Laboratorio de Análisis Instrumental 01 (2022) 1-2

Químico
Laboratorio de Análisis Instrumental Farmacéutico
Biólogo

Cuantificación de ácido linoleico en leche materna por RMN-¹H

Aguilar, Ingrid.; Angulo, Johana.; Arguelles, Valeria.; Gutierrez, Humberto.

*Laboratorio de Docencia 1, Facultad de Química, Universidad Autónoma de Yucatán. Fecha: 08/03/2022

1. Introducción 3 de 3
La resonancia magnética nuclear (RMN) permite
dilucidar la estructura de moléculas, especialmente
moléculas orgánicas, basándose en las propiedad
magnéticas de los núcleos, que se comportan como
imanes al tener un momento magnético intrínseco.¹
Los núcleos con números impares de p+ o n, como
átomos de 1H, son magnéticamente más activos y de
carga positiva, estos, en presencia de un campo
magnético, se orientan en la misma dirección que el
campo (spin α), mientras que los negativos en dirección
opuesta (spin β).2
Cuando una muestra con compuestos orgánicos es
irradiada por un pulso de radiación, los núcleos spin α se
promueven al β, cuando regresan a su estado inicial,
emiten señales dependientes de la diferencia de energía
entre ambos spines, dicha señal es detectada por el
espectrómetro RMN, registrándose como el espectro
RMN.2
La leche materna es el principal alimento durante los
primeros 6 meses de vida, el ácido linoleico está
constituido por 18 átomos de carbono y 2 dobles enlaces,
tiene isómeros geométricos y posicionales (ác. linoleico
conjugado), que, en junto con otros ácidos grasos
esenciales, constituye el 10% de las grasas de la leche
materna, su contenido depende de diversos factores
como el régimen alimenticio o edad de la madre.3
2. Materiales y métodos 7 de 7
Cafeína
Probeta de 25 mL
Probeta de 50 mL
Embudo de separación
Matraz balón de 100 mL
Pinza keck
Pipeta pasteur con bulbo
Tubo de resonancia magnética
Anillo de hierro
Soporte universal
Micropipeta de 1-10 o de 2-20 µL
Pizeta
-Metodología/procedimiento-
Se midieron 5 mL de la muestra y se extrajo con 30 mL
de CHCl₃-MeOH 3:1 lo cual se filtro a gravedad.
Después se efectuó la extravasación líquido-líquido
recuperando la fase orgánica,esto se trasvasó a un
matraz balón (previamente pesado) y se evaporó el
disolvente en un evaporador rotatorio, seguidamente se
esperó a que esté a temperatura ambiente el matraz y se
peso el extracto seco. Se adiciono en el matraz 0.5 mL de
CDCl₃ y se homogeneizó, después con la ayuda de una
pipeta pasteur y un filtro de papel libre de pelusas se
preparó el extracto para analizarlo por RMN, de la
siguiente manera: se transfirió la muestra disuelta a un
tubo de resonancia, se le agrego 3 mg de cafeína al
extracto del tubo de resonancia, se selló y etiquetó la
tapa del tubo de resonancia con los siguientes datos:
LAI-S3-EQ6.

-Materiales- 3. Resultados y discusión 2.5 de 7

Equipo de resonancia magnética nuclear de protón de
400 MHz, con sonda dual Los resultados que se obtuvieron a través de la
Evaporador rotatorio elaboración de la RMN-1 se muestran en la imagen 1,
Balanza analitica donde se puede apreciar la presencia del protón vinílico
Muestra de leche materna del patrón interno, la cafeína, el cual cuenta con un valor
Solución CHCl ₃-MeOH 3:1 de integral de 100.
Solución CDCl₃
1
 Laboratorio de Análisis Instrumental 01 (2022) 1-2

Con eso calculado se sustituyeron los datos de la fórmula

1, dando como resultado:

mg de ácido linoleico =
moles∗1889.05∗1
(1.4933 x 10−5 )(280.44 g/mol)(1000)
2∗100
= 39.55 mg de ácido linoleico

El resultado obtenido no se puede comparar con otros

datos o literaturas en el estado en el que se obtuvo. Para
corregir eso se decidió obtener el porcentaje de ácido
linoleico contenido en la muestra. Utilizando la fórmula:

Fórmula 3:
Imagen 1. Espectro de la RMN obtenido de la muestra
P peso de ácido linoleico
de leche materna. % de ácido linoleico= ∗100
P peso de la muestra analizada
A partir de este patrón interno se fue realizando la
Para el cálculo del peso de la muestra se tomó el peso del
cuantificación de las demás señales leídas por el equipo.
matraz balón sin muestra (59.5 g) y se comparó con su
Con base a esta se obtuvo el resultado de la integral de la
peso conteniendo la muestra (60.9 g) obteniendo el peso
señal obtenida del metileno contenido en el ácido
de la muestra de 1.4 g.
linoléico, esta fue de 1,889.05. Esta señal se puede ubicar
Al sustituir los valores con los datos obtenidos en la
del lado derecho del gráfico entre los valores de 2.7-2.9
práctica y cálculos previos se obtuvo el siguiente
ppm.
resultado:
Más a la izquierda se logran identificar las señales de los
otros ácidos grasos correspondientes de la leche materna.
Para obtener los mg de ácido linoléico de la muestra se P 39.55mg
% de ácidolinoleico= ∗100=2.825 %
utilizó la fórmula: P 1400mg

Fórmula 1: Con estos datos obtenidos con la fórmula 3 (2.825%) es

n PI∗I x∗p I posible mencionar que el contenido de ácido linoleico en
mg de ácido linoleico = ( )( PM x )(1000) la muestra fue muy por debajo al indicado como valor
px I PI
normal en un estudio realizado Durán y Masson en Chile
Donde: (18.9%)5 . Esto puede ser tanto por causa de una dieta
nPi = número de moles del patrón interno con baja ingesta de alimentos ricos en ácidos grasos
Ix = integral del ácido linoleico esenciales para el desarrollo de la leche materna, como
IPI = integral del patrón interno (cafeína) por algún error en la preparación de la muestra, se notó
pI = numero de protones del patrón interno (cafeína) que la leche materna no era completamente homogénea y
px = numero de protones de x (grupo metilo del ácido esto pudo modificar los valores al tomar una porción con
linoleico) bajos ácidos grasos.
PMx = Peso molecular del ácido linoleico
4. Conclusiones 5 de 5
Para la obtención del número de moles del patrón
interno se realizó un cálculo, utilizando la fórmula:
Los resultados arrojados por la prueba de RMN-¹H en
conjunto con la utilización de fórmulas denotaron un
Fórmula 2:
porcentaje de ácido linoleico (2.825%) bastante
gramos pesados deficiente en comparación con los estándares
nPi =
PM del compuesto establecidos por diversos estudios. Se recomienda revisar
el estado nutricional de la paciente para encontrar
Sustituyendo los datos solicitados la ecuación y su correlación entre este porcentaje y sus hábitos
resultado quedaron de la siguiente forma: alimenticios, así como interpretar las señales totales
obtenidas de los demás ácidos grasos en la muestra como
0.0029 g forma de complementar los resultados.
nPi = = 1.4933 x 10-5 moles de cafeína
194.2 g/mol

5. Referencias 3 de 3
2
 Laboratorio de Análisis Instrumental 01 (2022) 1-2

1. Laurella, S. Resonancia magnética nuclear: Una

herramienta para la elucidación de estructuras
moleculares. Editorial de la Universidad de La
Plata: Argentina, 2016.
2. Universidad Veracruzana (UV). Tema 10.
Espectroscopia de resonancia magnética nuclear
[En línea].
https://www.uv.es/jcastell/Espectroscopia.pdf
(Consultado Febrero 2022).
3. Guerra, H. Determinación de ácido linoleico
conjugado en leche materna. Trabajo de fin de
grado. Universidad Nacional de Colombia,
Bogotá, 2010.
4. Durán, S.; Masson, L. Aporte de ácidos grasos
trans, ácido linoleico conjugado y ácido
docosahexaenoico, en la grasa de la leche
materna de nodrizas chilenas. Rev. Chil Nutr.
[En linea] 2010, 37, 9-17.
https://www.scielo.cl/scielo.php?
script=sci_arttext&pid=S0717-
75182010000100001#:~:text=El
%20%C3%A1cido%20graso%20de
%20mayor,internacionales%20(21%2C33)
(Consultado Marzo, 2022)