Universidad Nacional Autónoma de México
Facultad de Estudios Superiores Cuautitlán
Bioquímica Diagnóstica
Virología
Grupo: 2751
Congelamiento celular
Alumnas:
Gómez Valdez Alejandra Anaid
Mandujano Ceron Jessica Paola
Vicente Juárez Valeria Dejanira
Asesoras:
QFB. Ana Laura Vázquez Martínez
QFB. Paola Edith Briseño Lugo
2017-II
Introducción
La criopreservación es el método donde se utilizan bajas temperaturas con el fin de
preservar las estructuras intactas de las células vivas. Las células se crio preservan para
evitar pérdidas por contaminación, para minimizar cambios genéticos en líneas continuas
y evitar la transformación en líneas finitas. Una criopreservación exitosa de células
requiere seguir protocolos estandarizados y reproducibles, aunque cada protocolo puede
requerir modificaciones según el tipo celular o línea a usar, para lograr la máxima
viabilidad después del descongelamiento. Las células de mamíferos criopreservadas
incluyen líneas celulares inmortalizadas, células primarias aisladas a partir de tejidos y
células madre. Las células de mamíferos se congelan comúnmente con un
criopreservante; DMSO o glicerol, y se disminuye la temperatura a una velocidad de 1°C/
minuto para evitar los efectos perjudiciales de la formación de cristales de hielo del agua
dentro de la célula
Un principio básico de la criopreservación es que la cantidad del daño provocado por la
congelación depende de la cantidad de agua libre en el sistema y la capacidad de dicho
agua de cristalizar durante la congelación; como se sabe, el agua es el principal
componente de todos los sistemas vivos y debe estar presente dentro de la célula para
que se produzcan las reacciones químicas del metabolismo. Durante la congelación, la
mayoría del agua se transforma en hielo, cesando el metabolismo celular.
La formación de hielo se inicia en el medio extracelular, lo que provoca un aumento de la
concentración de sales debido a la disminución del agua cuando ésta se transforma en
hielo, es decir, se produce un desequilibrio osmótico. Entonces el agua sale de las células
por ósmosis y se produce una deshidratación celular, la cual puede ir en detrimento de
una posterior recuperación celular. Este efecto puede minimizarse con las siguientes
acciones:
- Controlando la tasa de enfriamiento mediante el uso de un congelador con control de
la tasa de congelación.
- Utilizando agentes crioconservantes
- Manteniendo las temperaturas de almacenamiento adecuadas
- Controlando la tasa de descongelación
Objetivo
Realizar al cultivo celular de células de cáncer de mama una criopreservacion por medio
de un agente crioprotector a bajas temperaturas para poder conservar las células vivas
intactas y libres de contaminantes
Metodología
Despegar
Observar las Centrifugar 10 Eliminar realizar
celulas del Agregar agente
celulas al min a 2500 tripsina del congelamiento
cultivo celular crioprotector
microscopio rpm medio celular
con tripsina
Resultados
Análisis de resultados
Se realizó la crioprotección de la línea celular de células de cáncer mama separándolas
del medio con tripsina que es una enzima que es una enzima segregada por el páncreas y
que digiere las proteínas logrando separarlas de la monocapa que se ha formado lo que
es necesario para su crioproteccion
Recordemos que la tripsina es altamente toxica por lo que su contacto con las células por
largos periodos de tiempo puede ser daniño para ellas y lograr su degradación por lo que
se centrifugo después de su desprendimiento de la monocapa a 2500 rpm para
posteriormente colocarse el agente crioprotector. Los más utilizados son el DMSO y el
glicerol; el suero fetal bovino (SFB) también se utiliza a menudo para la criopreservación
de células de mamíferos, pero no es un agente crioconservante. Otros crioconservantes
reportados en la literatura son las sales, como el cloruro magnésico, los dextranos,
glicoles, el almidón o los azucares.
Estos agentes crioconservantes protegen a las células que se congelan lentamente
mediante uno o más de los siguientes mecanismos:
- Eliminando las elevadas concentraciones de sales
- Reduciendo el encogimiento celular a una determinada temperatura
- Reduciendo la fracción de la solución congelada a una determinada temperatura
- Minimizando la formación de hielo intracelular
Casi sin excepción, todos los métodos de criopreservación comienzan con un paso inicial
de "pre congelación", fase en la cual se transfieren las células o el tejido desde un medio
fisiológico a una solución crioprotectora (medio tamponado que contiene un agente
crioconservante para minimizar el daño ocasionado por la congelación). Esta fase de
precongelación conlleva una fase inicial de enfriamiento
- Ralentizar el metabolismo y minimizar los cambios isquémicos y de hipoxia
- Reducir la toxicidad química de la agentes crioconservantes
El material biológico puede introducirse en la solución crioprotectora previamente enfriada
entre 0°C y 4°C y después colocada en una cámara de criopreservación también
previamente enfriada o se puede utilizar un congelador con control de la tasa de
congelación para enfriar el material biológico desde temperatura ambiente hasta 0°C –
4°C.
Conclusiones
Se llevó a cabo la crioproteccion de la línea celular de cáncer de mama por medio de la
enzima tripsina y de un agente crioprotector esto para evitar el daño celular y conservar
las células intactas para su posterior estudio con ellas se deben utilizar un previo
precongelamiento para garantizar la estabilidad de la células pero por falta de recursos no
se realizó sin embargo el congelamiento si fue realizado bajo las condiciones necesarias
para la línea celular
Bibliografía
Molecular Biology of The Cell. Bruce Alberts, Alexander Johnson, Julian Lewis, Martin Raff,
Keith Roberts, Peter Walter. Publisher: Garland Publishing Inc.
Los cultivos celulares y sus aplicaciones I (cultivos de células animales). Lic. María Eugenia
Segretín. INGEBI-CONICET - Dpto. FBMyC, FCEyN-UBA
