BIORREACTORES

Un biorreactor es un recipiente o sistema que mantiene un ambiente biolgicamente activo. En algunos casos, un biorreactor es un recipiente en el que se lleva a cabo un proceso qumico que involucra organismos o sustancias bioqumicamente activas derivadas de dichos organismos. Este proceso puede ser aerbico o anaerbico. Estos biorreactores son comnmente cilndricos, variando en tamao desde algunos mililitros hasta metros cbicos y son usualmente fabricados en acero inoxidable. Un biorreactor puede ser tambin un dispositivo o sistema empleado para hacer crecer clulas o tejidos en operaciones de cultivo celular. Estos dispositivos se encuentran en desarrollo para su uso en ingeniera de tejidos. En trminos generales, un biorreactor busca mantener ciertas condiciones ambientales propicias (pH, temperatura, concentracin de oxgeno, etctera) al organismo o sustancia qumica que se cultiva.

Fig.1.Un biorreactor cerrado utilizado en la investigacin de etanol celulsico

Diseo de Biorreactores
El diseo de biorreactores es una tarea de ingeniera bastante compleja. Los microorganismos o clulas son capaces de realizar su funcin deseada con gran eficiencia bajo condiciones ptimas. Las condiciones ambientales de un biorreactor tales como flujo de gases (por ejemplo, oxgeno, nitrgeno, dixido de carbono, etc.), temperatura, pH, oxgeno disuelto y velocidad de agitacin o circulacin, deben ser cuidadosamente monitoreadas y controladas. La mayora de los fabricantes industriales de biorreactores usan recipientes, sensores, controladores y un sistema de control interconectados para su funcionamiento en el sistema de biorreaccin La misma propagacin celular (fenmeno conocido en ingls como Fouling) puede afectar la esterilidad y eficiencia del biorreactor, especialmente en los intercambiadores de calor. Para evitar esto, el biorreactor debe ser fcilmente limpiable y con acabados lo ms sanitario posible (de ah sus formas redondeadas). Se requiere de un intercambiador de calor para mantener el bioproceso a temperatura constante. La fermentacin biolgica es una fuente importante de calor, por lo que en la mayor parte de los casos, los biorreactores requieren de agua de enfriamiento. Pueden ser refrigerados con una chaqueta externa o, para recipientes sumamente grandes, con serpentines internos. En un proceso aerobio, la transferencia ptima de oxgeno es tal vez la tarea ms difcil de lograr. El oxgeno se disuelve poco en agua (y an menos en caldos fermentados) y es relativamente escaso en el aire (20,8 %). La transferencia de oxgeno usualmente se facilita por la agitacin que se requiere tambin para mezclar los nutrientes y mantener la fermentacin homognea. Sin embargo, existen lmites para la velocidad de agitacin, debidos tanto al alto consumo de energa (que es proporcional al cubo de la velocidad del motor) como al dao ocasionado a los organismos debido a un esfuerzo de corte excesivo. Los biorreactores industriales usualmente emplean bacterias u otros organismos simples que pueden resistir la fuerza de agitacin. Tambin son fciles de mantener ya que requieren slo soluciones simples de nutrientes y pueden crecer a grandes velocidades. En los biorreactores utilizados para crecer clulas o tejidos, el diseo es significativamente distinto al de los biorreactores industriales. Muchas clulas y tejidos, especialmente de mamfero, requieren una superficie u otro soporte estructural para poder crecer y los ambientes agitados son comnmente dainos para estos tipos de clulas y tejidos. Los organismos superiores tambin requieren medios de cultivo ms complejos.

I.-Clasificacin de los Biorreactores

Clasificacin operativa Tanto biorreactores como fermentadores se clasifican primeramente de acuerdo al modo de operacin: Discontinuo Semicontinuo Continuo. Esta es una clasificacin operativa y se aplica a cualquier reactor, sea qumico o biolgico (biorreactor). En los reactores biolgicos el modo de operacin define el sistema de cultivo que es el mismo y delimita la clasificacin procesal-productiva del bioproceso (cultivo). Al operar un biorreactor en una determinada categora (discontinuo, semicontinuo, continuo), automticamente queda determinado el modo de cultivo del sistema y se definen los parmetros y las caractersticas operativas y de diseo que intervienen en el proceso productivo del sistema. Clasificacin biolgica Los sistemas biolgicos deben interaccionar con el ambiente externo para poder crecer y desarrollarse; es por eso que los biorreactores se clasifican biolgicamente de acuerdo al metabolismo procesal del sistema de cultivo: Anaerbico Facultativo Aerbico Los bioprocesos de cultivo y las fermentaciones estn basados en el metabolismo celular del cultivo. El metabolismo define los parmetros y caractersticas operativas-biolgicas de diseo y de operacin del biorreactor. Estas caractersticas son las que intervienen en la parte biolgica del sistema y tienen que ver con el crecimiento, productividad y rendimiento del cultivo; por lo que, definen la clasificacin biolgica-procesal del sistema de cultivo. Clasificacin biolgica-operativa Ambas clasificaciones; la biolgica y la operativa, son procesalmente interdependientes y en su conjunto afectan el diseo final del biorreactor. Al conjuntarse ambas clasificaciones, se conjuntan tambin la funcin operativa y la biolgica para establecer entre ambas un propsito de utilizacin, el modo de cultivo y el bioproceso. Siendo el propsito de utilizacin, el destino de cultivo del biorreactor; para

qu tipo de cultivo va a ser utilizado el biorreactor; el modo de cultivo es sinnimo de sistema de cultivo y el bioproceso es en s, todo el proceso.

II.-Biorreactores y Tipos de Cultivo

Los sistemas biolgicos que determinan el metabolismo celular de cultivo y el modo procesal-biolgico del sistema son: Clulas y microorganismos anaerbicos Bacterias en su gran mayora, son microorganismos de metabolismo degradativo (catablico); generalmente unicelulares, estos microorganismos son autnomos y nutricionalmente independientes (auttrofos); sus clulas (cuerpos) no respiran (no utilizan la gluclisis para la respiracin celular), en cambio, utilizan vas alternas, donde una molcula orgnica, producida durante el proceso metablico (catabolismo), es utilizada como aceptor de electrones, en un proceso bioqumico conocido como respiracin oxidativa; esta molcula es reducida a producto orgnico en un proceso comnmente denominado fermentacin. Clulas y microorganismos facultativos Son ambivalentes, tienen la capacidad de vivir o sobrevivir entre ambientes: aerbico (presencia de oxgeno) y anaerbico (ausencia de oxgeno); son microorganismos de metabolismo mixto por lo que, pueden tanto degradar (catabolismo) como construir (anabolismo) materia orgnica, a partir de diferentes sustratos (materia prima), tanto orgnicos como inorgnicos. Pese a su versatilidad, sus mayores representantes son microorganismos que presentan relaciones parsitas o simbiontes tales como: hongos y levaduras, por lo que no son muy extensos. Clulas y microorganismos aerbicos Pertenecen en su mayora al Reino Eucariota pero tambin los hay procariota son microorganismos y clulas que respiran (utilizan la gluclisis como forma de respiracin celular); por lo que su metabolismo es constructivo (anablico) y deben obtener sus nutrientes de diferentes fuentes. Sus principales grupos estn representados por: bacterias y microorganismos aerbicos, plantas y animales; cuyas clulas se puedan cultivar en suspensiones celulares o bien, en diferentes arreglos artificiales o modificadas. Posibles sistemas de cultivo que se pueden realizar y el tipo de biorreactor asociado a cada uno:
Cultivos microbianos anaerbicos - fermentador bacterial (CO2)

Los microorganismos de metabolismo anaerbico son los ms simples de todos, tan solo necesitan de un medio de cultivo adecuado, agitacin vigorosa y cierta cantidad de CO 2 (dixido de carbono) disuelto (COD) para crecer y multiplicarse.

 Cultivos microbianos facultativos fermentador bacterial Los microorganismos facultativos toleran la presencia de oxgeno en bajas concentraciones y adems de un sustrato adecuado, slo requieren agitacin moderada y un medio de cultivo para crecer y desarrollarse.
Cultivos microbianos aerbicos fermentador bacterial (O2)

Los microorganismos aerbicos necesariamente requieren la presencia de oxgeno (aire) disuelto (OD) para sobrevivir; adems, agitacin moderada y un medio de cultivo rico en nutrientes para poder crecer y desarrollarse.
Cultivos celulares aerbicos y facultativos fermentador mictico (CO2)

Los cultivos celulares se diferencian de los bacteriales (microbios) en que no son microorganismos procariota, son eucariota. Son microorganismos aerbicos o facultativos pertenecientes al Reino Fungi (hongos y levaduras), generalmente llamados micticos, requieren de la presencia de CO2 disuelto en el medio como sustrato limitante de la velocidad de reaccin y generan estructuras reproductivas muy particulares.
Cultivos Celulares aerbicos estrictos Fermentador con aireacin (O2)

El cultivo de microorganismos celulares (no bacteriales) aerbicos estrictos requiere la presencia de oxgeno disuelto en el medio de cultivo para el metabolismo celular; as como una adecuada agitacin.
Clulas vegetales en suspensin biorreactor de levantamiento por aire (O 2) en

rgimen turbulento (Re3000) Las clulas vegetales pueden ser cultivadas en suspensiones celulares: pequeos agregados celulares que se suspenden en el medio de cultivo mediante agitacin. Dado que las clulas vegetales respiran, el diseo del biorreactor debe incorporar una lnea de aireacin (aire) para suministrar oxgeno disuelto (OD) al medio de cultivo. El diseo debe contar con agitacin vigorosa, pues los agregados celulares vegetales tienden a agruparse (clusters) y de alcanzar gran tamao y peso, precipitaran. Por eso, la operacin de este tipo de biorreactores debe ser en rgimen turbulento (Re3000). Los biorreactores para clulas vegetales en suspensin generalmente son diseados con un mecanismo de levantamiento por aire air lift que combina una agitacin vigorosa (turbulenta) con una adecuada aireacin (oxgeno disuelto) del medio de cultivo.
Protoplastos vegetales - biorreactor de levantamiento por aire (O 2) en rgimen

laminar (Re2300) Los protoplastos son clulas vegetales desprovistas de su pared celular, esto se logra utilizando enzimas proteolticas (proteasas y lipasas) que degradan la pared celular. Actualmente, el cultivo de protoplastos no es muy comn, pero de realizarse, requiere de

una cama de aire (burbujas muy finas) que opere en rgimen laminar (Re2300), para evitar que los esfuerzos cortantes (esquileo) e hidrodinmicos (agitacin) generados en el medio de cultivo daen (lisis celular) las clulas en suspensin (tamao de Kolmogorov de los Eddies). Tambin es indispensable que el medio de cultivo contenga las proteasas y lipasas necesarias para evitar la regeneracin de la pared celular.
Clulas animales biorreactor de lecho fluidizado (O2)

Los cultivos de clulas animales requieren de proximidad mutua y de un soporte slido (anclaje) para interactuar (comunicacin clula-clula) y poder metabolizar (producir); esto por cuanto, las clulas animales, por lo general, no son independientes y deben estar unidas a un sistema (p.ej; heptico) para funcionar adecuadamente. Para suministrar esa proximidad y el soporte necesario, los diseos de biorreactores para clulas animales deben aumentar la densidad celular (concentrar) de las clulas en cultivo. Una forma de hacerlo es incorporar un lecho fluidizado formado por cantidad de microesferas acarreadoras hechas de material cermico poroso inerte que, por su tamao (micromtrico) forman una interfase con el medio de cultivo (fluido) que permite la transferencia de masa (nutrientes y OD), energa (calor) y momentun (agitacin) entre el medio de cultivo y las clulas en cultivo; lo que es llamado lecho fluidizado. Los cultivos celulares animales, por la delicada naturaleza de las membranas plasmticas requieren adems de oxgeno disuelto (OD) en el medio de cultivo (tamao de Kolmogorov de los Eddies) y de un rgimen de agitacin laminar (Re2300).
Clulas Inmovilizadas biorreactor de Fibra Hueca (O2)

La inmovilizacin celular es otra forma de lograr proximidad celular y aumentar la densidad celular y la concentracin de metabolitos dentro de las clulas. La inmovilizacin es un mtodo mucho ms eficiente y logra rendimientos muy superiores a los del lecho fluidizado. Pero, los fenmenos de transferencia (masa, momentun y energa) se ven muy limitados por la inmovilidad. Esto es especialmente crtico en cultivos de clulas de mamfero por cuanto ya clula no recibe la nutricin adecuada. Los reactores de fibra hueca son los dispositivos ms utilizados para inmovilizar y concentrar cultivos celulares animales. Su diseo consiste en una batera de fibras hueca y porosa en su interior, colocadas en paralelo. Las clulas se concentran y aumenta la densidad celular, en los intersticios de las fibras huecas. El medio de cultivo fluye en contrasentido desde el exterior del reactor o a travs de una carcasa como si fuera un intercambiador de calor de doble tubo. Para solventar el problema de la escasa transferencia de masa (nutrientes y OD) dentro de la fibra hueca, un diseo novedoso es el tambor rotativo en el cual, el tambor externo rota sobre la batera de fibras huecas, generando una circulacin constante de masa y de momentun, aumentando las tazas de transferencia.
Clulas empaquetadas - biorreactor de Lecho Empacado (O2)

El empaquetamiento celular es una forma menos drstica de inmovilizacin; pues sta es parcial. Tambin tiene el objetivo de aumentar la concentracin y la densidad celular; pero

al no estar enclaustradas las clulas, la transferencia de masa es mayor, aunque siempre limitada. Un lecho empacado es una matriz de soporte slido que retiene las clulas, bien por geometra (dentro de los intersticios o espacios huecos de la matriz), bien por afinidad (paso o adherencia selectiva). Un biorreactor con este propsito debe contener un lecho de soporte slido, sumergido en el medio de cultivo. La oxigenacin generalmente se realiza en el exterior del lecho, a travs del medio de cultivo. Cultivos enzimticos Reactores de Lecho Cataltico Los cultivos enzimticos se comportan en algunos aspectos como cultivos celulares y en otros como reactivos qumicos. Debido a que un sustrato enzimtico es un cataltico de una reaccin biolgica, la cintica de estos reactores puede simularse como la qumica, pero sin olvidar que el compuesto es biolgico. Los sustratos enzimticos deben estar anclados a un lecho semislido o a uno semifluido - segn sea el caso - dependiendo de la naturaleza enzimtica del sustrato; que por la naturaleza de la enzima se conocen como lechos catalticos. Muchas veces el medio de cultivo, adems de la enzima, requiere, para un sustrato determinado, su respectivo precursor metablico llamado cofactor, ms algn componente especial que agilice el proceso metablico.

III.-Modo de Operacin y Sistemas de Cultivo

El modo de operacin de un sistema de cultivo, es sinnimo del modo de operar del biorreactor o fermentador. ste no solo influye en el diseo propio del reactor, tambin, en el modelo cintico de crecimiento del cultivo y en el proceso de produccin. Existen tres modos de cultivo aunados a tres modos bsicos de operacin:

Discontinuo (batch): Por lotes o tandas, sin alimentacin (F); se coloca dentro del biorreactor la carga total de cada proceso (tanda o lote) de cultivo o fermentacin y se dejar que se lleve a cabo el proceso productivo o la fermentacin por el tiempo que sea necesario; el cul se denomina tiempo de retencin.

Semicontinuo (fed-batch): Por lotes alimentados, con alimentacin de entrada (F1); se alimenta una lnea de entrada o alimentacin (F1) para que el sistema de cultivo tenga un producto (biomasa) con mximo de crecimiento (exponencial) y aumente la productividad.

Continuo (continuos): Por quimioestato, se alimenta una lnea de entrada F1 o alimentacin y se drena una lnea de salida F2 o lavado; de manera que los flujos o caudales de ambas lneas sean iguales y la produccin sea continua.

IV.-Balances y Ecuaciones
La parte terica del diseo consiste en modelar; es decir, poner en ecuaciones el proceso biolgico (bioproceso) que se lleva a cabo, para que, a partir de esas ecuaciones, dimensionar (dar dimensiones) y simular el comportamiento terico de un modelo prototipo. Si la teora corresponde a la prctica, el comportamiento del modelo se acercar a la realidad; est en la habilidad del diseador, que esto sea lo ms cercano posible. Antes de modelar en ecuaciones un diseo es necesario saber que tamao va a tener el modelo, de cuanto se dispone y cuanto vamos a requerir para realizar un proyecto de ese tamao. Eso es, hacer un balance para igualar todas las variables o parmetros de las ecuaciones y llevar la contabilidad de nuestro proyecto. Balance general El primer balance que debe realizarse en cualquier sistema es el Balance General o Global; en el se toma en consideracin nicamente el sistema como una caja negra el ambiente externo y los flujos que entran (F1) y salen (F2) e interaccionan con el ambiente externo. De esta forma el primer balance es: Balance general biomasa Velocidad de Acumulacin = Velocidad de Entrada Velocidad de Salida + Velocidad de Formacin Velocidad de Consumo

Balance General por componente Una vez dado el balance general de biomasa, debe tomarse en cuenta que, en un sistema de cultivo, existen muchos componentes: sustratos, productos, compuestos metablicos que conforman el caldo de cultivo (medio interno); incluso la biomasa, se considera un componente en s misma. A partir del balance general, debe establecerse un balance general para cada componente i del cultivo o la biomasa. De acuerdo al enunciado del balance general: la velocidad de acumulacin del componente i es el flujo de entrada (F1) por la concentracin inicial del componente i [velocidad de entrada] menos el flujo de salida (F2) por la concentracin del componente i (Ci) [velocidad de salida]; ms la velocidad de formacin del componente i [formacin] menos la velocidad de consumo del componente i [consumo]: Ec.1

Respecto a las velocidades de formacin y consumo: Si se trata de un componente metablico, responden a la acumulacin (formacin) del componente dentro de la clula y al consumo del metabolito por parte de la clula (consumo). Si se trata de biomasa, formacin corresponde a la generacin de biomasa y el consumo al consumo de biomasa durante el bioproceso; esto es, a la produccin metablica en el primer caso y a la produccin o productividad en el segundo. Nomenclatura

V = volumen del cultivo (m) F1 = caudal de alimentacin (m/s) F2 = caudal de salida (m/s) = concentracin del componente i en la alimentacin (kg/m) Ci = concentracin del componente i en el lavado (kg/m) = velocidad de formacin del componente i (kg/ms) = velocidad de consumo del componente i (kg/ms).

Balance General por componente para cada modo de operacin La ecuacin de balance general por componente Ec. 1, por ser general, se define para una operacin contnua. En una operacin continua el flujo de entrada (F1) debe ser igual al flujo de salida (F2): F1 = F2 Esta condicin se conoce como flujo en estado estacionario (FEE). Para modelar el comportamiento de la biomasa del cultivo en el estado estacionario (EE) adems de la condicin de flujo (FEE) debe haber equilibrio en la densidad o concentracin de sta. Esto se conoce como quimioestsis o equilibrio quimioesttico y es por eso que a los sistemas de cultivo continuo se les llama quimioestatos. Est condicin est dada por la ecuacin: dV/dt = F1 F2 Ec. 2. Bajo la condicin de FEE y suponiendo que la densidad del cultivo y de la alimentacin son iguales (Ec.2, quimioestsis) la Ec.1 se reduce a: dCi/dt = F (Ci1 Ci) + V (rfi rci) Ec. 3. La ec.3 que se conoce como ecuacin de balance para una operacin contnua en estado estacionario.

De no existir el estado estacionario (EE) se produciran dentro del biorreactor dos condiciones de flujo indeseables:
o Si F1 > F2 se produce el rebalse o desborde del biorreactor, condicin que se da

cuando el flujo de entrada sobrepasa la capacidad del reactor. o Si F2 > F1 se produce el lavado o drenado de producto o biomasa, condicin que se da cuando el flujo de salida sobrepasa la capacidad del reactor. Cuando el modo de operacin es semicontinuo (fed-batch) el caudal de salida F2 es nulo (F2 = 0) por lo que, el volumen V aumentar con el tiempo en funcin del caudal de entrada: dV/dt = F Ec.4.

Y en el balance de materia se anula el trmino F2Ci resultando: d(VCi/dt) = FCio + V (rfi - rci) Ec.5. Observe que el volumen que permanece dentro del operador diferencial es porque vara con el tiempo (Ec.4), en tanto que el otro no lo hace (Ec.3). Esa es la razn por la que una operacin semicontnua tiene duracin limitada en el tiempo (el volumen no puede incrementarse ms all del volumen de trabajo o volumen til del biorreactor). El tiempo que dura una operacin semicontnua se conoce como tiempo de residencia (tr) y es el tiempo que dura el cultivo o bioproceso en un sistema semicontinuo. Cuando el modo de operacin es discontinuo ambos caudales son nulos (F1 = F2 = 0) por lo que, el volumen es constante y se anulan los trminos F1 Cio, F2 Ci en la Ec.1.Eso da como resultado: dCi/dt = rfi rci Ec.6.

La duracin de un cultivo discontinuo (batch) es tambin, limitada en el tiempo, pero se diferencia de la del cultivo semicontinuo (fed-batch) en que depende nicamente de las condiciones iniciales del cultivo; esto por cuanto, no existe alimentacin (F1). Una vez cargado el biorreactor e inoculado el medio de cultivo, la concentracin de la biomasa aumenta gracias a los nutrientes, pero una vez que el sustrato que limita el crecimiento se haya agotado, el crecimiento ya no es posible y finaliza el cultivo. Por este motivo, el tiempo que dura el cultivo dentro de un biorreactor con un modo de operacin discontinuo se llama tiempo de cultivo (tc).

 Balances individuales Los principales balances por componente en su forma individual son:

Balance de Biomasa: d (VX) / dt = FiXi + VrgX FoXo VrcX

Balance de Sustrato: d (VS) / dt = FiSi FoSo VrcS

Balance de producto: d (VP) / dt = FiPi FoPo VrgP

Balance de Oxgeno: d (VCL) / dt = FiCLi FoCLo VrcO2 + VNiO2

Balance de Anhdrido Carbnico: d(VCCO2) / dt = FiCCO2i FoCCO2o + VrgCO2 VNoCO2

Donde:

V: Volumen del lquido en el biorreactor, L t: Tiempo, h y: Concentracin del componente y en el lquido dentro del biorreactor, g/L X: Concentracin de biomasa en el lquido dentro del biorreactor, g/L S: Concentracin de sustrato en el lquido dentro del biorreactor, g/L P: Concentracin de producto en el lquido dentro del biorreactor, g/L CL: Concentracin de oxgeno en el lquido dentro del biorreactor, g/L C*: Concentracin de oxgeno en el lquido en equilibrio con el gas, g/L CCO2: Concentracin de CO2 en el lquido dentro del biorreactor, g/L F: Velocidad de flujo de lquido, L/h Ni: Velocidad de transferencia de un componente del gas al lquido, g/Lh No: Velocidad de transferencia de un componente del lquido al gas, g/Lh rg: Velocidad de generacin, formacin o produccin, g/Lh rc: Velocidad de consumo o utilizacin, g/Lh : Velocidad especfica de crecimiento celular, h-1 qS: Velocidad especfica de consumo de sustrato, g/gh qP: Velocidad especfica de formacin de producto, g/gh m: Velocidad especfica de consumo de sustrato para mantenimiento celular, g/gh Kd: Velocidad especfica de muerte o declinacin celular, h-1

YP: Coeficiente (estequiomtrico) de rendimiento de producto basado en el consumo de sustrato consumido para formacin de producto, g/g YP/S: Coeficiente de rendimiento de producto basado en el consumo total de sustrato, g/g YG: Coeficiente de rendimiento de biomasa basado en el consumo de sustrato para crecimiento, g/g YX/S: Coeficiente de rendimiento de biomasa basado en el consumo total de sustrato, g/g kLa: Coeficiente volumtrico de transferencia de oxgeno, h(-1).

Subndices

i = Ingreso o = Salida S = Sustrato P = Producto O2 = Oxgeno CO2 = Anhdrido carbnico

V.-Diseo de Algunos Tipos de Reactores 1.Diseo de un Quimioestato: Cultivo continuo

Un quimioestto un sistema de cultivo en continuo; su operacin esquemtica es como la que muestra la figura. Una operacin en continuo exige una serie de consideraciones para modelar su comportamiento: Mezcla perfecta (sin gradientes de concentracin y con agitacin turbulenta); Flujo de entrada y salida iguales (F1 = F2 = F); Volumen de operacin constante (volumen de lquido dentro del biorreactor: dV/dt = 0); Parmetros constantes de transferencia (temperatura, pH, velocidad de transferencia de oxgeno, etc.) Para iniciar un cultivo continuo; el biorreactor o el fermentado debe cargarse previamente con el inculo del cultivo y luego de que este crece lo suficiente, alimentar el sistema con medio fresco a un caudal F1 y lavar el producto por un rebalse a un caudal F2, de modo que, el volumen se mantenga constante, el tiempo que dure el bioproceso o la fermentacin. El caudal de salida F contiene clulas vivas (X), medio de cultivo con algn sustrato (S) parcialmente agotado (So) y posiblemente algn producto (P). Al alimentar con medio fresco (So) el caudal de entrada (F1), la biomasa (Xo) y el producto (Po) sern iguales a cero para las condiciones de entrada; por lo que, slo se deber considerar la concentracin de sustrato limitante del crecimiento (So) en la alimentacin.

Balances y Ecuaciones en el Estado Estacionario Teniendo en cuenta estas consideraciones, los balances de materia para X, S y P en el estado estacionario sern: Balance de Biomasa: VdX/dt = -FX + Vrx = (F/V)X + X = 0 rX = mX; E.E dX/dt = 0. Por definicin D = velocidad de dilucin = F/V = D Balance de Sustrato: VdS/dt = F (So S) Vrs; rs = X / YX/S E.E dS/dt = 0. Por definicin: SEE = KsD / m D XEE = YX/S (S0 S) Donde: D = velocidad de dilucin; SEE = concentracin del sustrato limitante de la velocidad en estado estacionario; XEE = concentracin de biomasa en estado estacionario. Balance de Producto: VdP/dt = -FP + Vrp = PEE = qPX / D rP = qPX; E.E dP/dt = 0 Donde: PEE = concentracin del producto en el estado estacionario. Nota: cuando el sustrato limitante de la velocidad de crecimiento (S) es tambin la fuente de carbono: X = DYX/S (So SEE) / (D + msYX/S) Modelo Cintico de Monod para el Cultivo Continuo El modelo de crecimiento que se aplica en los sistemas de cultivo continuo es el modelo cintico de Monod: D = mS / (KS + S) S = KSD / (m D) X = YX/S [S0 KSD / (m D)]

Velocidad Crtica de Dilucin: existe un valor de dilucin por encima del cual es X = 0; es decir, se produce lavado o arrastre de la biomasa por encima del valor de equilibrio que permite el estado estacionario y F2 > F1. Este factor se conoce como dilucin crtica (Dc); Dc = mSo / Ks + So En condiciones normales de operacin contnua S0 >> KS DC = m por lo que, un quimioestto debe trabajar a una fraccin de m. En trminos de crecimiento de la biomasa esto significa que el quimioestto impone una condicin selectiva al crecimiento del cultivo o el microorganismo. Formacin de producto: PEE = rp/D = qPXEE/D Determinacin de Parmetros de Crecimiento: un cultivo continuo es sumamente til para determinar parmetros de crecimiento. 1/D = 1/m + Ks/m * 1/SEE Se grafica 1/D en funcin de 1/S los puntos se ajustan a una recta cuya interseccin con el eje 1/D es el valor de 1/m y cuya pendiente es Ks /m. D (So SEE) / XEE = D / YX/S + ms La grfica de D (So-S) / X en funcin de D permite estimar 1/Y'x/s y s cuando el sustrato limitante de la velocidad de crecimiento es la fuente de carbono.

2.Diseo de un Reactor de Mezcla Perfecta

La ecuacin de diseo nos da el tiempo de residencia (t) del cultivo dentro del biorreactor. Para poder utilizar la ecuacin de diseo hay que modificar la definicin de componente X y sustituirlo por conversin X del componente i. Por definicin: Xi = Nio Ni / Nio Donde N = moles del componente i. Despejando: Ni = Nio (1 - Xi) dNi/dt = -Nio dXi/dt = riV

Con lo que, la ecuacin de balance de biomasa para el estado estacionario se transforma en: -FXi + riV = VdXi/dt = 0 Reordenado: V/F = Xi / -ri = t Ecuacin de diseo de un reactor de mezcla perfecta. Donde t = tiempo de residencia del cultivo dentro del biorreactor; Xi = Xi2 Xi1 = dXi Otro trmino comnmente utilizado en el diseo de reactores es el tiempo espacial () el cual define el tiempo necesario para procesar o fermentar en el biorreactor, un volumen de alimentacin, medido en condiciones de entrada (presin y temperatura), igual al volumen de operacin del biorreactor (el que define el estado estacionario). El tiempo espacial se obtiene dividiendo el volumen de reactor (V) entre el caudal volumtrico de entrada al biorreactor (Q): = V/Q Observe que al igual que t las unidades de son s^ (-1).

3.Diseo de un Biorreactor Semicontinuo

Un cultivo semicontinuo posee una lnea de entrada o alimentacin (F1). Para iniciar un cultivo alimentado (fed-batch) son validas las mismas consideraciones que se hicieron para el cultivo continuo; pero, se inicia la alimentacin del cultivo cuando el sustrato limitante de la velocidad se ha agotado; esto permite controlar la velocidad de crecimiento, regulando la velocidad de alimentacin (caudal); finalmente se debe alimentar el cultivo con medio fresco. Balances y Ecuaciones Los balances de materia respectivos para X, S y P son:

Balance de Biomasa: d (VX)/dt = Vrx = VX

Balance de Sustrato: d (VS)/dt = FSo Vrs

Balance de Producto: d (VP)/dt = Vrp

En estos casos el volumen V permanece dentro del operador diferencial; esto se debe a que vara con el tiempo. Si en la ecuacin de balance de sustrato la velocidad rs se reemplaza por rx / Yx/s se tiene: d (VS)/dt = FSo 1/Yx/s. d (XV)/dt Para controlar la velocidad de crecimiento (rx) mediante el caudal de alimentacin (F) el sustrato (S) debe ser cero en todo momento: S = 0 y por lo tanto: d (SV)/dt = 0. Esta condicin equivale a que el sustrato sea consumido en su totalidad conforme ingresa al biorreactor; es por eso que se aplica la condicin de alimentacin fresca. Bajo estas condiciones, la ecuacin de balance de biomasa se transforma en: d (VX)/dt = FSoYx/s por integracin: XV = XeVe + FSoYx/st Donde Xe y Ve representan la concentracin de biomasa y el volumen de cultivo al iniciar la alimentacin. La variacin del volumen con el tiempo es: V = Ve + Ft El criterio para disear una alimentacin adecuada se obtiene por la ecuacin: FSo = VeXe / Yx/s la ecuacin es vlida para cualquier rango de , hasta m. Como criterio adicional, sobre todo en procesos de fermentacin se suele seleccionar un valor de So tan alto como sea posible y lo contrario con F (uno relativamente pequeo); a fin de evitar el lavado del cultivo por dilucin excesiva. No obstante esto ocasionara que la duracin del cultivo (tiempo de fermentacin) se prolongarse excesivamente. Para buscar el equilibrio se dise empricamente una solucin de compromiso: = 1 / VX. d (VX)/dt = Yx/sFSo / XeVe + Yx/sFSot

4.de Diseo de un biorreactor Semicontinuo Ideal

Un sistema de cultivo semicontinuo es un sistema transciende; es decir, hay un flujo temporal o transitorio que alimenta o drena (lava) el sistema.

El balance general de masa que se aplica a un volumen de control (diferencial de volumen) para un componente i en un sistema de flujo semicontinuo es: Entra - Sale - Desaparece = Acumula Fi - (Fi+dFi) - (-rxi) dV = 0

Operando se obtiene: - dFi = (-rxi) dV Por definicin la conversin del componete i en reactores en flujo (semicontinuo) es: Xi = Fio Fi / Fio Por lo que, sustituyendo en la ecuacin de balance: FiodXi = -rxidV Integrando la expresin anterior: dV/Fio = dXi/-rxi Donde los lmites de integracin son: 0, V para el volumen y Xio, Xif para la conversin. Resolviendo la integral obtenemos: V/Fio = dXi/-rxi = t La ecuacin de diseo para un biorreactor de flujo (semicontinuo). La ecuacin es vlida tanto si existe o no variacin de caudal (flujo) del sistema. Cuando se requiere una expresin en funcin de la concentracin, podemos utilizar la siguiente ecuacin: Fio = CioQi Donde Cio es la concentracin del componente i en las condiciones de entrada y Qi es el caudal volumtrico del componente i. Sustituyendo: V/Fio = V/QiCio = /Cio donde es el tiempo espacial del biorreactor. En forma integral: = Cio dXi/-rxi Para sistemas de densidad constante: = - dCi/-rxi Al comparar la ecuacin de diseo de un biorreactor semicontinuo ideal con la que se obtiene para uno discontinuo ideal, se observa que la diferencia est la expresin que toma el tiempo: t o t. En un biorreactor discontinuo, t representa el tiempo de cultivo tc y es igual

a la duracin del bioproceso o la fermentacin; lo que equivale a decir, el tiempo necesario para que el sustrato limitante de la velocidad se agote. En un biorreactor semicontinuo (de flujo) el tiempo t corresponde al equivalente para que la conversin de salida alcance su mximo valor posible; es decir, para que la generacin de biomasa o bien, del componente metablico X, alcancen su mximo de crecimiento (m) para un mismo componente i. Es por eso que en un biorreactor de flujo el tiempo t se llama tambin tiempo de residencia tr; ya que, es el tiempo que el cultivo reside dentro del biorreactor; el cual es diferente (mayor) del tiempo de cultivo tc, puesto que an despus de agotado el sustrato limitante de la velocidad, el cultivo (clulas o microorganismos) tiene la capacidad metablica de seguir sintetizando metabolitos X o generar ms biomasa (crecer); es por eso que le incorporan los adjetivos limitante de la velocidad al sustrato S.

5.Diseo de un biorreactor discontinuo

Un sistema de cultivo discontinuo no posee alimentacin (F1) o lavado (F2); se carga el contenido del biorreactor (tanda o lote) con el medio de cultivo y luego se inocula con el cultivo (clulas o microorganismos) y se deja crecer hasta obtener el producto (biomasa o metabolito). Balances y ecuaciones Dado que F1 = F2 = 0, las ecuaciones de balance son:

Balance de Biomasa: d (X)/dt = rx = X

Balance de Sustrato: d (S)/dt = rs = X / Yx/s

Balance de Producto: d (P)/dt = rp

Generacin de Biomasa: Cuando la operacin discontnua tiene como objetivo la generacin de biomasa (clulas o microorganismos); se parte del supuesto de que no se forma producto y que la relacin -S puede ser representada por la ecuacin de Monod, con lo que las ecuaciones de balance de biomasa y balance de sustrato limitante de la velocidad quedan:

Balance de biomasa: d (X)/dt = m (XS / Ks + S) Balance de sustrato: d (S)/dt = -m / Yx/s (XS / Ks + S)

El sistema de ecuaciones posee solucin analtica, pero en sta, no aparece X en forma explcita, por lo que, resulta de poca utilidad. Afortunadamente, es posible analizar casos particulares, haciendo algunas suposiciones. En el caso de tomar en cuenta nicamente la fase exponencial del crecimiento, cumple que: S Ks y las ecuaciones se reducen a las originales, salvo que es substituida por m:

Balance de biomasa: d (X)/dt = mX Balance de sustrato: d (S)/dt = mX / Yx/s

Dado que bajo tales condiciones el crecimiento ocurre al mximo valor de posible, integrando la ecuacin de balance de biomasa con las condiciones: t = 0, X = Xo se obtiene una expresin para la concentracin de biomasa en funcin del tiempo: X = Xo emt o bien: lnX = lnXo + mt La ecuacin establece que para S Ks, el crecimiento es exponencial y permite calcular el valor de m graficando el valor del logaritmo de X (ln X) en funcin del tiempo (t). En forma similar, la concentracin de sustrato limitante de la velocidad en funcin del tiempo es: S = So [(Xo / Yx/s) (emt - 1)] Conforme el sustrato se agota, S disminuye y la condicin de S se hace comparable a Ks con lo que dX/dt comienza a disminuir (fase de desaceleracin), hasta hacerse finalmente nula (S = 0); en este punto, se alcanza la mxima concentracin de biomasa y finaliza el cultivo, pues se ha alcanzado la fase estacionaria. La concentracin final de biomasa (Xf) se puede calcular si se conoce Yx/s: Yx/s = - (Xf Xo) / (Sf So) Dado que Sf = 0, Xf = Xo + Yx/sSo Lo usual es utilizar estas ecuaciones para calcular Yx/s.

6.Diseo de un Biorreactor con Aireacin

Un biorreactor con aireacin es por definicin un reactor continuo donde la entrada F1 es una lnea de alimentacin de aire estril (O2); la salida F2 es una lnea de lavado de aire estril y el sustrato limitante de la velocidad de crecimiento es el oxgeno disuelto (OD). Existen dos tipos o diseos bsicos de biorreactores con aireacin; ambos, de uso muy difundido: el primero es tanque agitado con lnea de aireacin y el segundo es el de levantamiento por aire o "air lift". De este ltimo existe tambin, una variante que se utiliza

para cultivos aerbicos muy resistentes a esfuerzos cortantes e hidrodinmicos y es la cama de burbujas o bubble bed.

6.1.Estructura de un Reactor Continuo de Tanque Agitado Con Lnea de Aireacin

Un CSTR con lnea de aireacin es utilizado, por lo general, como dispositivo fermentador para clulas y cultivos aerbicos; su esquema se representa en la figura. En l, la aireacin se da en rgimen laminar o de transicin (Re3000) por cuanto estas fermentaciones son destinadas a cultivos de clulas y microorganismos aerbicos sensibles a esfuerzos cortantes e hidrodinmicos altos. La agitacin extra requerida se realiza mecnicamente, por medio de: un eje transmisor de potencia provisto de aletas o turbinas de agitacin y accionado por un motor de corriente alterna con control de potencia y velocidad. Adems de esto, es indispensable que el sello mecnico del eje del motor sea hermtico y esterilizadle; que las lneas de entrada y salida de aire sean estriles y que la difusin del aire dentro del biorreactor sea controlada en presin, flujo y concentracin. Para completar el esquema de diseo: el aire se inyecta por la parte inferior del tanque y es difundido a travs de toda la mezcla por una corona con pequeos orificios espaciados regularmente o una boquilla de difusin. La cama de aire debe ser un chorro de finas burbujas de aire de pequeo dimetro, que salen de cada orificio de la corona o el difusor (boquilla) y y al ser "golpeadas" por las paletas de la turbina o el agitador, se distribuyen por todo el volumen, generndose miles de pequeas burbujas de aire que, difunden el 02 disuelto hacia el seno del lquido. El sistema de agitacin se completa con cuatro o seis deflectores o baffles que rompen el movimiento circular que imprimen las paletas de la turbina o el agitador al lquido y generan mayor turbulencia y mejor mezclado; pero sin daar el tejido o la pared celular de las clulas y microorganismos (tamao de Kolmogorov de los Eddies). Finalmente, el tanque debe poseer un intercambiador de calor formado por una camisa por la que circule agua, para poder controlar la temperatura del cultivo y evitar que este muera o sufra un estrs trmico.

6.2.Estructura de un biorreactor de Levantamiento por Aire

Cuando el volumen es muy grande (mayor que 1000 l) o se requiere de un mayor volumen de aireacin, el sistema CSTR, ya no es eficiente y se requiere del levantamiento por aire. Debido a que, a mayor volumen de cultivo, tambin es mayor la cantidad de calor generado; se hace necesario, aumentar el rea de transferencia de calor y la eficiencia de refrigeracin; por lo que, el intercambiador de calor de camisa debe ser reemplazado por uno de serpentn en contra flujo o con circulacin adyacente a la pared interior del tanque. Ver esquema representado en la figura. Al igual que en el diseo de tanque agitado, el aire que ingresa al biorreactor debe ser estril; esto se consigue, hacindolo pasar por un filtro microporo de dimetro de poro inferior a los 0,45 micrones (0,2 m 0,1 m) que impida el paso de microorganismos contaminantes. En los biorreactores de levantamiento por aire o "air lift" la cama de aire tambin funciona como medio de agitacin; de modo que, se genere una circulacin fluida

de lquido con aire (burbujas) que asciende el compartimiento interno y luego desciende por el compartimiento externo, favoreciendo el mezclado perfecto.

*Transferencia y Balance de Oxgeno

La velocidad de transferencia de 02 (r02) desde el seno de la fase gaseosa (burbujas) hasta la fase lquida (medio lquido) est determinada por la siguiente ecuacin: rO2 = Kla (C*- C) Donde KLa es el coeficiente volumtrico de transferencia de oxgeno; C la concentracin de 02 disuelto en el seno del lquido y C* la concentracin de O2 disuelto en equilibrio con la presin parcial de oxgeno de la fase gaseosa. El KLa y por lo tanto el grado de transferencia de oxgeno desde el seno del lquido hasta las clulas o microorganismos en cultivo, dependen del diseo del biorreactor y de las condiciones de operacin del sistema de cultivo: caudal de aire, volumen del lquido, rgimen de agitacin, rea de transferencia y viscosidad del cultivo. En general, disminuyen el KLa: la viscosidad y el volumen del lquido y aumentan el KLa: el rea de transferencia, la agitacin y la presencia de dispositivos que aumenten una, la otra, o ambas. La ecuacin de balance de oxgeno en el estado estacionario es: d(VCO2) / dt = F (C C*) VrO2 + VNiO2 Donde Ni es la velocidad de transferencia de un componente del gas (oxgeno) al lquido (medio). Dado que el oxgeno es el sustrato limitante de la velocidad de crecimiento, cuando el cultivo se encuentra en crecimiento, el flujo de entrada oxgeno (FiO2) ser mayor al flujo de salida de oxgeno (FfO2) debido al consumo de oxgeno disuelto en el lquido por parte de las clulas o microorganismos en crecimiento y/o divisin celular. En este caso, la ecuacin de balance de oxgeno para clulas o microorganismos en crecimiento es: d(VCO2) = FiO2C FfO2C* VrO2 + VNiO2 Es decir, debe utilizarse la ecuacin general.

*Sistema de Aireacin
El sistema de aireacin externamente comprende las lneas de entrada Fi y salida de aire Ff e internamente debe optimizar la transferencia de gases nutrientes (aire) hacia el medio lquido. Un sistema de aireacin consta de cuatro partes mecnicas: fuente de aire; tubera y filtros de entrada; boquilla y difusor de aire; tubera y filtros de salida. Y tres partes de control: control de flujo aire; control de presin de aire; control de difusin de oxgeno disuelto.

Fuente de Aire: dado que el sistema de aireacin, en su conjunto, depende de la correcta eleccin del dispositivo que suministrar la fuente de aire, se siguieren dos opciones:
1. Compresor de Aire: su principal caracterstica es que opera con: alta presin y bajo

caudal de aire; por eso, cuando operan, es de manera continua o, cuando se requiere capacidad, debe haber un tanque de almacenamiento a alta presin como parte del sistema. Una segunda e importante caracterstica es que produce un alto nivel de ruido 80dB y una tercera es que, si el compresor es de tipo pistn debe lubricarse con aceite, por lo que, sta caracterstica se incluye en el diseo como: autolubricado (oiless) o no lubricado (oil lubricated). Existen dos tipos de diseo constructivo para compresores de aire: a) El compresor de diafragma: esta diseado para un trabajo de operacin contnua; su presin operacin es moderada 60 psia y como su nombre lo indica, utiliza un diafragma o fuelle para impulsar y comprimir el aire. El compresor de diafragma resulta adecuado para oxigenar volmenes medianos de cultivos o microorganismos aerbicos. b) El compresor de pistn: es ms utilizado comercialmente, no obstante, para cultivos celulares sensibles (clulas de membrana plasmtica), no es recomendable, por cuanto, su presin de operacin es muy alta (80 psia o ms) para estos cultivos y puede causar dao celular severo o la lisis de las clulas; y porque, el pistn debe lubricarse con aceite y esto ocasiona que se filtre en pequeas cantidades a la corriente de aire.

7.Diseo de un Fermentador Semicontinuo

Los cultivos anaerbicos y facultativos estn constituidos por clulas y microorganismos cuyo metabolismo ante la ausencia de oxgeno, utiliza vas metablicas alternas para la oxidacin de los compuestos que le sirven de nutrientes. En estas clulas y microorganismos, la respiracin celular se sustituye por una ruta oxidativa alterna llamada fermentacin en la que, el piruvato no produce CO2 como producto final de desecho; por el contrario, se consume CO2 y esta es incorporado, junto al piruvato, en la fermentacin, cuyo producto final de desecho, le da nombre; por ejemplo: en la fermentacin alcohlica el piruvato se oxida a acetaldehdo y al final de la cadena oxidativa se produce etanol como producto final de desecho. Un fermentador es un dispositivo de tipo tanque agitado en el que se realiza una fermentacin controlada. Los fermentadores suelen operar en modo semicontinuo; por cuanto, debe alimentarse una lnea de sustrato limitante de la velocidad de crecimiento (S) para mantener el crecimiento celular o microbial durante la fermentacin. El catabolismo celular de las fermentaciones adems del producto final, produce gran cantidad de subproductos de desecho y metabolitos secundarios que son excretados al medio de cultivo, por las clulas en cultivo, y esto genera gran cantidad de espuma en el caldo de fermentacin. Las espumas modifican la acidez del medio de cultivo ya que, cambian el pH del medio de cultivo y por tanto, debe regularse y controlarse la acidez del medio adecuadamente. Adicionalmente, la turbidez y la cantidad de espuma, deben

mantenerse en niveles adecuados para evitar prdidas y el mal funcionamiento del biorreactor. Finalmente, la mayora de los procesos fermentativos generan gran cantidad de calor debido a la naturaleza exergnica del catabolismo celular de estos microorganismos, por lo que, la temperatura tambin debe ser controlada. En la mayora de los cultivos anaerbicos el dixido de carbono (CO2) es el sustrato limitante de la velocidad de crecimiento por lo que, la cintica del sistema de cultivo debe modificarse incorporando la ecuacin de balance de consumo de CO2: d(VCCO2)/dt = FiCCO2i FoCCO2o + VrgCO2 VNoCO2 Donde:
CCO2 = concentracin de CO2 en el lquido;

rg = velocidad de generacin; No = velocidad de transferencia de un componente del lquido al gas; i = ingreso; = salida.

Control y Medicin del CO2 Disuelto (COD): la curva de generacin de CO2 se debe determinar experimentalmente para determinar la velocidad de consumo de sustrato limitante de la velocidad (rgCO2) del cultivo; para eso, es necesario mantener el crecimiento mximo del cultivo. En la prctica la curva de consumo de CO2 se determina basndola en la concentracin de dixido de carbono disuelto (COD) en el medio de cultivo; esta puede ser medida y controlada con un dispositivo comercial diseado para ese propsito, un controlador COD y la sonda o probeta COD respectiva. El suministro de CO2 se obtiene con un cilindro de CO2 recargable. La regulacin del flujo de CO2 se realiza manualmente con un regulador manual de flujo o manmetro; se debe hacer de forma que, se mantenga la concentracin mxima de de dixido de carbono disuelto, medida en el controlador COD, para que, la velocidad especfica de consumo de sustrato para mantenimiento (m) se mantenga en todo momento. El control de flujo de CO2 se realiza utilizando una vlvula solenoide electrnica que el controlador COD dirige al recibir la seal de la probeta COD y en base a su valor, comanda la apertura o clausura de una vlvula solenoide, mediante una seal de paso (abrir o cerrar) que regula el flujo de CO2 proveniente del tanque de CO2 comprimido. Las vlvulas solenoides son servo mecanismos elctricamente controlados y se escogen de acuerdo al material, al nmero de vas, al calibre y la presin y si permanecen abiertas o cerradas, entre otros. La difusin del CO2 en el medio lquido se realiza utilizando una boquilla de difusin o un difusor de gases de material cermico poroso.

Sistema de Control de Espuma

La presencia de oxigeno en el ambiente interno del biorreactor ocasiona que los productos de desecho del catabolismo celular de los microorganismos facultativos, sean oxidados, por lo que, las espumas se tornan densas y jabonosas ocasionando serios problemas funcionales y contaminado el cultivo. Un sistema de control de espuma (ver diagrama) consta de dos subsistemas sistemas que funcionan en conjunto:
1. Subsistema Antiespuma formado por:

Controlador de antiespuma: comanda la bomba peristltica que dispensa el antiespumante y recibe la seal de medicin del sensor de espuma Probeta o sensor antiespuma: es el sensor que mide el nivel de espuma en el medio de cultivo; se especifica de acuerdo al tamao del frasco dispensador de antiespumante Frasco dispensador de antiespumante: debe contar con su propio sistema de filtracin y equiparacin de presin (externa e interna)

1. Subsistema de Bombeo Peristltico: formado por:

Mangueras flexibles; Bomba peristltica; Frasco dispensador;

El frasco dispensador es factor comn en ambos subsistemas. La bomba peristltica maja la manguera flexible e impulsa el flujo del fluido antiespumante dentro del biorreactor. La manguera flexible se escoge segn el material, el tipo de bomba y la longitud; se recomienda una de silicn curado o Tygon y para un sistema de bombeo L/S (bomba sencilla de velocidad fija o variable). Nota: la manguera flexible se conecta al sistema (biorreactor) mediante un tubo de adicin de reactivo. Este debe ser de acero inoxidable y su dimetro (puerto) debe ser el dimetro interno de la manguera flexible. Sistema de Control de pH El sistema controla el pH del medio de cultivo; que es generada por los productos de desecho y el metabolismo propio del cultivo celular o microorganismos. Un sistema de control de acidez consta de: Dos subsistemas mecnicos servo controlados

1. Sistema Dispensador de cido: que consta de:

Dispensador asptico de cido (HCl); Filtro microporo en lnea; Manguera flexible resistente al cido; Bomba peristltica;

1. Sistema Dispensador de lcali: que consta de:

Dispensador asptico de lcali (NaOH); Filtro microporo en lnea; Manguera flexible resistente al lcali; Bomba peristltica;

Un sistema de control formado por:

Controlador de pH: ordena y regula la accin del motor que controla a las bombas peristlticas que suministran el cido y el lcali.

Un sistema de medicin: formado por:

Sensor de pH: sonda o probeta electroqumica que mide la acidez y dice al controlador de pH, la situacin del medio. pH ptimo: toda clula y microorganismo poseen un rango de acidez (pH) dentro del cual, es posible su crecimiento con normalidad; dentro de ese rango, existe un pH ptimo en el cual el crecimiento es mximo y muy bien definido.

Al crecer los microorganismos en ambientes naturales, su rango de pH se acerca a los valores del hbitat en que se desarrolla; el rango normal de acidez en que pueden sobrevivir la mayora de los microorganismos es 2,0 pH 10,0. La mayora de los hbitats tienen valores de pH de 5,9 por lo que, los microorganismos que viven en esos hbitats tienen un pH ptimo equivalente (5,9). Algunos rangos de pH ptimo son: para levaduras entre 3,5 y 5,5; para bacterias entre 6,0 y 7,5; para mohos, segn la cepa, se extiende entre 3 y 7; para clulas en cultivo entre 6,0 y 7,5. La forma exacta de la curva de acidez es muy variada y depende del metabolismo propio de cada microorganismo o clula por lo que, no se ha formulado un modelo general y simple para representarla.

Sistema de Control de Temperatura

Mantiene estable y dentro de un rango ptimo requerido por el cultivo para su mximo crecimiento, la temperatura interna del sistema.

Un sistema de control de temperatura consta de: Dos sistemas de intercambio trmico:

Intercambiador de Calor: dispositivo de intercambio trmico que genera calor o absorbe el calor excedente. El intercambiador de calor de caso y tubos es el ms usado y se define por su rea de transferencia de calor; a mayor rea de transferencia de calor, mayor capacidad de absorber calor. Serpentn: medio fsico por el cual el calor es absorbido o transmitido al fluido. El tubo del serpentn debe ser de acero inoxidable 304 o 316 (preferiblemente) y se recomienda que sea delgado para una mejor transferencia de calor.

Un sistema de control:

Controlador de Temperatura: sistema que ordena y regula la accin del motor que controla las servo vlvulas que regulan el flujo de lquido fro o caliente.

Un sistema de medicin:

Sensor de temperatura: sonda (termocopla) que mide la temperatura.

Un servo control:

Servo Controlador de Temperatura: controla la temperatura a la que debe abrir o cerrar la vlvula solenoide.

Un sistema regulador de paso de flujo:

Vlvula Solenoide: servo mecanismo actuador que regula el flujo (paso) de lquido por la tubera o lnea de paso (abre o cierra el flujo del lquido)

Un sistema de conduccin de fluido:

Tuberas de Conduccin de Agua: el agua es fluido trmico por excelencia para la transferencia de calor por conduccin a travs de las paredes metlicas de la tubera. stas deben ser de acero inoxidable.

Nota: las tuberas deben anclarse al cuerpo del biorreactor mediante un puerto de entrada que es soporte hermtico que la sujeta a la superficie plana. Temperatura ptima: la temperatura es otro factor ambiental que influye y que afecta el crecimiento del cultivo microbiano y celular; poniendo el juego, la propia supervivencia de la clula o microorganismo. La temperatura afecta a las clulas y microorganismos cultivados de dos formas distintas:

1. Conforme aumenta la temperatura, aumenta tambin la velocidad de las reacciones

enzimticas y el crecimiento se hace ms rpido; 2. Por encima de un mximo temperatura, se produce la desnaturalizacin de las protenas celulares y la descomposicin de los componentes celulares esenciales para mantener la vida, causando la muerte de las clulas o microorganismos en cultivo. En este punto analizaremos nicamente el primer tem; ms adelante veremos el segundo. Para cada clula y microorganismo existe una temperatura mnima por debajo de la cual, no hay crecimiento; es decir se inhibe el crecimiento celular. Y una temperatura mxima por encima de la cul, la clula o microorganismo muere. Entre ese rango de temperaturas existe una temperatura ptima para la cual, el crecimiento es el ms rpido posible. Estas tres temperaturas son caractersticas de cada clula y microorganismo y pueden variar ligeramente con la composicin del medio de cultivo. Clasificacin de los microorganismos de acuerdo a sus temperaturas Tipo de microorganismo Psicrfilo Psicrtrofo Mesfilo Termfilo Temp. Mnima (C) -5 +5 -5 +5 5 - 15 40 - 45 Temp. ptima (C) 12 - 15 25 - 30 30 - 45 55 - 75 Temp. Mxima (C) 15 - 20 30 - 35 35 - 47 60 - 90

Determinacin de la Temperatura ptima de Crecimiento: se realiza desde el punto de vista cintico, aplicando la Ley de Arrhenius para el crecimiento y la muerte de clulas o microorganismos: dln (k)/dt = Ea/RT2; dln (k) = -(Ea/R)*d(1/T) Donde: k = mx (para el crecimiento), k = mx (para la muerte), T = temperatura absoluta, R = constante general de los gases ideales, Ea = energa de activacin del proceso: EC para el crecimiento, Em para la muerte; EC = 8 12.000 cal/g-mol K (crecimiento), Em = 50 100.000 cal/g-mol K (muerte). La realizacin de la curva de crecimiento EC en conjunto a la curva de muerte Em representada por su logaritmo ln (k) versus el inverso del tiempo 1/T conduce a la determinacin grfica de la temperatura ptima.

8.Diseo de un Biorreactor de Tanque Agitado

Componentes de Diseo de un Biorreactor de Tanque Agitado Para lograr el cumplimiento de objetivos descritos, un biorreactor de tipo tanque agitado o CSTR (ver figura), debe contar con los siguientes componentes bsicos en su diseo: figura

Cuerpo del Biorreactor: recipiente o contenedor que alberga al cultivo o microorganismo. El contenedor es la frontera fsica entre el ambiente externo contaminado y el ambiente interno controlado. Un tanque contenedor o cuerpo del biorreactor se debe construir en acero inoxidable austentico, por sus caractersticas qumicas y fsicas superiores; usualmente se prefiere los aceros de las series 316. Dimensionamiento del Cuerpo del Biorreactor: el primer paso en el diseo de cualquier biorreactor es dimensionar el tamao del tanque o del cuerpo del biorreactor; la prctica comn es, hacerlo a travs de variables adimensionales: variables que representan una razn entre dos parmetros con las mismas dimensiones. De esta forma, es posible escalar; es decir cambiar de dimensin o tamao, el biorreactor y adaptarlo a otra escala de proceso. Las principales relaciones adimensionales que se utilizan en tanques agitados son: la razn de la altura de trabajo (H) al dimetro del tanque (Dt): 3 H/Dt 1 en reactores tubulares (largos) esta relacin es de 4 - 6; la razn del dimetro del tanque (Dt) al dimetro de las hojas o aspas (Da): Da/dt cuando el rgimen de agitacin es laminar y las revoluciones del motor menores a 150 rpm, la relacin aumenta ; la razn entre el dimetro de la hoja (Da) y el dimetro del espacio libre o hueco entre el rotor y el cuerpo de la hoja (Dd): 2 Da/Dd 1 en turbinas axiales y hojas planas esta relacin aumenta de 2 4; la razn entre el ancho de la hoja o aspa (L) y el espesor o grosor de esta (W): 4 L/W 1 en turbinas axiales y hojas planas esta relacin se invierte L/W 1/16. En la figura aparece como gap (G) es el espacio libre que se deja cuando se utilizan baffles o dispositivos amortiguadores de la turbulencia; normalmente el valor de G es: 1/12 1/16 del valor de J donde J es el ancho del baffle o amortiguador; J por su parte se disea de acuerdo al dimetro del tanque (Dt) pero valor de diseo es el mismo que el del espacio libre: 1/12Dt J 1/16Dt. (Hs), no aparece en la figura, es la altura de techo o espacio libre que se deja entre la superficie libre del lquido (H) y el techo o tapa del biorreactor, para facilitar la operacin del sistema; el valor mnimo de la luz (Hs) es 10% de la altura total del tanque (Ht) y el valor mximo es 50% Ht que representa el valor mnimo de volumen de operacin . Finalmente, C es la altura de piso del agitador altura desde el fondo del tanque hasta el punto ms bajo de las aspas u hojas; C se dispone en base a la altura de la columna de fluido (H), normalmente: C/H . Sistema de Agitacin: tiene la funcin de generar la potencia necesaria para producir una mezcla perfecta para el sistema de cultivo y producir un rgimen de agitacin adecuado que, maximice la difusin de gases en el lquido y minimice la produccin de esfuerzos cortantes y la presin hidrodinmica local y global, para optimizar los fenmenos de transferencia de momentum, calor y masa.

Un sistema de agitacin consta de cuatro partes mecnicas: Motor Impulsor: suministra la potencia al eje de potencia; debe ser de corriente alterna (a.c), preferiblemente de induccin y su potencia debe calcularse para manejar el doble (200%) de la potencia terica requerida para agitar el fluido y el cultivo a Re3000. Motor de Induccin (A.C): dado que un biorreactor debe operar de forma continua durante todo el proceso de cultivo; se requiere un motor capaz de resistir largos periodos de operacin

continua y trabajo duro; por eso, el motor debe ser de induccin de corriente alterna (a.c) y debe ser acorazado, preferiblemente en acero inoxidable. Eje trasmisor de la potencia: es una barra cilndrica de acero inoxidable 316L y por lo general se disea en dimetros estndar: , , etctera para mayor facilidad de ajuste a los estndares de motores a.c. Su longitud depende de la profundidad del contenedor (tanque). Acople del Eje Transmisor: ajusta y fija al motor, el eje transmisor de potencia. Existen dos tipos de acople: Acople-adaptador de tipo taladro: el puerto de entrada se acopla al eje del motor por fijacin directa. El puerto de salida es un dispositivo que se adapta a varios dimetros de broca y sujeta o abraza firmemente el eje transmisor de potencia por presin y abrasin; similar al que utilizan los taladros mecnicos. Acople-ajustador de tipo tornillo-rosca: el puerto de entrada se enrosca o se fija firmemente al eje del motor. El puerto de salida es un dispositivo que abraza el eje transmisor de potencia por un mecanismo de tornillo-rosca. En ambos casos, el dimetro del puerto de entrada del acople que es la unin de ste con el eje del motor debe ser de dimetro interno igual al dimetro externo del eje del motor y el dimetro del puerto de salida que es dispositivo sujetador del eje transmisor de potencia debe ser el mismo que el dimetro externo del respectivo eje. Puerto de Entrada del Biorreactor: se denomina puerto a la superficie fsica sobre el cual se instala un dispositivo de entrada o salida al biorreactor, un anclaje o un aparato mecnico o de medicin; el puerto es el medio por el cual, se ajusta o fija, tal dispositivo o artefacto a la pared o superficie del tanque o del biorreactor. Como se observa en la fotografa, el puerto de entrada es la tapa o cara superior del tanque biorreactor y en donde se anclan o sujetan todos los dispositivos y perifricos que se requieren para su operacin. Cada dispositivo de anclaje o sujetador tambin un puerto menor cuyo dimetro externo es la superficie externa total y cuyo dimetro interno es el dimetro externo del dispositivo que sujeta. Algunos puertos tienen dos dimetros internos, cuando el dispositivo que sujetan tiene dimetro externo y dimetro interno; por ejemplo, los sensores o probetas medidores y el sello mecnico del eje del agitador. Sello Mecnico: su funcin es triple: evitar la contaminacin, mantener hermtico el sistema, servir de amortiguador de friccin. El sello mecnico tambin debe permitir la esterilizacin in situ del biorreactor, mediante una lnea de vapor sobrecalentado. Un sello mecnico, generalmente se disea en una de dos configuraciones: Cartucho rgido: que permite el rodamiento del eje de potencia a travs de soporte de cuerpo rgido que sella y asla el paso de cualquier materia al interior del depsito.

Cartucho flexible: que permite el rodamiento del eje de potencia a travs de un soporte fijo al exterior pero flexible en el interior y que tambin sella y asla el paso de contaminantes al interior del depsito. En ambos caso el sello mecnico se especifica de acuerdo al dimetro eterno del eje transmisor de potencia; el cual es el dimetro interno del puerto del sello mecnico. Dentro de lo posible se recomienda el uso de sellos flexibles ya que amortiguan mejor las vibraciones mecnicas del eje transmisor de potencia; la desventaja es que esa flexibilidad obliga a cambiarlos ms frecuente, pues el desgaste es mayor. Eje Transmisor de Potencia: transmite la potencia del motor al impulsor, a travs de, las hojas de agitacin. Existen ejes en los cuales ya vienen incorporadas hojas o aspas de agitacin, se disean para operar en uno de dos sistemas de flujo, segn sea, la orientacin espacial de las hojas o aletas: Flujo axial: suministran mayor efectividad de mezclado (distribucin) y reducen la potencia de mezclado requerida, al distribuir mejor la mezcla; sus hojas u aspas son planas. Flujo radial: generan mayor potencia de mezclado (turbulencia) y pueden causar dao celular; sus hojas o aspas son del tipo hlice. Impulsores: son los dispositivos que impulsan el fluido y el movimiento, mediante hojas o aspas unidas al eje transmisor de potencia; pueden ser del tipo mecnico (agitador) o hidrulico (turbina). Agitadores: es un impulsor formado por hojas o aspas de agitacin conectadas al eje transmisor de potencia; pueden tener una distribucin de flujo axial o radial. Los propulsores de flujo radial pueden tener gran variedad de formas y diseos; dentro de stos, las hlices son las que ms se utilizan. Hlices: existen en tres diseos bsicos que dependen de la orientacin espacial: (a) Plano XY, (b) Plano ZX, (c) Plano ZY. Cada orientacin (plano) describe una superficie curva que es determinada por dos (2) de tres (3) ngulos de diseo: (a) Plano XY, determina el ngulo de inclinacin (), este vara 15 45; (b) Plano ZX, determina el ngulo de torsin (), este vara 16 32;

(c) Plano ZY, determina el ngulo de tensin (), este vara 15 45. Como se observa en la figura: (a) Hlices de superficie curva en el Plano XY estn determinadas por los ngulos , ; (b) Hlices de superficie curva en el Plano ZX estn determinadas por los ngulos , ; (c) Hlices de superficie curva en el Plano ZY estn determinadas por los ngulos , . Por su gran potencia y la turbulencia que generan, las hlices no se recomiendan para cultivos de clulas sensibles; solo deben utilizarse para cultivos bacteriales o micticos y a bajas velocidades de rotacin. Turbinas: es un impulsor de flujo axial el cual opera como una centrfuga que distribuye el flujo de lquido a travs de hojas planas, a todo el volumen de fluido. El impulso axial ha demostrado ser la forma ms eficiente de diseo para reducir esfuerzos cortantes e hidrodinmicos y disminuir la turbulencia y la potencia requerida para homogenizar el mezclado; objetivo que se persigue en una mezcla perfecta. Por eso se recomienda impulsores de flujo axial para cultivar clulas sensibles o de membrana plasmtica. Dentro de stas, la turbina Rushton (b) es el impulsor de flujo axial ms recomendado y ms eficiente para generar una mezcla perfecta de alto perfil hidrodinmico, bajo en esfuerzos cortantes y alto en distribucin. Y una de control: Control de Velocidad del Motor: los motores de induccin de corriente alterna (a.c) tienen velocidades nominales de rotacin de 1800rpm o 3600rpm. Estas velocidades son muy altas para los sistemas biolgicos causando la destruccin de las clulas y microorganismos en cultivo. La velocidad de rotacin del motor debe entonces reducirse a un mximo de 600rpm (revoluciones por minuto) para que no cause dao celular. Usualmente se acopla a la salida de eje del rotor una caja de reduccin de 1/3 o 1/6 para bajar la velocidad de rotacin a 600rpm. Adicionalmente se coloca un control de velocidad que puede ser analgico o digital al motor para un control ms fino y preciso de la velocidad de rotacin. Agitacin y Mezclado Relaciones de Potencia y Mezclado: conforme el dimetro de la hoja o aspa (Dd) aumenta, tambin lo hace, la potencia (Pt) requerida para realizar el trabajo de mezclado; la potencia de mezclado (Pm) es mayor porque el torque () se acrecienta, recuerde que el torque es la relacin entre la fuerza (F) y el brazo de palanca (r) y que, el brazo de palanca es el dimetro del aspa u hoja cuyo momentum (mv) aumenta al aumentar la velocidad de rotacin (). As entonces, cuando Dd es muy grande, debe disminuirse para reducir Pt; pero esto ocasiona que Pm tambin se contraiga; as como la turbulencia excesiva. Caso contrario ocurre cuando Dd es muy pequeo, debe aumentarse para mejorar Pm y

extender la turbulencia, ya que, en estos casos, es localizada (se acumula alrededor de las aspas y hojas). Este fenmeno local que se conoce como potencia fluida (Pf) provoca que el volumen de lquido que es afectado por la turbulencia local (Rex) no sea suficiente para oxigenar los tejidos y clulas en cultivo pues el Kla disminuye. Para que la Pf se transmita a todo el volumen de operacin del fluido, es necesario que, se alcance el estado estacionario (EE) en dicha operacin, y esto toma mucho tiempo lo que implica, un alto costo. La mejor forma de combinar positivamente estos efectos hidrodinmicos que se contraponen; es decir: bajar Pm y aumentar Pf es optimizar Dd. A esto se le conoce como potencia ptima de mezclado (Pe) y se logra de dos maneras:

Colocar varias hojas o paletas (2-3) en dimetros (Dd) descendentes y distribuidas a alturas equidistantes a lo largo de la altura de la columna de fluido (H); Colocar varias hojas o paletas (2-3) de igual dimetro (Dd) a alturas equidistantes a lo largo de la altura de la columna de fluido (H).

La primera alternativa minimiza la potencia de mezclado requerida y maximiza la potencia fluida al aprovechar mejor el gradiente de mezcla. La segunda aumenta la potencia de mezclado y la potencia fluida pero tambin, la potencia requerida y desaprovecha el gradiente de mezcla y difusin. Utilizacin de Bafles: son una mejora muy utilizada ya que pueden instalarse fcilmente en los sistemas de agitacin, disminuyen (deflectan) la turbulencia ocasionada por las hojas o aspas del impulsor, rompen (disgregan) los cmulos celulares y micelios que se forman en los respectivos cultivos y mejoran la eficiencia de mezclado. La relacin ptima del dimetro del bafle (Db o J) al dimetro de tanque (Dt) es: Db/Dt = 1/101/12. El nmero indicado de bafles es 4 para sistemas moderadamente agitados y 6 para sistemas turbulentos. CONCLUSIONES: La aplicacin de procesos biotecnolgicos ha logrado gran importancia en el sector industrial y en procesos de biorremediacin. Existen sistemas patentados de tratamientos que utilizan material biolgico para la recuperacin, por ejemplo, de aguas. El punto inicial para el desarrollo de procesos biotecnolgicos son los fenmenos biolgicos explotables. A diferencia de lo que ocurre con equipos para procesos de transferencia de masa o de calor, no existe una metodologa para el diseo de equipos, dentro de los cuales se desarrolle una reaccin o conversin bioqumica, debido principalmente a que el diseo del biorreactor estar regido por el sistema de reaccin especfico y el tipo de microorganismos que se emplee.

 Para disear un reactor biolgico se debe considerar el efecto del flujo, el tiempo de residencia, el pH, la temperatura, la biomasa, la concentracin de nutrientes y la velocidad de agitacin, etc. con el fin de obtener un rendimiento ptimo. BIBLIOGRAFIA:
Ingenieria de la Cintica Quimica J.M. Smith Elementos de ingeniera de las reacciones qumicas H. Scott Fogler http://es.wikipedia.org/wiki/Biorreactor