Práctica No.

6
CURVAS DE
TITULACION DE AMINOACIDOS
FUNDAMENTO TEÓRICO:

Un aminoácido puede existir en varias formas iónicas, dependiendo del pH del medio en donde se
encuentre disuelto. Esta propiedad se describe mejor utilizando la ecuación de Henderson-
Hasselbach. Los aminoácidos tienen al menos dos grupos disociables, el amino y el carboxilo;
pueden tener más si el grupo R tiene a su vez grupos que se puedan ionizar. Para cada uno de estos
grupos existe un pK, el del carboxilo se le llamará PKCOOH y PKNH2 al del amino.

La forma más protonada de un aminoácido que no tiene grupos ionizables en el grupo R es:

Esta especie totalmente protonada puede sufrir la pérdida de un protón del carboxilo y pasar a la
siguiente forma iónica:
Finalmente, cuando el grupo -NH3+ pierde un protón, el aminoácido pasa a la forma menos
protonada posible (-NH2):

En la siguiente imagen se puede observar el proceso de ionización completo:

Si se aplica la ecuación de Henderson – Hasselbach a la reacción anterior, es fácil darse cuenta, que
las formas iónicas en las que puede existir un aminoácido, están determinadas por el pH del medio
en el que se encuentra disuelto, de tal manera que:
1. Cuando el pH < pKCOOH se encontrará únicamente (100%) la forma más protonada, (ácida), del
aminoácido, es decir la que se señala como A en el proceso de disociación completa.

2. Se sabe que cuando el pH = pKCOOH existen la sal y el ácido en la misma cantidad, para este caso
se tendrá el 50% de la forma A, (ácido), y 50% de la forma B, (sal).

3. Cuando el pH > pKCOOH y pH < pKNH2, la forma A ya no se encuentra puesto que toda, (100%),
se ha convertido a la forma B.

4. Cuando el pH se acerca al valor del pKNH2, el compuesto B, que a pHs más bajos se comportó
como sal, ahora es un ácido y dona protones para transformarse en el compuesto C. De tal forma
que cuando pH = PKNH2 se tendrá 50% del compuesto B, (ácido) y 50% del compuesto C, es decir,
su sal.

5. Finalmente, cuando pH > pKNH2, la forma B ya no se encuentra y el 100% del aminoácido se

encuentra en la forma C.

En la Tabla siguiente se muestran los valores de pKCOOH, pKNH2 y pKR para algunos aminoácidos.
El pKR está relacionado con los aminoácidos que tienen en el grupo R un grupo ácido o básico, de
tal manera que solamente este tipo de aminoácidos poseen algún valor de pKR. Nótese como el
valor de pKCOOH es más pequeño que el de pKNH2, o sea que el carboxilo es un ácido más fuerte,
se disocia más fácilmente, que el grupo amino.
 Valores de pKCOOH, pKNH2 y pKR de algunos aminoácidos.

A continuación pondremos como ejemplo la ionización del ácido glutámico el cual tiene los tiene los
siguientes valores de pK: pKCOOH= 2.19, pKNH2=9.67 y pKR=4.25. Las diferentes formas
moleculares en las que se puede encontrar este compuesto dependiendo del pH son las siguientes:

La siguiente figura muestra la curva de titulación para el ácido glutámico:

Curva de titulación del ácido glutámico. Las letras representan las fórmulas que se encuentran en la
imagen de ionización completa
PRÁCTICA No. 6
Objetivos:
Trazar las curvas de titulación de algunos aminoácidos y predecir el estado de ionización en que se
encuentran, dependiendo del pH.
Realizar la titulación de la glicina, un aminoácido neutro, y de la histidina, un aminoácido básico,
para obtener la curva completa de valoración utilizando un ácido titulante (HCl 0.5 M) y una base
(KOH 0.5 M).
Determinar a partir de la curva de titulación los valores pK y K de cada uno de los grupos ionizables,
así como las zonas tampón y la posible importancia fisiológica de estos equilibrios.
Material y Reactivos:
Material:
4 vasos de precipitado
2 agitadores
15 pipetas de 1 y 5ml
Reactivos:
Soluciones de aminoácidos
Solución de HCl 0.5 M para los grupos α-carboxilo
Solución de KOH 0.5 M para los grupos α-amino.
Agua destilada
Procedimiento:
Teniendo en cuenta que los pK de los grupos funcionales de los aminoácidos se encuentran
localizados en distintos rangos de pH, es necesario realizar una titulación que abarque
prácticamente todo el rango de pH (ácido y básico) para cada aminoácido. Así, se emplea una
solución de HCl 0.5 M para los grupos α-carboxilo, y una solución de KOH 0.5 M para los grupos α-
amino. Dado que la histidina presenta el grupo ionizable imidazol en su cadena lateral, es necesario
también caracterizar su pKR. Por lo tanto, hay que realizar cuatro valoraciones (dos por cada
solución de aminoácido, una con ácido y otra con base). Otra posibilidad es ajustar el pH de la
solución inicial a valores muy ácidos ó muy básicos, y titular con un solo agente; el problema de esta
segunda aproximación radica en la dilución de la muestra tras sucesivas adiciones de ácido ó base
fuerte.

1. Calibrar el potenciómetro y lavarlo con agua destilada, según las instrucciones que se
proporcionan.
2. Medir 50 mL de la solución de aminoácido a valorar y añadirlos a un vaso de precipitados.
3. Introducir el electrodo en la solución y medir el pH (pH inicial). Anotar el valor en el protocolo
experimental.
4. Lavar el electrodo con agua destilada.
5. Añadir a la solución 0.5 mL ácido o base titulante, agitar con cuidado y medir el pH de nuevo.
Anotar el volumen añadido y el pH medido.
6. Repetir la adición de ácido o base titulante en alícuotas de 0.5 mL hasta terminar la valoración,
es decir, cuando se haya cubierto el rango entero de pH, o bien se haya completado la titulación de
todos los grupos funcionales de la molécula.
RESULTADOS:

Curva de Titulacion de Histidina

8.4
8.3

8.2

8.1

7.9

7.8

7.7

7.6

7.5
0 5 10 15 20 25 30
Equivalentes de OH-
PH VOL
12 0
11.3 0.5
11.19 1
11.05 1.5
10.87 2
10.65 2.5
10.58 3
10.48 3.5
10.4 4
10.32 4.5
10.26 5
10.16 5.5
10.12 6
10.08 6.5
10.03 7
9.98 7.5
9.94 8
9.83 8.5
9.84 9
9.82 9.5
9.8 10
9.77 10.5
9.73 11
9.7 11.5
9.63 12
9.55 12.5
9.6 13
9.59 13.5
9.56 14
9.54 14.5
9.51 15
9.49 15.5
9.47 16
9.46 16.5
9.44 17
9.41 17.5
9.39 18
9.38 18.5
9.36 19
9.32 20
9.28 21
9.25 22
9.2 23
9.18 24
9.12 25
9.09 26
9.04 27
9.01 28
8.98 29
30
8.91 31
8.81 33
8.73 35
8.64 37
8.55 39
8.42 41
8.27 43
8.07 45
7.81 47
7.54 49
7.21 51
6.97 54
6.78 57
6.61 60
6.46 63
6.35 66
6.24 69
6.14 72
6.07 75
DIAGRAMA DE FLUJO DE LA PARTE EXPERIMENTAL
 RESULTADOS
Nombre del aminoácido Histidina
Clasificación del aminoácido polar
Concentración del 0.1M (al 1%)
aminoácido
Escriba la fórmula
C6H9N3O2

Eq. OH- Eq. H+

0.0205 0.051

0.05 0.021

0.028 0.043
 CUESTIONARIO

1. Usando la ecuación de Henderson-Hasselbalch, calcular el pKa de cada grupo ionizable titulado.

2. ¿Coincide con el pKa reportado en los libros?

pKa experimental (aproximado) pKa reportado en libros

pKaCOOH = 2.10 2.34

pKaNH3 = 9.48 9.60

Los valores de pKa para el grupo carboxilo y grupo amino se encuentran muy
próximos de los reportados en los libros.

3. ¿Cómo se podría confirmar la identidad del aminoácido?

Mediante una curva de titulación, caracterizando sus diferentes pK´s, que para cada aminoácido
son diferentes. Podríamos primero identificar si contienen o no un grupo R ionizable, lo que nos
daría información de cuál aminoácido podría ser, y con sus pk´s experimentales, comparar con los
teóricos.

4. Dibujar la curva que se esperaría en la titulación del aminoácido neutro y la que se esperaría en
la titulación del aminoácido básico, señalando las especies predominantes en cada región.
Para ambos aminoácidos cuando el pH<pKa el aminoácido se encuentra en su forma más protonada,
cuando pH=pKa existe un 50% de cada especie (protonada y desprotonada) y cuando pH>pKa el
aminoácido se encuentra en su forma más desprotonada.