UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA –UNAD

Escuela de Ciencias Agrícolas, Pecuarias y del Medio Ambiente-ECAPMA

Programa: Zootecnia
LABORATORIO DE NUTRICIÓN AVANZADA-LNAV

INTEGRANTES DEL GRUPO

MATEO SOLANO BUJATO

ALVARO MANUEL SARMIENTO
DYLSON RAMIRO CABEZA OROZCO

PROFESOR VIRTUAL DEL CURSO

LUCERINA ARTUNDUAGA

TUTOR DE PRÁCTICA

YAZMIN OLARTE

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA “UNAD”

ESCUELA DE CIENCIAS AGRÍCOLAS, PECUARIAS Y DEL MEDIO AMBIENTE
“ECAPMA”
PROGRAMA ZOOTECNIA
NOVIEMBRE 24 de 2019
 RESUMEN

Este laboratorio se realizó con el fin de determinar los Factores Antinutricionales

(FAN) de algunas materias primas destinadas a la alimentación animal. Al efectuar
la valoración de dichos factores de materias primas en el laboratorio, nos permite
identificar los factores que inhiben la asimilación de un nutriente determinado, para
así encontrar la manera de eliminarlos o minimizar sus efectos negativos sobre los
animales; se realizaron diferentes pruebas en forraje como el matarratón y el pasto
Estrella, donde se determinaron los valores en densidad de Licor Tánico (LT),
Saponinas, Fenoles Totales (FT), alcaloides, Taninos Hidrolizables (TH).

PALABRAS CLAVES: Factores antinutricionales, acasia roja, saponinas, alimentos

animales domesticos y fitometabolitos secundarios, Alcaloides, Fenoles Totale,
Taninos

INTRODUCCIÓN

Los FAN son sustancias naturales no fibrosas generadas por el metabolismo

secundario de las plantas, como un mecanismo de defensa ante el ataque de
mohos, bacterias, insectos y pájaros, o en algunos casos, productos del
metabolismo de las plantas sometidas a condiciones de estrés, que al estar
contenidos en ingredientes utilizados en la alimentación de animales, Composición
y factores antinutricionales ejercen efectos contrarios a su óptima nutrición,
reduciendo el consumo e impidiendo la digestión, la absorción y la utilización de
nutrientes por el animal.

1. FUNDAMENTACIÓN TEÓRICA

Las saponinas son glucósidos de esteriodes o de triterpenoides, llamadas asi por

sus propiedades como las dá jabon: cada molecula esta constituida por cada
elemento soluble en lipidos(el esteriode o el triterpenoide) y un elemento soluble
en agua (el azucar) y forman una espuma cuando son ajitadas en agua.
Las saponinas son toxicas, se cree que su toxicidad proviene de su habilidad para
formar complejos con esterol: las saponinas podrian interferir en la asimilacion de
esterol por el sistema dejestivo, o romper las membranas de las celulas luego de
ser absorbidas por la corriente sangineo.

Las saponinas son unas serie de productos naturales con caracteristicas fisicas y
quimicas biologicas comunes: ajentes tensioactivos, hemoliticos, toxicos para
animales, toxicos para el hombre por via endovenosa. Por hidrolisis dan: azucares
y agliconas(sapogeninas). Por ropturas de una molecula se puede optener:
metilsiclopentanofenantreno, maftaleno, fenantreno, sapotaleno. Los esteroides y
los triterpenicos estan muy relacionados biosinteticamente sigen la misma via esta
el escualeto

1.1 MAPA CONCEPTUAL

CONCEPTOS CONCEPTOS
MATERIAS PRIMAS MIMOSINA
MECANISMO DE DEFENSA FITOMETABOLITOS
ALCALOIDES TANINOS
ÁCIDO MEVALÓNICO METABOLISMO SECUNDARIO
ESTEROLES PLANTAS
SAPONINAS phaseolus vulgaris
ÁCIDO SHIQUÍMICO PALATABILIDAD
FACTORES DISTURBIOS NEURONALES
ANTINUTRICIONALES
POLIFENOLES DESÓRDENES
REPRODUCTIVOS
1.2. Revisar detalladamente los videos relacionados con análisis de factores
antinutricionales mostrados en los siguientes link y elaborar diagrama de flujo
que integre los conceptos y metodologías mostrados allí.

http://www.youtube.com/watch?v=eIHyzk3IpDg

http://www.youtube.com/watch?v=O5HPgddlnAQ
 2. MATERIALES Y
MÉTODOS

MATERIAL Ó EQUIPO
(indicar: marca, capacidad y APLICACIÓN FOTO
precisión)
Matraz Kitasato.

conectar a trompa de agua o

bomba de vacío.

Balanza digital Ohaus Pesada(Gravimetría)

0,0001g

Extracción de filtros
Centrifuga metabólicos

Tubo de centrifugado Contener muestra para

centrifugar

tubos de ensayos para las muestras de acacia

roja presencia de fenoles
pirogalicos
 Embudo de filtración en vidrio
Crisol de Filtración. borosilicato,

Ideal para triturar y mezclar

Mortero en porcelana sustancias de poca dureza
como semillas, hierbas, etc.
con mango

Probeta indispensables para el trabajo

diario del laboratorio en la
preparación de disoluciones

Sistema de evaporación
Plancha eléctrica
 Colorímetro (usar espectrofotómetro 535 nm) Klett-Summerson con Filtro No. 54.
 Matraz Kitasato.
 Tubos de ensaye.
 Crisol de Filtración.
 Vasos de precipitado de 250 ml.
 Vasos de precipitado de 150 ml.
 Matraz Volumétrico de 250 ml.
 Matraz Volumétrico de 100 ml.

Lista de equipos utilizados en la extracción de fitometabolitos secundaria (Acacia Roja)

Mortero en porcelana con mango
•Tubo de centrifuga
•Tubo de ensayo
•Peso electrónico
•Centrifuga
•Probeta
•Pipeta
•Agitador de vidrio

Lista de equipos utilizados

Tubo de ensayo, probeta, pipeta, ajitador de vidrio

2.1 LISTA DE MATERIALES Y EQUIPOS UTILIZADOS

Cuadro 1.lista de materiales y equipos utilizados en la práctica

 MATERIAL Ó EQUIPO
(indicar: marca, capacidad y APLICACIÓN FOTO
precisión)
Matraz Kitasato.

conectar a trompa de agua o

bomba de vacío.

determinación del color de una

Colorímetro sustancia

Matraz Volumétrico de 250 ml. amplia selección y

medición de
volumen preciso.

Matraz Volumétrico de 100 ml.

amplia selección y
medición de volumen
preciso.

tubos de ensayos para las muestras de acacia

roja presencia de fenoles
pirogalicos
 Embudo de filtración en vidrio
Crisol de Filtración. borosilicato,

Adecuados para preparar y

Vasos de precipitado de 250 calentar muestras, trasvasar
ml. líquidos y disoluciones.

Vasos de precipitado de 150 ml. Aptos para calentamiento hasta

500ºC.
 LISTA DE REACTIVOS UTILIZADOS.

 Solución de Mimosina, 0.1% en HCl 0.1N (mimosina de L. glauca

recristalizada).
 Solución de Cloruro férrico al 0.5% en HCl 0.1N.
 Carbón Activado.
 Ácido Clorhídrico 0.1N.

 5 grm muestra de forraje picado ( acacia roja)

 10 ml de metanol (CH3OH)
 5 ml de agua destilada (H20)
 15 ml de éter(CH3CH2OCH2CH3)
 Ml de Etanol (CH3-CH2-OH) hasta completar 10 ml
 1 ml EFMS (estraccion de fitometabolitos secundarios)
 9 ml de agua destilada
 1 ml EFMS (extraccion de fotometabolitos secundarios)
 3ml de agua destilada (H)
 0,5 ml de cloruro ferrico al 10 %(FECL3)

FACTORES ANTINUTRICIONALES

La Leucaena posee una calidad forrajera sobresaliente, las hojas contienen

hasta 30 por ciento de proteína cruda y su palatabilidad es excelente.
Sin embargo, contiene una sustancia tóxica llamada mimosina, que actúa
lentamente causando la pérdida del pelo, como también del peso vivo en animales
en pastoreo.

Materiales y Equipo
 Colorímetro (usar espectrofotómetro 535 nm) Klett-Summerson con Filtro
No. 54.
 Matraz Kitasato.
 Tubos de ensaye.
 Crisol de Filtración.
 Vasos de precipitado de 250 ml.
 Vasos de precipitado de 150 ml.
 Matraz Volumétrico de 250 ml.
 Matraz Volumétrico de 100 ml.
 REACTIVOS UTILIZADOS EN LA PRÁCTICA.
 Solución de Mimosina, 0.1% en HCl 0.1N (mimosina de L. glauca recristalizada).
 Solución de Cloruro férrico al 0.5% en HCl 0.1N.
 Carbón Activado.
 Ácido Clorhídrico 0.1N.

PROCEDIMIENTO

EXTRACCIÓN.
Coloque 1.25 g de hoja seca de Leucaena en un Vaso de precipitado de 250 ml y
digiera con 100 ml de HCl 0.1N por hora con agitación constante, deje enfriar y
transfiera todo a un matraz volumétrico de 250 ml, agite bien y deje reposar hasta
que los sólidos se asienten en el fondo.

CLARIFICACIÓN.

Transfiera 10 ml de sobrenadante a un V.P. de 150 ml con 30 mg de Carbón.

Agregue agua para llevar el volumen a 25 ml, cúbralo con un vidrio de reloj y
caliente a ebullición por 15 min., deje enfriar y filtre con vacío en el crisol de
filtración; el filtrado es colectado en un tubo colocado en el matraz Kitasato.
Enjuague el vaso de precipitado y el material en el crisol con 10 ml de HCl 0.1N
dividido en tres porciones. Enjuague finalmente el crisol con 5 pequeñas porciones
de agua.
 DETERMINACIÓN COLORIMÉTRICA:

Transfiera el líquido obtenido a un matraz volumétrico de 100 ml, agregue 4 ml de

solución de cloruro férrico al 0.5% en HCl 0.1N y afore con agua. El pH deberá ser
entre 1.5 y 2.5. Lea en el Colorímetro y calcule la cantidad de mimosina en una
curva de calibración.

CURVA DE CALIBRACIÓN.

Disuelva 0.1046 g de mimosina pura en HCl 0.1N y afore a 100 ml con el ácido. La
solución contiene 0.1% de mimosina. Coloque 1 ml de solución de mimosina en un
matraz volumétrico de 100 ml y adicione 10 ml de HCl 0.1N y 4 ml de la solución
de cloruro férrico al 0.5% y afore con agua. Lea la intensidad del color en el
Colorímetro (espectro 535 nm). Use agua destilada como referencia y repita el
procedimiento usando 2, 3, 4 y 5 ml de solución de mimosina. Se obtiene una
línea al graficar la lectura del Colorímetro contra la concentración.
 CONCLUSIONES

En conclusión, después de haber realizado los diferentes experimentos de

Mimosina en la Leucaena Leucocephala tuvimos como resultado pH entre 2 y 3 de
las 5 muestras seleccionadas en un rango acido que pueden degenerar las papilas
y a su vez la muerte de los microorganismos del Rumen los cuales son de vital
importancia para la absorción de los nutrientes aportados por la alimentación.

A la vez este pH en rango acido hace que se generen toxinas que se absorben por
medio de las paredes del rumen. En animales monogástricos provoca una gran
cantidad de ácidos que en animales como el caballo podrían desencadenar un
cólico y producir la muerte del animal.

EXPERIMENTO 2

MATERIALES Y MÉTODOS.

Lista de equipos utilizados en la extracción de fitometabolitos secundaria (Acacia

Roja)
 Mortero en porcelana con mango
 Tubo de centrifuga
 Tubo de ensayo
 Peso electrónico
 Centrifuga
 Probeta
 Pipeta
 Agitador de vidrio
 MATERIAL Ó EQUIPO
(indicar: marca, capacidad y APLICACIÓN FOTO
precisión)
Mortero en porcelana con
mango
Ideal para triturar y mezclar
sustancias de poca dureza
como semillas, hierbas, etc.

• Tubo de centrifuga Son ampliamente

empleados en diversos
campos, no sólo para la
centrifugación sino como
simples viales
contenedores de
sustancias

• Peso electrónico Medidor de

materiales o
insumos

tubos de ensayos para las muestras de

acacia roja presencia de
fenoles pirogalicos

Centrifuga Extracción de filtros

metabólicos

indispensables para el
Probeta trabajo diario del laboratorio
en la preparación de
disoluciones
 Pipeta

Utilizan
da el
desplazamiento del aire
producido por el pistón
para dosificar pequeñas
cantidades de líquido sin
que éste entre en
contacto con la pipeta
Agitador de vidrio Sirve para agitar
disoluciones, con la
finalidad de mezclar
productos químicos y
líquidos

LISTA DE REACTIVOS
 5 grm muestra de forraje picado ( acacia roja)
 10 ml de metanol (CH3OH)
 5 ml de agua destilada (H20)
 15 ml de éter(CH3CH2OCH2CH3)
 Ml de Etanol (CH3-CH2-OH) hasta completar 10 ml

PROCEDIMIENTO

En un mortero con mango coger 5 gr de muestra de forraje picado.10ml de

metanol y 5 ml de agua destilada. Macerar durante 3 minutos. Adicionar 15 ml de
éter. Seguir macerando durante 3 minutos. Pasar todo el material a un tubo de
centrifuga o de ensayo. Centrifugar durante 3 minutos a 4500 revoluciones por
minuto. Se obtendrá el siguiente resultado; fase liquida sobrenadante que contiene
fitometabolitos y pigmentos y residuo sólido precipitado contiene NNP y fibra.
Sacar fase sobrenadante poner en una probeta y medir volumen en ml. Pasar a un
tubo de ensayo adicionar ml de etanol hasta completar 10 ml de la muestra. Por
último se rotula “Estrato de fitometabolitos de acacia roja” y se aísla totalmente de
la luz.
RESULTADO FINAL Y DISCUSION

Se obtuvo como resultado final obtener 1ml de sobrenadante sobre la muestra de

forraje de acacia roja después del proceso de centrifugado y como muestra final
10 ml de muestra con presencia de fitometabolitos secundarios y algunos
pigmentos con el cual se trabajara para poder posteriormente determinar los
análisis de polifenoles totales, saponinas, fenoles, esteroles, alcaloides.

CONCLUSIONES

En el forraje seco de acacia roja se obtuvo la extracción de fitometabolitos

secundarios, Los cuales se utilizaron para realizar la prueva de saponina.

EXPERIMENTO NUMERO 3

PRESENCIA DE SAPONINAS EN FORRAJE DE ACACIA ROJA

RESUMEN

Se procedió a realizár el respectivo analisis de la presencia de seponina sobre la

muestra optenida de fitometabolitos secundarios del forraje de acasia roja

MATERIALES Y METODO

Lista de equipos utilizados

Tubo de ensayo, probeta, pipeta, ajitador de vidrio
 LISTA DE REACTIVOS

1 ml EFMS (estraccion de fitometabolitos secundarios)

9 ml de agua destilada

PROCEDIMIENTO
En 1 tubo de ensayo mezclar un ml de EFMS y 9 ml de agua destilada. Ajitar
vigorosamente durante 3 minutos. Reposar por 15 minutos. Analizar (h) de la
espuma formada.

RESUSTADOS Y DISCUSIÓN

Tabla de datos para determinar presencia de saponinas en muestra de forraje de

acacia roja

Analisis de altura (h) en espuma

Rango h (mm) Resultados

0,1----5.0mm Muy bajo contenido
5.1-----6.0mm Contenido bajo
6.1---9.0mm Contenido moderado
9.1---14mm Muy alto contenido
>14 .1 Muy alto contenido
0.0mm Prueva negativa

Nota: en el laboratorio realizado la prueba obtenida nos dio como resultado muy
bajo contenido
PRESENCIA DE FENOLES EN MUETRAS DE FORRAJE DE ACACIA ROJA

RESUMEN
Se procedio a realizar el respectivo analisis de la presencia de fenoles sobre la
muestra optenida de fitametabolitos secundarios del forraje seco de acacia roja

¿Que son los componentes fenolicos ?

Clasificados como metabolitos secundarios de las plantas, son aquellos productos
biosintetizados en las plantas que poseen la caracteristica biologica de ser
productos secundarios de su metabolismo, y la caracteristica quimica de contener
almenos un grupo de fenol. En general son sintetizados por una de dos vias
biosinteticas. La via del acido shikimico o la via del acido malonico o por las dos
por ejemplo, las flavonoides.
Los compuestos fenolicos de las plantas son un grupo heterogeno de productos
con mas de 10.000 compuestos, algunos son solubles en solventes organicos,
otros son glucosidos o acidos carboxilicos y por lo tanto solubles. Este grupo
tambien juega una propiedad heterogenea de roles en las plantas, roles que son
atribuidos en general a los productos secundarios de las plantas. Muchos son de
productos de defensa ante hervivoros y patogeneo, otros proveen soporte
mecanico a la planta, otros atraen polinizadores o dispersores de frutos, algunos
de ellos absorven la radiacion ultra violeta, o actuan como agentes alelopaticos

MATERIALES Y METODOS

LISTA DE EQUIPOS

 Tubo de ensayo
 Proveta
 Pipeta
 Agitador de vidrio
 MATERIAL Ó EQUIPO
(indicar: marca, capacidad y APLICACIÓN FOTO
precisión)

Agitador de vidrio Sirve para agitar disoluciones, con

la finalidad de mezclar productos
químicos y líquidos

indispensables para el trabajo

diario del laboratorio en la
Probeta preparación de disoluciones

tubos de ensayos para las muestras de acacia

roja presencia de fenoles
pirogalicos

Utilizada el
Pipeta desplazamiento del aire
producido por el pistón para
dosificar pequeñas cantidades
de líquido sin que éste entre en
contacto con la pipeta

LISTA DE REACTIVOS
 1 ml EFMS (extraccion de fotometabolitos secundarios)
 3ml de agua destilada (H)
 0,5 ml de cloruro ferrico al 10 %(FECL3)
PROCEDIMIENTO

En 1ml de EFMS y 3 ml de agua destilada. Agitar durante 5 segundos.

Posteriormente adicionar 0,5 ml de cloruro ferrico al 10% observar los cambio de
color

RESULTADOS Y DISCUSIÓN

Tablas de datos para determinar presencia de fenoles en muestra de forraje de

acacia
Color Descripcion
Azul = presencia de fenoles pirogalicos
Verde = presencia de taninos condensados
Amarillo = presncia de fenoles catecoles
No cambia = prueba negativa

La muestra analizada dio como resultado color azul en la muestra de acacia roja
presencia de fenoles pirogalicos

CONCLUSION DE DETERMINACION DE PRESENCIA DE FENOLES EN

FORRAJES DE ACACIA ROJA

Los fenoles pirogalicos que por destilacion seca dejan optener el pirogalol, se
hidrolizan en solucion, producion acido galico C 6 H2 (OH)3 COOH Y glucosa
El término tanino se usó originalmente para describir ciertas sustancias orgánicas
que servían para convertir las pieles crudas de animales en cuero. Los taninos
tienen un ligero olor característico, sabor amargo y astringente, y su color va
desde el amarillo hasta el castaño oscuro. Expuestos al aire, se tornan oscuros y
pierden su eficacia para el curtido. Los taninos se utilizan en el curtido porque
reaccionan con las proteínas de colágeno presentes en las pieles de los animales,
uniéndolas entre sí; de esta forma, aumenta la resistencia de la piel al calor, a la
putrefacción por agua y al ataque por microbios.
Químicamente son metabolitos secundarios de las plantas, fenólicos, no
nitrogenados, solubles en agua y no en alcohol ni solventes orgánicos. Abundan
en las cortezas de los robles (donde están especialmente concentrados en las
agallas) y el castaño, entre otros árboles
 VARIABLES EVALUADAS

Cuadro xx. Variables evaluadas y métodos utilizados

VARIABLE TÉCNICA ANALÍTICA

(indicador) UTILIZADA
evaluada(o))
Espectrofotometría con
Taninos Hidrosolubles
ácido tánico
(THS)
Espectrofotometría
Taninos Condensados(TC)
con butanol-
HCl
Saponinas Centrifugada
Alcaloides Evaporación con,
Amoniaco, Acético Glacial.
observación
del color
polifenoles Centrifugada, observar
colores.
Taninos
 3.2. PROTOCOLOS DE MUESTRAS ANALIZADAS

Nom Espe Nom Luga Datos Animale

bre cie bre r de Agroclimáti s, Etapa
del cientí la cos producti
forraj fico mues va y
e tra Alimentac
ión
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Altura: 100 se utiliza
ena a ca la
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roja x regia regia la para la
msnm
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ano
C
a)
 5. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

Significado nutricional de los compuestos fenólicos de la dieta publicado por Isabel Martínez-
Valverde. María Jesús Periago. Gaspar Ro Caracas mar. 2000 Recuperado de :
http://www.scielo.org.ve/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0004-06222000000100001

Chaparro Sandra P., Aristizabal Ivan D., Gil Jesús Humberto. COMPOSICIÓN Y FACTORES
ANTINUTRICIONALES DE LAS SEMILLAS DEL GÉNERO Mucuna. Recuperado:
http://www.scielo.org.co/pdf/rfnam/v62n1/a12v62n1.pdf

ANEXO DE FOTOGRAFÍAS