 AGAR SIMIONS CIRATO

USO:
Medio utilizado para la diferenciación de enterobacterias en base a la capacidad de
usar citrato como única fuente de carbono y energía.

FUNDAMENTO:
En el medio de cultivo, el fosfato monoamónico es la única fuente de nitrógeno
y el citrato de sodio es la única fuente de carbono. Ambos componentes son
necesarios para el desarrollo bacteriano. Las sales de fosfato forman un sistema
buffer, el magnesio es cofactor enzimático. El cloruro de sodio mantiene el
balance osmótico, el azul de bromotimol es el indicador de pH, que vira al color
azul en medio alcalino y el agar es el agente solidificante.

FORMULACIÓN (gramo por litro de agua):

Citrato de sodio ……………………………………………2.0

Cloruro de sodio……………………………………………5.0
Fosfato dipotásico………………………………………….1.0
Fosfato monoamónico……………………………………...1.0
Sulfato de magnesio………………………………………..0.2
Azul de bromotimol………………………………………0.08.
Agar…………………………………………………………15
pH Final: 6.9 ± 0.2

PROCEDIMIENTO:
Suspender 24,2 g del polvo en 1 litro de
agua purificada. dejar reposar 5 minutos.
Calentar con agitación frecuente y llevar a
ebullición durante 1 o 2 minutos para
disolución total. distribuir en tubos y
esterilizar en autoclave a 121°C durante 15
minutos.
Enfriar y solidificar en posición inclinada
(pico de flauta).

INTERPRETACION DE RESULTADOS
 positivo: crecimiento bacteriano
con un intenso color azul en el pico
de flauta.
 negativo: ausencia de crecimiento
y permanencia del color verde del
medio de cultivo.
 AGAR UREA
USO:
Medio utilizado para diferenciar microorganismos en base a la actividad
ureásica. Se utiliza para identificar bacterias que hidrolizan urea, tales como
Proteus spp. otras enterobacterias y estafilococos.
FUNDAMENTO:
En el medio de cultivo, la tripteína y la glucosa, aportan los nutrientes para el
desarrollo de microorganismos. El cloruro de sodio mantiene el balance
osmótico, y el rojo de fenol es el indicador de pH. El agar es el agente
solidificante.
Las bacterias hidrolizan la urea por medio de la enzima ureasa liberan amoníaco
y dióxido de carbono. Estos productos alcalinizan el medio de cultivo haciendo
virar el indicador rojo de fenol del color amarillo al rojo.

FORMULACIÓN (gramo por litro de agua):

Tripteina……………………………………………………1.0
Glucosa……………………………………………………..1.0
Cloruro de sodio……………………………………………5.0
Fosfato monopotasico………………………………………2.0
Rojo de fenol…………………………………………….0.012
Agar…………………………………………………………15
pH final: 6.8 ± 0.2

PROCEDIMIENTO:
Suspender 24 g del polvo en 950 ml de agua
purificada. Dejar reposar 5 minutos. Calentar
con agitación frecuente y llevar a ebullición
para disolución total. Distribuir en recipientes
apropiados y esterilizar en autoclave a 121°C
durante 15 minutos. Enfriar a 50°C y agregar 50
ml de una solución de urea al 40% previamente
esterilizada por filtración o cloroformo.
Fraccionar en tubos.

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS:

 Microorganismos que hidrolizan la

urea: el medio de cultivo es de color
rosado-rojizo.
 AGAR SABORAUD

USO:
Medio utilizado para el aislamiento, identificación y conservación de hongos
patógenos y saprófitos. También es útil para el cultivo de levaduras.

FUNDAMENTO:

Medio de cultivo recomendado para el aislamiento y desarrollo de hongos,

particularmente los asociados con infecciones
cutáneas (piel, pelo).
En el medio de cultivo, la peptona, la tripteína y la glucosa son los nutrientes para
el desarrollo de microorganismos. El alto contenido de glucosa, la presencia de
cloranfenicol y el pH ácido, inhiben el desarrollo bacteriano y favorecen el
crecimiento de hongos y levaduras

FORMULACIÓN (gramo por litro de agua):

Peptona………………………………………………………5.0
Tripteina……………………………………………………..5.0
Glucosa....................................................................................40
Cloranfenicol……………………………………………….0.05
Agar………………………………………………………….15
pH final: 5.6 ± 0.2

PROCEDIMIENTO:
Suspender 65 g del polvo en 1 litro de agua purificada. reposar 5 minutos y
mezclar hasta uniformar. Calentar agitando frecuentemente y hervir 1 minuto
hasta disolver completamente.
Distribuir en tubos o en otros recipientes apropiados y esterilizar en autoclave a
118-121 ºC durante 15 minutos.
Colocar los tubos en posición inclinada para solidificar el medio de cultivo (pico
de flauta). También puede distribuirse en placas de Petri estériles.
 MEDIO MRVP

USO:
Medio utilizado para la realización del ensayo de Rojo de Metilo y Voges
Proskauer.
Es particularmente útil para la clasificación de enterobacterias

FUNDAMENTO:

En el medio de cultivo, la pluripeptona aporta los nutrientes necesarios para el

desarrollo bacteriano y la glucosa es el hidrato de carbono fermentable.
La glucosa puede ser metabolizada por los microorganismos, a través de distintas
vías metabólicas. Según la vía utilizada, se originarán productos finales ácidos
(ácido láctico, ácido acético, ácido fórmico), o productos finales neutros (acetil
metil carbinol).
Esta diferencia en el metabolismo bacteriano, podría ser reconocida por la adición
de un indicador como rojo de metilo, para revelar la presencia de productos
ácidos, y por la adición de alfa naftol e hidróxido de potasio para evidenciar la
presencia de productos finales neutros.

FORMULACIÓN (gramo por litro de agua):

Pluripeptona………………………………………………….7.0
Glucosa………………………………………………………5.0
Fosfato dipotásico……………………………………………5.0
pH Final: 6.9 ± 0.2

PROCEDIMIENTO:
Suspender 17 g del polvo en 1 litro de agua purificada. Reposar 5 minutos.
Calentar con agitación frecuente y llevar a ebullición para disolución total.
distribuir en tubos y esterilizar en autoclave a 118- 121°C durante 15 minutos.

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS:
Examinar los tubos y revelar las pruebas bioquímicas
 Prueba del rojo de metilo: añadir unas gotas de
una solución de rojo de metilo al 0.04%,
observar el color del medio.
 Prueba del Voges Proskauer: añadir 0,6 ml de
alfa naftol al 5% en alcohol etílico absoluto y
0.2 ml de hidróxido de potasio al 40% a2.5 ml
de cultivo. agitar vigorosamente el tubo, y dejar
a temperatura ambiente durante 10-15 minutos.
observar el color de la superficie del medio.