Medios de Cultivo 14

MEDIOS DE CULTIVO
PARA
MICROORGANISMOS
INDICE:
1. Medio de cultivo para bacterias ………………………………………. 1
1.1 King Agar A ……………………………………………………… 2
1.2 Medio Fluido AC …………………………………………………. 4
1.3 Agar al alcohol feniletílico ………………………………………. 5
1.4 Agar APT ………………………………………………………… 7
1.5 Caldo APT ………………………………………………………. 8
2. Medios de cultivo para hongos ……………………………………… 10
2.1 Agar de CZAPEK – DOX ………………………………………. 11
2.2 Agar de sabouraud glucosado ………………………………….... 12
2.3 Agar de sabouraud maltosado …………………………………… 14
2.4 Caldo de Littman ………………………………………………… 15
2.5 Agar de CZAPEK – DOX (2) ……………………………………. 17
3. Medios de cultivo para mohos y levaduras …………………………. 18
3.1 Agar sabouraud cenan …………………………........................... 19
3.2 Agar al extracto de malta ………………………………………. 20
3.3 Caldo al extracto de malta ……………………………………… 21
3.4 Caldo de levadura y malta (ym broth) …………………………. 22
4. Referencia…………………………………………………………... 23
1.PARA
BACTERIAS
pág. 1
1. 1 KING AGAR A
ESPECIFICACIÓN
Medio para exaltar la producción de piocianina en Pseudomonas aeruginosa.
FÓRMULA EN g/L
Peptona de carne …………………………. 20,0
Cloruro magnésico ………………………... 1.4
Sulfato potásico ……………………………10,0
Agar-agar…………………………………...13,0
pH del medio a punto de uso aprox. 7,2
INSTRUCCIONES PARA LA RECONSTITUCION
Suspender 45 gramos de polvo en un litre de agua destilada que contenga 10 ml de
glicerol y dejarlo embeber durante 10 minutos. Calentar con agitación constante hasta
ebullición. Distribuir en recipientes adecuados y esterilizar al autoclave durante quince
minutos a 121°C. Si se utilizan tubos, dejar solidificar con cuña corta y fondo
abundante.
DESCRIPCIÓN
EI medio A fue formulado por King, Ward y Raney en 1954 para exaltar la
producción de piocianina en Pseudomonas aeruginosa. La piocianina es un pigmento
azulado que difunde en el medio de cultivo y cuya producción es variable entre las
cepas de esta especie bacteriana, dependiendo esencialmente de las condiciones de
pág. 2
crecimiento. En ocasiones, a pesar de que este medio exalta especialmente la produce
ion de pigmento azul. pueden aparecer simultáneamente otros pigmentos de colores
verdosos (pioverdina) o marrones (piomelaninas) que llegan a enmascarar la piocianina.
En estos casos se recomienda utilizar simultáneamente el AGAR PIOCIANOGENO que
inhibe también la producción de los pigmentos secundarios. En cualquier case, la
fluorescencia y otros pigmentos de los pseudomonas pueden observarse en otros medios
de cultivo más adecuados, como el AGAR FLUORESCEINOGENO y/o el AGAR B
DE KING.
TECNICAS DE USO RECOMENDADAS
Los tubos inclinados o placas de petri se inoculan por estria superficial y se incuban a
30-32°C durante 4-5 dias. EI uso de placas tiene el inconveniente de la fuerte
deshidratación del medio durante la incubación, por lo que es mejor utilizar tubos
inclinados, cuidando la aireación para 10 cual se deben aflojar los tapones roscados o
sustituirlos por las clásicas torundas de algodón o los capuchones de aluminio. En cepas
recién aisladas de materiales patologicos, la producción de pigmentos suele
manifestarse de forma temprana, a las 24 o 48 horas de incubación, pero en cambio, en
las procedentes de agua, alimentos o suelo, la pigmentación puede ser tardía. Cuando el
pigmento no tiene el acostumbrado color azul se debe a la producción de dos o más
sustancias coloreadas. En estas circunstancias y si no se confirma sobre otro medio de
cultivo es recomendable la confirmación por extracción: Sobre la cuña del medio de
cultivo se añaden 0,5-1 ml de cloroformo y se agita durante unos minutos para que se
disuelva la piocianina. que colorea de azul el disolvente.
A continuación, se acidifica el cloroformo con unas gotas de HCl y se obtiene un
rápido viraje de azul a rojo, confirmando así la presencia de piocianina.
pág. 3
EI medio preparado, tiene un color claro y debe mantenerse en sitio fresco y oscuro.
1. 2 MEDIO FLUIDO AC
ESPECIFICACIÓN
Medio de cultivo en forma fluida. de alto poder nutritivo para microorganismos
anaerobioso microaerófilos exigentes.
FÓRMULA EN g/L
Peptona de carne …………………………. 10
Peptona de caseina ………………………. 10
Extracto de carne ………………………… 3.0
Extracto de levadura………………………3.0
Extracto de malta…………………………3.0
Dextrosa ………………………………… 5.0
Ácido ascórbico …………………………0.2
Agar-agar ………………………………1.0
pH del medio a punto de uso 7,3 aprox.
INSTRUCCIONES PARA LA RECONSTITUCIÓN
Suspender 35 g, de polvo en un litro de agua destilada y dejar embeber el agar
durante 10 minutes. Calentar con agitación constante hasta ebullición y distribuir en
recipientes adecuados. Esterilizar el autoclave durante quince minutos a 121°C. Enfriar
los recipientes para impedir la floculación irregular del agar.
pág. 4
DESCRIPCIÓN
EI medio de cultivo AC, ya sea en su forma líquida como fluida constituye un
magnifico soporte para el crecimiento de cualquier tipo de microorganismo.
Su extraordinaria riqueza nutritiva permite satisfacer las exigencias de factores de
crecimiento aun en los casos de microorganismos más delicados, al mismo tiempo que
la inclusión de ácido ascórbico proporciona suficiente potencial reductor para que
puedan crecer los anaerobios más frecuentes. Sin embargo, cuando se usa con esta
finalidad es más aconsejable la utilización del medio f1uido, inoculándolo después de
un calentamiento a baño maría en ebullición para eliminar el aire disuelto.
Aunque ningún organismo oficial lo ha adoptado como medio de cultivo rutinario. su
utilización como medio complementario y de confirmación en los controles de
esterilidad es cada vez más frecuente.
1.3 AGAR AL ALCOHOL FENILETILICO
ESPECIFICACIÓN
Medio selectivo para bacterias grampositivas, especialmente indicado en muestras
con fuerte contaminación de gramnegativos.
FÓRMULA EN g/L
Peptona de caseina ………………………15.00
Peptona de soja …………………………. 5.0
Cloruro sódico …………………………… 5.0
pág. 5
Fenil-etanol ……………………………… 2.50
Agar-agar ………………………………... 15.00
pH del medio a punto de uso 7.3 aprox.
Suspender 42,5 g.. de polvo en un litro de agua destilada y dejar embeber el agar
durante unos 10 minutos. Calentar con agitaci6n constante hasta ebullición y distribuir
en recipientes adecuados. Esterilizar al autoclave durante 15 minutos a 121 ° C.
DESCRIPCIÓN
Este medio ha sido recomendado por diversos autores para la utilización paralela con
otros no selectivos como el de Tripticase y Soja cuando en la observación microscópica
de la muestra se ha comprobado la abundante presencia de bacilos gramnegativos. EI
fenil-etanol inhibe el crecimiento de la flora acompañante sin afectar apenas a los
grampositivos, que suelen dar colonias de tamaño medio, incluso los estreptococos más
exigentes. En algunos casos, sin embargo. es aconsejable que se prolongue la
incubación a 37° C, durante 48 horas ya que ayuda mucho a la diferenciación. El medio
deshidratado siempre presenta un aspecto untuoso y húmedo que no implica ningún
signo de alteración.
Las placas se inoculan en superficie. directamente del hisopo rectal o bien a partir de
diluciones adecuadas de la muestra. para que crezcan las colonias separadas. Se incuban
a 37° C durante un periodo de 24 horas y se observa la diferencia colonial. Por lo
general, la selectividad es buena, porque si bien en ocasiones puede aparecer alguna
colonia de gramnegativo, su tamaño suele ser muy inferior a la de los grampositivos.
pág. 6
Las condiciones de cultivo pueden mejorarse sin perder la selectividad con la adición de
un 5% de sangre desfibrinada, pero el medio así preparado no es adecuado para
observar las reacciones de hemólisis. Con este fin es mucho más aconsejable la
utilización de Agar Selectivo para Estreptococos.
1.4 AGAR A.P.T.
ESPECIFICACIÓN
Medio sólido, de usa general, especialmente desarrollado para el cultivo de los
lactobacilos heterofermentativos que provocan el verdeamiento de los productos
cárnicos.
FÓRMULA EN g/L
Peptona de caseina ……………………………… 10.00
Extracto de levadura ……………………………. 7.50
Cloruro sódico …………………………………. 5.00
Fosfato potásico ………………………………… 5.00
Citrato sódico …………………………………… 5.00
Dextrosa ………………………………………... 10.00
Polisorbato 80 …………………………………… 0.20
Sulfato magnésico ………………………………. 0.80
Cloruro manganoso ……………………………… 0.14
Sulfate ferroso …………………………………… 0.04
pág. 7
Tiamina …………………………………………. 0.001
Carbonato sódico …………………………………. 1.250
Agar-agar ………………………………………… 15.00
pH del medio a punto de usa 6,7 aprox.
Suspender 59,5 gramos del polvo en un litro de agua destilada y dejar embeber el
agar durante 10 minutos. Calentar con agitación constante y llevar a ebullición.
Distribuir en recipientes adecuados y esterilizar al autoclave durante 15 minutos a
121°C.
1.5 CALDO A. P.T.
ESPECIFICACIÓN
Versión liquida del agar de la misma denominación. especialmente adecuado para el
cultivo de bacterias del ácido láctico.
FÓRMULA
La composición de este caldo de cultivo corresponde exactamente a la del medio
solido (Agar APT) con la omisión del agente gelificante.
Disolver 44,5 gramos de polvo en un litro de agua destilada, calentando ligeramente
si es preciso. Distribuir en recipientes adecuados y esterilizar al autoclave durante 15
minutos a 121 °C.
pág. 8
DESCRIPCIÓN
Estos dos medios de aplicación general (All Purpose with Tween), originalmente
formulados por Evans y Niven han sido utilizados con gran éxito para el aislamiento y
cultivo de las bacterias del ácido láctico que alteran alimentos y requieren un alto nivel
de tiamina. Por este motivo, prescindiendo de la que pueda aportar la peptona y el
extracto de levadura, el medio se ha suplementado con una cantidad suficiente de esta
vitamina. En sus dos versiones, sólido y líquido, el medio APT ha demostrado su
eficacia en la detección de los lactobacilos que producen verdeamiento de la carne y
suplementados con un 5% de zumos de fruta, tal como preconiza la APHA, se
convierten en un insustituible medio de prospección de cualquier tipo de bioalteradores
alimentarios. Sin embargo, al no incluir en su formulación ningún agente inhibidor,
carecen en absoluto de capacidad selectiva y por ello soportan el crecimiento de casi
todos los tipos microbianos.
pág. 9
2. PARA
HONGOS
2.1 AGAR DE CZAPEK-DOX
pág. 10
ESPECIFICACIÓN
Medio semisintetico sólido para el cultivo de hongos con nitrato como única fuente
de nitrógeno.
FÓRMULA EN g/L
Sacarosa ………………………………. 30.00
Nitrato sódico …………………………. 2.0
Fosfato dipotásico ……………………. 1.0
Sulfato magnésico ……………………. 0.5
Cloruro potásico ………………………. 0.5
Sulfato ferroso ………………………… 0.01
Agar~agar ………………………………. 15.0
pH del medio a punto de usa aprox. 7.3
Suspender 49 g. de polvo en un litro de agua destilada y calentar hasta ebullición,
Repartir en recipientes y esterilizar al autoclave durante 15 minutos a 121°C. Si se desea
usar a pH más bajo, acidificarlo con ácido láctico estéril cuando se haya enfriado a
45°C.
2.2 AGAR DE SABOURAUD GLUCOSADO
pág. 11
ESPECIFICACIÓN
Medio para la enumeración y cultivo de hongos.
FÓRMULA EN g/L
Glucosa …………………………………. 40.00
Peptona de caseina ……………………... 5.00
Peptona de carne ………………………. 5.00
Aga~agar ………………………………. 15.00
pH del medio a punto de uso aprox, 5.6
Disolver 65 g. de polvo en un litro de agua destilada. calentando hasta ebullición con
agitación frecuente. Distribuir en recipientes y esterilizar al autoclave durante 15
minutos a 118° C. Evítese el sobrecalentamiento; la acidez del medio puede hidrolizar
parcialmente el agar.
DESCRIPCIÓN
EI medio de Sabouraud glucosado. es una modificación al clásico medio de
Sabouraud para el cultivo de hongos. La formulación permite un cultivo y
diferenciación adecuado. ya que los aspectos morfológicos se mantienen con mayor
regularidad. La selectividad se debe a su bajo pH y la alta concentración de glucosa, que
junto a una incubación a temperaturas relativamente bajas (25-30°C), permiten
favorecer el crecimiento de los hongos al mismo tiempo que dificultan el de las
bacterias.
pág. 12
Además, la especial composición de la peptona, esta estudiada para que suministre
todos los requerimientos nutritivos nitrogenados a los hongos. La fuerte reacción acida
del medio de Sabouraud hidroliza en parte el agar por lo cual se recomienda preparar el
necesario y no refundirlo, ya que cualquier sobrecalentamiento disminuye notablemente
su capacidad de gelificación. Si se desea una mayor selectividad, se pueden añadir
diversos inhibidores después de la esterilización. cuando el medio aun esta fundido e
incluso agentes indicadores para convertirlo en un medio diferencial.
A continuación, se ofrecen algunas de las mezclas inhibidoras y diferenciales que se
han empleado:
Penicilina 20.000 Unidades en un litro
Estreptomicina 40 mg
Cloramfenicol 400 mg en un litro
Penicilina 20.000 Unidades
Neomicina 40 mg en un litro
Telurito potásico 150 mg en un litro
Colistina 8 mcg
Novobiocina 100 mcg. en un litro
Sulfato de cobre 500 mg
Cristal Violeta 2 mg en ur. litro en un litro
Verde Brillante 5 mg
Inhibidores de hongos patógenos:
~cloheximide 500 mg en un litro
2.3 AGAR SABOURAUD MALTOSADO
pág. 13
ESPECIFICACIÓN
Medio para el cultivo y cromogénesis de los hongos filamentosos.
FÓRMULA EN g/L
Maltosa …………………………………40.0
Peptona de caseína……………………... 5.0
Peptona de carne………………………. 5.0
Agar- agar……………………………… 15.0
pH del medio a pun to de uso aprox . 5.6
Disolver 65 g. de polvo en un litro de agua destilada, calentando hasta ebullición con
agitación frecuente. Distribuir en recipientes y esterilizar al autoclave durante 15
minutos a 118° C. Evítese el sobrecalentamiento que puede hidrolizar parcialmente el
agar.
DESCRIPCIÓN
Este medio responde a la misma descripción que el Agar Sabouraud Glucosado con
la única sustitución de azúcar.
2.4 CALDO DE LITTMAN
pág. 14
ESPECIFICACIÓN
Medio líquido para el enriquecimiento y multiplicación de hongos saprofitos y
patógenos.
FÓRMULA EN g/L
Peptona de caseina ……………………………3.00
Peptona de carne ……………………………… 3.00
Peptona de gelatina …………………………… 4.00
Dextrosa ………………………………………. 10.00
Bilis bovina ……………………………………. 15.00
Cristal vioteta …………………………………... 0.01
pH del rne dio a punto de uso aprox. 7,0
Disolver 35 g. de polvo en un litro de agua destilada calentando si es preciso. El
medio siempre queda algo turbio debido a la presencia de la bilis. Distribuir en
recipientes y esterilizar al autoclave durante 15 minutos a 121 ° C. Enfriar a 45°C y
añadir una solución de estreptomicina para que quede a una concentración final de 30
mcg/ml.
TÉCNICAS DE USO RECOMENDADAS
pág. 15
EI medio de Littman se ha mostrado mucho más eficaz que el de Sabouraud en el
aislamiento de hongos saprofitos y patógenos, probablemente debido a su pH neutro que
facilita el rápido crecimiento de los hongos que se consigue en períodos de 3-6 días de
incubación a temperaturas de 28-30° C. EI crecimiento siempre queda restringido a
colonias de pequeño tamaño que si bien facilitan su aislamiento obligan a un subcultivo
posterior para poder estudiar la morfología colonial típica. Para estos casos se
recomienda el uso simultaneo o posterior de medios como el de Sabouraud glucosado,
el Agar Micológico o el Agar de patata glucosado.
Debido a la larga incubación a que luego deberán someterse se recomienda llenar las
placas con 30-35 ml de medio. La fuerte selectividad permite utilizar fuertes inóculos
sin miedo al sobrecrecimiento colonial. Las muestras patógenas como esputos.
supuraciones, heces. etc., se esparcen directamente sobre la superficie con la ayuda de
un asa de Drigalski, los recortes de uñas, pelos y cabellos y escaras en general se
depositan sobre la superficie simplemente. En estos casos es recomendable aclarar el
área de siembra con una pequeña cantidad de acetona, Normalmente el medio queda con
un aspecto turbio y sucio debido a la presencia de la bilis completa, por lo que debe
presentarse especial atención en resuspender el precipitado después de cada refusión.
Las placas preparadas pueden mantenerse largo tiempo en nevera, pero una vez se ha
adicionado la estreptomicina debe evitarse cualquier sobrecalentamiento.
pág. 16
2.5 Agar Czapek–Dox (2)
ESPECIFICACIÓN
Cultivo de Hongos y bacterias consumidores de Nitrato sódico.
FÓRMULA EN g/L
Nitrato sódico……………………………… 2,00
Cloruro potásico…………………………… 0,50
Sulfato magnésico…………………………. 0,50
Sulfato ferroso ……………………………... 0,01
Fosfato dipotásico ………………………….. 1,00
Sacarosa ……………………………………. 30,00
Agar agar …………………………………… 12,00
pH final: 6,8 ± 0,2
Disolver 46 g en 1 litro de agua destilada. Calentar y agitar hasta su completa
disolución.
Autoclavar a 115 ºC durante 20 minutos.
Mezclar bien antes de verter en las placas.
Para ajustar el pH a 3’5, añadir 10 ml de solución estéril de ácido láctico al 10% por
litro de medio.
No recalentar.
pág. 17
3. PARA
MOHOS Y
LEVADURAS
pág. 18
3.1 AGAR SABOURAUD CENAN
DESCRIPCIÓN
Medio de cultivo sólido para la enumeración total de mohos y levaduras según
normativas CeNAN.
FÓRMULA EN g/L
Dextrosa …………………………………. 20,0
Extracto de levadura ………………………. 5,0
Agar~agar…………………………………… 20,0
pH final aproximado 7,2
Aparte, Oxitetraciclina (0,1% esteril)
Suspender 45 g. de polvo en un litro de agua destilada y dejar remojar unos minutos.
Distribuir en recipientes y esterilizar al autoclave durante 15 minutes. Enfriar a unos
50°C y añadir la tetraciclina para alcanzar una concentración de 0,1 mg/ml.
DESCRIPCIÓN
La presente formulación de este medio de cultivo difiere de los clásicos en la
ausencia de peptonas y en una reacción prácticamente neutra. En cambio, incorpora la
presencia de una fuerte concentración de oxitetraciclina que hace prácticamente
imposible el crecimiento de bacterias.
pág. 19
TÉCNICA DE USO RECOMENDADA
EI Centro Nacional de Alimentación y Nutrición recomienda el inóculo de 1 ml de
cada dilución, por duplicado, en masa, con este medio de cultivo. La incubación debe
hacerse a 22-25° durante 5 días con una lectura parcial a los 3 días.
3.2 AGAR AL EXTRACTO DE MALTA
ESPECIFICACIÓN
Media para el cultivo de mohos y levaduras.
FÓRMULA EN g/L
Extracto de Malta …………………. 13.00
Dextrina ……………………………. 2.50
Peptona de gelatina ………………… 5.00
Agar-agar …………………………… 15.0
pH del medio a punto de usa aprox. 5,5
Suspender 35,5 g. de polvo en un litro de agua destilada y calentar suavemente con
agitación constante hasta ebullición. Repartir en recipientes y esterilizar al autoclave
durante 15 minutos a 115 °C. Evítese el sobrecalentamiento ya que el bajo pH del
medio puede hidrolizar el agar.
pág. 20
3.3 CALDO AL EXTRACTO DE MALTA
FÓRMULA EN g/L
Extracto de Malta………………………… 13.0
Dextrina: ………………………………… 2.5
Peptona de gelatina ………………………. 5.0
pH del medio a punta de uso aprox. 5.5
Disolver 20.5 g. de polvo en un litro de agua destilada calentando si es preciso.
Distribuir en recipientes y esterilizar al autoclave durante 15 minutos a 121 °C. EI
precipitado es normal y no afecta la fertilidad del medio.
DESCRIPCIÓN
Estos medios de cultivo son clásicos en el cultivo de mohos y levaduras. En principio
el extracto de malta posee suficientes azucares (maltosa, glucosa, sacarosa y dextrina
sobre todo) para permitir un crecimiento abundante y los factores de crecimiento que
pueden ser necesarios en los casos más exigentes los proporciona la peptona de gelatina.
Tanto el caldo como el agar al extracto de malta se han utilizado ampliamente en el
mantenimiento, aislamiento e identificación de hongos e incluso algunas farmacopeas lo
programan aun como medio para el control de esterilidad de productos farmacéuticos,
aunque su uso más difundido es para estudios morfológicos comparativos. La técnica de
Galloway y Burgess. para el cultivo consiste en depositar unos cortos conos de papel de
filtro sobre una placa de petri que contenga 7-8 ml de caldo.
pág. 21
Cuando el papel de filtro esta húmedo se siembra sobre su superficie el material a
examinar. La incubación se hace a temperatura ambiente y con iluminación.
Si se desea una mayor selectividad se puede añadir unos mililitros de ácido láctico al
10% o de ácido tartárico al 5% pero entonces se dificulta mucho la gelificación del agar.
Cuando la acidificación es por debajo de pH 5.0. no debe volver a fundirse el agar va
que el agente solidificante se hidroliza.
3.4 CALDO DE LEVADURA Y MALTA
ESPECIFICACIÓN
Medio líquido para el enriquecimiento y producción de hongos y organismos
aciduricos.
FÓRMULA EN g/L
Extracto de malta ……………………… 3.0
Extracto de levadura …………………… 3.0
Peptona de caseina ……………………… 5,0
Dextrosa ................................................... 10,0
pH del medio a punto de uso aprox. 5.2
Disolver 21 g. de polvo en un litro de agua destilada, calentando si es preciso.
Distribuir en recipientes y esterilizar al autoclave durante 15 minutos a 121°C. Si se
desea hacer el medio selectivo acidular antes de la esterilizaci6n hasta un pH de 3,5.
pág. 22
DESCRIPCIÓN
Este medio fue formulado por Wickerham para el aislamiento, cultivo, preparación
de inóculos y mantenimiento de levaduras. EI medio se puede hacer selectivo o bien
bajando el pH a 3,5 o con la adición de antibióticos y fungistáticos. Si se usa el medio
acidulado, la adición de ácido estéril debe hacerse después de la esterilización para que
no afecte a la gelificación del agar.
EI caldo se puede usar como enriquecimiento en poblaciones mixtas. Para ello basta
cubrir la superficie con una gruesa capa de parafina que favorecerá el crecimiento de los
organismos fermentativos. Posteriormente se pasa al aislamiento sobre placas del medio
solido acidulado o no. Para favorecer el enriquecimiento de las formas fermentadoras y
oxidadoras es recomendable un enriquecimiento en medio liquido con agitación
continua durante dos días. antes de pasar al medio sólido. Este procedimiento impide la
esporulación de las formas filamentosas.
4. REFERENCIA:
Uberoa F, J. (1981) Medios de cultivo para Microbiologia Recuperado de:
file:///D:/10%20ciclo/lab%20bioquimica/Medios%20de%20cultivo%20para
%20microbiolog%C3%ADa.pdf
Microkit: Medios de Cultivo. (2015). Información de Medios de cultivo para
Microbiología. Recuperado de: http://www.medioscultivo.com/czapek-dox-agar/
pág. 23

Medios de Cultivo 14

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1. Medio de cultivo para bacterias ………………………………………. 1

1.1 King Agar A ……………………………………………………… 2

1.2 Medio Fluido AC …………………………………………………. 4

1.3 Agar al alcohol feniletílico ………………………………………. 5

1.4 Agar APT ………………………………………………………… 7

1.5 Caldo APT ………………………………………………………. 8

2. Medios de cultivo para hongos ……………………………………… 10

2.1 Agar de CZAPEK – DOX ………………………………………. 11

2.2 Agar de sabouraud glucosado ………………………………….... 12

2.3 Agar de sabouraud maltosado …………………………………… 14

2.4 Caldo de Littman ………………………………………………… 15

2.5 Agar de CZAPEK – DOX (2) ……………………………………. 17

3. Medios de cultivo para mohos y levaduras …………………………. 18

3.1 Agar sabouraud cenan …………………………........................... 19

3.2 Agar al extracto de malta ………………………………………. 20

3.3 Caldo al extracto de malta ……………………………………… 21

3.4 Caldo de levadura y malta (ym broth) …………………………. 22

Medio para exaltar la producción de piocianina en Pseudomonas aeruginosa.

Peptona de carne …………………………. 20,0

Cloruro magnésico ………………………... 1.4

Sulfato potásico ……………………………10,0

pH del medio a punto de uso aprox. 7,2

INSTRUCCIONES PARA LA RECONSTITUCION

Suspender 45 gramos de polvo en un litre de agua destilada que contenga 10 ml de

ebullición. Distribuir en recipientes adecuados y esterilizar al autoclave durante quince

producción de piocianina en Pseudomonas aeruginosa. La piocianina es un pigmento

cepas de esta especie bacteriana, dependiendo esencialmente de las condiciones de

ion de pigmento azul. pueden aparecer simultáneamente otros pigmentos de colores

verdosos (pioverdina) o marrones (piomelaninas) que llegan a enmascarar la piocianina.

En estos casos se recomienda utilizar simultáneamente el AGAR PIOCIANOGENO que

inhibe también la producción de los pigmentos secundarios. En cualquier case, la

fluorescencia y otros pigmentos de los pseudomonas pueden observarse en otros medios

de cultivo más adecuados, como el AGAR FLUORESCEINOGENO y/o el AGAR B

TECNICAS DE USO RECOMENDADAS

30-32°C durante 4-5 dias. EI uso de placas tiene el inconveniente de la fuerte

recién aisladas de materiales patologicos, la producción de pigmentos suele

manifestarse de forma temprana, a las 24 o 48 horas de incubación, pero en cambio, en

pigmento no tiene el acostumbrado color azul se debe a la producción de dos o más

sustancias coloreadas. En estas circunstancias y si no se confirma sobre otro medio de

cultivo es recomendable la confirmación por extracción: Sobre la cuña del medio de

disuelva la piocianina. que colorea de azul el disolvente.

A continuación, se acidifica el cloroformo con unas gotas de HCl y se obtiene un

rápido viraje de azul a rojo, confirmando así la presencia de piocianina.

Medio de cultivo en forma fluida. de alto poder nutritivo para microorganismos

anaerobioso microaerófilos exigentes.

Peptona de carne …………………………. 10

Peptona de caseina ………………………. 10

Extracto de carne ………………………… 3.0

Dextrosa ………………………………… 5.0

Ácido ascórbico …………………………0.2

pH del medio a punto de uso 7,3 aprox.

INSTRUCCIONES PARA LA RECONSTITUCIÓN

Suspender 35 g, de polvo en un litro de agua destilada y dejar embeber el agar

durante 10 minutes. Calentar con agitación constante hasta ebullición y distribuir en

recipientes adecuados. Esterilizar el autoclave durante quince minutos a 121°C. Enfriar

los recipientes para impedir la floculación irregular del agar.

EI medio de cultivo AC, ya sea en su forma líquida como fluida constituye un

magnifico soporte para el crecimiento de cualquier tipo de microorganismo.

Su extraordinaria riqueza nutritiva permite satisfacer las exigencias de factores de

la inclusión de ácido ascórbico proporciona suficiente potencial reductor para que

finalidad es más aconsejable la utilización del medio f1uido, inoculándolo después de