Intrumentacion y Analisis

 Electroforesis.
- Definición, Tipos, Fundamentos

 Electroforesis Capilar.-Velocidades de migración, Altura de Platos, Flujo electro
osmótico, Instrumentación de trabajo
 Tipos de detección.- Absorbancia, Indirecta, influorescencia, Electroquímica,
Espectrometría de masas
 Inyección de la muestra.- Electrocinética, Hidrodinámica, Hidrostática.
 Aplicaciones de la electroforesis capilar.- Electroforesis capilar de zona,
Electroforesis capilar en gel,Isotacoforesis capilar (citp),.
 Principios basicos (enfoque isoelectrico capilar )
 Electrocromatografia capilar.- Definición, Principios, Instrumentación y trabajo,
En columna empaquetada o rellena.
 Cromatografia capilar electronica micelar Introduzca su logotipo o su 1
nombre aquí
ELECTROFORESIS CAPILAR
Definicion
es una técnica de separación
utilizada en distintas áreas (química,
bioquímica, etc.) para separar las
diferentes moléculas presentes en
una disolución
La separación se lleva a cabo

en un tubo hueco de
diámetro muy pequeño
(menos de 50 µm de
diámetro), de ahí que reciba
el nombre de capilar Introduzca su logotipo o su
nombre aquí
La EC ha contribuido algunos fármacos
al fortalecimiento de importantes en el
estudio de diferentes
la ciencia y la
ramas en el área de la
medicina moderna salud
contaminantes
separar aminoácidos, alimenticios, material
ácidos orgánicos, genético
iones inorgánicos
Introduzca su logotipo o su
nombre aquí
TIPOS
electroforesis
capilar
electroforesis
ordinaria
La separación se
es una técnica de lleva a cabo en un
cargadas bajo la
separación basada en capilar de sílice
acción de un
la diferente velocidad fundida de diámetro
campo
de migración de las muy pequeño
eléctrico.
distintas especies
nombre aquí
de elevada contiene una se aplica un campo
Electroforesis masa solución eléctrico de
ordinaria molecular, de amortiguadora corriente continua a
interés la placa durante un
acuosa en el
biológico y
interior de sus periodo fijo
bioquímico.
poros
es la metodología
clásica que se ha es capaz de separar
utilizado durante Las separaciones varias muestras en
muchos años para ordinarias se forma simultánea.
separar especies efectúan sobre una Dichas muestras se
complejas capa delgada y plana introducen en la
o sobre una placa forma de manchas o
hecha de un gel bandas sobre la
semisólido placa
nombre aquí
produce separaciones
alta velocidad alta resolución
volúmenes de muestra
extraordinariamente
pequeños (de 0.1 a 10 nL ) Se pueden utilizar detectores
Las especies separadas son
cuantitativos como los que se
eluidas desde uno de los
emplean en cromatografía de
extremos del capilar líquidos de alta resolución
Introduzca su logotipo o su 6
nombre aquí
EQUIPO DE
FIGURA N°01: Esquema de los elementos

básicos de la Electroforesis Introduzca
Capilar.su logotipo o su 7
nombre aquí
VELOCIDADES DE MIGRACION EN ELECTROFORESIS CAPILAR
La velocidad de migración de un ion v

depende de la fuerza del campo
eléctrico aplicado. A su vez, el campo
eléctrico es proporcional a la magnitud es deseable
del voltaje aplicado V e inversamente aplicar voltajes
proporcional a la longitud L sobre la elevados para
que se aplica. obtener
migraciones
iónicas y
separaciones
rápidas
(1)
nombre aquí
ALTURA DE PLATOS O EFICACIA EN ELECTROFORESIS CAPILAR
solo es necesario En la práctica, el las separaciones se

considerar la calentamiento de Joule puede describen a menudo
difusión longitudinal sumar discrepancias así como de manera similar a
el proceso de inyección. la cromatografía
el número de platos (N)

viene dado por:
• D: coeficiente de
difusión del
soluto, en cm2 s-1
• V: voltaje aplicado
(2) • L: longitud
nombre aquí
la resolución se incrementa al aumentar el
número de platos
ya que para la electroforesis el número de

es aconsejable aplicar voltajes elevados con platos no se incrementa con la longitud
la finalidad de obtener separaciones con de la columna
una elevada resolución
electroforesis ordinaria en gel el calentamiento por el efecto Joule limita la magnitud del
voltaje aplicado a un valor de alrededor de 500 V
Ventaja del
formato capilar
nombre aquí
disipación de energía es
inversamente proporcional a la alta relación superficie-volumen
resistencia del capilar
(P = I2 /R)
enfriamiento
efectivo
se pueden aplicar voltajes

muchísimo más altos a los resultado de estos dos factores, el
capilares que a las placas
ensanchamiento de banda debido a
la convección térmica no tiene lugar
o es insignificante
misma cantidad de calor
nombre aquí
potenciales normalmente numero de platos
utilizados
20.000 y 60.000 V 100 000 y 200 000 x 5000 a 20 000

del HPLC
mejoras en la rapidez y en
la resolución con respecto a
la disposición convencional mejoras en la velocidad y en la
resolución por arriba de las que se
obtienen con el formato de placa
campos elevados
alcanzan el límite teórico

anchuras de pico marcado por la difusión
longitudinal. Introduzca su logotipo o su 12
nombre aquí
zona de la muestra excesivamente larga
por simplificación se
determina el límite dice que si la longitud
para el valor de la zona es de 3 mm o
mínimo de N menor en un capilar de
Analitos separados por electroforesis
100 cm
capilar se pueden detectar al pasar el
detector
Puede ignorarse esta

contribución en el
ensanchamiento de la
electroferogramas tienen la banda
misma apariencia general
nombre aquí
no se interpreta adecuadamente
En la una serie de extracciones
cromatografía secuenciales, pero se mantiene el
término N
La electroforesis incluso
N se usa para describir separaciones no se parece a tales
tanto cromatográficas como procesos químicos.
electroseparaciones
ignoramos el origen de N y retenemos este

concepto para describir la calidad de las
separaciones electroforéticas
nombre aquí
la unión de dicho analito
se cuantifica como un
factor de capacidad k
como el usado en
cromatografía
la eficacia de N
disminuye rápidamente
con la unión
FIGURA N°02: Efecto en la eficacia de un analito unido
reversiblemente al capilar en electroforesis capilar
nombre aquí
FLUJO ELECTROOSMÓTICO (FEO)
Se origina cuando se aplica un potencial elevado a

través de un capilar que contiene un tampón
El disolvente migra hacia el La velocidad de

migración puede
cátodo o el ánodo
ser apreciable
nombre aquí
la causa del flujo electroosmótico es
la doble capa eléctrica que se forma
en la interfase sílice-solución.
Los cationes de la
solución amortiguadora
se agrupan sobre la doble
capa eléctrica adyacente
a la superficie negativa
del capilar de sílice.
Los cationes situados en la

capa exterior difusa de la
doble capa son atraídos
FIGURA N° 03: Distribución de cargas en la interfase capilar- hacia el cátodo o electrodo
sílice y flujo electroosmótico resultante. negativo
nombre aquí
FIGURA N° 04: Perfiles de flujo para los líquidos: a) por presión electroosmótica y b) por presión
hidrodinámica
Puesto que el flujo se

origina en las paredes del
tubo
La electroósmosis da lugar a un flujo

de la disolución con un perfil plano a
través del tubo
nombre aquí
La velocidad del flujo electroosmótico suele ser mayor que las velocidades de migración electroforéticas de
los iones individuales y, en efecto, se convierte en la bomba de la fase móvil en la electroforesis capilar de
zona. Aun cuando los analitos migran según sus cargas dentro del capilar, la velocidad de flujo
electroosmótico generalmente es suficiente para arrastrar todas las especies positivas, neutras e incluso
negativas, hacia el mismo extremo del capilar, de manera que todas pueden ser detectadas a su paso por un
punto común.
FIGURA N°05: Velocidades en presencia del flujo

electroosmótico. La longitud de la flecha junto al ion
indica la magnitud de su velocidad y el sentido de la
flecha indica la dirección del movimiento. El
electrodo negativo está situado a la derecha y el
positivo a la izquierda para esta solución.
nombre aquí
La velocidad del flujo electroosmótico
(v) se expresa mediante la ecuación:
En presencia de la electroósmosis, la velocidad

de un ion es la suma de su velocidad de
migración y la velocidad del flujo
electroosmótico
nombre aquí
ORDEN DE ELUCIÓN
En algunos casos, la velocidad
de flujo electroosmótico no es
lo bastante grande como para
1 Los cationes más rápidos superar la velocidad a la cual se
mueven algunos aniones hacia
el ánodo, en cuyo caso estas
Los cationes sucesivamente especies se desplazarán en esa
2 dirección en lugar de ir hacia el
más lentos
cátodo.
Todas las especies neutras en
3 una zona única
4 Los aniones más rápidos 5 Los aniones más lentos
nombre aquí
Es el tiempo que tarda un soluto para migrar desde el
TIEMPO DE MIGRACIÓN (tm )
punto en que es introducido hasta el detector.
Si se utiliza un capilar
de longitud total L y
la longitud al
detector es l:
La cantidad de platos teóricos Donde W, es la

en presencia de flujo anchura del pico
electroosmótico se puede medida en su base.
determinar como:
nombre aquí
INSTRUMENTOS PARA ELECTROFORESIS CAPILAR
Esta en el
Se dice que se
Cuando el extremo de
opera en modo
inyección
ánodo (+) capilar
normal
Esta al final de Se puede

Cuando el la inyección, es aplicar voltios
cátodo (-) modo polaridad potenciales de
inversa hasta 1000 Vcm
a corriente constante
La potencia suministrada por
equipos comerciales puede
operar de diferentes a potencial constante o
maneras: a potencia constante.
nombre aquí
Los detectores son En la electroforesis capilar
cada ión migra a una
semejantes en diseño y
velocidad determinada por
función a los de HPLC. su movilidad
Ya descritos electroforética
Por tanto, las bandas de analito En HPLC todas las especias

atraviesan el detector a pasan a través del detector a
diferentes velocidades, lo cual la velocidad de la fase móvil,
hace que las áreas de los picos y las áreas de los picos son
sean ligeramente dependientes independientes de los
de los tiempos de retención. tiempos de retención. Introduzca su logotipo o su
nombre aquí
nombre aquí
• Los detectores de fluorescencia y absorbancia se han empleado ampliamente en
1-Detección por electroforesis capilar. Para que el volumen de detección se mantenga dentro del orden
de magnitud de nL o inferior, la detección se lleva a cabo en columna. Para ello, se
elimina el recubrimiento protector de poliimida de la parte externa de una pequeña
absorbancia sección de la columna por combustión, disolución o raspado, y esa parte del capilar hace
las veces de la celda de detección.
2-Detección • Se ha utilizado el método de detección indirecta de absorbancia para lograr la

detección de especies que, debido a su pequeña absortividad molar, resultan
difíciles de detectar sin derivatización. Se incorpora un cromoforo iónico al tampón
indirecta de la electroforesis, lo que se hace que el detector reciba una señal constante
debida a la presencia de esta sustancia.
• Al igual que en el HPLC, la detección por fluorescencia incrementa la sensibilidad y

3-Detección por selectividad para los analitos fluorescentes o los productos derivatizados
fluorescentes. Se prefiere la instrumentación basada en el empleo de láser, con la
influorescencia finalidad de focalizar la radiación excitadora en una pequeña zona del capilar y lograr
los bajos límites de detección inherentes al empleo de fuentes intensas.
nombre aquí
• Se han utilizado 2 tipos de detección electroquímica en electroforesis capilar: conductimétrica y
4-Detección amperométrica. Uno de los problemas de la detección electroquímica ha sido el de aislar los
electrodos del detector de la influencia de los elevados potenciales necesarios para la separación.
• Uno de los métodos de aislamiento consiste en unir el capilar a un segundo capilar que contiene los
electroquímica electrodos del detector mediante una unión de vidrio poroso o gráfico.
• Los flujos tan pequeños, de alrededor de 1 µL/min, que proceden de los capilares de la
electroforesis, hacen posible el acoplamiento directo del efluente del capilar de un dispositivo
5-Detección por electroforético a la fuente de ionización de un espectrómetro de masas.
• En la actualidad la interfase mas empleada para el proceso de introducción de las
espectrometría muestras/ionización es el sistema de electronebulización, aunque también se ha empleado el
bombardeo por átomos rápidos.
de masas • La electroforesis capilar con detector espectrométrico de masas tiene solamente una década y
media, pero ha llegado a ser de gran interés para biólogos y bioquímicos para la determinación de
moléculas grandes de origen natural, como las proteínas, fragmentos de ADN y péptidos.
nombre aquí
FIGURA N°06: Electroforesis capilar. Instrumentación
nombre aquí
Es un procedimiento crucial en la electroforesis capilar.
Aún que son optimas las variables fisicoquímicas del
INYECCIÓN DE LA MUESTRA
protocolo electroforético, se puede producir una
separación no satisfactoria.
Tipos de Inyección Para preservar la eficacia teóricas de

la electroforesis capilar, el sistema
de inyección deberá:
basan en aplicar
Inyección  Evitar el ensanchamiento de la zona de

gradiente de voltaje
Electrocinética inyección.
 el volumen de la muestra introducida
no deberá exceder el 1-2% del volumen
gradiente de presión del total del capilar.
Inyección Hidrostática
Inyección Hidrodinámica Introduzca su logotipo o su 29

nombre aquí
Inyección electrocinética
 La muestra ingresa al capilar

debido a la actuación conjunta de
los fenómenos de migración
iónica y flujo electroosmótico.
Esta técnica de inyección es
discriminatoria al introducir
mayor cantidad de los iones más
móviles respecto a los más lentos.
Se introduce un extremo del capilar en el vial que contiene la
muestra y el otro extremo en el vial que contiene el tampón , y
se aplica un voltaje elevado durante un breve periodo de
tiempo.
nombre aquí
La introducción de la muestra al capilar mediante una
Inyección hidrodinámica diferencia de presión entre los dos extremos de la
columna, es el método más convencional de inyección.
Existen varias formas de producir una presión superior al extremo del

capilar en contacto con la disolución de la muestra:
 Flujo gravitatorio de la disolución electrolítica

mediante la elevación del vial con la muestra.
 Mediante aplicación de presión sobre la muestra
 Succión de la muestra mediante aplicación de vacío al
vial de salida.
nombre aquí
Inyección hidrostática
La inyección de la muestra en electroforesis capilar se hace de

dos únicas formas:
 Aplica una diferencia de presión entre los extremos del

capilar.
 Otra alternativa es haciendo vacío en el
comportamiento del tampón del final del detector o
una presión positiva de aire a la muestra.
nombre aquí
APLICACIONES DE LA ELECTROFORESIS CAPILAR
Las separaciones por electroforesis capilar se llevan a cabo de distintas maneras:

 electroforesis capilar de zona
 la electroforesis capilar en gel
 el enfoque isoeléctrico capilar
 isotacoforesis capilar
 cromatografía micelar electrocinética
nombre aquí
ELECTROFORESIS CAPILAR DE ZONA
• En la electroforesis capilar de zona, la composición de la solución
amortiguadoras constante en toda la zona de separación. El campo aplicado
hace que los diferentes componentes iónicos de la mezcla migren cada uno
según su propia movilidad y se separen en zonas que pueden estar definidas
por completo o parcialmente traslapadas.
nombre aquí
ELECTROFORESIS CAPILAR DE ZONA
• Separación de iones pequeños • Separación de moléculas
• En la mayoría de las separaciones • Mediante electroforesis capilar de zona es
electroforéticas de iones pequeños se posible separar y analizar una gran
observan tiempos de análisis breves variedad de moléculas pequeñas, como
cuando los iones del analito se mueven en herbicidas sintéticos, plaguicidas y
el mismo sentido que el flujo electro fármacos, siempre que sean iones o que
osmótico. Por consiguiente, en las puedan producirlos. También proteínas,
separaciones de cationes las paredes de aminoácidos e hidratos de carbono se han
los capilares no se tratan, y tanto el flujo separado en tiempos mínimos mediante
electro osmótico como los cationes se electroforesis capilar de zona
desplazan hacia el cátodo
nombre aquí
3.4) ENFOQUE ISOELÉCTRICO CAPILAR
Se trata de una variante de electroforesis en la que el gel (poliacrilamida) posee un gradiente de pH fijado en su
estructura. Esto se consigue incluyendo en su preparación moléculas ionizables con valores de pK diferentes. Como
consecuencia, al avanzar los componentes de la muestra a lo largo del gel se encuentran en entornos de pH diferente, y
eventualmente alcanzan una región en la cual el pH local es igual al punto isoeléctrico de la molécula muestra y, en
consecuencia, ésta detiene su avance. Se alcanza un equilibrio y se consigue la separación de los componentes de la
muestra de acuerdo con su punto isoeléctrico, que además se puede medir, pues se conoce la geometría del gradiente
de pH fijado al gel
nombre aquí
Fundamento:
• Una proteína tiene grupos cargados de ambas polaridades, por lo que presenta un punto isoeléctrico (pI) que
corresponde al valor de pH al cuál la molécula posee carga neta (z) igual a cero (zwitterion), y por lo tanto es inmóvil en
un campo eléctrico. En un zwitterion simple, pI= (pK1+ pK2)/2 (Fig. A); mientras que para un aminoácido de cadena
lateral ácido-base, pI es el promedio de los pK entre la especie con carga+1 y -1
nombre aquí
¿QUÉ ES LA
ELECTROCROMATOGRAFÍA
CAPILAR?
Es una técnica en la cual la
fase móvil es conducida a
través de la cama
cromatográfica
por electroósmosis.
es una combinación de dos técnicas Se separar analitos Electrocromatografía

analíticas, Cromatografía líquida de alto sobre la base de capilar, son los
rendimiento y electroforesis capilar. su masa para cargar capilares, con fase
cociente al pasar un estacionaria de HPLC.
alto voltaje entre
extremos de un tubo
capilar, que se llena
con el analito. Introduzca su logotipo o su 38
nombre aquí
INSTRUMENTACIÓN Y TRABAJO
Muestras
de frasco
Ampollas de
Salida de
origen y de
datos
destino
COMPONENTES
BÁSICOS Capilar
Detector
lleno
Fuente de
alimentación
Electrodos
de alto
voltaje Introduzca su logotipo o su 39
nombre aquí
CAPILAR
SALIDA DEL
DETECTOR
ELECTRODOS
FRASCO DE LA
FUENTE
FIGURA N°11: Instrumentación y trabajo de electrocromatografía capilar. Introduzca su logotipo o su 40

nombre aquí
ELECTROCROMATOGRAFÍA EN COLUMNA
EMPAQUETADA O RELLENA
SOLVENTE
POLAR Las separaciones
dependen de la
distribución del
analito entre la fase
móvil y la fase
estacionaria liquida
retenida por el
relleno.
FLUJO ELECTROOSMÓTICO COLUMNA
RELLENA
nombre aquí
FIGURA N°12:
Electrocromatograma en el que
se muestra la separación
electrocromatográfica de 16
hidrocarburos aromáticos
policíclicos en un capilar de
33cm de longitud y diámetro
interno de 75 μm.
nombre aquí
ELECTROFORESIS CAPILAR EN GEL
 Esta técnica se lleva a cabo en una matriz polimérica con estructura de gel poroso que contiene una mezcla de solución
amortiguadora que llena los poros.
 Este tipo de medio proporcionaba una acción de tamiz molecular que retrasaba la migración de las especies por analizar
en diferentes grados, en función del tamaño de poro del polímero y del tamaño de los iones del analito.
 Dicho efecto de tamiz es en especial útil en las separaciones de macromoléculas, como proteínas, fragmentos de ADN y
oligonucleótidos que tienen en esencia la misma carga pero distinto tamaño.
TIPOS DE GELES
 AGAROSA Y POLIACRILAMIDA :
 En primer lugar adquieren la misma forma, también forman tubos cuyos diámetros interno es de 5 nm, y estos geles se
denominan geles de tubo o geles de disco. Los geles también se emplean en capilares con un diámetro interno inferior a
0,5 mm.
 En segundo lugar, ambas estructuras están libres de cargas iónicas, así evita que la disolución del tampón se desplace
por el gel cuando se active el campo eléctrico: FEO. Importante recordar que, obtener geles excelentes es una arte,
significa que tenemos que controlar tanto los detalles de elaboración así como la práctica, cuyos requisitos para un
análisis es una muestra de patronesinternos.
nombre aquí
Equipo electroforesis con gel.
nombre aquí
ISOTACOFORESIS CAPILAR (CITP)
ISO IGUAL
Las bandas de los
analitos migran a la
misma velocidad.
TACO VELOCIDAD
nombre aquí
Iones de mayor
movilidad.
FRONTAL O
CONDUCTOR (>
componentes a
MUESTRA analizar)
Iones de menor
TERMINAL movilidad que los
de la muestra.
Ejemplo: Análisis de iones, cuando el campo eléctrico es aplicado, los aniones empiezan a
migrar hacia el ánodo, de forma que el anión delantero migra con la mayor velocidad,
seguido por el anión con la siguiente mayor movilidad, y así sucesivamente.
nombre aquí
La selección de los electrolitos guías y terminales
Conocimiento de los valores de pKa para todos los componentes

movilidades. de la muestra.
Separación de los distintos analitos en bandas adyacentes.
1° Los iones migran a distintas velocidades. La especie más rápida en la banda mas próxima al tampón
conductor.
La especie más lenta inmediatamente por delante del
terminal.
El potencial se hace mas reducido para las bandas más

2° Las bandas se mueven a la misma velocidad. móviles.
El potencial se hace más intenso para las bandas más lentas.

nombre aquí
• Separación de proteínas.
• Separación de fármacos.
• Separación de cationes y aniones en corridas
APLICACIONES: diferentes.
• Análisis del color y sabor de los alimentos.
• Análisis de iones inorgánicos.
nombre aquí
CROMATOGRAFIA CAPILAR ELECTRONICA
MICELAR
Los métodos de electroforesis capilar que

se han visto hasta ahora no son aplicables
a la separación de solutos no cargados. Sin
embargo, en 1984 TERABE y colaboradores
describieron una modificación del método
que permitía la separación de fenoles y
nitroderivados aromáticos de bajo peso
molecular.
nombre aquí
Esta técnica implica la introducción de un tensioactivo, como por
ejemplo el dodecil sulfato de sodio (SDS), en un nivel de
concentración en el cual se formen micelas. Las micelas se forman
en disolución acuosa cuando la concentración de las sustancias
tensioactivos que tienen una larga cadena hidrocarbonada y un grupo
iónico se incrementa por encima de un cierto valor denominado
concentración micelar crítica (CMC).
Los iones empiezan a formar agregados

esféricos, de entre 40 y 100 iones, cuyas
cadenas hidrocarbonadas se orientan hacia
el interior mientras que los extremos
cargados quedan orientados hacia el
exterior, en contacto con el agua
nombre aquí
La superficie de una micela de este tipo es anionica y posee una
elevada carga negativa, lo cual hace que tenga una movilidad
electroforética alta, desplazándose hace el electrodo positivo. Sin
embargo, algunos de los tampones presentan una velocidad de flujo
electro electroosmótico hacia el electrodo negativo tan alta que hace
que las micelas anionicas también se desplacen hasta este electrodo,
pero a una velocidad muy reducida.
Cuando una muestra se introduce en este medio los distintos

componentes se distribuyen entre la fase acuosa y la fase
hidrocarbonada del interior de las micelas.
Las situaciones resultantes de estos equilibrios de distribución

dependerán de la polaridad de los solutos. Si los solutos son polares se
ve favorecida se permanencia en la fase acuosa, si los compuestos son
no polares, el entorno preferido es el hidrocarbonado de la micela
nombre aquí
El sistema anteriormente descrito es bastante similar al que tiene
lugar en una columna cromatografía de reparto líquido, excepto que
la fase estacionaria se va desplazando también a lo largo de la
columna, pero a una velocidad mucho más lenta que la fase móvil.
El mecanismo por el cual se produce la separación es idéntico en

ambos casos y depende de las diferencias de los coeficientes de
distribución de los analitos entre la fase móvil acuosa y la fase pseudo
estacionaria hidrocarbonada. De allí el nombre de cromatografía
capilar electrocinética micelar
nombre aquí
Gracias
+1 23 987 6554
alberto@email.com
www.fabrikam.com

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 Electroforesis.

- Definición, Tipos, Fundamentos

La separación se lleva a cabo

alta velocidad alta resolución

FIGURA N°01: Esquema de los elementos

La velocidad de migración de un ion v

solo es necesario En la práctica, el las separaciones se

el número de platos (N)

ya que para la electroforesis el número de

se pueden aplicar voltajes

20.000 y 60.000 V 100 000 y 200 000 x 5000 a 20 000

alcanzan el límite teórico

Puede ignorarse esta

ignoramos el origen de N y retenemos este

Se origina cuando se aplica un potencial elevado a

El disolvente migra hacia el La velocidad de

Los cationes situados en la

Puesto que el flujo se

La electroósmosis da lugar a un flujo

FIGURA N°05: Velocidades en presencia del flujo

En presencia de la electroósmosis, la velocidad

4 Los aniones más rápidos 5 Los aniones más lentos

La cantidad de platos teóricos Donde W, es la

Esta al final de Se puede

Por tanto, las bandas de analito En HPLC todas las especias

2-Detección • Se ha utilizado el método de detección indirecta de absorbancia para lograr la

• Al igual que en el HPLC, la detección por fluorescencia incrementa la sensibilidad y

Tipos de Inyección Para preservar la eficacia teóricas de

Inyección  Evitar el ensanchamiento de la zona de

Inyección Hidrodinámica Introduzca su logotipo o su 29

 La muestra ingresa al capilar

Existen varias formas de producir una presión superior al extremo del

 Flujo gravitatorio de la disolución electrolítica

La inyección de la muestra en electroforesis capilar se hace de

 Aplica una diferencia de presión entre los extremos del

Las separaciones por electroforesis capilar se llevan a cabo de distintas maneras:

es una combinación de dos técnicas Se separar analitos Electrocromatografía

FIGURA N°11: Instrumentación y trabajo de electrocromatografía capilar. Introduzca su logotipo o su 40

Conocimiento de los valores de pKa para todos los componentes

El potencial se hace mas reducido para las bandas más

El potencial se hace más intenso para las bandas más lentas.

Los métodos de electroforesis capilar que

Los iones empiezan a formar agregados

Cuando una muestra se introduce en este medio los distintos

Las situaciones resultantes de estos equilibrios de distribución

El mecanismo por el cual se produce la separación es idéntico en

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