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Micropropagacion Laboratorio Educacional PDF
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FUNDAMENTOS BIOLÓGICOS
¿POR QUÉ ENSEÑAR LAS TÉCNICAS DE MICROPROPAGACIÓN?
EN EL LABORATORIO DE ENSEÑANZA
LOS EXPERIMENTOS
Cultivo in vitro de plantas enteras
Cultivo in vitro de órganos aislados
Cultivo in vitro de callos
Cultivo in vitro de células aisladas
LOS PROCEDIMIENTOS
LOS OBJETIVOS POSIBLES
PRIMER OBJETIVO: ESTABELECER UN CULTIVO ASÉPTICO
La obtención de explantes
Desinfección de la superficie del explante
Sembrado e incubación
SEGUNDO OBJETIVO: REGENERAR UNA PLANTA
Multiplicación
Preparación de las plántulas para la transferencia a tierra
Aclimatación
¿VALE LA PENA?
BIBLIOGRAFÍA BÁSICA
FUNDAMENTOS BIOLÓGICOS
EN EL LABORATORIO DE ENSEÑANZA
LOS EXPERIMENTOS
LOS PROCEDIMIENTOS
Salvo que se tenga una buena práctica microbiológica, hay que evitar el flameado
por el mechero de Bunsen (el alcohol es inflamable) sustituyendo la desinfección
de los instrumentos por la inmersión en alcohol o agua sanitaria (lavandina, o agua
jano, según su denominación en distintos países).
Antes de iniciar los procedimientos, recogerse el cabello además de quitarse relojes
o anillos. Una buena organización del lugar de trabajo es determinante para el
éxito de las actividades.
Durante los procedimientos, usar guantes descartables sobre los cuales
eventualmente se pasará alcohol y una máscara quirúrgica y, fundamentalmente
no hablar ni pasar los brazos sobre los explantes o por encima de los frascos
abiertos que contienen medio. Evitar también abrir y cerrar las puertas y la
circulación de personas en el laboratorio.
Todo el material contaminado será esterilizado y posteriormente, eliminado.
Incubación
Limpiar cuidadosamente con agua y jabón el material elegido (hojas, tallos, raíces,
etc.) dando preferencia a las partes jóvenes y saludables.
Sumergir el material retirado de la planta madre en etanol 70º, durante uno a dos
minutos, antes de desinfectarlo con un agente químico como el hipoclorito de sodio
(NaClO con 0,5-1% de principio activo) en solución, a la que se agregará una gota
de detergente.
La concentración de la solución de hipoclorito y el tiempo necesario para la
desinfección varía con el tipo de explante. La función del detergente es disminuir
la tensión superficial, favoreciendo el contacto entre el explante y el desinfectante.
La agitación suave y continua durante el proceso cumple la misma función.
El hipoclorito de sodio será eliminado mediante tres lavados con agua destilada
estéril (Guía 90: Micropropagación- La desinfección de los explantes). A
continuación, puede ser necesaria una disección en condiciones asépticas para
eliminar las partes dañadas de los explantes.
Incubación
Una vez dominada la técnica para el establecimiento de cultivos asépticos, los tres
próximos pasos para regenerar una planta son la multiplicación de los propágulos,
la preparación de las plántulas para la transferencia a tierra y la aclimatación.
Multiplicación
Aclimatación
¿VALE LA PENA?
Por supuesto
BIBLIOGRAFIA BÁSICA
DODDS J.H E ROBERTS L.W. Experiments in Plant Tissue Culture. Cambridge, Cambridge
University Press, 1995.
FAO – FOOD AND AGRICULTURAL ORGANIZATION / IAEA -INTERNATIONAL ATOMIC
ENERGY AGENCY –Low cost options for tissue culture technology in developing countries,
2004. 68653-142828-1-PB.pdf
HOME TISSUE CULTURE GROUP. http://www.hometissueculture.org
KYTE L. E KLEYN J. Plants from test tubes – 3th edition. Portland, Timber Press Inc., 2009.
MANTELL S.H., MATTHEWS J.A. E McKEE R.A. Princípios de biotecnologia em plantas.
Ribeirão Preto, Sociedade Brasileira de Genética, 1994.
PIERIK R.L.M. Cultivo in vitro de las plantas superiores. Madrid, Ediciones Mundi-Prensa,
1990.
RAVEN, et al. Biologia Vegetal. Rio de Janeiro, Editora Guanabara Koogan, 2001.
SMITH R.A. Plant Tissue Culture Studies. Reston, National Association of Biology Teachers,
1997.
TORRES A.C. ET AL. Cultura de Tecidos e Transformação Genética de Plantas. Vol.1.
Brasília, EMBRAPA-CNPH, 1998.
AGRADECIMIENTOS