CROMATOGRAFIA

La palabra cromatografia significa grafica de colores y fue diseñada por Michael

tswett en el 1903. Tswett llevo a cabo una extraccion de un mezcla de pigmentos de hojas

verdes y luego paso este extracto a traves de un tubo de vidrio empacado con carbonato de

calcio ; de esta forma logro separar los pigmentos presentes en las hojas.

Actualmente cromatografia es el nombre que se le da a un grupo de tecnicas

utilizadas en la determinacion de la identidad de sustancias, en la separacion de componentes

de las mezclas y en la purificacion de compuestos . esta tecnica es muy efectiva y por lo

tanto se utiliza tanto a nivel de investigacion como a nivel industrial.

Este metodo puede variar en tecnica ,pero siempre se basa en el mismo principio:

todos los sistemas de cromatografia contienen una fase estacionaria y una fase movil.

La fase estacionaria puede ser un solido o un liquido que se queda fijo en la misma

posicion. La fase movil puede ser un liquido o un gas que corre a traves de una superficie y

de la fase estacionaria. Las sustancias que estan en un Sistema de cromatografia

interaccionan tanto con la fase estacionaria como con la fase movil. La naturaleza de estas

interacciones depende de las propiedades de las sustancias asi como tambien de la

composicion de la fase estacionaria. La rapidez con que viaja una sustancia a traves del

Sistema de cromatografia depende directamente de la interaccion relativa entre las

sustancias y las fases movil y estacionaria. En el caso de una mezcla ,si cada componente

interacciona diferente con la fase movil y la fase estacionaria ,cada uno de ellos se movera

diferente .
APLICACIÓN DE LA CROMATOGRAFIA

La aplicación de la cromatografía es muy amplia, puede ser utilizada en todas las ramas de la

ciencia, a menudo, los científicos necesitan separar los componentes de una mezcla para

identificarlos y determinar aquel o aquellos responsables del aroma, del color y del sabor de

los frutos, de las propiedades medicinales o tóxicas de una planta, de los compuestos

específicos que ayudan a la clasificación de una especie o bien, los que funcionan como señales

químicas en las interacciones entre los diferentes organismos.

Es por ello, que aunque la palabra cromatografía se utilice hace más de 110 años, los avances

científicos y tecnológicos nos presentan una innovación continua de equipos de cromatografía

de gases (GC) y de líquidos (HPLC), con el acoplamiento de técnicas como la espectrometría

de masas que permite la identificación de compuestos a concentraciones muy pequeñas

con una alta eficiencia y rapidez.

CROMATOGRAFIA DE GASES

Concepto

Nacida en los años cincuenta, ha experimentado un desarrollo espectacular y actualmente

tiene una enorme importancia en el campo del análisis de todo tipo de compuestos

(Industriales, clínicos, medioambientales, alimenticios, etc.).

La cromatografía de gases es la técnica cromatográfica en la que la fase móvil es un

gas. Similar a las otras técnicas cromatográficas, sus rasgos característicos derivan de la

naturaleza de la fase móvil.

Es útil para el análisis de gases o para analitos relativamente volátiles, lo que incluye a
numerosos compuestos orgánicos. En esta técnica la muestra se volatiliza y se inyecta en la

cabeza de una columna cromatográfica. La elución se produce por el flujo de una fase móvil

de gas inerte. A diferencia de los otros tipos de cromatografía, la fase móvil no interacciona

con las moléculas del analito: su única función es la de transportar el analito a través de la

columna

Existen dos tipos de cromatografía de gases (GC): la cromatografía gas-sólido (GSC) y la

cromatografía gas-líquido (GLC), siendo esta última la que se utiliza más ampliamente, y que

se puede llamar simplemente cromatografía de gases (GC). En la GSC la fase estacionaria es

sólida y la retención de los analitos en ella se produce mediante el proceso de adsorción.

Precisamente este proceso de adsorción, que no es lineal, es el que ha provocado que este tipo

de cromatografía tenga aplicación limitada, ya que la retención del analito sobre la superficie

es semipermanente y se obtienen picos de elución con colas. Su única aplicación es la

separación de especies gaseosas de bajo peso molecular. La GLC utiliza como fase

estacionaria moléculas de líquido inmovilizadas sobre la superficie de un sólido inerte. La

GC tiene dos importantes campos de aplicación. Por una parte, su capacidad para separar

mezclas orgánicas complejas, compuestos organometálicos y sistemas bioquímicos. Su otra

aplicación es como método para determinar cuantitativa y cualitativamente los componentes

de la muestra. Para el análisis cualitativo se suele emplear el tiempo de retención o el

volumen de retención. En aplicaciones cuantitativas, integrando las áreas de cada compuesto

o midiendo su altura, con los calibrados adecuados, se obtiene la concentración o cantidad

presente de cada analito. Sus principales aplicaciones actuales en el área de los alimentos son:

- Determinación simultánea de múltiples residuos remanentes de hormonas ilegales,

plaguicidas o de solventes orgánicos. - Determinación de los perfiles característicos de

composición de ácidos grasos (saturados, insaturados, cis/ trans, etc). - Estudio de

composición de aromas y sabores, etc.

Descripción del cromatógrafo de gases

En un cromatógrafo de gases podemos distinguir los siguientes elementos esenciales:

- Recipiente con al fase móvil o gas portador: Es una bala de gas inerte (N2, He, Ar), a

elevada presión y de gran pureza, provista de un manorreductor y un sistema para regular un

flujo pequeño de gas.

- Sistema de introducción de la muestra. Es el lugar por donde vamos a introducir la

muestra, generalmente en disolución, con ayuda de una microjeringa. Se suelen inyectar

volúmenes muy pequeños del orden de los microlitros. En el sistema de inyección la muestra

se volatiliza y es arrastrada hacia la columna por la fase móvil.

- Horno y Columna. El siguiente componente del cromatógrafo es el horno, que es un

recinto donde está la columna, la cual está conectada por un extremo al sistema de inyección y

por otro al detector.

La columna es el elemento principal del cromatógrafo pues se trata de un tubo de acero

o sílice fundida en cuyo interior está la fase estacionaria. Los componentes de la muestra
arrastrados por el gas portador son más o menos retenidos por la misma y en consecuencia se

separan unos de otros. El tiempo de retención de un compuesto en cromatografía de gases va a

depender, por una parte, de su naturaleza, es decir, de su estructura, composición química y

volatilidad, y por otra, de las características del sistema cromatográfico, como tipo de fase

estacionaria, longitud de la columna y Tª de la separación.

Se emplean actualmente cientos de tipos diferentes de fases estacionarias, si bien las

podemos agrupar en tres variantes:

Fases estac. sólidas

Fases estac. líquidas, y

Fases estacionarias ligadas

Estas últimas, basadas en una estructura de silicona, son las más empleadas. Hay muchas

variedades de diferentes polaridades que nos permiten elegir la fase más adecuada para una

muestra concreta.

- Detector. La salida de la columna esta conectada al detector, cuya misión es la de

generar una pequeña señal eléctrica cuando pase un analito por él. Dicha señal, proporcional a

la cantidad de analito, es amplificada y enviada a un registro, donde es representada en función

del tiempo transcurrido desde la inyección de la muestra, dando lugar a un cromatograma.

También puede el detector enviar su señal a un ordenador donde es almacenada y procesada

adecuadamente.

En CG se pueden emplear una gran variedad de detectores. Podemos considerar por una

parte los detectores clásicos, que suministran como información analítica únicamente el tiempo

de retención y el área y altura del pico cromatográfico. Por otra parte, se emplean también

detectores más complejos en la llamada hibridación instrumental, que aportan una información

mucho más completa de los componentes separados de la muestra.

Papel de la temperatura en CG

La temperatura es un factor clave en CG. Debe controlarse de forma independiente en

las tres zonas principales del cromatógrafo:

- En el sistema de inyección: Para asegurar que cuando la muestra entre se volatilice.

No obstante, no debe ser excesivamente elevada pues podría producirse la descomposición

térmica de los analitos.

- En la columna: Aquí tiene una importancia decisiva el control de la temperatura para

conseguir una adecuada separación de los componentes de la muestra. En general cuanto mayor
sea la temperatura de la columna menos retenidos serán los analitos (menores tiempos de

retención). Se puede operar de formas diferentes:

A Tª cte.- Manteniendo constante la temperatura de la columna durante todo el proceso. Se

utiliza cuando los componentes de la muestra tienen volatilidades parecidas.

Con programación de Tª. - Se varia la temperatura de forma gradual y programada durante el

proceso de separación. Esta forma de operar es adecuada cuando las volatilidades de los

componentes de la muestra varían en un rango amplio.

- En el detector: Para evitar que los gases que salen de la columna pudieran condensar

en el detector, la temperatura del mismo debe ser suficientemente elevada. También es

necesario un buen control de este parámetro para obtener una señal estable y repetible.

APLICACIÓN EN EL SECTOR VINICOLA

La unión de la SPME con la cromatografía de Gases Masas/Masas ha abierto un abanico de

posibilidades inmensas que en el Instituto Catalán del Corcho hemos desarrollado para la

cuantificación de aromas en vino.

La complejidad del vino está en consonancia con su complejidad química; podemos encontrar

compuestos de familias químicas muy diferentes (ésteres, aldehídos, cetonas, terpenos,

alcoholes, etc.). El aroma del vino es el resultado de interacciones complejas entre muchos de

estos compuestos con olor; se sabe que en un mismo vino puede llegar a encontrarse hasta 800

compuestos volátiles. Las notas sensoriales aparecen como consecuencia de las acciones

concertadas de muchas moléculas y, sorprendentemente, en muchos casos estas moléculas se

encuentran en concentraciones muy cercanas o incluso por debajo de su umbral de percepción.

A veces un cierto aroma no es debido a un solo compuesto sino a la suma de diferentes

compuestos que a baja concentración pueden dar una misma nota aromática.

La cantidad y variedad de compuestos aromáticos que podemos encontrar depende de muchos

factores: la naturaleza de la uva, la variedad genética, la madurez, el suelo, el clima, las

levaduras usadas en el proceso de fermentación, el tipo de envejecimiento y almacenamiento,

etc. La cromatografía de Gases Masas/Masas nos permite medir la evolución de la

concentración de estos compuestos de una manera mucho más precisa y selectiva que hasta

ahora. La separación de los compuestos conseguida entre la suma de la cromatografía y la

detección en tándem es tan alta, que el ruido del cromatograma final es mínimo, hecho que nos

permite detectar compuestos que hasta ahora pasaban desapercibidos debido a su baja

concentración. Gracias a este hecho podemos correlacionar mucho mejor los resultados

obtenidos de la cromatografía con los resultados de los análisis sensoriales y catas que

realizamos día a día.

Las aplicaciones de la técnica son infinitas, por citar algunos ejemplos:

 Evolución de los compuestos terpénicos (linalol, geraniol, α-terpineol...) durante la

fermentación y su evolución desde su origen, la uva, al producto final.

 Cuantificación de los compuesto aromáticos que aportan las barricas de madera al vino:

furfural, metil-furfural, vainillina, whiskylactona…

 Evolución de los compuestos de oxidación y reducción del vino en el envejecimiento y

posterior embotellado.

 Determinación de compuestos off-flavors, para lograr eliminar al máximo la presencia

de estos compuestos incluso per debajo de su umbral de percepción.

 Influencia del tipo de cierre en la evolución del vino a largo plazo.

Las posibilidades son tan elevadas que sería imposible nombrarlas todas, ya que como bien

sabemos, cada vino tiene su identidad y características aromáticas particulares que podemos

asociar a diferentes compuestos químicos.

En esta línea, el Instituto Catalán del Corcho a través de proyectos de investigación o de análisis

de protocolos de calidad para las empresas, estamos desarrollando todas estas aplicaciones

gracias a nuestra experiencia de más de 20 años en cromatografía de gases.

En resumen, la última innovación en tecnologías de análisis que nos ha ofrecido el mercado de

la instrumentación química, la cromatografía de Gases Masas/Masas, nos está permitiendo

conocer, separar y cuantificar con más precisión y fiabilidad que nunca los compuestos que

forman la complejidad aromática de los diferentes vinos; con el objetivo final de poder tener

productos más adecuados y acordes con las preferencias de los consumidores cada día más

exigentes en el momento de escoger los vinos que acompañan sus comidas.

REFERENCIAS

http://biblioteca.uns.edu.pe/saladocentes/archivoz/curzoz/cromatografia.pdf

https://www.sabermas.umich.mx/archivo/la-ciencia-en-pocas-palabras/296-numero-34/534-
cromatografia.html

www.ugr.es/.../fundamentos/CROMATOGRAFIA%20DE%20GASES(Seminario).doc
http://bibliotecavirtual.corpmontana.com/bitstream/handle/123456789/1148/M000293.pdf?seque
nce=5&isAllowed=y