LATEX PCR SD
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Instrucciones de Uso
Finalidad . Sistema para la determinación cualitativa y
semicuantitativa, en lámina, de la proteína C-reactiva (PCR).
[Solamente para uso diagnóstico in vitro.]
Principio . Partículas de látex estabilizadas y sensibilizadas con
anticuerpo antiproteína C-reactiva humana son aglutinadas
macroscópicamente cuando la proteína C-reactiva está presente en la
muestra en concentraciones mayores a 6,0 mg/L.
Características del sistema . El sistema Latex PCR SD de
Labtest tiene sensibilidad para detectar concentraciones de proteína
C-reactiva de como mínimo 6,0 mg/L, utilizando partículas de
poliestireno estabilizadas y sensibilizadas con anticuerpo anti proteína
C-reactiva humana.
La sensibilidad de 6,0 mg/L fue establecida con material de referencia
ERMÒ -DA472/IFCC.
El test cualitativo es sencillo y rápido, suministrando resultados positivos
para las muestras con concentraciones de PCR hasta 400 mg/L, sin la
necesidad de dilución previa.
Metodología . Aglutinación.
Reactivos
1. ( - Látex PCR - Conservar el frasco bien cerrado en la posición
vertical entre 2 - 8 ºC. No congelar.
Contiene partículas de látex revestidas con anticuerpo IgG de cabra anti
proteína C-reactiva humana en tampón pH=8,1 - 8,3 y azida sódica
£0,1 %. Homogeneizar bien la suspensión antes de utilizar.
Los controles positivo y negativo y también la lámina de prueba son
parte del producto Serolatex PCR SD Ref. 144-120. El producto de
Ref. 144K-120 contiene apenas el reactivo Latex PCR SD.
Los reactivos no abiertos, cuando almacenados en las condiciones
indicadas, son estables hasta la fecha de expiración impresa en el rótulo.
Durante su uso, los reactivos están sujetos a contaminaciones de
naturaleza química y microbiana que pueden provocar reducción del
tiempo de estabilidad.
Precauciones y cuidados especiales
Los cuidados habituales de seguridad deben ser aplicados durante la
manipulación de los reactivos y de las muestras de pacientes.
Se sugiere utilizar técnicas adecuadas de laboratorio en la manipulación
de los reactivos para evitar la contaminación microbiana. La utilización de
puntas contaminadas puede comprometer el desempeño del test y la
estabilidad del reactivo.
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Ref.
Interpretar los tests después de dos minutos de la mezcla de la muestra
con el reactivo. Interpretaciones después del tiempo recomendado
pueden suministrar resultados falso positivos.
La intensidad de la aglutinación no es un indicativo de la concentración de
PCR en la muestra analizada. Para conocer la concentración aproximada
de la PCR en una muestra positiva es necesario realizar el procedimiento
semicuantitativo.
El reactivo contiene azida sódica como conservante. No obstante, deben
tomarse todos los cuidados para evitar la contaminación microbiana.
La azida sódica es tóxica. Se debe tener cuidado para evitar la ingestión, y
en caso de contacto con los ojos, lavar inmediatamente con gran cantidad
de agua y buscar auxilio médico. La azida puede formar compuestos
altamente explosivos con las cañerías de plomo o cobre. Utilizar grandes
volúmenes de agua para descartar los reactivos.
Lavar exhaustivamente la lámina de ensayo con agua desionizada y
secarla a temperatura ambiente. El uso de material contaminado con
trazas de detergente provoca resultados incorrectos y deteriora los
reactivos.
El sistema está estandarizado para obtener la sensibilidad propuesta y el
desempeño adecuado, en función de los volúmenes indicados en la
metodología. Las modificaciones en los volúmenes recomendados y la
introducción de puntas contaminadas pueden comprometer el
desempeño del test y la estabilidad del reactivo.
Para descartar los reactivos y el material biológico sugerimos aplicar las
normas locales, estatales o federales de protección ambiental.
Material necesario y no provisto
1. Bastones mezcladores.
2. Pipetas para medir las muestras y realizar diluciones.
3. NaCl 150 mmol/L (0,85%).
4. Cronómetro.
5. Control Positivo (Ref. 144.P).
6. Control Negativo (Ref. 144.N).
7. Lámina de prueba
Muestra
Se debe crear un Procedimiento Operacional Estándar (POE) que
establezca métodos adecuados para la obtención, preparación y
almacenamiento de la muestra. Destacamos que los errores debidos a la
muestra pueden ser mucho mayores que los errores ocurridos durante el
procedimiento analítico.
Utilizar suero sin hemólisis. No usar plasma para realizar el ensayo.
Las muestras de suero pueden ser almacenadas hasta 7 días entre
2 - 8 ºC. Las muestras se pueden congelar a 20 ºC negativos durante tres
meses, siempre que el congelamiento sea realizado hasta 24 horas
después de su obtención. La utilización de muestras congeladas y
descongeladas repetidas veces puede dar resultados inconsistentes.
Como las muestras utilizadas son potencialmente infectivas, sugerimos
manipularlas según las normas de bioseguridad.
Interferencias
Muestras de suero fuertemente lipémicas pueden producir resultados
falsamente positivos por aglutinación inespecífica. Sueros turbios
pueden clarificarse por centrifugación a 19000 g durante 30 minutos
seguida del descarte posterior de la capa superior de lípidos.
El sistema utiliza aglutinación de partículas sensibilizadas con
inmunoglobulinas originarias de mamíferos y está sujeto a la interferencia
del Factor Reumatoide.
La contaminación del reactivo Látex PCR SD y de la lámina con
detergentes modifica la estructura coloidal del reactivo, conduciendo al
deterioro irreversible y resultados inconsistentes.
Método cualitativo . Ver observaciones 1 y 2.
1. No es necesario que los reactivos alcancen la temperatura ambiente
antes de usarlos.
2. Colocar 0,025 mL del Látex PCR SD, previamente homogeneizado,
en cada área de la placa de acuerdo con el número de tests a ser realizado.
3. En las áreas conteniendo el Látex PCR SD, colocar 0,025 mL de la
muestra y de los control negativo y control positivo (vea MATERIAL
NECESÁRIO Y NO PROVISTO) y mezclar en forma de círculo.
4. Inclinar la lámina hacia delante y hacia tras haciendo movimientos
oscilatorios en varios planos durante dos minutos y, inmediatamente,
bajo una buena fuente de luz, verificar la presencia o no de aglutinación
macroscópica, comparando el resultado de la muestra con los
estándares obtenidos con los controles.
Lectura después del tiempo recomendado leva a la obtención de
resultado falso positivo.
Interpretación
Resultado Negativo . Suspensión homogénea semejante al estándar
obtenido con el control negativo, indicando niveles de proteína C reactiva
menores a 6 mg/L.
Resultado Positivo . Aglutinación macroscópica que varía desde la
formación de grumos finos hasta grumos gruesos, indicando una
concentración mayor a 6 mg/L. La intensidad de la aglutinación no es un
indicativo de la concentración de PCR. Para estimar la concentración de la
muestra se debe utilizar el método semicuantitativo.
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Método semicuantitativo . Ver observaciones.
1. Preparar diluciones seriadas del suero, 1/2, 1/4, 1/8, 1/16, 1/32, 1/64
en tubos de ensayo utilizando solución salina (0,85%). Añadir 0,1 mL de
salina en cada tubo. Transferir para el 1º tubo 0,1 mL de la muestra que
presentó test cualitativo positivo. Mezclar, transferir 0,1 mL del 1º para el
2º tubo, mezclar, transferir 0,1 mL del 2º para el 3º tubo y así
sucesivamente hasta el 6º tubo. Se obtienen diluciones 1/2, 1/4, 1/8,
1/16, 1/32 y 1/64, respectivamente.
2. Colocar 0,025 mL del Látex PCR SD, previamente homogeneizado,
en cada área de la placa de acuerdo con el número de tests a ser realizado.
3. En las áreas conteniendo el Látex PCR SD, colocar 0,025 mL de las
diluciones preparadas y mezclar en forma de círculo.
4. Inclinar la lámina hacia adelante y hacia tras haciendo movimientos
oscilatorios en varios planos durante dos minutos y, inmediatamente,
bajo una buena fuente de luz, verificar la presencia o no de aglutinación
macroscópica, comparando el resultado de la muestra con los
estándares obtenidos con los controles.
5. Será considerado como título la mayor dilución de la muestra que
presentar aglutinación macroscópica. Si la aglutinación estuviera
presente hasta 1/64, continuar las diluciones a partir del 6º tubo y
proseguir con el test.
Sensibilidad . En el sistema Latex PCR SD la sensibilidad es de
6 mg/L (5 - 10mg/L).
Resultados
Test Negativo . Expresar el resultado como menor a 6 mg/L.
Test Positivo . Expresar el resultado en mg/L.
mg/L = sensibilidad x inversa del título encontrado en el método
semicuantitativo.
Ejemplo
Título encontrado 1/16 \ mg/L=6,0 x 16=96 mg/L.
Valor de referencia . Menor a 6,0 mg/L. Este valor debe ser usado
sólo como orientativo. Se recomienda que cada laboratorio establezca, en
la población atendida, su propio rango de valores de referencia.
Control interno de calidad . El laboratorio debe mantener un
programa de control interno de calidad que defina claramente, los
objetivos, procedimientos, normas, criterios para límites de tolerancia,
acciones correctivas y registro de las actividades. La utilización de los
controles negativo y positivo en todas las corridas analíticas es
fundamental para verificación del desempeño del sistema.
6
Características de desempeño . La calibración del reactivo y
el límite de detección de 6,0 mg/L fueron verificados usando un calibrador
aforado con material de referencia ERMÒ - DA472/IFCC.

Eficiencia diagnóstica . Ciento y veinte y cinco muestras (125) de
suero con valores menores y mayores a 6 mg/L fueron ensayadas
utilizando Latex PCR SD y un otro producto de que también emplea el
método de la aglutinación en placa como método comparativo.
Látex PCR SD
Método Comparativo Positivos Negativos
Positivo 44 2
Negativo 3 76
El análisis estadístico mostró los siguientes resultados
Sensibilidad . 95,6%.
Especificidad . 96,2%.
Eficiencia . 96%.
Repetitividad . La imprecisión intra-ensayo fue verificada evaluando
10 réplicas de cuatro muestras de suero con las concentraciones iguales
a 1,62; 7,14; 97,4 y 146,0 mg/L. Los resultados negativos y positivos
encontrados muestran una perfecta concordancia con los resultados
esperados.
Reproducibilidad . La imprecisión inter-ensayo fue verificada en 10
evaluaciones independientes usando cinco muestras con
concentraciones iguales a 1,28; 7,19; 40,1; 148,5 y 270 mg/L. Los
resultados negativos y positivos encontrados mostraron una perfecta
concordancia con los resultados esperados.
1-5
Significado clínico . La proteína C-reactiva es, probablemente, el
ensayo más sensible para evaluar la reacción inflamatoria o necrosis
tisular. La PCR tiene una vida media de 5 a 7 horas y por esta razón sus
valores caen a los niveles de referencia mucho más rápidamente que
otras proteínas de fase aguda. En el 70% de los pacientes con infección, la
elevación de la PCR precede en por lo menos 12 horas la elevación de
otros marcadores de infección como la leucocitosis, hemosedimentación
y, aún, la fiebre.
Cuando la respuesta inflamatoria es mediada primariamente por
neutrófilos o monocitos, la síntesis hepática de la PCR está aumentada y
la concentración sérica, habitualmente alcanza valores de 100 mg/L o
más. Pacientes portadores de agranulocitosis acompañada de
septicemia pueden presentar niveles de PCR dentro de los valores de
referencia, lo que demuestra el papel esencial de los neutrófilos para
iniciar la síntesis de esta proteína.
Cuando la respuesta inflamatoria es mediada primariamente por
linfocitos, la síntesis de la PCR no se altera o puede estar ligeramente
aumentada y los valores séricos de la PCR no se modifican o raramente
sobrepasan los 26 mg/L.
La síntesis de la PCR no es afectada directamente por drogas anti-
inflamatorias o inmunosupresoras incluyendo esteroides, y una
disminución de los niveles séricos de la PCR, aún con el uso de estas
drogas, es un indicador seguro de la involución del proceso inflamatorio.
Concentraciones séricas iguales o mayores a 200 mg/L tienen una
sensibilidad del 70% y especificidad del 100% para diagnosticar
infección, siendo el valor predictivo del test positivo igual a 100%.

Estudios de dilución . Los estudios fueron realizados por dilución En la pielonefritis, la PCR es generalmente mayor a 100 mg/L, mientras
de una muestra de PCR elevada en un pool de suero humano normal. que en los pacientes portadores de cistitis ella es usualmente menor que
13 mg/L.

Muestra (mg/L) Resultado En el infarto agudo del miocardio pueden ser encontrados niveles de
322 Reactivo hasta 350 mg/L con un pico en torno de la 50ª hora. La persistencia de
215 Reactivo valores elevados después de 100 ó 150 horas del episodio agudo puede
143 Reactivo ser considerada sugestiva de isquemia en progresión o de la asociación
95,6 Reactivo con otra enfermedad.
63,7 Reactivo Condiciones clínicas que presentan concentración sérica de PCR muy
42,5 Reactivo elevada: infecciones bacterianas, enfermedad de Still, espondilitis
28,3 Reactivo anquilosante, artritis asociada a la anastomosis yeyuno-ileal,
18,9 Reactivo enfermedad de Crohn, infarto agudo del miocardio, artritis psoriática,
12,5 Reactivo síndrome de Reiter, fiebre reumática, artritis reumatoide, amiloidosis
8,4 Reactivo secundaria, complicaciones trombo-embolicas pos-quirúrgicas y
5,6 Débilmente Reactivo vasculitis.
3,7 No Reactivo
Condiciones clinicas que presentan pequeñas elevaciones de PCR:
hepatitis crónica activa, la mayoria de las virosis, dermatomiositis,
Los resultados demuestran que después de sucesivas diluciones de la poliomiositis, dolencia mixta del tejido conectivo, esclerodermia, lupus
muestra las recuperaciones esperadas son encontradas. eritematoso sistémico, leucemias y colitis ulcerativa. En estas
condiciones, niveles séricos de PCR iguales o mayores a 100 mg/L son
Efecto prozona . Una muestra proteica con concentración igual a un indicador seguro de infección bacteriana intercurrente o de
400 mg/L fue ensayada con Látex PCR SD encontrándose resultados agudización en casos de leucemia.
repetidamente positivos, confirmando que hasta la concentración
evaluada no hay efecto prozona. Cuando se esperan concentraciones por
encima de 400 mg/L, la muestra a ensayar deberá ser diluida con
solución de NaCl 150 mmol/L (0,85%).

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La proteína C-reactiva puede ser usada para distinguir la enfermedad de 5. Whicher JT, Bell AM, Southall PJ: Diagnostic Medicine, 1981;4:62-80.
Crohn de la colitis ulcerativa. En la colitis ulcerativa la concentración
sérica de la PCR es generalmente menor a 26 mg/L aún cuando la 6. Lars-Olof Hanson et al. Current Opinion in Infectious diseases 1997;
enfermedad es sintomática y extensa y el paciente no tenga infección 10: 196- 201.
intercurrente. En contraposición, en la enfermedad de Crohn, la PCR está
elevada y los niveles séricos se correlacionan con la extensión y actividad 7. M.M. Pepys. The Lancet 1981; March 21: 653 - 656.
de la dolencia.
8. Chetana Vaishnavi. Immunology and Infectious Diseases 1996; 6: 139
- 144
Observaciones 9. Yoshitsugy Hokama et al. Journal of Clinical Laboratory Status 1987; 1:
15 - 27.
1. La limpieza y secado adecuados del material utilizado son factores
fundamentales para la obtención de resultados correctos. La 10. Yamamoto S et al. Veterinary Immunology and Immunopathology
contaminación del Látex PCR SD con detergentes modifica la estructura 1993; 36: 257 - 264.
coloidal del reactivo provocando su deterioro irreversible.
11. Charles Wadsworth et al. Clinica Chimica Acta; 1984: 138: 309 -
2. El laboratorio clínico tiene como objetivo fornecer resultados exactos 318.
y precisos. La utilización de agua de calidad inadecuada es una causa
12. Young DS. Effects of drugs on clinical laboratory test, 4th ed. AACC
potencial de errores analíticos. El agua desionizada o destilada utilizada
Press, 1995.
en el laboratorio debe tener la calidad adecuada para cada aplicación. Así,
para preparar reactivos y usar en las mediciones y para su uso en
13. Labtest: Datos de archivo.
enjuague final de la vidriería, debe tener resistividad ³1 megaohm.cm o
conductividad £1 microsiemens/cm y concentración de silicatos
<0,1 mg/L. Cuando la columna desionizadora está con su capacidad Presentación
saturada, se produce agua alcalina con liberación de varios iones,
Producto Referencia Contenido
silicatos y sustancias con gran poder de oxidación o reducción que
deterioran los reactivos en pocos días o incluso horas, alterando los Latex PCR SD 144K/120 1 1 X 3,0 mL
resultados de modo imprevisible. Por lo cual es fundamental establecer
un programa de control de la calidad del agua.
Informaciones al consumidor
3. Al comparar métodos para la determinación del PCR tener en cuenta la [Términos y Condiciones de Garantía]
sensibilidad de los mismos. Resultados obtenidos con productos que
presentan sensibilidades diferentes solamente son comparables si están Labtest Diagnóstica garantiza el desempeño de este producto dentro de
expresados en mg/L. las especificaciones hasta la fecha de expiración indicada en los rótulos,
siempre que los cuidados de utilización y conservación indicados en los
4. El sistema está estandarizado para obtener la sensibilidad propuesta y rótulos y en estas instrucciones sean seguidos correctamente.
el desempeño adecuado en función de los volúmenes indicados en la
metodología. Modificaciones en los volúmenes recomendados y la
Labtest Diagnóstica S.A.
introducción de puntas contaminadas pueden comprometer el
CNPJ: 16.516.296 / 0001 - 38
desempeño del ensayo y la estabilidad del Latex PCR SD.
Av. Paulo Ferreira da Costa, 600 - Vista Alegre - CEP 33400-000
Lagoa Santa . Minas Gerais Brasil - www.labtest.com.br
Referencias
Servicio de Apoyo al Consumidor e-mail: sac@labtest.com.br
1. Angerman HS: J Reprod Med, 1980;25:63.
Edición: Marzo, 2015 Copyright by Labtest Diagnóstica S.A.
2. Becker GJ, Waldburger M, Heghes GRV, Pepys MB: Ann Rheum Dis, Ref.: 270215 Reproducción bajo previa autorización
1980;39:50.

3. Gambino: Lab Rep for Physicians, 1982;4:1.

4. Singer JM, Plotz CM, Pader E, Elster SK:AmJ Clin Path, 1957;28:611.

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