Facultad de Ciencias
Departamento de Química Analítica
Técnicas analíticas de separación (2º grado). Curso 2019-2020
Relación de problemas Electroforesis Capilar
1) La carbónico anhidrasa de buey es una proteína con 18 restos de lisina. Los 19 picos
que hay en la figura se originan por la proteína no modificada pn- más la proteína con
todos los posibles grados de acetilación: p(n+1)-, p(n+2)-, p(n+3)-, ... , p(n+18)-. El voltaje
aplicado al capilar de 0,840 m de longitud es de 2,50 X 104 V. Una molécula neutra
usada como marcador, arrastrada por la corriente electroosmótica tarda 308 segundos
en recorrer 0,640 m, desde la entrada hasta el detector. Los tiempos de migración de
las proteínas pn- y P (n+l)- son 343 y 345 s, respectivamente. Hallar la velocidad
electroosmótica y la movilidad electroosmótica. Hallar las movilidades aparentes y
electroforéticas de pn- y p(n+1)-
2) Consideramos un capilar de longitud l (Ld) = 0,5 m y L (LT)= 0.6 m ¿Cuántos platos
teóricos se podría alcanzar? Tomando como valor típico de ap = 2 x 10-8 m2/(v.s)
para un tiempo de migración de 10 min en ese capilar un campo eléctrico de 25 Kv y
usando como coeficiente de difusión para el K+ = 2 x 10-9 m2/s y para la albumina
de suero = 0,059 x 10-9 m2/s.
3) ¿Cuánto tiempo se necesita para inyectar una muestra igual al 1,0 % de la longitud de
un capilar de 50 cm, si se tiene un diámetro interno de 50 µm y la diferencia de
presión es 2,0 x 104 Pa (0,2 bar). Suponer que la viscosidad es de 0,0010 Kg/(ms),
que es parecida a la viscosidad del agua.
4) ¿Cuánto tiempo se necesita para inyectar una muestra igual al 1,0 % de la longitud de
un capilar de 50 cm, si se tiene un diámetro interno de 50 µm y el campo eléctrico de
inyección es de 10 kV/m?. Suponer que la muestra tiene una conductividad diez
veces menor que la del electrolito de fondo y que µap = 2,0 x 10-8 m2 V-1s-1.
5) Se hace una inyección hidrodinámica aplicando una diferencia de presión de 2,5 x
103 (0,02 atm) durante 2 segundos a un tubo capilar de 75 cm, con un diámetro
interno de 50 µm. Suponiendo que la viscosidad de la disolución tampón es de 10-3
Kg/(ms). ¿Cuál es el volumen de muestra inyectado?
6) Los refrescos dietéticos contienen cantidades apreciables de aspartamo, ácido
benzoico y cafeína. ¿Cuál es el orden previsible de elusión de estos compuestos en
una separación mediante electroforesis capilar en zona cuando se usa un tampón a
pH 9,4 dado que los valores de pka son de 2.96 y 7.37 para el aspartamo, 4,2 para el
ácido benzoico e inferior a 0 para la cafeína?
Cafeína, aspartamo Acido benzoico
7) En una electroforesis de alto voltaje en papel a pH=4,0 ¿qué aminoácidos de la
relación siguiente migrarán hacia el ánodo y cuáles hacia el cátodo?: Gly, Cys, Asp,
Lys, His
¿En qué orden quedarán distribuidos?
pKR pKCOOH pKNH3+ pKR pKCOOH pKNH3+
Gly 2.34 9.60 Thr 13.60 2.11 9.62
Ala 2.34 9.69 Cys 10.28 1.96 8.18
Val 2.32 9.62 Met 2.28 9.21
Leu 2.36 9.60 Asn 2.02 8.80
Ile 2.36 9.68 Gln 2.17 9.13
Pro 1.99 10.96 Asp 3.65 1.88 9.60
Phe 1.83 9.13 Glu 4.25 2.19 9.67
Tyr 10.07 2.20 9.11 Lys 10.53 2.18 8.95
Trp 2.38 9.39 Arg 12.48 2.17 9.04
Ser 13.60 2.21 9.15 His 6.00 1.82 9.17
8) Se ha determinado la movilidad relativa de la lactato deshidrogenasa y de varias
proteínas patrón en electroforesis en gel de poliacrilamida al 7,5% en presencia de
SDS, obteniéndose los valores de la tabla. Calcule la masa molecular estimada de la
LDH.
muestra patrones
lactato gliceraldehído-
glutamato
proteína deshidroge seroalbúmina catalasa 3-P tripsina mioglobina
deshidrogenasa
nasa deshidrogenasa
Mr (kDa) ¿? 68 60 53 36 23.3 17.2
movilidad
(relativa al 0.455 0.18 0.22 0.29 0.40 0.60 0.74
frente)
9) La separación electroforética de las alquipiridinas se lleva a cabo mediante ECZ.
Las separaciones se efectuaron usando capilares de 50-µm ó 75-µm de diámetro
interno, con una longitud total de 57 cm y una distancia entre la inyección y el
detector de 50 cm. El tampón utilizado fue fosfato de litio a pH 2,5. Las
separaciones se efectuaron aplicando un voltaje de 15 kV. La velocidad del flujo
electoosmótico, medida con el marcador neutro, fue de 6,398 x10–5 cm2 V–1 s–1.
El coeficiente de difusión, D, para las alquipiridinas fue de 1,0 x10–5 cm2s–1.(a)
Calcular la movilidad electroforética de la 2-etilpiridina, teniendo en cuenta que
su tiempo de elución es de 8.20 min. (b) ¿Cuantos platos teóricos tiene la 2-
etilpiridina? (c) Las movilidades electroforéticas para la 3-etilpiridina y la 4-
etilpiridina son de 3,366 x 10–4 cm2 V–1 s–1 y 3,397 x 10–4 cm2 V–1 s–1,
respectivamente. ¿Cuál es la resolución esperada entres estas dos alquipiridinas?
(d) Explica las tendencias de la movilidad electroforética que se muestran en el
cuadro siguiente:
Alquipiridina µef (cm2 V–1 s–1)
2-methylpyridine 3,581 x10–4
2-ethylpyridine 3,222 x10–4
2-propylpyridine 2,923 x10–4
2-pentilpyridine 2,534 x10–4
2-hexylpyridine 2,391 x10–4
