PREINFORME LABORATORIO DE BIOQUIMICA

PRACTICA 3: BIOQUÍMICAS DE LAS PROTEÍNAS

PRESENTADO POR:
LEANDRO LOPEZ
CODIGO: 87.068.065

MARCELA SALAZAR
CODIGO: 1082657577

MELISSA ESTRADA
CODIGO: 1085290217

TUTOR:

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA – UNAD

ESCUELA DE CIENCIAS DE BÁSICAS TENOLOGÍA E INGENIERÍA ECBTI
PROGRAMA TECNOLOGIA EN REGENCIA DE FARMACIA
CEAD – PASTO
JUNIIO – 12 – 2016
INTRODUCCION

Las proteínas son las sustancias orgánicas más importantes, desde el punto de vista
nutrimental y por su papel tan esencial en las funciones biológicas de los organismos.
Constituyen el tercer grupo de los macro componentes de los sistemas vivos, y por tanto de
los alimentos.

Las proteínas son macromoléculas formadas por cadenas lineales de aminoácidos. Entre las
macromoléculas, ellas son las ejecutoras, el ácido desoxirribonucleico (ADN) es la
memoria que contiene la información genética y los ácidos ribonucleicos (ARN) son las
macromoléculas descodificadoras, ya que son capaces de convertir la información
codificada en los ácidos nucleicos en la información secuencia1 de las proteínas. Existen
miles de proteínas diferentes, cada una con función específica. A cualquier nivel a que nos
refiramos, una determinada estructura permite una función determinada y las proteínas son
un ejemplo conspicuo; por ello se vuelve importante e imprescindible el estudio de la
estructura de las proteínas, lo que permitirá comprender su diversidad funcional, la relación
estructura-función y sus Propiedades más relevantes. En este contexto, dada sus
importancias biológica y biomédica, no podemos dejar de hacer referencia a los péptidos.
 PRACTICA 3: BIOQUÍMICAS DE LAS PROTEÍNAS

Las proteínas son uno de los principales componentes de todas nuestras células. Los
aminoácidos (compuestos orgánicos) son los ladrillos de construcción de la proteína. Los
aminoácidos se agrupan de acuerdo con su comportamiento químico. La síntesis de las
proteínas ocurre mediante la unión entre sí de las cadenas de aminoácidos. Los distintos
aminoácidos imparten diferentes comportamientos químicos en la estructura de las
proteínas. Debido a la presencia de diferentes aminoácidos en las uniones peptídicas las
proteínas reaccionan con una variedad de compuestos formando productos coloreados.
Los aminoácidos tienen tres tipos de reacciones químicas importantes:
(1) reacciones debido a la presencia del grupo carboxilo (COO-)
(2) reacciones debidas al grupo amino (NH)
(3) reacciones debido al grupo R.
Las reacciones debidas al grupo carboxilo y al grupo amino son generales y se dan para
todos los aminoácidos. Las reacciones del radical R son reacciones específicas; por
ejemplo, cisteína da una reacción para azufre, triptófano da ciertas reacciones de color
debido a que su molécula contiene el grupo indol, tirosina da otras reacciones de color
debido a su grupo fenólico, etc.

Tabla 11 Descripción de reactivos y métodos.

Método Descripción Desventajas
Biuret Se basa en la reacción de sales de Cu+2 con El método se usa para
moléculas que contienen más de dos soluciones que tienen de 0.5
enlaces peptídicos en un medio alcalino; el a 10 mg proteína/ml.
cobre es reducido a Cu+ formando Es un método poco
complejos color púrpura que tienen un sensible. Es útil cuando se
máximo de absorción a 540 nm. quiere analizar grandes
lotes de proteína.
Lowry Resulta de la reacción de Biuret sobre los Este es un método muy
enlaces peptídicos, además de la reducción sensible, por lo que permite
del reactivo de trabajar con soluciones muy
fosfomolibdatofosfotungstato (Folin- diluidas de proteínas (0.02 -
Ciocalteu) por las proteínas pretratadas con 0.5 mg proteína/ ml)
cobre en medio alcalino, dando una
coloración azul, determinado a 650 nm.
El Cu+ y los grupos R de la tirosina,
triptofano y cisteína reaccionan con el
reactivo de Folin, produciendo un producto
inestable que es reducido a azul de
 molibdeno/tungsteno.
Bradford Basado en el Azul Brillante de Coomasie Muestra interferencias con
G-250 cambia de rojo a azul, al unirse a detergentes
residuos aromáticos y arginina
en las proteínas.
La reacción entre el colorante y la proteína
es muy rápida (aproximadamente 2 min), y
el completo proteínacolorante permanece
disperso en solución por un tiempo
relativamente largo.
Rango de detección: 0.5-10 mg proteína/ml.

Tabla 12 Materiales y Materiales y reactivos.

REACCIÓN DE BIURET:
Esta reacción la producen los péptidos y las proteínas, pero no los aminoácidos ya que se
debe a la presencia del enlace peptídico CO-NH. que se destruye al liberarse los
aminoácidos. El reactivo de Biuret lleva sulfato de Cobre (II) y sosa. El Cu, en un medio
fuertemente alcalino, se une con los enlaces peptídicos formando un complejo de color
violeta (Biuret) cuya intensidad de color depende de la concentración de proteínas.
Tabla 13 Procedimiento a realizar para la reacción de Biuret.

REACCIÓN DE AMINOÁCIDOS AZUFRADOS

Se pone de manifiesto por la formación de un precipitado negruzco de sulfuro de plomo. Se
basa esta reacción en la separación mediante un álcali, del azufre de los aminoácidos, el
cual
al reaccionar con una solución de acetato de plomo, forma el sulfuro de plomo.

Tabla 14 Reacción De Aminoácidos Azufrados, Grupos SH

Tubo Cantidad Reactivo Procedimiento Cada Tubo
1 Con 3 ml. De solución Hidróxido Preparar los 2 ml.
Albumina de huevo 1% sodio + acetato tubos de ensayo Hidróxido
de plomo sódico +
Añadir 2 ml. solución de
De solución de acetato de
hidroxido plomo al 5%
2 con 3 mL de solución de hidróxido sódico al 20%. +
 aminoácidos Tirosina, sódico 
Triptófano o + Añadir 10 gotas
Fenilalanina. acetato de de solución de
plomo acetato de
plomo al 5%

Calentar el tubo
hasta
ebullición. con 3 mL de
 solución
Observar y respectiva
tomar apuntes +
de los Calentar el tubo
cambios. hasta
 ebullición.
El precipitado
de color
negruzco
indica que se ha
formado
sulfuro de
Plomo,
utilizándose el
azufre de los
aminoácidos
3 con 3 mL de Leche hidróxido
1% sódico
+
acetato de
plomo
4 con 3 mL de hidróxido
Aceite de cocina sódico
+
acetato de
plomo
5 con 3 mL de hidróxido
Glucosa sódico
+
acetato de
plomo

DETERMINACIÓN DE LA CONCENTRACIÓN DE PROTEÍNAS: MÉTODO DE

 BRADFORD
Existen varios métodos para determinar la concentración de proteínas de una muestra, tales
como la determinación de la absorbancia a 280 nm, o mediante la formación de derivados
coloreados de las proteínas, base de los métodos de BIURET o de LOWRY. En estos casos
se forma un complejo coloreado de cobre con el enlace peptídico; en el método de Lowry,
además del complejo anterior también se forma un derivado de las tirosinas que contribuye
a la absorbancia total.
El método de Bradford se basa en el empleo de emplea un colorante hidrofóbico cuyas
disoluciones acuosas en presencia de ácido fosfórico tienen un color pardo y que, al
encontrarse en el entorno hidrofóbico del interior de una proteína, origina un color azul
intenso que se puede medir fácilmente. Este método depende, pues de la interacción
relativamente inespecífica entre un colorante hidrofóbico y las proteínas, por lo que es
relativamente sensible a la presencia de contaminantes tales como restos de detergente y
líquidos orgánicos como el metanol.

1- Reactivo de Bradford
Azul de coomasie G-250 5 mg
Etanol 2.5 ml
Ácido fosfórico 5 ml
Agua Hasta 50 ml
Mezclar en el orden indicado, disolver con agitación y a continuación filtrar
2-Patrón de albúmina. Disolver 10 mg de albúmina bovina en 10 ml de agua destilada, con
lo
que tenemos una disolución madre con una concentración de 1 mg/ml.
1-Preparar la curva patrón de albúmina bovina en un rango desde 0 hasta 60 μg; de tal
manera que el volumen final en cada tubo sea de 300 μl.
Mezclar para ello el volumen adecuado de la disolución madre de albúmina bovina de un 1
mg/ml y el correspondiente volumen necesario de agua, de acuerdo con la siguiente tabla.

METODO
1-Preparar la curva patrón de albúmina bovina en un rango desde 0 hasta 60 μg; de tal
manera que el volumen final en cada tubo sea de 300 μl. Mezclar para ello el volumen
adecuado de la disolución madre de albúmina bovina de un 1 mg/ml y el correspondiente
volumen necesario de agua, de acuerdo con la siguiente tabla.
 Tabla 15 Preparar la curva patrón de albúmina bovina en un rango desde 0 hasta.

2-Preparación de tres diluciones de la muestra problema:

Hacer una dilución 1:20 de la leche comercial; a continuación, realizar las diferentes
diluciones de acuerdo con la siguiente tabla.
Tabla 16 Preparar la curva patrón de albúmina bovina en un rango desde 0 hasta

Finalmente añadir 3 ml del reactivo de Bradford a todos los tubos; tanto a las diluciones
que contienen la albúmina como a las que contienen la leche diluida. Agitar los tubos y a
continuación proceder a la lectura de la absorbancia a 595 nm en el colorimetro.

RESULTADOS
1- Elaboración de la recta patrón. Para ello representar en el papel milimetrado adjunto la
absorbancia de cada uno de los tubos que contenían albúmina bovina frente a la cantidad de
proteínas correspondiente. Si se dispone de una calculadora con capacidad para hacer rectas
de regresión, compruebe el coeficiente de correlación de la recta obtenida. En cualquier
caso, determine la pendiente de la recta.
2- Para las tres diluciones del problema, interpolar la absorbancia obtenidas sobre la recta
representada para saber la cantidad de proteínas presentes en cada una de ellas.
Alternativamente, haga el cálculo mediante la pendiente de la recta.
3- Teniendo en cuenta los volúmenes de muestra usados en cada caso y teniendo en cuenta
la dilución realizada, calcúlese la concentración de proteínas en la muestra analizada. Dar el
resultado en gramos de proteínapor 100 ml de leche.

PREGUNTAS:
.Cuales son los principales metodos colorimetricos usados en la determinacion de
proteinas?
.Cual es la reaccion de un alfa-aminoacido y ninhidrina?
.Cual es la reaccion con el reactivo de Biuret?
.Que proteinas dan positivas con la prueba de Hopkins-cole?
.Como se manifiesta la desnaturalizacion de la clara de huevo? 2. .Cual de los tres agentes
utilizados tiene mayor poder de desnaturalizacion? 3. .Como podriamos saber que una
sustancia desconocida es una proteina? 4. .Que coloracion da la reaccion del Biuret? 5.
.Una proteina coagulada podria dar la reaccion del Biuret? 6. Si se realiza la reaccion del
Biuret sobre un aminoacido como la Glicina .es positiva o negativa? .Por que?