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Electroforesis Capilar: Migración de Aminoácidos

En este documento se presentan dos problemas de electroforesis capilar. El primero pregunta sobre el orden de migración y carga de cinco aminoácidos a pH=4. La solución indica que aspartato, lisina e histidina migrarán hacia el cátodo y glicina y cisteína hacia el ánodo, en ese orden. El segundo problema pide calcular la masa molecular de la lactato deshidrogenasa a partir de su movilidad relativa respecto a patrones proteínicos conocidos mediante electroforesis en gel. La solución determina que la L

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Electroforesis Capilar: Migración de Aminoácidos

En este documento se presentan dos problemas de electroforesis capilar. El primero pregunta sobre el orden de migración y carga de cinco aminoácidos a pH=4. La solución indica que aspartato, lisina e histidina migrarán hacia el cátodo y glicina y cisteína hacia el ánodo, en ese orden. El segundo problema pide calcular la masa molecular de la lactato deshidrogenasa a partir de su movilidad relativa respecto a patrones proteínicos conocidos mediante electroforesis en gel. La solución determina que la L

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Facultad de Ciencias

Departamento de Química Analítica

Técnicas analíticas de separación (2º grado). Curso 2019-2020


Relación de problemas Electroforesis Capilar.

7) En una electroforesis de alto voltaje en papel a pH=4,0 ¿qué aminoácidos de la


relación siguiente migrarán hacia el ánodo y cuáles hacia el cátodo?: Gly, Cys, Asp,
Lys, His

¿En qué orden quedarán distribuidos?

pKR pKCOOH pKNH3+ pKR pKCOOH pKNH3+


Gly 2.34 9.60 Thr 13.60 2.11 9.62
Ala 2.34 9.69 Cys 10.28 1.96 8.18
Val 2.32 9.62 Met 2.28 9.21
Leu 2.36 9.60 Asn 2.02 8.80
Ile 2.36 9.68 Gln 2.17 9.13
Pro 1.99 10.96 Asp 3.65 1.88 9.60
Phe 1.83 9.13 Glu 4.25 2.19 9.67
Tyr 10.07 2.20 9.11 Lys 10.53 2.18 8.95
Trp 2.38 9.39 Arg 12.48 2.17 9.04
Ser 13.60 2.21 9.15 His 6.00 1.82 9.17
El punto isoeléctrico es el pH al que un polianfólito tiene carga neta cero. El concepto
es particularmente interesante en los aminoácidos y también en las proteínas. A este
valor de pH la solubilidad de la sustancia es casi nula.
Para calcularlo se deben utilizar los pKa.

(Los pKa a considerar para esta ecuación, en una tabla de pH, son los que contienen a la
especie química con carga igual a cero, cuando tienen más de un pKa).
Las moléculas complejas, tales como las proteínas, se combinan con los iones
hidrógeno y con otros iones presentes en la disolución, dando lugar a la carga neta de la
molécula.

Solucion:
pI carga se mueve hacia
Gly 2.34+9.60 /2 = 5.97 (+) cátodo
Cys 1.96+8.18 /2 = 5.07 (+) cátodo
Asp 1.88+3.65 /2 = 2.765 (-) ánodo
Lys 8.95+10.53 /2 = 9.74 (+) cátodo
His 6.00+9.17 /2 = 7.585 (+) cátodo
Orden de avance: cuanto más lejano sea el pI del pH, mayor es la carga y más
rápidamente se mueven: Lys > His > Gly > Cys

8) Se ha determinado la movilidad relativa de la lactato deshidrogenasa y de varias


proteínas patrón en electroforesis en gel de poliacrilamida al 7,5% en presencia
de SDS, obteniéndose los valores de la tabla. Calcule la masa molecular
estimada de la LDH.

muestra patrones
lactato gliceraldehído-
glutamato
proteína deshidroge seroalbúmina catalasa 3-P tripsina mioglobina
deshidrogenasa
nasa deshidrogenasa
Mr (kDa) ¿? 68 60 53 36 23.3 17.2
movilidad
(relativa al 0.455 0.18 0.22 0.29 0.40 0.60 0.74
frente)

Representando movilidad frente a log(Mr) se obtiene una recta:

La ecuación ajustada es:


Movilidad = 4.65 - 0.926 log(Mr)
r² = 0.9944

De donde LDH tiene Mr = 33900 Da

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