β CARBA Test

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Detección rápida de cepas de enterobacteriáceas productoras de carbapenemasa

881159 – 2015/05

Contenidos

1. CAMPO DE APLICACIÓN

2. RESUMEN Y EXPLICACIÓN DE LA PRUEBA

3. PRINCIPIOS DEL PROCEDIMIENTO

4. REACTIVOS

5. PRECAUCIONES DE USO

6. MUESTRAS

7. PROCEDIMIENTO

8. CARACTERÍSTICAS DEL RENDIMIENTO

9. LIMITACIONES DE LA PRUEBA

10. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

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1. CAMPO DE APLICACIÓN
La sensibilidad reducida a los carbapenemas puede deberse a la presencia de enzimas específicas (carbapenemasas) en
las bacterias, o bien a la modificación en la membrana que impide la penetración de la molécula dentro del
microorganismo. β CARBA es una prueba colorimétrica cualitativa usada para la detección de cepas con susceptibilidad
reducida a carbapenemas debido a la producción de carbapenemasas. La prueba puede realizarse directamente con
colonias aisladas de enterobacteriáceas. La prueba β CARBA test no está prevista para sustituir los métodos
convencionales de comprobación de la sensibilidad antimicrobiana.

2. RESUMEN Y EXPLICACIÓN DE LA PRUEBA

Los carbapenemas son antibióticos de último recurso, y la diseminación actual de enterobacteriáceas productoras de
carbapenemasas (EPC) resulta extremadamente preocupante. Todas las especies de enterobacteriáceas pueden adquirir
genes que codifican carbapenemasas y las CPE suelen ser resistentes a muchos otros antibióticos, dejando muy pocas
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opciones de tratamiento .
Las carbapenemasas se agrupan en tres clases, en función de su identidad de aminoácidos (clasificación de Ambler):
• Carbapenemasas de clase A: principalmente de tipo KPC;
• Carbapenemasas de clase B, también denominadas metalo-β-lactamasas (MBL): principalmente de los tipos IMP, VIM
y NDM;
• Carbapenemasas de clase D: OXA-48 y sus variantes.
La prueba β CARBA test permite una detección rápida de CPE, lo que resulta de vital importancia para la determinación
de los programas terapéuticos apropiados y la implantación de las medidas necesarias para el control de infecciones. La
interpretación de los resultados debe realizarse teniendo en cuenta la historia clínica del paciente.

3. PRINCIPIOS DEL PROCEDIMIENTO

El principio de la prueba β CARBA test se basa en el cambio de color de un sustrato cromogénico* en presencia de CPE.
La prueba se realiza en un microtubo a partir de colonias de enterobacteriáceas recién aisladas. La interpretación debe
realizarse en los siguientes 30 minutos.
* Gracias por su colaboración al Dr. Hideaki Hanaki de la Universidad de Kitasato (Tokio, Japón).

4. REACTIVOS
4.1 Descripción
Un kit que incluye reactivos R1, R2, R3 y 25 microtubos

Identificación Descripción Presentación

Solución de extracción (incolora)
R1 TM Un vial listo para usar, 1 mL
Conservante: 0,1 % ProClin 300
Mezcla cromogénica liofilizada de color
R2 Un vial, a reconstituir con R3
amarillo
Solución en suspensión
R3 TM Un vial listo para usar, 1,1 mL
Conservante: 0,1 % ProClin 300

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4.2 Condiciones de almacenamiento y manipulación
Este kit debe guardarse a + 2-8 °C.
Los reactivos pueden usarse hasta la fecha de caducidad indicada en el envase.

Identificación Conservación (después de la apertura)

R1 3 meses a + 2-8 °C
R2 (solución reconstituida) 3 meses a + 2-8 °C

Compruebe que los tapones de los dos viales están firmemente apretados para evitar que los reactivos se contaminen o
se sequen. Guarde los viales en posición vertical.

5. PRECAUCIONES DE USO
Uso exclusivo para diagnóstico in vitro
Solo para uso de profesionales de la sanidad

Instrucciones de higiene y seguridad:

• Este kit de pruebas deberá ser manipulado únicamente por personal cualificado que haya recibido formación sobre
procedimientos de laboratorio y esté familiarizado con sus posibles riesgos. Lleve prendas de protección adecuadas,
guantes que aíslen del frío/gafas/máscara y manipule el kit conforme a las buenas prácticas de laboratorio exigidas.
• Deseche todas las muestras y todo el material utilizado para realizar la prueba como si contuvieran un agente
infeccioso. Los residuos del laboratorio, sustancias químicas o residuos biológicos peligrosos deben manipularse y
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desecharse conforme a la normativa local, regional y nacional .
• Para obtener más información acerca de las recomendaciones de precaución y peligros relativos a ciertos
componentes químicos de este kit de prueba, consulte el/los pictograma(s) mencionado(s) en las etiquetas y la
información indicada al final de las instrucciones de uso. La Hoja de datos de seguridad de materiales está
disponible en www.bio-rad.com.

Precauciones relativas al procedimiento

No use aquellos kits que presenten signos de deterioro.

5.1. Preparación
• Asegúrese de que para la utilización de la prueba β CARBA test se sigan detenidamente las instrucciones del
prospecto contenido en el paquete. La inobservancia de las instrucciones de uso indicadas pueden generar
resultados incorrectos.
• No mezcle reactivos asociados de distintos lotes en una misma ejecución.
• Antes del uso, homogeneice mediante una breve agitación con vortex de los reactivos R1 y R3.
• Asegúrese de que el reactivo liofilizado está en el fondo del vial de R2 antes de la reconstitución con solución R3.
• Reconstituya el R2 liofilizado con 1,1 mL de solución R3 (el tope de goma debe desecharse).
• No use el R2 reconstituido si cambia a color rojo.
• No congele los reactivos R1, R2 (reconstituidos o no) y R3.
• No prepare con antelación la mezcla de R1 y R2.
• No utilice los reactivos después de la fecha de caducidad.
• No use colonias de enterobacteriáceas aisladas de medios que se hayan incubado durante más de 24 horas.
• Utilice únicamente colonias correctamente individualizadas.

5.2. Manipulación
• Realice la prueba a temperatura ambiente (entre 18 y 30 °C).
• Agite los viales de R1 y R2 antes de su uso.
• Tras el uso, guarde los viales de R1 y R2 a +2-8°C en su envase.
• Respete la cantidad de inóculo con un asa de 1 µl llena.
• La interpretación del cambio de color debe realizarse dentro de un período de 30 minutos de incubación.

6. MUESTRAS
La prueba se realiza con colonias de enterobacteriáceas correctamente individualizadas.
Las colonias pueden recogerse de los siguientes medios tras 18-24 horas de incubación: Agar Columbia + 5% sangre de
cordero, UriSelect™ 4, Drigalski, Agar Tripticasa de Soya. Para la utilización de otros medios de cultivo, póngase en
contacto con Bio-Rad.

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7. PROCEDIMIENTO

7.1. Materiales necesarios

7.1.1. Materiales suministrados

• Microtubos
• Reactivos R1 y R2 (R2 previamente reconstituido con R3)

7.1.2. Materiales necesarios pero no incluidos

• Asas 1 µl
• Temporizador
• Incubadora

7.2. Procedimiento del ensayo

• Etiquete el microtubo.
• Añada 40 µL de reactivo R1 y 40 µL de reactivo R2 en el microtubo.
• Seleccione colonias de enterobacteriáceas recién y correctamente individualizadas y realice la recogida con un asa
de 1 µl llenándola completamente. El asa debe estar llena. De un medio cromogénico, seleccione colonias con la
misma morfología y color homogéneo. Descargue completamente el asa en el microtubo.
• Homogeneice la mezcla.
• Observe el color de la mezcla a T0.
• Incube el microtubo a 37 °C (rango aceptable: 33 - 39 °C) durante 30 minutos y proceda con la lectura del
resultado.
• Anote cualquier cambio en el color e interprete el resultado (negativo / positivo). La interpretación final del color debe
realizarse dentro de un período de 30 minutos de incubación; no obstante, puede observarse un resultado positivo
en menos de 30 minutos.

7.3. Control de calidad

®
• Control negativo, p. ej. Escherichia coli ATCC 35218 (cepa productora de penicilinasa tipo TEM-1).
• Control positivo, p. ej. Klebsiella pneumoniae NCTC 13438. Esta cepa contiene carbapenemasa KPC-3 que confiere
resistencia a los carbapenemas. En las pruebas rutinarias, puede usarse una cepa clínica bien caracterizada que
sea productora de carbapenemasa.

7.4. Interpretación de los resultados

Resultado Interpretación
Presencia de producción de
Cambio de color a naranja claro, rojo o púrpura Positivo
carbapenemasa
Ausencia de producción de
Sin cambio de color a naranja claro, rojo o púrpura Negativo
carbapenemasa

8. CARACTERÍSTICAS DEL RENDIMIENTO

8.1. Estudio de precisión

En un período de 3 semanas, se probaron 4 cepas por triplicado 10 veces por 2 operadores diferentes. Se probó la
repetibilidad y precisión intermedia de tres lotes diferentes de β CARBA. Todas las pruebas mostraron los resultados
esperados.

8.2. Resultados
Se llevaron a cabo dos estudios europeos usando cepas de recogida bien caracterizadas mediante método genotípico.
298 cepas de enterobacteriáceas fueron sometidas a prueba con β CARBA. De entre las mismas, 91 eran cepas no
productoras de carbapenemasas (resultados negativos previstos), 207 eran cepas productoras de carbapenemasas
(resultados positivos previstos).
Los tipos de carbapenemasas fueron los siguientes: KPC (53), similar a OXA-48 (57), NDM (36), VIM (34), IMP (15), IMI
(5), GES-5 (4) y aislados de Klebsiella pneumoniae coproductoras de carbapenemasas KPC & MBL (3).
La prueba β CARBA test se llevó a cabo tras el cultivo de cepas en Drigalski, agar Columbia + 5% sangre de cordero o
medio UriSelect™ 4 durante18-24 horas.

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8.2.1. Sensibilidad

Resultado de la prueba β CARBA test

Positivo a 30 min. Total
Aislados productores de carbapenemasa 185 207
KPC 53 53
similares OXA-48 50 57
NDM 36 36
VIM 30 34
IMP 12 15
IMI 1 5
GES-5 0 4
KPC & MBL 3 3

• La sensibilidad es igual al 89,4% (185/207) con un intervalo de fiabilidad del 95% [84,0; 94,7] % para cepas de
enterobacteriáceas productoras de carbapenemasas.
• Se observó un resultado positivo antes de los 30 min. (lectura a los 15 minutos) para el 100%, 98,6% y 77,6% de las
cepas positivas verdaderas respectivamente para los medios agar Columbia + 5% sangre de cordero, UriSelect™ 4
y Drigalski.

8.2.2. Especificidad

Resultado de la prueba β CARBA test

Negativo a 30 min. Total
Aislados no productores de carbapenemasa 89 91

• La especificidad es igual al 97,8% (89/91) con un intervalo de fiabilidad del [94,0; 100] % para cepas no productoras
de carbapenemasas.
• Las dos cepas con falso positivo eran AmpC con sensibilidad reducida a los carbapenemas.

9. LIMITACIONES DE LA PRUEBA

• No se recomienda la utilización de colonias de Enterobacteriáceas aisladas de agar Mac Conkey, CLED, BCP o
EMB.
• La prueba no puede realizarse en colonias que coloreen la mezcla a T0 en naranja claro, rojo o púrpura.
• Algunas cepas productoras de carbapenemasas de tipo IMI y GES pueden no ser detectadas.

10. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS.

1- Nordmann P, Naas T, Poirel L. Global spread of carbapenemase-producing Enterobacteriaceae. Emerg Infect Dis.
2011 Oct.
®
2 - CLSI M29-A, Protection of Laboratory Workers from Occupationally Acquired Infections; Approved Guideline – Current
Revision.

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Bio-Rad
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