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Biorreactores

Prof. Antonio Monzn


amonzon@unizar.es

Cintica de Crecimiento Microbiano

Introduccin.
Estequiometra, Rendimientos, Velocidad de Reaccin
Tipos de Modelos Cinticos. Aproximaciones
Crecimiento estacionario y no-estacionario
Modelo de Monod. Linealizaciones.
Modelos con Inhibicin:
Por sustrato
Por producto

Tipos de Clulas
Procaryota

Eucaryota
3

Clulas Eucariotas
Estructura de una clula
vegetal tpica

Estructura de una clula


animal tpica

Crecimiento celular
Condiciones ambientales:
pH, humedad, temperatura, salinidad
Carbono
(nutriente limitante)

Clula
Fuente de
Energa
(donor de e-)

Nutrientes

Clula

Aceptor de e(O2 en aerobio)


(NO3-, NO2-, SO42- en anaerobio)

Subproductos
Metablicos
(productos, CO2, H2O)

Crecimiento celular
Consumo de sustratos (energa y materia prima) para sntesis de clulas y
de productos de metabolismo
El entorno debe tener todos los elementos necesarios para la formacin
de clulas

La DG de los sustratos consumidos debe ser superior que la DG de las


clulas y productos formados (DG<0)
Los elementos que constituyen los nutrientes deben ser compatibles con
el medio enzimtico de las clulas
Obedece las leyes de conservacin de materia y energa
La cantidad de productos formados (metabolitos) , y el calor generado,
son proporcionales a la cantidad consumida de sustrato, o de alguno de
los productos
6

Crecimiento celular
S
(comida)
(sustrato)

X
Proceso
autocataltico

Para:

X +
(clulas)
(microorg.)

P
(producto)

- Eliminar S: depuracin de agua


- Producir P: antibiticos
- Producir X: produccin de SCP
- Primera etapa fermentacin

Tipos de reactores:
Biorreactor
Fermentador
Quimiostato

Veneno !!!
(mximo 12% vol.)

A veces sucede que:


Hidratos de carbono
(mosto, cereales, patatas, frutas)

bichos

(bichos) + alcohol

Crecimiento celular
Conservacin de materia Estequiometra
Fuente de C + Fuente de N + O2 + minerales + nutrientes especficos
Masa celular + Productos + CO2 + H2O
Ej. Crecimiento aerobio del Saccharomyces Cerevisiae:

C6 H12O6 aO2 bNH 3 cCH xOy N z dCO2 eH 2O

Composicin elemental de los microorganismos


Ejemplo. Determinacin de los coeficientes estequiomtricos para el crecimiento
aerobio del Saccharomyces Cerevisiae sobre glucosa:

C6 H12O6 aO2 bNH 3 cCH xOy N z dCO2 eH 2O


Frmula emprica del Saccharomyces Cerevisiae sobre glucosa:
Balance de Carbono:
Balance de Hidrgeno:
Balance de Oxgeno:
Balance de Nitrgeno:

6=c+d
12+3b=1,703c+2e
6+2a=0,459c+2d+e
b=0,171c

CH1,70 N0,17O0, 46

Dato adicional: Coeficiente respiratorio


(RQ): mol CO2/mol O2
RQ = 1,033 = d/a

Solucin:
a=3,942 ; b=0,33 ; c=1,928; d=4,072; e=4,854

C6 H12O6 3,942O2 0,33NH 3 1,928CH1,703O0, 459N0,171 4,072CO2 4,854H 2O


9

Composicin elemental de los microorganismos


Microorganismo

Nutriente limitante Frmula emprica

Aerobacter aerogenes

CH 1,78 N 0,24 O 0,33

Klebisella aerogenes

Glicerol

CH 1,74 N 0,22 O 0,43

Cndida utilis

Glucosa

CH 1,84 N 0,20 O 0,55

Cndida utilis

Etanol

CH 1,84 N 0,20 O 0,55

Saccharomyces cerevisiae

Glucosa

CH 1,70 N 0,17 O 0,46

10

Composicin elemental de los microorganismos


Ejemplos de composicin elemental

11

Definiciones de Rendimiento
Smbolo
YX/S

Definicin

g de biomasa seca/g de substrato consumido


Tasa de crecimiento molar:
g de biomasa seca/mol de sustrato consumido

YX/O

g de biomasa seca/g mol de oxgeno consumido

YP/S

g mol de producto/g mol de sustrato consumido

YC/S

mol de CO2/mol de substrato consumido

12

Definiciones de Rendimiento

13

Velocidad de Reaccin y Rendimientos


Velocidad de Crecimiento Celular y Velocidad Especfica de Crecimiento:

dX
1 dX
rX
m

dt
X dt

rX (g/l.s)

m (s-1)

Rendimientos:
X (g/l)
S (g/l)

P (g/l)

YX S

rX
DX
r
DX

; YX O X
(rS )
DS
(rO )
DO

YP S

r
DP
r
DP
P
; YP X P
(rS )
DS
rX DX

YC S

r
DC
C
(rS )
DS

rC (g/l.s)
-rO (g/l.s)

-rS (g/l.s)
rP (g/l.s)

Relacin entre las velocidades de reaccin:


(rS )

r
rX
r
P C (rS ) YS X rX YS P rP YS C rC
YX S YP S YC S
14

Rendimientos Bacterianos con diversas


fuentes de carbono
Sustrato

Y X/S

Y X/O

YD

Malato

0,34

1,02

0,3

Acetato

0,36

0,7

0,21

Glucosa (melazas, almidn)

0,51

1,47

0,42

Metanol

0,4

0,44

0,12

Etanol

0,68

0,61

0,18

Isoporpanol

0,43

0,23

0,074

Parafinas

1,03

0,5

0,16

Metanol

0,62

0,2

0,061

15

Rendimientos Bacterianos con diversas


fuentes de carbono

16

Rendimientos Bacterianos con diversas


fuentes de carbono
Ejemplo. Rendimientos en la produccin de cido actico

17

Rendimiento Entlpico
Rendimiento entlpico: YD (g de clulas /kJ generado)

YD

YX

DH S YX S DH C

YX S (1 YD DH C ) YD DH S

DHS : Entalpa de combustin del sustrato: kJ/g sustrato


DHC : Entalpa de combustin del material celular : kJ/g clulas
DHG : Entalpa de reaccin del sustrato para dar X, CO2 y H2O: kJ/g sustrato
Balance de calor para un crecimiento aerobio:

DHS = YX/S.DHC + DHG


(Calor generado por g de sustrato oxidado) =
(Calor de combustin de las clulas producidas a partir del sustrato) +
(Calor generado por g de sustrato consumido en la fermentacin que produce clulas, CO2 y H2O)
18

Ciclo Entlpico
Crecimiento celular
Respiracin

CO2 H 2O clulas

(kJ/g clulas)

YD

DHC (kJ/g clulas)

HS (kJ/g sustrato)

Sustrato O2 CO2 H 2O
1

YX

DH S DH C
S

g sustrato

kJ

g
clulas
g
sustrato

YX S
YD
(DH S Y X S DH C )

YD
DH S

YX

DH G

YX

YD
YD

YX S DH C DH G YX S DH C

19

Factores clave en la Interaccin Clula-Medio Ambiente


Condiciones medioambientales

Poblacin celular

Multicomponente

Nutrientes

Multicomponente

Reacciones en solucin

Sustratos

Heterogeneidad de cada clula


individual

Equilibrio cido-base

Productos

pH y temperatura variable
Cambio de las propiedades
reolgicas
Multifsico (gas, lquido)
Distribucin espacial no uniforme

Calor

Reacciones mltiples
Mecanismos internos de control
Adaptabilidad

Interacciones
mecnicas

Aleatorio
Variabilidad gentica

20

Crecimiento Celular, Consumo de Sustratos


y Obtencin de Productos
Consideraciones sobre la evolucin de la poblacin celular:
1.Cada clula individual es un sistema multicomponente con una distribucin interna no
homognea, incluso a nivel de clula individual.
2.El nmero de reacciones individuales que tienen lugar en la clula es muy elevado. Tambin lo
es el de mecanismos internos de control de la propia clula.
3.La clula tiene capacidad de adaptarse a cambios en la composicin del medio ambiente. A lo
largo del cultivo pueden ocurrir mutaciones que provoquen algn cambio en las caractersticas
genticas de la clula. En clulas modificadas genticamente se puede producir inestabilidad, de
forma que la informacin gentica introducida se puede perder a lo largo del tiempo.
4.Cada clula individual evoluciona dentro de su ciclo de crecimiento, de forma que en el medio se
encontrarn clulas con distintas edades, algunas acabadas de nacer, otras en proceso de
divisin y otras al final de su ciclo celular.

5.A lo largo de las distintas fases del ciclo celular, las clulas varan su actividad metablica.
Adems, en microorganismos no unicelulares, como los que desarrollan los micelios, la
morfologa y tamao de los mismos vara sustancialmente a lo largo del crecimiento.

21

Crecimiento Celular, Consumo de Sustratos


y Obtencin de Productos
Nomenclatura:

Sistema estructurado: Est formado por mltiples compartimentos distintos y


todos intervienen en el crecimiento.

Sistema segregado: Est formado por un conjunto de clulas con


caractersticas individuales, distintas en cada una de ellas.

Crecimiento Balanceado: Todo el proceso de crecimiento celular se define


en funcin de un componente individual, el cual controla su velocidad. Se tienen
diferentes clulas, pero cada una es tratada como un todo, i.e. todas crecen por
igual.

Clula Promedio: Considera que todas las clulas de una poblacin son
iguales y se comportan de la misma forma.

22

Crecimiento Celular, Consumo de Sustratos


y Obtencin de Productos
Consideraciones sobre los modelos cinticos:

Un modelo cintico de crecimiento que intente contemplar todos los aspectos


recogidos en el esquema anterior es imposible de formular.

Su aplicacin sera poco prctica dada la gran cantidad de informacin que se


requerira conocer previamente (e.g. elevado nmero de parmetros
cinticos).

La solucin habitual implica efectuar una serie de suposiciones que permitan


simplificar el problema, pero que al mismo tiempo permitan obtener una
representacin til de la cintica de crecimiento de una poblacin celular.

En funcin del grado de aproximacin adoptado se obtendrn modelos ms


complejos o ms simples
23

No estructurado
(un componente)

Estructurado
(varios componentes)

CASO IDEAL
La poblacin celular
se trata como un
nico componente
en solucin

Crecimiento
Balanceado

Considera los
multicomponentes
de una clula
promedio

Promedio
celular

Promedio
celular

Segregado
(clulas diferentes)

No segregado
(clula promedio)

Aproximaciones a la Cintica Microbiana

Considera los
componentes
simples de las
diferentes clulas

Crecimiento
Balanceado

CASO REAL
Considera los
multicomponentes
de las diferentes
clulas
24

Crecimiento Celular, Consumo de Sustratos


y Obtencin de Productos
CASO REAL
Sistema segregado y estructurado
(Muy complejo de describir)

SIMPLIFICACIN MS UTILIZADA
Sistema NO-segregado y NO-estructurado
(Tratamiento ms simple)

25

Fases del Crecimiento Celular Discontinuo

J. Monod. The Growth of Bacterial Cultures, Annual Review of Microbiology; Vol. 3, p.p. 371-394 (1949).

Fases del Crecimiento Celular Discontinuo

Fases del Crecimiento Celular Discontinuo


3

muerte
estacionaria

X
2

crecimiento exponencial

Al agotarse los nutrientes disminuye la velocidad


de crecimiento y comienzan a morir las clulas

tiempo
Latencia o induccin

Fases del Crecimiento Celular Discontinuo


Fase de latencia. Caractersticas:
1) Es el tiempo que necesitan los microorganismos para adaptarse al nuevo
medio (generar nuevas enzimas,).

2) Velocidad de crecimiento despreciable (X X0).


3) Depende de la edad de los microorganismos. Puede haber una edad
ptima, y normalmente los ms jvenes se adaptan ms rpidamente.

4) Se reduce realizando el crecimiento previo en un ambiente anlogo.


5) Se recomienda usar como siembra entre el 5-10% de la biomasa en
contenida en el fermentador.
6) Puede haber varios periodos de induccin, si se van utilizando
sucesivamente diferentes sustratos (crecimiento diuxico).
29

Fases del Crecimiento Celular Discontinuo


Fase de Crecimiento Exponencial. Ley de Malthus (1798)
dX
m m X ; X X 0 t tlag
dt
mm : velocidad especfica de crecimiento celular, min-1
mm y tlag = f (microorganismos, S)

Evolucin Biomasa-tiempo:

X
m m (t tlag ) X X 0 expm m (t tlag ) ; t tlag
ln
X0
Tiempo de duplicacin celular, t2:

t2

X crece exponencialmente con el tiempo

ln(2)

mm

t2: tiempo necesario para duplicar la concentracin celular


30

Fases del Crecimiento Celular Discontinuo


Fase de Crecimiento Exponencial.
Valores tpicos del tiempo de duplicacin
Tipo de organismo

td (h)

Bacterias

0,3 2,0

Levaduras

1,0 4,0

Hongos filamentosos

2,0 4,0

Microalgas

18 35

Clulas animales (in vitro)

20 - 40

31

Fases del Crecimiento Celular Discontinuo


Fase de Crecimiento Exponencial.
Ln(m)

log (X)

mm

Ley de Malthus
No predice la fase estacionaria!!!!
Tiempo
Tiempo

latencia

32

Fases de Crecimiento Exponencial y Estacionaria


Cambio condiciones ambientales
a) Se acaba el sustrato

XF

alta S0

XF

media S0

XF

baja S0

XF = f(S0)
La concentracin final de clulas, XF , depende de la
concentracin inicial de sustrato, S0

tiempo

33

Fases de Crecimiento Exponencial y Estacionaria


Velocidad de consumo de nutrientes (S) y Ley Malthus:

dS

k S X

dt

X X 0 exp( m m t )

dS
k S X 0 exp( m m t )
dt
k : constante cintica de desaparicin

de S, (g S/g X.min)

Evolucin de la concentracin de sustrato con el tiempo:

S S0

kS X 0

mm

exp(m m t ) 1

tlag t t final

Al agotarse el sustrato, S=0, se llega a la concentracin mxima de biomasa (X):

X F X 0 S0

mm
kS

X X 0 (S0 S )

Tiempo para agotar el sustrato, tfinal:

t final

S0 mm

ln1
mm kS X 0
1

mm
kS

YX S

mm
kS

34

Fases de Crecimiento Exponencial y Estacionaria


Dependencia de la poblacin mxima, XF , respecto de la concentracin inicial de
nutriente limitante, S0
XF

X F X 0 S0

XF

mm
kS

XF

35

Fases de Crecimiento Exponencial y Estacionaria


Cambio condiciones ambientales
b) Se acumulan materiales txicos (o se acaba el espacio disponible)

XF

alta S0
media S0
baja S0

XFf(S0)
La concentracin de clulas final es independiente
de la concentracin inicial de sustrato

tiempo

36

Fase de Crecimiento Estacionario

Poblacin mxima (final)

XF

El factor limitante de crecimiento depender de la concentracin


inicial de sustrato

Factor limitante: productos txicos


Controla el veneno

XFf(S0)

XF=f(S0)

Concentracin inicial de nutrientes

S0

37

Crecimiento Diaxico
80
Densidad bacteriana

El crecimiento diaxico se produce cuando se


observan diferentes periodos de latencia,
debido a que en el medio hay diferentes
sustratos que son consumidos a diferente
velocidad por los microorganismos.

Crecimiento diaxico
de Escherichia Coli

60

Cuando uno de los sustratos es consumido


totalmente, tras un periodo de latencia, los
microorganismos consumen el segundo
sustrato.

40

20

4
6
Tiempo, h

Utilizacin de glucosa

Utilizacin de xilosa

38

Crecimiento Diaxico

39
J. Monod. The Growth of Bacterial Cultures, Annual Review of Microbiology; Vol. 3, p.p. 371-394 (1949).

Modelos de Crecimiento Microbiano


Ley de Malthus (1789)

X X 0 exp( m m t )
X X0

l0 F
X0

X F X 0 S0

X
XF

rX

dX
m m X m m X 0 exp( m m t )
dt

2,6

0,9

2,4

mm

0,8

2,2

kS

0,7

Thomas Malthus (1766-1834)

2
1,8

0,6

1,6

0,5

1,4
1,2

0,4

0,3

0,8

0,2

X0=
k=
l 0=
XF=

0,1

0,6

5
0,015
35
180

0,4
0,2

0
0

50

100

150

200

Tiempo

250

300

rX

Modelos de Crecimiento Celular


Modelo de Malthus (adimensional)
Variables adimensionales: biomasa (), tiempo ()
X X0
X X

X X 0 (1 l0 )
1 F
XF X0
XF X0

l0

XF X0
X0

X F X 0 (1 l0 )

m mt
Relacin Biomasa-Tiempo:
exp( ) 1

l0
ln(1 l0 )

X 1 l0 1 exp( )

XF
1 l0
1 l0

Velocidad de reaccin:
d 1 l0 exp( )
r

d
l0
l0

41

Modelos de Crecimiento Celular


Modelo de Malthus (adimensional)

l 0 0=
l 0 1=
l 0 2=
l 0 3=
l 0 4=
l 0 5=

0,9

0,8
0,7

80
60
45
33,75
25,3125
18,984375

exp( ) 1

l0

0,6
0,5

l0

0,4
0,3
0,2
0,1
0
0

0,5

1,5

2,5

42

Modelos de Crecimiento Celular


Modelo de Malthus (adimensional)

l 0 0=
l 0 1=
l 0 2=
l 0 3=
l 0 4=
l 0 5=

0,9
0,8
0,7

80
60
45
33,75
25,3125
18,984375

exp( )

l0

0,6
0,5

l0

0,4
0,3
0,2
0,1
0
0

0,5

1,5

2,5

43

Modelos de Crecimiento Celular


Ley de Verhulst (1844); Pearl & Reed (1920).

El crecimiento celular est limitado por la acumulacin de toxina


La produccin de toxina es proporcional al crecimiento celular
Ct : Concentracin de toxina;
Pierre-Francois Verhulst
Ct,max : Concentracin de toxina letal o mxima
(1804-1849)

Velocidad de reaccin, rX:


dX
rX
k ' X (Ct ,max Ct )
dt
dCt
dX

dt
dt
Balance de materia a la toxina:

Ct ( X X 0 )
Ct ,max

dX
k X ( X F X ) k X ( X F X ) ; k k '

( X F X 0 )
dt

Modelos de Crecimiento Celular


Modelo Logstico de Verhulst
Velocidad de reaccin, rX:
dX
rX
k X (X F X )
dt
Relacin Biomasa-Tiempo:
XF
X
1 l0 exp(k X F t )

l X
1
ln 0
k XF XF X

Nmero de rplicas del inculo inicial:


XF X0

X0

l0
1

90

X
0,9
XF

80

(rX)max

0,8
0,7

70
60

0,6

Coordenadas de rX,max:

rX max k

2
F

X
4

X
X max F
2
ln(l0 )
t max
k XF

0,5

X0=
k=
l 0=
XF=
k*XF=
Xmax=
rXmax=
tmax=
X/XF_max=

(X/XF)max

0,4

0,3
0,2
0,1

4
50
0,012
40
40
164
1,968
30
82
80,688
1,8744306220
0,5
10

tmax

0
0

0
3

Tiempo

rX

Modelos de Crecimiento Celular


Modelo Logstico de Verhulst (adimensional)
Variables adimensionales: biomasa (), tiempo (), l0:
X X0
X X

X X 0 (1 l0 )
1 F
XF X0
XF X0

l0

XF X0
X0

X F X 0 (1 l0 )

k X 0t
Relacin Biomasa-Tiempo:
1 exp (1 l0 )

1 l0 exp (1 l0 )

X 1 l0
1

XF
1 l0
1 l0 exp (1 l0 )

1 l0
1

ln
1 l0 1

Velocidad de reaccin:
(1 l0 ) 2 exp (1 l0 )
d
r
(1 l0 ) (1 )
d
1 l0 exp (1 l0 ) 2

max

l 1
0
; r
2l0

max

(1 l0 ) 2
ln(l0 )

; max
4l0
1 l0

46

Modelos de Crecimiento Celular


Modelo Logstico de Verhulst (adimensional)

1
l 0 0=
l 0 1=
l 0 2=
l 0 3=
l 0 4=
l 0 5=

0,9

max

l 1
0
2l0

r max

(1 l0 ) 2

4l0

max

ln(l0 )
1 l0

0,8
0,7

50
25
12,5
6,25
3,125
1,5625

l0

0,6
0,5
0,4
0,3
0,2

0,1

1 exp (1 l0 )
1 l0 exp (1 l0 )

0
0

X X0
l0 F
X0

0,5

1,5

47

Modelos de Crecimiento Celular


Modelo Logstico de Verhulst (adimensional)

l 0 0=
l 0 1=
l 0 2=
l 0 3=
l 0 4=
l 0 5=

0,9

max

l 1
0
2l0

r max

(1 l0 ) 2

4l0

max

ln(l0 )
1 l0

0,8
0,7

50
25
12,5
6,25
3,125
1,5625

0,6
0,5
0,4

l0

0,3
0,2

0,1

1 exp (1 l0 )
1 l0 exp (1 l0 )

0
0

X X0
l0 F
X0

0,1

0,2

0,3

0,4

0,5

48

Modelos de Crecimiento Celular


Modelo Logstico de Verhulst (adimensional)

14

12

max
r max

l0 1
2l0

(1 l0 ) 2

4l0

max

ln(l0 )
1 l0

l 0 0=
l 0 1=
l 0 2=
l 0 3=
l 0 4=
l 0 5=

l0

10

(1 l0 ) 2 exp (1 l0 )
r
1 l0 exp (1 l0 ) 2

l0

XF X0
X0

50
25
12,5
6,25
3,125
1,5625

0
0

r (1 l0 ) (1 )

0,5

1,5

49

Modelos de Crecimiento Celular


Modelo Logstico de Verhulst (adimensional)

14
l 0 0=
l 0 1=
l 0 2=
l 0 3=
l 0 4=
l 0 5=

12

max
r max

l0 1
2l0

(1 l0 ) 2

4l0

max

ln(l0 )
1 l0

10

50
25
12,5
6,25
3,125
1,5625

l0

l0

XF X0
X0

0
0

r (1 l0 ) (1 )

0,1

0,2

0,3

0,4

0,5

(1 l0 ) 2 exp (1 l0 )
r
1 l0 exp (1 l0 ) 2

50

Modelos de Crecimiento Celular


Modelo Logstico de Verhulst (adimensional)

14

l 0 0=
l 0 1=
l 0 2=
l 0 3=
l 0 4=
l 0 5=

12

max
r max

l0 1
2l0

(1 l0 ) 2

4l0

max

ln(l0 )
1 l0

10

50
25
12,5
6,25
3,125
1,5625

l0

l0

XF X0
X0

0
0

r (1 l0 ) (1 )

0,2

0,4

0,6

0,8

51

Modelos de Crecimiento Celular


Modelo Logstico Generalizado

d
(1 l0 ) a (1 )b
d

a=2
b=1

0,9

a=2
b=2

0,8

0,7
0,6

a=1
b=1

a=1,6
b=0,9

0,5

a=1
b=2

0,4
0,3
0,2

l0=10

0,1

0
0

0,1

0,2

0,3

0,4

0,5

52

Modelos de Crecimiento Celular


Modelo Logstico Generalizado

r
r

d
(1 l0 ) a (1 )b
d

20

a=2
b=1

18

l0=10

16
14
12

a=1,6
b=0,9

10

rX 11
rX 12
rX 21
rX 22
rX ab

a=2
b=2

a=1
b=1

a=1
b=2

2
0
0

0,1

0,2

0,3

0,4

0,5

53

Modelos de Crecimiento Celular


Modelo Logstico Generalizado

r
r

d
(1 l0 ) a (1 ) b
d

20

l0=10

a=2
b=1

18
16
14
12
10

a=1,6
b=0,9

a=2
b=2

a=1
b=1

a=1
b=2

2
0
0

0,1

0,2

0,3

0,4

0,5

0,6

0,7

0,8

0,9

54

Modelos de Crecimiento Celular


Modelo de Gompertz (1825):

X
X X F 0
XF
X
rX max k F
e
X
X max F
e
1 X
t max ln ln F
k X0
X X0
l0 F
X0

l1 1 l0

XF
X0

exp( k t )

X
rX k X ln F
X
X
XF

0,9

(rX)max

0,8

0,8

Benjamin Gompertz
1779 1865

0,7

(X/XF)max

0,9

0,7

0,6

0,6

0,5

0,5

0,4

0,4

0,3

0,3

0,2

0,2

0,1

0,1

tmax

0
0

100

0
200

300

Tiempo

400

500

rX

Modelos de Crecimiento Celular


Modelo de Gompertz (adimensional)
Variables adimensionales: biomasa (), tiempo ()

X X0
XF X0

l0

XF X0
X0

X X 0 (1 l0 )

X F X 0 (1 l0 )

XF X
XF X0

l1 1 l0

XF
X0

k t
Relacin Biomasa-Tiempo:

(l1 )1exp( ) 1

l0

X 1 l0
1

XF
l1
(l1 ) exp( )

ln(1 l1 )
ln(l1 ) ln(1 l0 )

Velocidad de reaccin:

d 1 l0 l1 ln(l1 ) l1 exp( )
ln

r

d l0 1 l0
l0 (l1 ) exp( )
l
l e
max 1
; r max 1 ; max ln(ln(l1 ))
e l0
e l0

56

Modelos de Crecimiento Celular


Modelo de Gompertz (adimensional)

1
0,9

l e
max 1
e l0
l
r 1
e l0
max ln(ln(l1 ))
max

0,8
0,7

l0

0,6

0,5

(l1 )1exp( ) 1

l0

0,4
0,3

l 0 0=
l 0 1=
l 0 2=
l 0 3=
l 0 4=
l 0 5=

0,2
0,1

X X0
l0 F
X0

l1 1 l0

XF
X0

0
0

100
50
25
12,5
6,25
3,125

57

Modelos de Crecimiento Celular


Modelo de Gompertz (adimensional)

0,5

l 0 0=
l 0 1=
l 0 2=
l 0 3=
l 0 4=
l 0 5=

0,45

l e
max 1
e l0
l
r 1
e l0
max ln(ln( l1 ))
max

0,4
0,35

100
50
25
12,5
6,25
3,125

ln(l1 ) l1 exp( )
r
l0 (l1 ) exp( )

0,3
0,25
0,2

l0

0,15
0,1
0,05

X X0
l0 F
X0

l1 1 l0

XF
X0

0
0

58

Modelos de Crecimiento Celular


Modelo de Gompertz (adimensional)

0,5

l 0 0=
l 0 1=
l 0 2=
l 0 3=
l 0 4=
l 0 5=

0,45

l e
max 1
e l0
l
r 1
e l0
max ln(ln( l1 ))
max

0,4
0,35

100
50
25
12,5
6,25
3,125

0,3

l0

0,25
0,2
0,15
0,1
0,05

X X0
l0 F
X0

l1 1 l0

XF
X0

0
0

0,2

0,4

0,6

0,8

59

Modelos de Crecimiento Celular


Modelo de Gompertz Generalizado
a

l1
d 1 l0

ln

d l0
1 l0

a=1
b=1

0,9

0,8

a=1
b=2
a=2
b=2

0,7

a=1,8
b=1,2

0,6
0,5

a=2
b=1

0,4
0,3
0,2

l0=10

0,1
0
0

10

60

Modelos de Crecimiento Celular


Modelo de Gompertz Generalizado
a

l1
d 1 l0

ln

d l0
1 l0

0,6

a=1
b=2

l0=10

0,5

a=1
b=1

0,4

0,3

a=2
b=1

a=1,8
b=1,2
0,2

a=2
b=2

0,1

0
0

10

61

Modelos de Crecimiento Celular


Modelo de Gompertz Generalizado
a

l1
d 1 l0

ln

d l0
1 l0

0,6

a=1
b=2

l0=10

0,5

a=1
b=1

0,4

0,3

a=2
b=1

a=1,8
b=1,2

0,2

a=2
b=2

0,1

0
0

0,2

0,4

0,6

0,8

62

Fase de Muerte Celular


Velocidad de muerte celular:
dX d
kd X
dt
Velocidad neta de crecimiento
cuando hay muerte celular:

14

X
Xd 12
XT

Xd: microorganismos muertos


X: microorganismos vivos
XT: microorganismos totales

10

dX
mm X ( X F X ) kd X
dt

dX
m m X ( X F* X )
dt
k
X F* X F d

mm

Velocidad de crecimiento de la
biomasa total:

XT

Xd

0
0

10

15

20

25

30

tiempo

XT X X d
dX T d ( X X d )

mm X
dt
dt

63

Modelos de Crecimiento Celular


Modelo de Monod (1942):
Sustrato (S) + Clulas (X) mas Clulas (X) + Producto (P)

dX m m X S
rX

dt
KS S

Jacques L. Monod
1910-1976

mm S
rX
1 dX
m

X X dt K S S
rX : velocidad de crecimiento celular
m : velocidad especfica de crecimiento celular
mm: velocidad especfica mxima de crecimiento celular
KS: constante de Monod

J. Monod, Recherches sur la croissanece des cultures bacteriennes , Ed. Hermann & Cie., Paris, 1942.
J. Monod. The Growth of Bacterial Cultures, Annual Review of Microbiology; Vol. 3, p.p. 371-394 (1949).

Modelo de Monod
J. Monod.
Recherches sur la
croissance des cultures
bactriennes .
PhD thses, Paris, 1941.
Ed. Herman, Paris,
France, 1942.

Modelo de Monod
Evolucin de la rX y m en funcin de la concentracin de sustrato

0,6

4,0
3,5

rX

0,5
3,0
0,4
2,5
X 0 = 0,04

0,3

2,0

y X/S = 0,95
S 0 = 10

m m = 0,6

0,2

1,5

K S = 0,35

mm S
rX
m
X KS S

0,1

1,0
0,5

0,0
0

10

66

Modelo de Monod
Evolucin de la concentracin de biomasa y sustrato en un cultivo discontinuo

X
S
rX

11
10

9
8
7
6

rX

4
X 0 = 0,04

y X/S = 0,95
S 0 = 10

m m = 0,6
K S = 0,35

1
0
0

rX

dX m m X S

dt
KS S

10

11

12

tiempo
67

Modelo de Monod
Caractersticas de la ecuacin de Monod

0,6

S K S m m m
0,5

m
0,4

0,6

0,5

0,4

m = mm/2

0,3

0,3

0,2

0,2

0,1

m S
r
m X m
X KS S

0,1

0,1

0,2

0,3

KS

0,4

0,5

0,6

0,7

0,8

0,9

0
0

S 0 m

mm
KS

10

68

Modelo de Monod
Linelizaciones de la ecuacin de Monod
250

1/m

200

mm

KS 1

mm S

1/m

150

pte.
100

o.o.

KS

mm

mm

50

Lineweaver-Burk
0
0

0.2

0.4

0.6

0.8

1.2

1/S

1/S

69

Modelo de Monod
Linelizaciones de la ecuacin de Monod
1800

S/m

1600

1400

KS

mm

mm

S/m

1200

pte.

1000

mm

800
600
400

o.o.

200

KS

Hanes

mm

0
0

200

400

600

800

1000

1200

1400

1600

SS
Eadie-Hofstee: m m m K S

m
S

Pendiente: -KS
Ord. origen: mm

70

Modelo de Monod
2.4

mm=2,24

mm

2.0

1.6

1.2

0.8

KS=
mm=
mm=
mm=
mm=
mm=
mm=
mm=
mm=
mm=
mm=

mm=0,95

0.4

0.3
0.950
1.045
1.150
1.264
1.391
1.530
1.683
1.851
2.036
2.240

0.0
0

71

Modelo de Monod
m

1.2

KS=0,20
1.0

0.8

0.6

KS=2,979

0.4

mm=
KS=
KS=
KS=
KS=
KS=
KS=
KS=
KS=
KS=
KS=

KS

0.2

1.100
0.200
0.270
0.365
0.492
0.664
0.897
1.211
1.634
2.206
2.979

0.0
0

72

Modelo de Monod
Velocidad especfica de crecimiento de Escherichia Coli

Crecimiento en
glucosa

KS=0,22 mol/l
mm=1,3 gener./h

Crecimiento en
triptofano

KS=1,1 ng/ml
mm=0,8 gener./h

73

Modelo de Monod
Constate de Monod para crecimiento celular microbiano en diferentes azucares

74

Modelo de Monod
Constante de Monod para distintos microorganismos

75

Modelo de Monod
Constate de Monod y mmax para distintos microorganismos

76

Modelo de Monod
Constante de Monod para distintos microorganismos

77

Modelo de Monod
Ejemplo.

Determinar los parmetros de la ecuacin de Monod a partir de


los datos originales de la Tesis Doctoral de J. Monod.

Croissance de Escherichia coli avec le lactose comme substrat limitant.

t est le temps exprime en heures.


x est la biomasse dans les units de DO de Monod.
1 unit de DO = 0,75 mg de biomasse sche par litre.
s est la concentration en lactose exprime en mg/l.

78

Modelo de Monod
Ejemplo.

Determinar los parmetros de la ecuacin de Monod a partir de


los datos originales de la Tesis Doctoral de J. Monod.

Solucin. Mtodo integral de anlisis de datos (Mtodo de Euler).

rX

DX m m X S

Dt
KS S
X F Xi
Si
YX S

X i 1 X i (rX ) i Dt X i

(rX ) i

F .O.

m m X i Si
K S Si

exp X calc

X exp

mi

m m X i Si
K S Si

Dt

m m Si
K S Si

exp S calc

S exp

79

Modelo de Monod
Ejemplo.

Determinar los parmetros de la ecuacin de Monod a partir de


los datos originales de la Tesis Doctoral de J. Monod.
tiempo
0
0,54
0,9
1,23
1,58
1,95
2,33
2,7

X
15,5
23
30
38,8
48,5
58,3
61,3
62,5

S
151
123
105
75
43
14
3,5
0,5

rX
12,1123384
17,4083867
22,0655913
26,4938675
27,9098794
19,0254206
6,83744398
1,11262473

time
0
0,54
0,9
1,23
1,58
1,95
2,33
2,7

X calc
15,5
23,5078686
30,7514243
38,8673726
48,6104771
57,8527545
61,7459708
62,1996496

S calc
151
125,126334
101,722186
75,4993117
44,0190458
14,1569676
1,57786799
0,11201812

rX calc
12,1123384
17,8441707
22,4785532
26,5839509
28,214169
19,0148009
3,32861823
0,2518885

m
0,78144119
0,75688638
0,73551971
0,68283164
0,57546143
0,32633655
0,11154068
0,017802

m calc
0,78144119
0,75907225
0,730976
0,68396573
0,58041333
0,32867581
0,05390827
0,00404968

80

Modelo de Monod
Ejemplo.

Determinar los parmetros de la ecuacin de Monod a partir de


los datos originales de la Tesis doctoral de J. Monod.

160

70

S 140

60

0,9

30

m 0,8

rX
25

0,7

120

50

0,6

100
40

0,5

30

0,4

80

20
15

60

0,3

20

40

10

0,2
5

10

20
0

0,1

0
0

0,5

1,5

2,5

0
0

50

Tiempo (h)

100

150

Sustrato (mg/L)

m m=

valor
0,911

error estndar % variacin


0,033
3,6%

Int. Conf.
0,077

Lim. Inf.
0,834

Lim. Sup.
0,989

KS =

25,10

3,86

15,4%

0,33

24,76

25,43

y X/S =

0,309

0,005

1,5%

0,032

0,277

0,342

Efectos Ambientales sobre el Crecimiento Celular

Temperatura de operacin
pH
Salinidad
Oxgeno
Presin

Fuera de las condiciones ptimas, la adaptacin (compensacin celular)


puede reducir la velocidad de crecimiento y, por tanto, el rendimiento.

Extremfilos:
Organismos que pueden tolerar, o quizs requerir, condiciones extremas
para vivir y desarrollarse (pH, T, P,...).

82

Efecto de la Temperatura
m m Am exp Ea RT

k d Ad exp Ed RT

Ea 10-20 kcal/mol
Ed 60-80 kcal/mol

La velocidad de muerte celular es ms


sensible a la temperatura que la de
crecimiento celular

83

Efecto de la Temperatura
Cintica de muerte celular por efecto de la temperatura
dX
kd X
dt
X X 0 exp k d t

(rd )

X
k d t
ln
X0
E
k d k d 0 exp d
RT

kd

84

Efecto de la Temperatura
Ejemplo. Cintica de muerte celular por efecto de la temperatura

Efecto de la Temperatura
Ejemplo. Cintica de muerte celular por efecto de la temperatura

86

Efecto de la Temperatura
Ejemplo. Cintica de muerte celular por efecto de la temperatura

kd

Ed/R

87

Efecto de la Temperatura
Ejemplo. Cintica de muerte celular por efecto de la temperatura

88

Efecto de la Temperatura

89

Efecto de la Temperatura
Efecto de la temperatura en el crecimiento de Escherichia Coli
Problema: El punto ptimo de temperatura est muy cerca del punto de muerte

td

ln 2

m m Am exp Ea RT

k d Ad exp Ed RT

Ea 10-20 kcal/mol
Ed 60-80 kcal/mol

La velocidad de muerte celular es


ms sensible a la Temperatura
que la de crecimiento celular
90

Efecto de la Temperatura
Clasificacin de los microorganismos segn su
temperatura ptima de operacin
40 a 70 C
70 a 100 C

90 a 115 C

10 a 45 C

15 a 18 C

91

Efecto de la Temperatura
Clasificacin de los microorganismos segn su temperatura ptima

Efecto de la Temperatura
Clasificacin de los microorganismos segn su temperatura
ptima de operacin
Temperatura (C)

Grupo

Mnima

ptima

Mxima

Termfilos

40 a 45

55 a 75

60 a 80

Mesfilos

10 a 15

30 a 45

35 a 47

Obligados

-5 a 5

15 a 18

19 a 22

Facultativos

-5 a 5

25 a 30

30 a 35

Psicrfilos

93

Efecto de la Temperatura
mm

A exp E g RT

1 B exp DGd RT

Klebsiella pneumoniae

m m A exp Ea RT

Escherichia coli

94

Efecto del pH
Clasificacin de los
microorganismos segn
su tolerancia al pH

95

Efecto del pH
m

m m ( pH )

mm
[ H ] K a2
1

K a1 [ H ]

Efecto del pH en el crecimiento celular (Sinclair & Kristiansen, 1987)

96

Efecto del pH
m

Efecto del pH en el crecimiento del Methylococcus capsulatus

97

mm

Efecto del pH

mm=0,3 h-1
Ka1=0,004
Ka2=2,0.10-8

mm

0,35

Aspergillus oryzae

mm

m m ( pH )
1

[ H ] K a2

K a1 [ H ]

0,3

0,25

0,2
0,15
0,1
0,05

98

0
0

pH

10

Efecto del pH
X
Saccharomyces Cerevisae

Efecto del pH en el crecimiento de Saccharomyces Cerevisae


99

Efecto del pH
td

td

ln 2

Escherichia Coli

Al aumentar la temperatura aumenta


el pH para la mxima velocidad de
crecimiento disminuye td

Efecto del pH en el crecimiento de Escherichia Coli


100

Efecto de la Salinidad
Clasificacin de los
microorganismos segn
su tolerancia a la
Salinidad

NaCl
101

Efecto del Oxgeno


Clasificacin de los
microorganismos segn su
respuesta al oxgeno
a. Aerbicos
b. Anaerbicos
c. Facultativos
d. Microaerbicos
e. Aerotolerantes

102

Efecto de la Presin
Clasificacin de los
microorganismos
segn su tolerancia
a la presin

103

Estratificacin en sistemas Naturales

104

Efecto de vertidos de aguas


residuales en sistemas acuticos
Aumenta el nmero de bacterias hetertrofas

Disminuyen los niveles de O2 despus del vertido


de materia orgnica
Aumenta NH4+ y despus aumenta NO3- proceso
de nitrificacin en dos etapas
El aumento en el n de algas y cianobacterias es
una respuesta a los nutrientes, especialmente PO43 Los niveles de O2 regresan a sus valores iniciales
una vez que se han agotado los compuestos
orgnicos e inorgnicos oxidables

105

Otros Modelos Cinticos


Ecuacin de Monod:

m mm

S
KS S

Otros Modelos Empricos

S
KS

Ecuacin de Tessier:

m m m 1 exp

Ecuacin de Moser:

Sn
m mm
KS S n

Ecuacin de Contois:

m mm

S
B X S

KS B X

106

Modelos Cinticos con Inhibicin por Sustrato


S

Ecuacin de Andrews y Noack:

m mm

Ecuacin de Webb:

S 1
K
iS
m mm
S2
KS S
K iS

Ecuacin de Aiba y cols.:

m m m

Ecuacin de Tessier:

S
m m m
K iS

Ecuacin de Tseng y Wymann:

m m m

S2
KS S
K iS

S
S
exp
KS S
KS

S
exp

KS

S
K iS ( S SC )
K

S
S

107

Otros Modelos Cinticos


dm
p
k m m m
dS

Modelo de Konak (1974):


Ec. de primer orden (p=0):

m mm S

Ec. de Tessier (p=1):

S
m m m 1 exp
KS

Ec. de Webb (p=3/2):

S 1
K
iS
m mm
S2
KS S
K iS

Ec. de Monod (p=2):

m mm

Ec. de Andrews y Noack (p=3/2, =0):

S
KS S

m mm

mm k

KS

KS

KS

1
k mm

1
k

K iS
1

; 1
4
k mm

S
S2
KS S
K iS
108

Modelos cinticos con sustratos mltiples


Modelos sin inhibicin competitiva entre sustratos:
Modelos aditivos

m m S1
1

K S1 S1

mm S2
2

K S2 S 2

m
i 1

m m Si
i

K Si S i

Modelos multiplicativos

n
S1

S
2
m m m Si
m mm

K S S1 K S S 2
i 1 K S i S i
2
1

The methanotrophs are aerobic bacteria


that oxidize methane as an energy source
and carbon source through the enzyme
methane monooxygenase (MMO).
Methane-oxidizing bacteria
(Methylosinus trichosporium OB3b)
S1: methane
S2: oxygen
109

Modelos cinticos con sustratos mltiples


Modelos con inhibicin competitiva entre sustratos.
Modelos de crecimiento diaxico
m m S1
mm S2
m

K S S1 S 2 K S S1
S
2

m m S1
1

K S1 S1

mm S2
2

S12
K S2 S 2
K iS1

110

Modelos Cinticos con Inhibicin por Producto

S
(1 k P)
KS S

Ecuacin de Dagley y Hinshelwood:

m mm

Ecuacin de Holzber y cols.:

m mm k1 ( P k2 )

Ecuacin de Ghose y Tyagy:

m mm 1

Ecuacin de Aiba y Shoda:

m mm

Ecuacin de Jerusalimsky y Neronova:

m mm

Modelo de Han Levenspiel:

m m m 1 *
P

P
Pmax

S
exp( k P)
K

S
S

S Kip


K S S Kip P

KS S

Pmx=P*= concentracin letal (mxima)

111

Modelo de Han y Levenspiel


Se utiliza cuando hay inhibicin y es una generalizacin del Modelo de Monod

m kobs
KS S
obs

kobs

Ci
m m 1 *
Ci

K Sobs

n=0

kobs
n<1

Ci
K S 1 *
Ci

n=1
n>1

Ci sustrato o producto, dependiendo cual ses el inhibidor


Ci* concentracin lmite mximo
P*
n, m determinan el tipo de inhibicin. Si son cero, no hay inhibicin

P
112

Modelo de Han y Levenspiel


Grficos de Lineweaver-Burk

n > 0 y m=0

a
Inhibicin no competitiva

K Sobs 1
1

m kobs m m S
1

n=0ym<0

b
Inhibicin competitiva

n>m>0

c
Inhibicin generalizada
(anticompetitiva)

113

Modelo de Han y Levenspiel


Grficos de Lineweaver-Burk

K Sobs 1
1

m kobs m m S
1

n= m>0

m>n>0

Inhibicin generalizada
(anti-competitiva)

Inhibicin anticompetitiva

n>0ym<0

f
Caso general

114

Cinticas de consumo de sustrato y formacin de producto


X
S
P

m=rX/X

Tipo I

Tipo II

u=rP/X

Tipo III

u=rP/X

u=rP/X

s=rS/X
s=rS/X

s=rS/X

m=rX/X

m=rX/X

Sistemas Tipo I: Productos asociados al crecimiento: La formacin del producto es funcin del
consumo de sustrato y proporcional al mismo. DG<0. Ej. Fermentacin alcohlica

u qP

1 dP rP
m
X dt X

=YP X

Sistemas Tipo II: Productos parcialmente asociados al crecimiento: La formacin del producto
depende slo indirectamente del consumo de sustrato. DG<0. Ej. Produccin de cido ctrico

u qP m +

Sistemas Tipo III: Productos no-asociados al crecimiento: La formacin del producto no depende
del consumo de sustrato. DG>0. Ej. Produccin de metabolitos secundarios (penicilina y otros
antibiticos)

u qP

( m=0)

Cinticas de consumo de sustrato y formacin de producto


Cintica de formacin de Producto
Ecuacin de Luedeking y Piret:

rP rX X m X X X ( m )
: coeficiente asociado al crecimiento celular
: coeficiente de mantenimiento, asociado a la masa celular

rP rX

Sistemas de Tipo I, = 0

YP X

Cintica de Consumo de Sustrato

1
rS '
YX S

m X mS X rP
'

Y
X S

asociado al
crecimiento

asociado al
mantenimiento
de las clulas

Consumo de sustrato para


formacin de producto
116

Cinticas de consumo de sustrato y formacin de producto


Estequiometra
Rendimientos verdaderos o tericos
X , rSX
d1S r
g1 biomasa ...
P , rSP
d 2 S r
p2 producto ...

d 3 S mantenimiento
rSm

Rendimientos Globales (experimentales)


X , rP , rS
d S r

g1 biomasa p2 producto ....

YX'

d d1

YX S YX'

d d2

YP S YP' S

YX' S

rX
g
1
rSX d1

YP' S

rP
p
2
rSP d 2

rX
g
1
(rS ) d

YP S

rP
p
2
(rS ) d

YX

Rendimiento terico mximo de clulas producidas por unidad de


sustrato consumido si se ignora el consumo de energa de las clulas
117

Cinticas de consumo de sustrato y formacin de producto


Si no hay consumo de sustrato por formacin de producto

(rS )

rX
mS X
'
YX S

Ecuacin de Pirt (1965):

(rS )
mS
1
'
rX
YX S m

YX
Y

mS

YX

1
YX

1
Y

'
X S

YX' S YX
Y

'
X S

YX

'
X S

1
Y

'
X S

mS

m mS Y X S

m mS Y X S

si mS = 0

YX' S YX

rX

(rS )
118

Resumen de Cinticas de Crecimiento Celular


Cintica de produccin celular:
m

dX m m X S
P
k d X
rX

1
dt
K S S Pmax
Cintica de consumo de sustrato:
rX
rP
(rS ) ' mS X '
YX S
YP S
Cintica de formacin de producto:
dP
rP
rX X ( m ) X
dt
Cintica de consumo de oxgeno (proceso aerbico):

1
(rO2 ) ' m X mO X
YX O

119

Resumen de Cinticas de Crecimiento Celular


Coeficiente de mantenimiento para distintos microorganismos usando glucosa.

120

Resumen de Cinticas de Crecimiento Celular


Microorganismo

Sustrato

(h -1 )

Acetobacterium woodii

Lactato

0,07

Anaerbico

Aerobacter aerogenes

Citrato

0,06

0,05

Aerobacter aerogenes

Glucosa

0,05

0,05

Aerobacter aerogenes

Glicerol

0,08

0,11

Saccharomyces cerevisiae

Glucosa

0,02

0,02

Escherichia coli

Glucosa

0,05

0,02

Penicilium chrysogenum

Glucosa

0,02

0,02

m 0 (h -1 )

121