de proteínas de transporte y cada una de ellas es
responsable de la transferencia de un tipo particular de soluto a través de la membrana. Existen dos
clases de proteínas de transporte de membrana, proteínas transportadoras y proteínas de canal.

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Son las proteínas de transporte específicas (proteínas transportadoras carriers y las proteínas de
canal) las responsables del tránsito selectivo de las moléculas pequeñas a través de la membrana
permitiendo a la célula controlar la composición del citoplasma.

El agua se mueve con facilidad a través de una membrana semipermeable de una región con menor
concentración de solutos a una región con mayor concentración de solutos. Este proceso se denomina
osmosis. Las membranas semipermeables permiten pasar el agua, moléculas pequeñas y los iones
hidratados. No obstante bloquean el pasaje de las enzimas y proteínas sintetizadas dentro de la
célula. La diferencia en las concentraciones de soluto dentro y fuera de una célula da origen a la
presión osmótica y el agua ingresa en la solución más concentrada en el interior de la célula,
transportando nutrientes moleculares pequeños con ella.

La osmosis es de gran significado práctico, en los pacientes que se deshidratan por enfermedades a
menudo requieren de agua y nutrientes por vía intravenosa, esta solución debe tener la misma
concentración global de soluto que la sangre del paciente: debe ser isotónica. Si se usara agua pura,
el interior de los eritrocitos tendría mayor concentración de soluto (menor concentración de agua) y
entraría el agua a la célula, esta solución se denomina hipotónica, ocasionaría que la membrana de
los eritrocitos sobrepasen el límite de turgencia y exploten (experimentarán lisis). La situación
opuesta, la hipertonicidad, ocurre cuando la solución intravenosa está más concentrada que el
contenido del eritrocito. En este caso la célula perdería agua y se encogería (crenación)

• El tiempo de Hemólisis: Se usa para medir la velocidad de penetración de sustancias en los
eritrocitos. Se expresa por la aparición brusca de una solución roja transparente, en lugar de la
suspensión turbina de los glóbulos rojos.
• En la práctica, se colocaran glóbulos rojos en soluciones hipertónicas como etilenglicol. Al
principio el agua abandona la célula y aparece crenación; pero con el tiempo van entrando las
moléculas de etilenglicol. Estas aumentan la cantidad de moléculas osmóticamente activas en las
células y se absorbe una cantidad correspondiente de agua. La membrana plasmática sólo puede
extenderse hasta cierto punto sin que se modifiquen sus propiedades, si sobrepasamos este límite,
los eritrocitos se hemolizan, es decir, empiezan a hincharse rebasando el límite de turgencia de
manera que la estructura molecular de la membrana queda alterada permitiendo la salida al
espacio extracelular de la hemoglobina. Como la célula vació todo su contenido se le llama
"eritrocito fantasma", casi todo lo que se conoce sobre transporte de membrana se ha hecho
utilizando el modelo del "eritrocito fantasma".

Reacción hiposmótica de la membrana plasmática: Cuando una célula se expone a condiciones
hiposmóticas, el agua ingresa al interior en un intento de llegar al equilibrio osmótico.

El espermatozoide humano, necesita de ciertos cambios morfofisiológicos para poder adquirir
capacidad fértil. Estos cambios se inician cuando el espermatozoide ha reacomodado sus proteínas
de membrana que le confieren integridad a la membrana espermática.
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La integridad de la membrana espermática es importante para el metabolismo de los
espermatozoides y además sirve para propiciar la interacción espermatozoide-ovocito.

Cuando el espermatozoide es expuesto a condiciones hiposmóticas, el influjo de agua aumentará el
volumen, que se expresará en una hinchazón de la membrana espermática. Esta hinchazón se
aprecia, generalmente, en el extremo de la cola del espermatozoide que es la zona más sensible al
shock hiposmótico. Esta reacción de la membrana celular, es un signo de que el transporte del agua a
través de la membrana está ocurriendo normalmente, lo cual es un indicador de la integridad de la
membrana y de su actividad fisiológica normal.

Sin Shock Con Shock
Hiposmótico Hiposmótico

En pruebas de infertilidad masculina, se considera una muestra como normal cuando el porcentaje
de colas de espermatozoide hinchadas es mayor del 60%.

II) OBJETIVOS

• Medir el tiempo de penetración de diversas sustancias observando la hemólisis de glóbulos
rojos humanos.
• Evaluar la madurez de la membrana espermática, mediante el test de reacción
hiposmótica.

III) MATERIALES

1. Incubadora
2. Microscopio compuesto de campo claro
3. Serie de alcoholes
4. Medio hiposmótico NaCl 0.065 M
5. Agua destilada
6. Cloruro de Sodio 0.9 %
7. Jeringa
8. Algodón.
9. Alcohol
10. Pipetas
11. Propipetas
12. Pipetas pasteur
13. Tubos de ensayo
14. Gradillas
15. Papel parafilm
16. Papel lente.
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17. Muestra de Semen humano, recolectada en un frasco estéril el mismo día de la practica.
18. Dos muestras de sangre venosa humana.
19. Instrumentos para medir tiempo de hemólisis

El aparato de hemólisis se construye de la siguiente manera:
* En una cartulina de 10 cm x 10 cm, se corta en la zona central, una ventana rectangular de
2.5 cm. x 5cm.
* Se extiende una hebra de hilo negro de manera que atraviese la ventana por el centro del eje
mayor.
* Se cubre la ventana con el papel cebolla.

Cartulina

Papel cebolla

Hilo negro

IV) PROCEDIMIENTO:

Medición relativa de la velocidad de penetración de una serie de alcoholes en eritrocitos
humanos.

Se usará la siguiente serie de alcoholes: metanol, etanol, etileno-glicol, n-propanol y glicerol. Como
controles se usará: agua y una solución de NaCl 0.9% (suero fisiológico).
La velocidad relativa de penetración de cada alcohol, se medirá en función al "tiempo requerido para
la hemólisis", definido como el tiempo total desde la adición de la sangre hasta que el hilo negro del
aparato de hemólisis se hace visible.

* Coloque el aparato de hemolisis detrás del tubo de ensayo y se coloca a contra luz de forma
que, la ventana quede completamente iluminada.
* Realizar este procedimiento con cada uno de los tubos (uno por uno), hasta poder observar
con claridad el hilo negro a través del tubo de ensayo.

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Pruebe una solución cada vez, procediendo de la siguiente manera:

1. Colocar 3 ml de cada solución en un tubo de ensayo (utilizará un total de 7 tubos)
2. Adicione 2 gotas de sangre en el tubo, coloque papel parafilm en la boca del tubo de ensayo
y homogenice despacio (no agitar) inmediatamente lleve el tubo al aparato de hemólisis y
tomar el tiempo. Repetir para cada solución y registre en la tabla el tiempo requerido para
hemólisis.
3. Repita el procedimiento para cada una de las otras sustancias y anote los tiempos.

SUSTANCIAS TIEMPO (seg.) HEMOLISIS OBSERVACIONES
AGUA DESTILADA
NaCl 0.9 %
METANOL 0.8 M
ETANOL 0.8 M
ETILENO GLICOL 0.8M
n-PROPANOL 0.8 M
GLICEROL 0.8 M

Respuesta de la membrana plasmática el espermatozoide ante un shock hiposmótico.

1. Coloque en un tubo de cultivo: 1 gota de semen o de suspensión espermática en 9 gotas de una
solución hiposmótica.
2. Se incuba a 36° C por 45 minutos.
3. Después del tiempo de incubación, se coloca una gota pequeña en un portaobjetos, se cubre
con una laminilla y se observa a 40X.

V) CUESTIONARIO

1. Explique porque las diversas sustancias tiene velocidades relativas diferentes de ingreso a la
célula.
2. Averigüe si la glucosa ingresa más rápido o tarda mucho más que el glicerol.
3. Por qué la reacción hiposmótica es una prueba importante en la evaluación de la calidad del
semen humano.
4.- Que efectos en el organismo produce el exceso de Metanol y Etanol.

VI) REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

Jeyendran RS, Van der Ven HH, Pérez-Pérez M, Grabo BG, & Zaneveld IJD. 1984: Development of
an assay to asses the funtional integrity of thehuman spem membrane and its relationship to other
semen characteristics. J. Reprod. Fet. 70: 219-228.

Bruce Alberts, Dennis Bray – 2006. Introducción a la Biología Celular. 2da Edición. Editorial
Medica Panamericana.
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PRACTICA Nº 8

Citoesqueleto y Movimiento intracelular

El movimiento intracelular tiene su origen en la composición del citoesqueleto de la célula, este
funciona como los huesos y músculos de las células eucariotas ya que les proporcionan la forma,
organizan y sostienen los sistemas de membranas de los organoides celulares, son los responsables
de la organización interna y del movimiento celular.

El citoesqueleto de las células eucarióticas está formado por filamentos de actina, filamentos
intermedios y microtúbulos. Estas estructuras definen la forma de las células.

Funciones del citoesqueleto:
• Estabilidad y forma celular.
• Movimiento celular.
• División celular.
• Movimiento de orgánulos internos

Microtúbulos: toman parte en la formación de la estructura celular y sirven como corredores o
rieles para el transporte de las organelas en acción conjunta con proteínas asociadas como la
dineina y la cinesina. Los microtúbulos forman husos mitóticos, rayos astrales de células en división,
elementos longitudinales de los axones y de los flagelos. También intervienen en varias funciones
como el transporte intracelular, el movimientos de cromosomas. La tubulina es la principal proteína.
Ciertas drogas interfieren en la polarización y despolarización, alcaloides como la colchicina, vinca
(esta última se utiliza como drogas antimitóticas en el tratamiento antitumoral).
Microfilamentos: la actina es la proteína más abundante en las células de los mamíferos. Los
filamentos de actina son esenciales para posibilitar los movimientos celulares e intracelulares, para
determinar la dinámica de la forma celular, para la adhesividad entre las células o entre células y
matrices, y en múltiples niveles para la organización de la superficie celular.
Filamentos intermedios: están químicamente representados por diversas proteínas como
queratina, desmina, vicentina, etc, le dan a la célula un soporte puramente mecánico. Son estructuras
fuertes, estables, insolubles, resistentes a los cambios de temperatura y dispuestas en densas redes
tridimensionales en el citoplasma que se relacionan y forman parte de las uniones intercelulares.

El movimiento intracelular, como por ejemplo: ciclosis realizado en las plantas, depende del
ordenamiento de los filamentos de que a manera de rieles de un tren permiten que circulen
organelas como los cloroplastos. Las estructuras especializadas por los microtúbulos, son los
centríolos, los cilios y los flagelos y el huso mitótico.

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II) OBJETIVOS

• Identificar los movimientos dependientes de microflamentos y de microtubulos.

III) MATERIAL

1. Hojas de Elodea (planta acuática)
2. Pipetas pasteur
3. Material audiovisual relacionado.

b) Observación de cloroplastos y movimiento de ciclosis
1. Se coloca una hoja de Elodea sobre el cubreobjeto, se añadió una gota de agua y se cubrió con
una laminilla.
2. Llevar al microscopio a 10 y 40 .
3.- Describa la forma como se mueven los cloroplastos

Elodea sp.

V .- Cuestionario:
1.- ¿Cuáles son los componentes del citoesqueleto?
2. Que función cumple los filamentos de actina en el tejido muscular?


Smith C.A. y Wood E.J., 1997: Biología Celular Ed. Addison - Wesley Iberoamericana Fred H.E, 1990:
Biología. Edit. Mc Graw Hill.

Smith C.A. y Wood E.J., 1997: Biología Celular Ed. Addison - Wesley Iberoamericana .
Cooper G. 2002. La Célula. Ed. Marban Libros.

http://books.google.com.pe/books?id=QcU0yde9PtkC&pg=PA512&dq=la+vida+en+la+tierra
&hl=es-
419&sa=X&ei=AwL5U_GqF87msASdu4KgBA&ved=0CDoQ6AEwBQ#v=onepage&q=la%20vida
%20en%20la%20tierra&f=fals

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PRACTICA N° 9

VISUALIZACION DE MITOCONDRIAS Y LISOSOMAS

I) Identificación de organelas:

Las células eucarióticas se caracterizan por tener un subsistema o nivel de organización de
organelas, en estos orgánulos tienen lugar actividades celulares específicas; las organelas se
caracterizan por presentar una membrana que separa el compartimiento interno de la organela del
entorno citoplasmático. El núcleo, la mitocondria y los cloroplastos están limitados por dos
membranas bicapas separadas por un espacio intermembrana. Todos los otros orgánulos están
rodeados por una membrana única.
El núcleo alberga el genoma de una célula. Las membranas nucleolar interna y externa están
fusionadas en numerosos poros nucleares, a través de los cuales pasan los materiales entre el núcleo
y el citosol. La membrana nuclear externa se continua con la del retículo endoplasmático rugoso.

Entre otras organelas tenemos los endosomas que internalizan las proteínas de la membrana
plasmática y los materiales solubles del medio extracelular y los clasifican para devolverlos a la
membrana o a los lisosomas para su degradación.
Los peroxisomas son orgánulos pequeños que contienen enzimas que oxidan diversos compuestos
organicos sin la producción de ATP. Los subproductos de la oxidación se utilizan en reacciones
biosinteticas.

La enorme superficie de membranas internas proporciona a las células no solamente un soporte
para la localización ordenada de multiples sistemas enzimáticos diferentes, sino que les provee de
subcompartimentos funcionales cerrados que constituyen los diferentes organoides membranosos
especializados, cada uno de ellos con estructura, dotación enzimática y propiedades funcionales que
lo caracterizan.
Numerosos compartimentos rodeados de membrana son responsables de funciones celulares vitales,
entre las cuales se encuentran la separación y asociación de sistemas enzimáticos, la digestión
intracelular de sustancias, la distribución de cada una de las miles de proteínas diferentes de la
célula hacia sus destinos finales.

El mayor sistema de membranas corresponde al retículo endosplasmático (RE), de donde se originan
la mayoría de las organelas celulares, como el aparato de Golgi y los lisosomas.
Las proteínas secretadas y las proteínas de membrana se sintetizan sobre el retículo endoplasmático
rugoso, una red de sacos aplanados limitados por membrana tachonados de ribosomas. Las
proteínas sintetizadas en el RE rugoso luego se mueven al complejo de Golgi, donde son procesadas y
clasificadas para ser transportadas a la superficie celular o a otros destinos.

Algunas vesículas provenientes del RE o del Aparato de Golgi, forman orgánulos limitados por
membranas llamados lisosomas, que contienen hidrolasas ácidas (enzimas que degradan polímeros
en sus unidades monoméricas). Los lisosomas varían en cuanto a su tamaño y forma y en una célula
pueden encontrarse en grandes cantidades. Los lisosomas intervienen en la digestión celular
uniéndose a las vesículas endocíticas o fagocíticas constituyendo lisosomas secundarios o
fagolisosomas.
Las células eucarióticas poseen organelas que traducen la energía y reciben el nombre de
mitocondrias y cloroplastos. Estas organelas se caracterizan por tener doble membrana que separa
su compartimiento interno o matriz del medio citoplasmático. En la membrana interna de ambas
organelas se encuentra una serie de proteínas que define en conjunto la llamada cadena
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transportadora de electrones, así como presentan una estructura denominada complejo F1, F0, a
través del cual y por quimiosmosis se va a formar el ATP.
Tanto los lisosomas como las mitocondrias no pueden ser observados directamente al microscopio
óptico, es necesario para ello, utilizar colorantes en concentraciones muy diluidas, de tal manera que
no presenten toxicidad a las células.
Actualmente existen muchas evidencias de que el rojo neutro en concentraciones no tóxicas es
tomado por la célula y se concentra en el sistema lisosomal.

Las mitocondrias pueden ser observadas en células vivas mediante coloración con una solución de
verde de Janus muy diluida con la cual toman un color azul - verdoso.
Esta coloración se debe al sistema citocromo - oxidasa, esta es una hemoproteína con amplia
distribución en muchos tejidos, constituye el componente terminal de la cadena de acarreadores
respiratorios presente en la mitocondria, por tanto, es el componente responsable de la reacción por
la cual los electrones resultantes de la oxidación de las moléculas del sustrato, catalizada por las
deshidrogenasa, se transfiere al aceptor final, oxigeno. En cambio en el citoplasma el colorante es
reducido a su leucobase.

La presencia de pigmentos fotosíntéticos en el cloroplasto, hace posible observarlos sin necesidad de
utilizar colorantes.

II) OBJETIVOS

• Reconocer lisosomas y mitocondrias e preparaciones frescas.
• Utilizar los colorantes adecuados para cada organela.

III) MATERIAL

1. Muestra de semen.
2. Hisopos.
3. Suero fisiológico (en goteros)
4. Solución de cristal de violeta
5. Solución de verde de Janus (1/10000)
6. Pipetas pasteur
7. Tubos de ensayo
8. Gradilla

PROCEDIMIENTO

a) Observación de mitocondrias en epitelio bucal

1. Enjuagar varias veces la boca.
2. Obtenga una muestra de células de epitelio bucal mediante un raspado suave utilizando un
hisopo largo.
3. Realice el frotis con ayuda del hisopo, extendiendo la muestra sobre la parte central de una
lámina portaobjetos, deje secar a medio ambiente.
4. Agregar unas gotas de colorante verde de Janus hasta cubrir la muestra por 10 minutos.
5. lavar con agua corriente y secar al mechero.
6. Observe a 10 x y 40x.

17

b) Observación de flagelos
1. Diluya el semen humano con suero fisiológico, mezclando una gota de semen y tres de suero.
2. Coloque una gota del colorante cristal violeta en el tubo de ensayo donde se realizó la
dilución.
6. Tome una muestra con la pipeta pasteur y colóquelo en un portaobjeto cubra con la laminilla
y observe nuevamente.

Cabeza

Flagelo

Acrosoma

Núcleo

V .- Cuestionario:
1. En que parte de la mitocondria se localiza la citocromo oxidasa?
2. Describa la función que realizan los lisosomas.
3. Escriba la importancia de la mitocondria.
4. Por que reacciona la mitocondria con el verde de Janus?
5. Si hiciéramos una tinción posterior para fosfatasa acida, veríamos que los gránulos son
lisosomas . Porque?


Smith C.A. y Wood E.J., 1997: Biología Celular Ed. Addison - Wesley Iberoamericana Fred H.E, 1990:
Biología. Edit. Mc Graw Hill.

18
Smith C.A. y Wood E.J., 1997: Biología Celular Ed. Addison - Wesley Iberoamericana .
Cooper G. 2002. La Célula. Ed. Marban Libros.

http://books.google.com.pe/books?id=QcU0yde9PtkC&pg=PA512&dq=la+vida+en+la+tierra
&hl=es-
419&sa=X&ei=AwL5U_GqF87msASdu4KgBA&ved=0CDoQ6AEwBQ#v=onepage&q=la%20vida
%20en%20la%20tierra&f=false

19
PRACTICA Nº 10

CICLO CELULAR

I) INTRODUCCIÓN:

Las células nuevas solo se originan de otras células vivas. Este proceso se llama División Celular. Un
tipo de división celular es la mitosis que conduce a la producción de células con características
genéticas idénticas a las de su antecesora, mientras que en la meiosis se producen células con la
mitad del contenido genético de la célula madre.

La función básica del ciclo celular es la de duplicar en forma genéticamente exacta la gran cantidad
de DNA cromosómico en dos copias exactas denominadas células hijas. Esta unidad de tiempo
represente EL CICLO DE VIDA DE UNA CÉLULA EN PROLIFERACION y constituye una unidad de
repetición en todo proceso de reproducción o proliferación celular.

El ciclo celular puede dividirse en dos fases principales: La fase M y la Interfase.

La Fase M: es el periodo en el que el contenido de la célula se divide, esta fase incluye:
• El proceso de mitosis, durante el cual los cromosomas duplicados se separan en dos núcleos.
• La citocinesis, en la que toda la célula se divide en dos células hijas.
• El final de la mitosis da como resultado a dos células e incluye la división nuclear o
cariocinesis y la división del citoplasma o citocinesis.
La interfase: es el periodo entre las divisiones celulares, es un intervalo donde la célula crece, y
efectúa diversas actividades metabólicas. Durante la interfase ocurren muchos preparativos para la
mitosis próxima, incluye la replicación del ADN celular. La interfase cuenta con 03 fases:
• Fase G1 (gap1) que corresponde al intervalo entre la mitosis y el comienzo de la replicación
del ADN. Durante esta fase la célula es metabólicamente activa y está creciendo, pero no se
replica su ADN
• Fase S (síntesis): durante la que se produce la replicación del ADN.
• Fase G2: aquí prosigue el crecimiento de la célula y en la que se sintetizan proteínas en
preparación para la mitosis.
A diferencia de la rápida proliferación en las células embrionarias, algunas células del animal adulto
cesan por completo su división y muchas otras células solo se dividen ocasionalmente, cuando es
necesario reemplazar la perdida de las células debido a la lesión o a la muerte celular. Entre este
último tipo de células se incluyen a los fibroblastos de la piel, así como a las células de muchos
órganos internos, como el hígado, el riñón y el pulmón. Estas células salen de G1 para entrar en un
estado de reposo del ciclo denominado G0, en el que permanecen activas metabólicamente pero no
proliferan a no ser que sean requeridas para ello mediante las señales extracelulares apropiadas.

La secuencia del Ciclo celular está dirigida por un sistema de control del ciclo celular, que está
formado por moléculas que funcionan de forma cíclica en la célula, que desencadena y coordina los
sucesos clave en el ciclo celular.
Los puntos de control en el ciclo celular tienen la función de verificar critica en el que las señales de
terminación y continuación pueden regular el ciclo. Por lo general, las células animales tienen
señales de detención internas que frenan el ciclo celular en puntos de control hasta que son
sobrepasadas por señales de proseguir. Muchas señales registradas en los puntos de control
provienen de mecanismos de supervisión dentro de la célula, estas señales informan sobre si los
procesos celulares importantes realizados hasta ese punto han terminado correctamente, por lo
20
tanto, indica si el ciclo debe de continuar o no. Hay tres puntos de control importantes en las fases G1,
G2 y M.

Para el estudio del ciclo de división celular, se utilizan los índices del ciclo mitótico, interfásico y de
fases.

CICLO CELULAR

Indice Mitótico: está dado por el porcentaje de células proliferativas que se encuentran en mitosis. En
el caso de las células meristemáticas de la raíz de la cebolla, el criterio para identificarlas de aquellas
que han iniciado los primeros estadios de diferenciación es considerar como meristemáticas a las que
tienen núcleo con un diámetro superior a la tercera parte del eje mayor de la célula.

Indice Interfásico. Es el porcentaje de células proliferativas en interfase. Se calcule restando de 100,
el índice mitótico.

Indice de Fases. Es el porcentaje de células mitóticas en cada una de sus fases.

DESCRIPCION DE LA MITOSIS

Profase: el comienzo de la profase queda determinado por la aparición de los cromosomas
condensados, cada uno de los cuales está constituido por dos cromátidas hermanas. Estas cromátidas
se mantiene unidas a través del centrómero, que es una secuencia de ADN a la que se unen proteínas
dando lugar al cinetocoro, este es el lugar de anclaje de los microtúbulos del huso.
AL final de la profase ocurre la rotura de la envoltura nuclear lo que posibilita la interacción entre el
huso y los cromosomas. La fosforilación de las moléculas de la lámina por la cinasa mitótica Cdk
promueve el desensamblaje de la lámina nuclear que constituye la capa interna de la envoltura
nuclear.

21

Metafase: Se caracteriza por la organización del huso mitótico. Los microtúbulos de los polos
opuestos del huso se acaban uniendo a los dos cinetocoros de las cromátidas hermanas y el equilibrio
de fuerzas que actúa sobre los cromosomas hace que estos queden alineados en la placa metafásica
en la mitad del huso. Este huso está constituido por microtúbulos cinetocóricos, que se unen a los
cromosomas y por microtúbulos polares, que se superponen unos con otros en el centro de la célula.
Además los pequeños microtúbulos astrales irradian desde los centrosomas hacia la periferia celular.

Anafase: el paso de la metafase a la anafase se debe a la proteólisis de proteínas reguladoras
mediada por la ubiquitinas, la cual se dispara por la activación de una ubiquitina ligasa denominada
complejo promotor de la anafase.
El movimiento de los cromosomas hacia el polo se acompaña de un acortamiento evidente en los
microtúbulos cromosómicos. Este mecanismo de separación recibe el nombre de DISYUNCION.

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Telofase: Los cromosomas empiezan a desarrollarse, los nucléolos están en fase de reorganización y
la envoltura nuclear se forma paulatinamente alrededor de los cromosomas. Simultáneamente se
produce la citocinesis (división del citoplasma).

En esta práctica se estudiará el ciclo de división celular en las células meristemáticas de la raíz de
Allium cepa "cebolla". Este sistema es muy adecuado porque la población celular está en equilibrio
dinámico y los cromosomas son relativamente grandes, con número diploide 2n = 16.

Observación a 10 de las diferentes fases de la mitosis. Coloración con hematoxilina – eosina.

II) OBJETIVOS
Al término de la práctica los estudiantes serán capaces de:

• Reconocer las fases de la mitosis.
• Reconocer las características del núcleo interfásico en las células meristemáticas de cebolla.
• Hallar los índices interfásico, de fases y mitótico en el modelo estudiado

III) MATERIALES

1. Raíces de bulbo de cebolla. (La cebolla se remojara previamente por 02 días en un recipiente con
agua.
2. Orceina acética – clorhídrica
3. Láminas patrón.

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IV) PROCEDIMIENTOS

1. Desarrollo De Las Raíces

1.1 Coloque bulbos de cebolla en vasos pequeños con agua, de tal manera que la parte inferior
toque el agua, como lo indica el grafico, unas 72 horas antes de la práctica. El agua debe
removerse cada 24 horas.

Palitos de madera

Agua

1.2. Cubra el frasco con una cartulina negra, con la finalidad de dar oscuridad a las raíces.
1.3. Las raíces que se desarrollan se usarán en la práctica.

2. Preparación De Las Láminas Para Observar Las Diferentes Fases De La Mitosis.

1. Corte unos 2 mm. de la parte apical de la raíz, unas 4 o 5 raicillas y colóquelas en una placa
petri que contenga Orceina acética.

2. Caliente cuidadosamente el petri en la llama de un mechero hasta 60 C aproximadamente,
momento que coincide con la emisión de vapores blancos (la temperatura puede controlarse
pasando el material de vidrio por el dorso de la mano. No debe de permitirse la ebullición del
colorante).

Raicillas con orceína

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3. Deje enfriar y repita esta operación tres veces.
4. Después del último calentamiento deje enfriar y reposar durante 10 minutos.
5. Coloque una raicilla en una lámina porta objeto y añada una gota de Orceina fría.
6. Cubra la muestra con una laminilla.
7. Coloque un trozo de papel filtro sobre la laminilla y con el borrador de un lápiz golpee el
material describiendo círculos concéntricos para permitir la extensión del tejido
meristemático. Este aplastamiento se denomina "squash".
8. Observe la preparación a menor y mayor aumento (40).
9. Identifique y haga esquemas de células meristematicas en interfase con sus prominentes
nucléolos, células en profase, metafase, anafase.

V) CUESTIONARIO
1. ¿Qué es una población celular en equilibrio dinámico?
2. ¿Por qué los cromosomas no son visibles durante la interfase?
3. ¿En qué etapa de la mitosis los cromosomas se observan con mayor facilidad? Porqué?.
4. ¿Del índice mitótico, ¿qué fase observo en mayor frecuencia? ¿Hay alguna relación con el
tiempo de duración de cada fase y con la hora del día?
5. ¿Cuáles son las características de los núcleos interfásicos?


Smith CA. y Wood EJ. 1997: Biología Celular Ed. Addison Wesley Iberoamericana.
Karp, Gerald 2009: Biología cellular y molecular. Ed. Mc Graw Hill

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PRACTICA N° 11
CROMATINA SEXUAL
Introducción:

Murray Llewellyn Barr (Junio 20, 1908 – Mayo 4, 1995) un Médico Canadiense y un investigador en
Medicina, descubrió en 1948 una importante estructura celular a la que se denominó “Cuerpo de
Barr”.

Corpúsculos o cuerpos de Barr: es una masa condensada de cromatina sexual ubicada en el núcleo
de las células somáticas de las hembras debido a un cromosoma X inactivo.
El fenómeno de inactivación del cromosoma X es un ejemplo del papel de la heterocromatina en la
expresión génica. En muchos animales, incluyendo los humanos, las hembras tienen dos cromosomas
X y los machos tiene un cromosoma X y un cromosoma Y. El cromosoma X posee miles de genes que
no están presentes en el pequeño cromosoma Y, de este modo las hembras tienen el doble de genes
localizados en el cromosoma X que los machos. A pesar de estas diferencias, las células de las
hembras y de los machos tienen una misma cantidad de proteína codificadas por los genes del
cromosoma X. Esto es debido a un mecanismo de compensación de dosis en el que uno de los
cromosomas X de las células de las hembras se inactiva en etapas tempranas de desarrollo,
transformándose en heterocromatina. Las células que se reproducen mitóticamente de esas células
embrionarias tienen el mismo cromosoma inactivado.
Esta heterocromatica, se puede observar como una masa plano convexo, con un tamaño de 0.7 * 1.2
micras.
El corpúsculo de Barr solamente se encuentra en las células de la mujer y nunca en las del hombre,
en condiciones normales. Según la hipótesis de Lyon (propuesto por Mary Lyon en 1966), uno de los
dos cromosomas X en cada célula somática femenina es genéticamente inactivo. A esta observación
siguió el desarrollo de una técnica sencilla que permitía detectar cuerpos de Barr en células de
mucosa oral.

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Como resultado de su aplicación se reconoció que las células femeninas eran “cromatina positiva”
mientras que las masculinas eran “cromatina negativa”, pero que existían excepciones:
Las pacientes con síndrome de Turner no tienen cuerpos de Barr. Esta una enfermedad genética y, a
su vez, una enfermedad rara caracterizada por una alteración en el cromosoma X o ausencia del
segundo cromosoma X en algunas o en todas las células de su cuerpo, expresándose en la falta de
desarrollo de los caracteres sexuales primarios y secundarios. Esto confiere a las mujeres que
padecen el síndrome de Turner un aspecto infantil e infertilidad de por vida. Su incidencia es de
alrededor de 1/2.500 niñas.
Los pacientes con síndrome de Klinefelter o síndrome 47XXY si presentan cuerpos de Barr, es una
condición que se presenta en los hombres como resultado de la presencia de un cromosoma X extra y
cuyo síntoma más común es la infertilidad.

Estos hallazgos también demostraron que en presencia de un cromosoma Y, independientemente del
número de cromosomas X, el embrión humano se desarrolla como macho, mientras que en ausencia
del Y se desarrolla como hembra.
Objetivos:
- Al término de la práctica el alumno sabrá verificar el sexo en forma genética de un individuo,

mediante la detección de los cuerpos de Barr en células epiteliales de la cavidad bucal.

Materiales:
04 Bajalenguas
Acetorceina
Microscopios
Aceite de inmersión

Procedimiento:
1. Por separado el hombre y la mujer se enjuagan la boca con agua varias veces.
2. Se obtienen células epiteliales del interior de la mucosa oral, raspando suavemente la parte
interna de la mejilla con un bajalenguas.
3. Descartar esta primera muestra.
4. Tomar la segunda muestra la cual se va a colocar en un portaobjetos limpio y seco, haciendo un
frotis o extendido sobre el mismo portaobjetos, deja secar la muestra al medio ambiente por unos
minutos.
27
6. Una vez seca la muestra, se le agrega una gota de acetorceina. Cubre con el cubreobjetos y espera
aproximadamente 10 minutos.
7. Observar con el objetivo de 40, localizando las células epiteliales y posteriormente con el objetivo
de 100, procura que se coloque una gota de aceite de inmersión sobre el cubreobjetos, entre la
preparación y el objetivo de 100.
8. Localiza los núcleos de las células y observa cuidadosamente. Los cuerpos de Barr son corpúsculos
pequeños que se localizan muy próximos a la cara interna de la membrana nuclear.
10. Dibuja los resultados obtenidos de las muestras comparativas de hombre y mujer.

Cuestionario:

1.- Que otros Síndromes hay relacionados al cromosoma X? explique cada uno de ellos.
2.- En que otras células podemos encontrar Corpúsculos de Barr.
3.- Que es la heterocromatina?

28
PRACTICA Nº 12.

GAMETOGENESIS

I) INTRODUCCIÓN

Una de las características notables de los sistemas vivientes es la reproducción, es
decir la capacidad de originar nuevos individuos de su misma especie. Todo los
los sistemas vivientes , utilizan el mecanismo reproductivo para perpetuar su especie .
Se distinguen dos formas generales de reproducción:
• Asexual y
• Sexual

Los sistemas vivientes multicelulares, en su nivel de organización celular, han desarrollado procesos
por los cuales las células somáticas o germinales originan descendientes a partir de una célula
materna.

La mitosis, es el proceso reproductivo mediante el cual una célula somática da origen a dos células
hijas con características idénticas a las que la origino. Este proceso a nivel de individuo recibe el
nombre de Reproducción Asexual.

La meiosis, otro proceso reproductivo celular origina células germinales a partir de una célula
somática. Este mecanismo consiste en que una célula (2n) da lugar a células (n) mediante la
reducción del número de cromosomas a la mitad, produciéndose a su vez una recombinación génica.
En el nivel de organización de individuo se denomina Reproducción Sexual.

Gameto génesis

Procesos espacio-temporales multifacéticos que ocurren en las gónadas o estructuras reproductivas
de los organismos que se reproducen sexualmente , para dar origen a las células reproductivas
llamadas gametos
En los animales y en los humanos, se pueden identificar los siguientes procesos:

• GONIAS: Mitosis
• CITOS: Meiosis
• GAMETOS: Cito diferenciación.

Cada uno de estos procesos ocurre en etapas diferentes del ciclo biológico de los organismos vivos.

Los procesos gameto génicos en los mamíferos y en la especie humana, se inician y terminan en
tiempos diferentes en las hembras y machos.

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ESPERMATOGENESIS
La espermatogenesis, proceso que se inicia con la pubertad, es la secuencia de eventos celulares a
través de los cuales las células troncales espermatogoniales se transforman en espermatozoides.
Este proceso se realiza en los túbulos seminíferos ubicados en los testículos.

Túbulos seminíferos

Tres categorías de células están involucradas en este proceso:

• Espermatogonias ( mitosis)
• Espermatocitos (meiosis)
• Espermatidas (espermiogenesis)

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Citología de las células germinales:

- Espermatogonias y mitosis: Células troncales situadas en la periferie de los tubulos
seminíferos entre las células de Sertoli. Producto de las divisiones mitóticas puede
distinguirse diferentes tipos de espermatogonias: tipo con núcleo muy tenido (Ad), con núcleo
difuso (Ap) y tipo B. En el ser humano las células palidas de tipo Ason las que representan la
reserva no cíclica y las oscuras son mitóticamente activas.

- Espermatocitos y meiosis: Espermatocitos primarios se originan de las espermatogonias tipo
B. Células redondas , grandes con núcleos esféricos y algunos nucleolos que inician la meiosis
(profase I : leptoteno, zigoteno, paquiteno, diploteno, diacinesis ).

- Espermatidas y espermiogenesis : La metamorfosis de espermatides a espermatozoides
constituye el proceso de cito diferenciación denominado espermiogenesis . Incluye
reorganización nuclear (histonas por protaminas), formación del acrosoma, ensamblaje de
las estructuras del flagelo y reorganización citoplasmática cuya fase final es la liberación de
los espermatozoides en el lumen de los tubulos seminíferos.

FUNCION OVARICA
El ovario es la estructura que en los mamíferos y en las mujeres , almacena y desarrollan los ovocitos
formados durante la vida embrio-fetal o en los primeros momentos del nacimiento.
Algunas etapas de las funciones ováricas:
1. Crecimiento folicular y a tresia de los folículos pequeños.
2. Crecimiento de los folículos ovulatorios y su regulación.
3. Ruptura folicular en el momento de la evolución.
4. Formación del cuerpo luteo y las funciones del mismo.

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Foliculogenesis

La foliculogenesis debe medirse desde la formación de esta unidad estructural y funcional ovárica
denominada folículo, hasta el momento que este es ovulado o se transforma en un folículo atresico .
Este proceso es continuo.

Etapas del desarrollo folicular :
• Folículo primordial
• Folículo Primario
• Folículo Secundario o Antral
• Folículo Maduro o de Graaf

• Folículo Primordial

Los folículos primordiales, son los folículos de reserva que están almacenados en el ovario, los cuales
van a ser usados durante la vida de la hembra o de la mujer. Se localizan en la periferie de la corteza
del ovario y contienen un ovocito primario. Este esta en la fase inactiva de dictioteno de la meiosis I.
Alrededor del ovocito primario esta una sola capa de células epiteliales foliculares planas también
conocidas como células de granulosa, rodeadas por una membrana basal.

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• Folículo Primario:

En la Pubertad la secreción de la hormona estimulante del folículo (FSH) por la hipófisis
estimula la el desarrollo de un pequeño número de los folículos primordiales. Se puede observar
un incremento de tamaño del ovocito, asociado con el aumento de tamaño de las células de
granulosa que lo rodean, convirtiéndose en células cubicas, en esta fase se denomina Folículo
Primario Unilaminar.
Las células de estroma que rodean al folículo se diferencian en la teca
Si continua la secreción de la FSH las células de granulosa se dividen recubriendo al ovocito en
crecimiento con múltiples capas, aquí se puede observar con mayor claridad la zona pelúcida.
Este Folículo se conoce con el nombre de Folículo Primario Multilaminar.

Zona pelúcida: Cubierta celular de naturaleza glicoproteica que es sintetizada
por el ovocito en crecimiento. Bloquea la polispermia.
Específica para cada especie.

• Foliculo Secundario :
La capa interna de las células estromales (la teca interna) aumenta de tamaño al desarrollar
las células un abundante retículo endoplasmático liso y mitocondrias con crestas tubulares
(característica de las células productoras de hormonas esteroides); estas células comienzan a
segregar estrógeno. La capa externa de células estromales (la teca externa) se mantiene
pequeña y compacta y no posee actividad secretora conocida. Aquí aparece una laguna llena
de líquido viscoso y rico en acido hialurónico, entre las células, este espacio se denomina
antro.

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• Folículo Maduro o de Graaf: la hormona luteinizante se encarga de la maduración final del

folículo. El ovocito se sitúa a un lado separado del líquido folicular por una capa de células de
granulosa denominada cúmulo ooforo.
La ovulación es precedida por una acumulación importante de liquido folicular, que exuda la teca
interna, por separación del oocito primario y sus células de granulosa, provenientes del cumulus
oophorus, y la terminación de la meiosis I. Por rotura del folículo maduro el oocito secundario
producido, sobresale en superficie ovárica aun recubierto de células de granulosa que
constituyen la llamada corona radiada, el oocito maduro penetra en el extremo proximal de la
trompa vecina y la célula comienza su segunda división de maduración que llega hasta la
metafase II, pero solo se completa si es fecundado el óvulo.

Antes de la ovulación el folículo contiene:
• 0.3 x 106 células de granulosa en rata
• 3.5 x 106 células de granulosa en oveja
• .50 x 106 células de granulosa en la mujer.

Atresia Folicular:

La atresia es el destino de la mayoría de los folículos. No existen criterios objetivos para detectarlos
en las etapas de folículos primordiales e intermedios.

En humanos, ovejas y rata se pueden detectar folículos atrésicos:
1. En folículos < 1mm de diámetro se caracterizan por una regresión del ovocito, retracción de
las células de la granulosa e hipertrofia de las células de la teca.
2. En folículos grandes, la atresia puede visualizarse por la presencia de vesículas picnóticas, el
número de las cuales determina el estado de atresia.
3. En los preantrales la atresia se visualiza por la invasión de la cavidad folicular por
fibroblastos.

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Cambios relacionados con la edad: decrece el número de folículos en todos sus tamaños. Esto es
visible en humanos decrecen a partir de los 38 años. En muchos mamíferos el número de folículos en
la reserva no son marcadamente afectados por la edad.

Cinética del crecimiento folicular: El índice mitótico de las células de la granulosa se utiliza para
establecer el rango de crecimiento folicular.

II) OBJETIVOS:
Al término de la práctica los estudiantes serán capaces de:
• Reconocer formas de espermatogonias, espermatocitos y espermátides.
• Reconocer las diferentes formas de folículos, desde el primordial hasta el folículo de Graaf o
maduro.

III) MATERIALES
Que debe traer el alumno:
1. Material Obligatorio.

Que proporciona el laboratorio:

1. Microscopio compuesto de campo claro.
2. Láminas preparadas de cortes de testículos y ovario.

IV) PROCEDIMIENTOS
Espermatogénesis
1. Observe con diferentes aumentos el corte de testículo humano teñido con HE.
2. Distinga y dibuje como se disponen los distintos tipos celulares (espermatogonias,
espermatocitos, espermátides, espermatozoide) desde la base el túbulo seminífero a la luz del
mismo.

Foliculogénesis

1. Observe con diferentes aumentos el corte de ovario teñido con HE y distinga el hilo, la médula
y la corteza. La ovogénesis tiene lugar en la corteza ovárica.
2. Usando diferentes aumentos reconozca y dibuje: folículo primordiales y folículos en
crecimiento: primarios, secundarios, o folículos antral y de Graff.
3. En el folículo de Graff identifique el ovocito.
4. Identifique folículos atrésicos.

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V) CUESTIONARIO

1. ¿Qué diferencia existe entre una población de espermatogonias y una de espermatocitos?
2. ¿Cómo se diferencian las espermátides?
3. ¿En que etapa de la meiosis se encuentran: las espermatogonias, los espermatocitos
primarios, las espermátides y los espermatozoide?.
4. ¿Qué diferencia encuentra entre un folículo primordial y un folículo secundario?
5. ¿En que fase de la meiosis está el ovocito dentro del folículo de Graff?
6.- ¿Qué es el cuerpo lúteo y qué función cumple?
7.- ¿Por qué los folículos ováricos no reaccionan a la hormona folículo estimulanteen la
menopausia?


Smith CA. & Wood Ej. 1997: Biología Celular. Ed. Addison Wesley Iberoamericana.
https://books.google.com.pe/books?id=NxYmIRZQi2oC&pg=PA872&dq=foliculo+atresico&hl=es-
419&sa=X&ved=0ahUKEwij347b1ozXAhUJwiYKHYVOA40Q6AEIJDAA#v=onepage&q=foliculo%20atr
esico&f=false
https://books.google.com.pe/books?id=7zFxo6bmxl0C&pg=PA507&dq=foliculo+atresico&hl=es-
419&sa=X&ved=0ahUKEwij347b1ozXAhUJwiYKHYVOA40Q6AEIMDAC#v=onepage&q=foliculo%20at
resico&f=false

36
PRACTICA N° 13

EXTRACCION DE DNA
I) INTRODUCCION

Técnicas en Biología Celular y Molecular
Se denomina así a todas las técnicas de laboratorio que se usan para aislar ADN o extraerlo en alta
pureza, visualizarlo para ver su estado, cortarlo y pegarlo (nacimiento de la Ingeniería genética),
amplificar una región en una enorme cantidad de moléculas (clonación de fragmentos en bacterias u
otros vectores como virus y PCR), corte de una determinada región con enzimas de restricción para
ver si por una mutación se gana o se pierde un sitio de restricción (análisis de mutaciones por RFLP o
Restriction fragment lengt polymorphism), que significa: diferencias en los tamaños de los
fragmentos de restricción debido a polimorfismos en el ADN entre otras.
Todas estas técnicas tiene diversas aplicaciones generalmente en el diagnóstico de enfermedades

hereditarias, diagnóstico de contaminación bacteriana en alimentos (detección de Escherichi coli
0157, cepas diferentes de Salmonellas, Mycobacterium sp) diagnóstico viral o de infección viral (HIV,
Hepatitis C, PIF, otros), selección de marcadores moleculares para asistir en el mejoramiento
genético de una especie, test de paternidad, diagnóstico de identidad forense, etc.
Los ácidos nucleicos son macromoléculas de suma importancia biológica. Todos los organismos vivos
contienen ácidos nucleicos en forma de ácido desoxiribonucleico (ADN) y ácido ribonucleico (ARN).
Algunos virus solo contienen ADN, mientras otros solo poseen ARN.

Los cromosomas se componen de ADN y proteínas relacionadas, que en conjunto se conocen como
cromatina. El empaquetamiento ordenado del ADN eucariota depende de las histonas, un importante
grupo de pequeñas proteínas que poseen un inusual contenido alto de los aminoácidos básicos
arginina y lisina. Las histonas se dividen en cinco clases: H1, H2A, H2B, H3, H4.
Kornberg postulo que el ADN y las proteínas histónicas se organizan en subunidades repetidas
denominadas nucleosomas. Ahora se sabe que cada nucleosoma contiene una partícula nuclear de
nucleosoma que consiste en 146 pares de bases de ADN superenrrollado envuelto por lo menos dos
veces alrededor de un complejo en forma de disco de ocho moléculas de histona.

El ADN constituye el depósito fundamental de la información genética. Esta información es copiada o
transcripta en las moléculas de ARN, cuyas secuencias de nucleótidos contienen el código para las
secuencias específicas de aminoácidos. Entonces se produce la síntesis de proteínas, en un proceso
llamado de traducción del ARN. Esta serie de fenómenos ha recibido el nombre de dogma central de
la Biología Molecular, que puede resumirse de la siguiente manera:

37

En las células superiores el ADN se halla principalmente en el núcleo integrando los cromosomas.
Una pequeña cantidad se halla en el citoplasma, dentro de las mitocondrias y los cloroplastos. El ARN
se localiza tanto en el núcleo donde se forma, como en el citoplasma, donde tiene lugar la síntesis
proteica.
Toda la vida celular actual almacena su información en código de tripletes en moléculas de DNA
lineales o circulares.

Se debe tomar en cuenta la estructura así como la secuencia de nucleótidos o de aminoácidos y la
composición del producto del gen para evaluar las homologías y la magnitud y el significado de la
divergencia evolutiva en los genes y sus productos.

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La organización y secuencia del genoma es capaz de cambiar, ya sea con lentitud en el curso de la
evolución o con rapidez a consecuencia de una trasposición. Los genes eucariotas que codifican
proteínas casi siempre son miembros de una familia de multigenes, cuyos elementos evidencian datos
de una evolución originada en un gen ancestral común. Se cree que el primer paso en este proceso es
la duplicación de un gen, la mayor parte de las veces quizá por el fenómeno de entrecruzamiento
desigual. Una vez ocurrida la duplicación, sería de esperar que la sustitución de nucleótidos
modifique a varios miembros en diferentes formas y produzca una familia de secuencias repetidas
con estructura similar pero no idéntica.

Diagnóstico molecular: el concepto de diagnóstico molecular es u termino amplio que incluye
técnicas de biología molecular en beneficio de la salud humana, detectando y/o cuantificando
secuencias genéticas específicas de ADN, ARN o proteínas. En la actualidad el diagnóstico molecular
se ha enfocado principalmente en el diagnóstico de enfermedades infecciosas, sin embargo, existe un
aumento progresivo de técnicas moleculares en el área de cáncer y enfermedades genéticas
convirtiendo al diagnóstico molecular en una de las áreas de diagnóstico de mayor dinamismo y
crecimiento, revolucionando las estrategias para el tratamiento de diversas patologías y condiciones
de salud.

El desarrollo de nuevas técnicas de diagnóstico en medicina tiene su origen en los problemas clínicos
que requieren con urgencia un método de diagnóstico, idealmente con una alta sensibilidad y
especificidad que pueda ser accesible a la población. La investigación básica en conjunto con el
desarrollo tecnológico, han permitido el diseño de instrumentos y métodos para responder a las
necesidades clínicas. En el caso del diagnóstico molecular, la detección de segmentos de ADN en una
muestra problema fue la primera estrategia utilizaba en clínica. Mediante técnicas de hibridación de
Southern blot utilizando fragmentos de ADN denominadas sondas, fue posible detectar la presencia
de una región de ADN que contenía una secuencia complementaria a la sonda en una muestra
problema. Posteriormente, la utilización de enzimas de restricción, tijeras moleculares que cortan el
ADN en regiones específicas, junto con el desarrollo de métodos de secuenciación simples, amplio el
número de técnicas disponibles para su uso en clínica.

II) OBJETIVOS
- Examinar un extracto crudo de DNA en células hepáticas
- Interpretar el origen del sistema de Información: RNA – DNA
III) MATERIALES
Que debe traer por mesa de trabajo:
1. 20 grs. De Hígado de pollo o res.
2. 10 grs. De Perejil
3. Material obligatorio

Que proporciona el laboratorio.
1. 4 tubos de ensayo en sus gradillas
2. 10 ml de alcohol de 95% helado.
3. Pipetas Pasteur
4. Mortero de porcelana
5. Propipetas
6. Centrífuga 5 600 RPM
7. Microscopio

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IV) PROCEDIMIENTO
1. Pesar 10 gr. De hígado y 10 gr. De perejil.
2. Cortar ambas muestras en trozos pequeños cada una en una placa Petri diferente.
3. Colocar las muestras cortadas en trocitos cada una en un mortero diferente y agregarle 10 ml
de solución de lauril sulfato de sodio al 5% a cada uno.
4. Homogenizar por aprox. 1 hora (NO BATIR), al término del cual es llevado a centrifugar por 5
minutos a 5300 RPM.
5. Extrae el sobrenadante producto del centrifugado con una pipeta pasteur y colocarlo en un
tubo de ensayo.
6. Agrega poco a poco, 3 ml de alcohol al 95% helado.

Si el procedimiento se realizó como es debido, se habrá formado una capa de alcohol encima de la
capa de extracto.

II) CUESTIONARIO

1. Que indica esto con respecto a la estructura de la molécula de ADN?
2. Con que finalidad se le agrega lauryl Sulfato de Sodio? Explique
3. A qué se debe que en este tipo de experimentos los resultados sean casi siempre mezclas en lugar
de sustancias puras?
4. Por que únicamente 20 aminoácidos están incluidos en el código genético cuando muchos otros
no están?
5. Si 30% de las bases de una cadena sencilla de ADN es T, entonces 30% de las bases de las cadenas
es A. ¿Cierto o Falso? ¿Por qué?

Referencias bibliográficas:
Karp, Gerald. 2008. Biología Celular y Molecular. Ed. Mc Graw Hill.

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