Rev. Invest. Mar.

23(3):221-227, 2002

EFECTO DEL LIPOPOLISACRIDO SOBRE EL NMERO

DE HEMOCITOS Y LA PRODUCCIN DE XIDO NTRICO
EN EL CAMARN BLANCO (Litopenaeus schmitti).
J. Marrero1, G. Espinosa1, M.E. Alonso1, U. Bcquer2, Y. Borrell1 , T. Rodrguez2 y M. Beatriz3.
(1) Facultad de Biologa, Universidad de La Habana, Calle 25 y J, Plaza, CP 104, Ciudad Habana, Cuba.
(2) Centro de Investigaciones Marinas, Universidad de La Habana.
(3) Centro de Qumica Farmacutica, Ave 21 y Calle 200, Playa, CP 11600, Ciudad Habana. Cuba.
RESUMEN
El xito de la acuicultura de los crustceos peneidos se ha encontrado limitada por enfermedades infecciosas endmicas y
epidmicas en diversas partes del mundo. Por esto los mecanismos de defensa de estos crustceos se han convertido en
una prioridad en trminos de control, prevencin y diagnstico de enfermedades. Las investigaciones actuales estn dirigidas
a lograr la estimulacin de la respuesta inmune innata y a la identificacin de efectores anti-infecciosos a niveles molecular y
celular. El lipopolisacrido (LPS) endotxico es un componente integral de la membrana externa de la pared celular de las
bacterias Gram-negativas, que puede estimular la respuesta inmune innata. La toxicidad del LPS (LD50) no ha sido
examinada sistemticamente en crustceos y sus efectos sobre el conteo de hemocitos circulantes son prcticamente
desconocidos, as como, sobre la produccin de xido ntrico por estas clulas. Los resultados mostraron que el LPS causa
un aumento exponencial en el nmero de hemocitos en circulacin y un aumento en la concentracin de xido ntrico en la
hemolinfa de los camarones tratados. Esto sugiere que la produccin de xido ntrico es tambin un mecanismo bactericida
importante en Litopenaeus schmitti y podra ser utilizado como criterio para la seleccin de animales ms resistentes o en los
primeros diagnsticos de infecciones en los centros de cra de camarones.
Palabras clave: toxicidad; inmunologa; cultivo de camarones; Escherichia coli; Litopenaeus schmitti
ABSTRACT
Aquaculture of penaeid crustaceans is an economically important activity, limited by endemic and epidemic infectious
diseases in different parts of the world. Due this, research about defense mechanisms in shrimp has become a priority with
the aim of the understanding of immune stimulation process that increases the resistance to pathogens. In this work the
toxicity of the endotoxic lipopolysacharide, coming from the external membrane of Gram-negative bacteria was evaluated
through mortality (LD50), its effects on the haemocyte number, and the nitric oxide production in the shrimp Litopenaeus
schmitti. Our results demonstrated that LPS induce an exponential increase of the total number of haemocytes and also an
increase in the amount of nitric oxide found in the haemolymph of the injected shrimps. This suggests that nitric oxide
production is also an important bactericidal mechanism in L.schmitti, and therefore could be used in a future as criteria to
selection of more resistant individuals or early diagnosis of infections in shrimp hatcheries.
Key words: toxicity; immunology; shrimp culture; Escherichia coli; Litopenaeus schmitti

INTRODUCCIN
prioridad en trminos de control y prevencin de
enfermedades. Adems, el conocimiento de los
procesos inmunes y de los efectores anti-infecciosos
puede ser directamente aplicado en la profilaxis
zoosanitaria mediante el establecimiento de tcnicas de
chequeo del estado de salud para detectar
inmunodeficiencias (Bachere et al, 1995).

La acuicultura de crustceos peneidos constituye una

actividad econmicamente importante, pero est
limitada en diferentes partes del mundo por
enfermedades infecciosas provocadas, entre otros, por
virus, bacterias y hongos y por el uso regular de
antibiticos que han dirigido progresivamente a las
poblaciones de cultivo a una situacin crtica de
resistencia (Bachre, 2000)

La inmunologa comienza a ser una herramienta muy

potente para las estrategias de seleccin de animales
genticamente resistentes a enfermedades. Para ello se
requiere que las investigaciones bsicas estn dirigidas
a la caracterizacin de efectores de defensa humorales
y celulares. En los camarones peneidos, como en el

En la actualidad las investigaciones en este campo

estn dirigidas al diagnstico de los patgenos
empleando varias metodologas (Bachre, et al 1995).
Simultneamente, la comprensin de los mecanismos
de defensa de camarones se ha convertido en una
221

Marrero et al.: Efecto del lps en el nmero de hemocitos y la produccin de xido ntrico en el camarn blanco (Litopenaeus schmitti).

resto de los crustceos, el sistema inmune no muestra

un alto grado de especificidad y no incluye un
componente adaptativo basado en la memoria
inmunolgica (Vargas-Albores y Yepiz-Plascencia,
1998)

Tabla 1. Grupos experimentales para la determi-nacin

de la DL50 del LPS sobre el camarn blanco
Litopenaeus schmitti.

El lipopolisacrido (LPS) es un componente integral de

la membrana externa bacteriana, que constituye el
antgeno principal de las bacterias Gram-negativas. La
endotoxina LPS causa, entre otros efectos, liberacin de
aglutininas y factores de coagulacin, activacin de la
cascada proPO, activacin de mecanismos bactericidas
protectores como la induccin de la xido ntrico sintasa
(NOS) y variacin en el nmero de hemocitos
circulantes (Lorenzon et al, 1999). La endotoxina ha
sido utilizada en varios peneidos como estimulador no
especfico del sistema inmune (Itami et al., 1989;
Newman, 1999).

La influencia del LPS sobre la cantidad de hemocitos

circulantes en la hemolinfa se determin, con el empleo
de 2 dosis de 2.11 y 4.48 mg de LPS / Kg de peso a las
6h, 8h y 10h. Los grupos experimentales fueron de 10
animales y el grupo control de 4.

El presente trabajo se realiz con el objetivo de estudiar

el efecto del LPS de Escherichia coli
sobre la
supervivencia, el nmero de hemocitos circulantes y la
produccin de oxido ntrico en el camarn blanco
Litopenaeus schmitti.

El efecto del LPS sobre la produccin de xido ntrico se

demostr con el empleo de 2 dosis (2.10 y 4.36 mg de
LPS / Kg de peso del animal) a las 2, 6, 8, 10, 12 y 24
horas. Los grupos experimentales y el control estuvieron
formados por 8-10 individuos por dosis y tiempo.

MATERIALES Y METODOS

Los hemocitos fueron contados en el hematocitmetro

de Neubauer bajo microscopio ptico OLYMPUS.

Grupo
experimental
1. Control
2. Dosis # 1
3. Dosis # 2
4. Dosis # 3

Las experiencias se realizaron con el camarn blanco

Litopenaeus schmitti en la Empresa Yaguacam,
provincia de Cienfuegos, Cuba. Los animales, en
estadio de intermuda, fueron aclimatados en un mismo
tanque bajo las condiciones propias de la estacin,
entre las que se incluye la temperatura del agua (28oC).
Se marcaron por el pednculo ocular con anillo
numerado, se agruparon por tratamientos y se
comenzaron los experimentos al da siguiente del
marcaje para reducir el efecto del estrs en los
animales. En todos los casos se determin el peso de
los animales. Las inyecciones del LPS y de la solucin
salina (NaCl 0.9%), esta ltima para los controles se
realizaron en las coxas del tercer par de pereipodos,
con jeringuilla y aguja hipodrmica Hamilton de 100 L.

LPS
mg / Kg
1.78
3.58
7.13

Solucin
salina
x
-

Total de
animales
10
10
10
10

El xido ntrico se determin por medida indirecta de

nitritos + nitratos mediante la reaccin de diazotacin de
Griess (Moncada et al., 1989).
El nivel de xido ntrico en suero de animales sanos y
enfermos se llev a cabo con 19 y 9 camarones,
respectivamente. Los animales enfermos fueron
clasificados segn el criterio tcnico del Centro de
Desove.
Las pruebas t, anlisis de varianza y correlaciones se
llevaron a cabo utilizando el paquete estadstico
Statistics sobre Windows (Release 4.0 Statsoft, Inc.
1993).

La hemolinfa fue extrada de los animales vivos

mediante una puncin en el seno dorsal y adicionada a
un tubo eppendorf con solucin anticoagulante (oxalato
de amonio 1.2% y oxalato da potasio 0.8%) en una
proporcin de 0.3 mL de anticoagulante por cada
mililitro de hemolinfa.

RESULTADOS
Toxicidad aguda a las 24 horas del LPS en
Litopenaeus schmitti.
El efecto txico de diferentes dosis del lipopolisacrido
en el camarn blanco Litopenaeus schmitti se muestra
en la Fig. 1. La toxicidad aument en la medida que se
increment la dosis de endotoxina. El menor valor de
supervivencia (20%) se obtuvo con la dosis mayor, 7.13
mg LPS / Kg de peso del animal, y no se observaron
muertes cuando se inocul solucin salina en los
controles negativos. La dosis letal media (DL50) de la

El LPS utilizado fue el de Escherichia coli 055:B5

(Sigma). La determinacin de la dosis letal media DL50
del LPS se llevo a cabo utilizando 3 grupos
experimentales a los que se les inyectaron las dosis
fijadas de LPS (Tabla 1). La DL50 se calcul a partir de
la mortalidad observada en las primeras 24 horas, por el
mtodo de Litchfield y Wilcoxon (1989) computarizado.
222

Rev. Invest. Mar. 23(3):221-227, 2002

endotoxina fue 3.78 mg de LPS/ Kg de peso del animal.

La Fig. 2 muestra la curva de mortalidad inducida por el
LPS, los lmites fiduciales fueron 7.23 mg / Kg (derecho)
y 2.19 mg / Kg (izquierdo). La ecuacin correspondiente
a la zona lineal,
y = 4.95 + 2.82 (x 0.56), se obtuvo
de la curva logaritmo dosis-mortalidad con el empleo del
logaritmo en las abscisas y la escala de probit en las
ordenadas segn Litchfield y Wilcoxon (1949).

El nmero de hemocitos circulantes en la hemolinfa del

camarn blanco Litopenaeus schmitti se vio modificado
cuando se trataron los animales con diferentes dosis de
la endotoxina bacteriana (Fig. 3).

B
B
B
m
m
m

/ m L

C H T x1 0

8 0

1
e a n
e a n
e a n

5
4
3
2

2
F
p
n

.1
=
=
=

1 m g /K
1 2 9 .5 0
0 .0 0
1 0

4
F
p
n

.4
=
=
=

8 m g /K
2 0 .7 9
0 .0 0
9

N
F
p
n

a C l 0 .9 %
= 0 .4 2
= 0 .6 7
= 4

6 0

1
4 0

0
6

1 0

T ie m p o ( h )

d e s u p e r v iv e n c ia

1 0 0

2 2

2 0

Fig. 3. Efecto del LPS sobre el nmero de hemocitos

circulantes del camarn Litopenaeus schmitti a las 6h,
8h, 10h. La solucin de NaCl 0.9% fue utilizada como
control del experimento. Los valores son expresados
como media desviacin estndar. En la leyenda se
muestran los resultados del ANOVA para las diferentes
dosis a travs del tiempo del ensayo. CHT: conteo de
hemocitos totales.

D o s is ( m g L P S / K g p e s o )

Fig.1. Efecto del lipopolisacrido (LPS) sobre la

supervivencia del camarn blanco Litopenaeus schmitti,
a las 24 horas y a 28 oC. La solucin de NaCl 0.9%
fue utilizada como control negativo del experimento.
Las dosis de LPS fueron 1.78, 3.58, 7.13 mg / Kg

Las dosis 2.11 y 4.48 mg de LPS / Kg de peso del

animal no produjeron cambios significativos en el
nmero de hemocitos circulantes a las 6 y 8 horas con
respecto a los animales controles (F=0.47, p=0.63;
F=0.57, p=0.58, respectivamente). Un comportamiento
diferente se observ a las 10 horas de inoculacin. Los
dos tratamientos a este tiempo manifestaron diferencias
significativas con el control (F=13.97, p=0.00). En la Fig.
3 se observa que ambas dosis produjeron en el tiempo
un aumento significativo de los hemocitos en circulacin
pero ste fue superior para la dosis de 2.10 mg de LPS /
Kg de peso, sin que se produjeran diferencias en el
tiempo para los controles. La tendencia observada en el
crecimiento de la poblacin de clulas de la hemolinfa,
provocado por el LPS, tiene un comportamiento
exponencial para ambas concentraciones de la
endotoxina (Fig. 3).

8 0

6 0

4 0

d e

m o r t a lid a d

1 0 0

2 0

0
1

lo g

1 0

1 0

d o s is

( m

L P S / K g

p e s o

Fig. 2. Curva de mortalidad inducida por LPS

(concentracin: 1.78, 3.58, 7.13 mg / Kg de peso) sobre
Litopenaeus schmitti a las 24 horas de exposicin y a
28 oC.

La solucin de NaCl 0.9% fue utilizada como control

negativo del experimento. Las dosis de LPS fueron
1.78, 3.58, 7.13 mg / Kg Cada grupo experimental
formado por 10 animales. La ecuacin correspondiente
a la zona lineal es y = 4.95 + 2.82 (x 0.56) y la DL50
a partir de esta recta fue 3.78 mg / Kg.

Influencia de diferentes dosis de LPS sobre los

hemocitos circulantes en Litopenaeus schmitti

223

Marrero et al.: Efecto del lps en el nmero de hemocitos y la produccin de xido ntrico en el camarn blanco (Litopenaeus schmitti).

Relacin entre el nmero de hemocitos totales y el

peso de Litopenaeus schmitti.
El estudio de la influencia del peso de los animales en el
nmero de hemocitos circulantes del camarn blanco
arroj que no existe correlacin entre el nmero de
hemocitos y el peso del animal (Tabla 2).

+ N O

]( M )

120

Tiempo
(h)

0 (control)

-0.04

0.91

12

2.10

6
8
10

0.44
-0.50
0.02

0.23
0.89
0.89

9
10
10

4.36

6
8
10

-0.17
0.30
-0.02

0.64
0.39
0.96

10
10
9

100

80

[N O

Tabla 2. Valores del coeficiente de correlacin (r) y

probabilidad estadstica (p) al relacionar el nmero de
clulas y el peso de Litopenaeus schmitti para los
tiempos de ensayo y las dosis de LPS empleadas. La
solucin salina 0.9% fue utilizada como control.

Dosis de LPS
(mg / Kg)

4 .3 6 m g /K g
2 .1 0 m g /K g
c o n tro l

60

40

10

15

20

25

T ie m p o ( h )

Fig. 4. Efecto del LPS sobre la induccin de la

produccin de xido ntrico por los hemocitos de
Litopenaeus schmitti a travs del tiempo. Las
concentraciones de LPS utilizadas fueron de 2.10 y
4.36 MG/Kg. y los tiempos de ensayo 2, 6, 8, 10, 12 y
24 horas. La solucin de NaCl 0.9% fue utilizada como
control del experimento

Produccin de xido ntrico

DISCUSIN

En la Fig. 4 se muestra la concentracin de xido ntrico

en la hemolinfa de los animales tratados y se puede
observar un ligero aumento en la concentracin de
xido ntrico en los primeros tiempos de ensayo, para
todos los tratamientos, hasta un valor mximo en que
disminuye. Con la dosis de 4.36 mg / Kg se logr un
aumento mximo en la concentracin de xido ntrico de
123 M entre las 8 y 10 horas de exposicin al inductor.
Este aumento result estadsticamente significativo con
respecto al de los animales sin tratar. Igualmente
resultaron diferentes desde el punto de vista estadstico
las producciones de xido ntrico inducidas para las
diferentes dosis con respecto al control a las 24 horas
(Tabla 3)

Existen pocos estudios relacionados con el nmero de

hemocitos en la hemolinfa y el mecanismo de aniquilamiento
celular por el xido ntrico (NO-*) en presencia de un estmulo
patognico. Este mecanismo se desencadena porque las
clulas fagocticas frente a una seal de peligro son capaces
de inducir la enzima xido ntrico sintasa inducible (iNOS de
sus siglas en ingls), la cual libera este metabolito capaz de
combinarse con radicales reactivos para as llevar a cabo la
destruccin de patgenos (Ottaviani y Franceschi 1997). La
elevacin en suero del xido ntrico constituye una medida
indirecta del estrs patognico del animal por lo que este
metabolito puede ser utilizado para la deteccin de animales
enfermos, adquiriendo su deteccin importancia en el manejo
de la produccin y en la economa general del cultivo.
La iNOS fue informada por primera vez en vertebrados (Hibbs
et al., 1988), despus se ha demostrado su presencia en
algunos invertebrados como moluscos (Conte y Ottavianni,
1995), pero en camarones no se han encontrado reportes
hasta el momento. La presencia de esta enzima en animales
con diferentes posiciones en la escala evolutiva, desde los
invertebrados hasta mamferos, nos demuestra cmo se han
conservado a travs de la evolucin los mecanismos de
defensa innatos o naturales.

Concentracin de xido ntrico en una muestra de

Litopenaeus schmitti enfermos.
La Fig. 5 muestra la diferencia de concentracin de
xido ntrico que se encontr al comparar animales
enfermos y sanos. Se obtuvo un promedio de 70.32
27.74 M de xido ntrico para los animales sanos y
640.55 326.09 M para los animales enfermos.
Ambos valores son diferentes estadsticamente, t =
5.24; p<0.001.
224

Rev. Invest. Mar. 23(3):221-227, 2002

Tabla 3. Concentracin de xido ntrico en la hemolinfa de Litopenaeus schmitti despus de la inoculacin del
lipopolisacrido (LPS) y solucin de NaCl 0.9% a diferentes tiempos. Los valores son expresados como media (x)
desviacin estndar (DS).

SOLUCIN SALINA
TIEMPO (H)
2h
6h
8h
10h
12h
24h

X DS
50.73 2.84
91.79 13.32
83.27 13.79
81.20 12.83
64.05 5.30
58.50 5.30
F
P

n
2
3
6
4
9
9
8.94
0.00

2.10 mg / Kg
X DS
65.15 9.89
87.85 16.34
97.73 37.20
98.10 24.82
96.42 12.36
78.51 20.76

n
4
12
11
10
5
8
4.93
0.00

n=9
600

400

[N O

+ N O

]( M )

t=5.24
P<0.001

200

n=19
0

E n fe rm o s

X DS
71.67 12.70
94.25 21.25
118.10 26.02
122.11 30.36
101.19 22.26
81.90 17.62

ANOVA
n
4
12
13
7
4
5
3.81
0.00

F
2.61
0.36
3.09
3.65
3.08
8.00

p
0.14
0.70
0.06
0.04
0.10
0.00

Los hemocitos circulantes son capaces de llevar a cabo

una serie de procesos cruciales para la eliminacin de
las partculas extraas. Se ha informado que las clulas
del fluido hemal varan grandemente en cantidad y tipos
celulares en determinados crustceos. Estos cambios
estuvieron relacionados con el ciclo de vida, la dieta o el
estado nutricional, las enfermedades y el estrs por
contaminacin del medio (Smith y Johnston, 1992). Sin
embargo, el total de hemocitos no parece estar
influenciado por variables fisiolgicas, como se ha
estudiado en Penaeus monodon. Owens y O Neill
(1997) demostraron que el conteo de hemocitos totales
no est influenciado por la edad, el peso, longitud del
caparazn o fuente poblacional. En el presente trabajo
se confirma que el nmero de hemocitos circulantes
result independiente del peso del animal (tratado o no
tratado con LPS). Estos resultados parecen lgicos si se
tiene en cuenta que se seleccionaron los animales para
el estudio atendiendo a la etapa del ciclo de vida en el
que se encontraban, lo cual conllev a una cierta
homogeneizacin de la muestra. Segn Bachere et al.,
(1995) el conteo de hemocitos permite analizar los
efectos de factores del medio ambiente o condiciones
alimentarias que pueden inducir a estrs o a
deficiencias metablicas. Los resultados obtenidos en
este trabajo demuestran cmo el nmero de hemocitos
circulantes puede aumentar producto de la exposicin
de los animales a diferentes dosis de una endotoxina
bacteriana, y que este incremento fue mximo a las 10
horas despus del inicio de la estimulacin. Similar a
esto, Sequeira et al., (1996) encontraron que los
hemocitos circulantes del camarn Penaeus japonicus
pueden proliferar in vivo despus de estimularse con
una protena mitognica de linfocitos, producida por
Cndida albicans (p43) o despus de una estimulacin
infecciosa con LPS. La menor dosis empleada (2.11mg /
Kg) en este trabajo fue la que produjo el mayor aumento
en el nmero de hemocitos. La dosis de 4.48 mg / Kg
indujo menor proliferacin, posiblemente por haber

1000

800

4.36 mg / Kg

S anos

Fig. 5. Concentracin de xido ntrico en la hemolinfa

de los animales sanos y enfermos. Los valores son
expresados como media desviacin estndar. En la
leyenda se muestra los resultados estadsticos de la
prueba t.

La dosis letal media del LPS en Litopenaeus schmitti fue

de 3.78 mg LPS / Kg de peso del animal a las 24 horas
y a una temperatura de 28C. Este valor es inferior al
encontrado en las especies de camarn Palaemon
elegans, Crangon crangon y Squilla mantis, que
presentaron una toxicidad aguda a las 24 horas de 5.62
mg/g a 24C, 0.117 mg/g a 20C y 0.0155 mg/g a 24C,
respectivamente (Lorenzon et al., 1998). Estos
resultados se pueden deber a que estos tres camarones
se diferencian filogenticamente y en sus hbitats de la
especie Litopenaeus schmitti y sugieren un
comportamiento particular en la forma de enfrentarse al
patgeno. De los resultados obtenidos tambin se
evidencia que el estrs por la manipulacin no provoc
ningn efecto txico en los camarones ya que se obtuvo
el 100% de supervivencia en los controles.
225

Marrero et al.: Efecto del lps en el nmero de hemocitos y la produccin de xido ntrico en el camarn blanco (Litopenaeus schmitti).

provocado, adems de la mitosis de los hemocitos, su

diferenciacin a clula efectora e incluso su
desgranulacin y salida del ciclo mittico. El incremento
en el nmero de los hemocitos circulantes por la
presencia del LPS nos sugiere un mecanismo de
defensa que es caracterstico en este tipo de
invertebrados y que pudiera ser comparado con la
proliferacin clonal de los linfocitos de vertebrados
cuando el antgeno especfico est presente. En este
caso, el incremento de hemocitos trae como
consecuencia el incremento en el nmero de clulas
efectoras encargadas de eliminar el antgeno.

Otro aspecto a analizar es que se requiere de un tiempo

para activar los mecanismos involucrados en la
produccin de xido ntrico (Figura 4), lo que es
esperado si tenemos en cuenta que se trata de la
induccin de una enzima, proceso que comienza con la
transcripcin del ADN y contina con el procesamiento y
movilizacin al citoplasma del ARNm para la sntesis
proteica. Despus de este tiempo, los valores
disminuyen producto de la degradacin del ARNm, cuya
vida media en los organismos eucariticos es muy
corta. Este razonamiento justifica las diferencias en la
concentracin de xido ntrico para las dosis a las 10
horas. A las 24 horas, la contribucin del estrs a la
produccin de xido ntrico es mnima y el valor que se
encontr se debe fundamentalmente al efecto del LPS,
por lo que la diferencia con el control se hace
significativa. Probablemente, si mantuviramos este
experimento tiempos mayores coincidiran los valores
de xido ntrico en el control y los estimulados con LPS.
Esta consideracin puede sugerir que la dosis de LPS
de 2.10 mg / Kg, a pesar de no tener diferencias
significativas con el control, produce induccin de xido
ntrico.

El aumento significativo del nmero de hemocitos

encontrado a las 10 horas y la conducta exponencial
observada demuestra que el LPS es capaz de inducir a
los hemocitos a proliferar. El comportamiento
exponencial que muestra la proliferacin de las clulas
de la hemolinfa es lgico ya que una clula da lugar a
dos clulas y cada una repite el proceso de manera que
se obtiene un crecimiento exponencial en el tiempo. En
la literatura consultada no se encontraron referencias
sobre la multiplicacin de los hemocitos con respecto al
tiempo cuando son estimulados.

El hecho de que al incrementar la dosis del inductor no

se observe correspondencia entre los aumentos de los
dos parmetros estudiados (nmero de hemocitos y
produccin de xido ntrico) se puede explicar si
planteamos que el LPS, despus de determinada dosis,
estimula a los hemocitos ms hacia la diferenciacin
que hacia la proliferacin. Por tanto, la dosis de 4.36 mg
/ Kg de peso genera a las 10 horas una mayor
proporcin de clulas diferenciadas dispuestas para la
sntesis de xido ntrico sintasa que la dosis menor. No
se puede descartar que algunos hemocitos a la mayor
dosis desgranulen, ya que se trabaj por encima de la
dosis letal media.

En este trabajo se encontr que los hemocitos del

crustceo Litopenaeus schmitti frente al LPS son
capaces de producir xido ntrico. Esto se evidenci
tambin al comparar el nivel de xido ntrico entre
animales enfermos y sanos. Conte y Ottaviani (1995)
encontraron que los hemocitos del caracol de agua
dulce Viviparus ater presentan actividad de xido ntrico
sintasa demostrado por la formacin de citrulina [3H] y
de nitrito + nitrato utilizando como inductor un
lipopolisacrido. Esta fue la primera demostracin
bioqumica de la existencia de la actividad de xido
ntrico sintasa en los hemocitos de moluscos. Los
resultados
del
presente
trabajo,
demuestran
indirectamente la induccin de la enzima a una
determinada concentracin de LPS en el camarn
blanco, as como que esta induccin es dependiente
del tiempo.

La literatura consultada hasta el momento no refiere

ningn estudio de esta enzima o de la produccin de
xido ntrico sintasa en el camarn blanco Litopenaeus
schmitti, por lo que este trabajo sera el primero que se
informa sobre la actividad de esta enzima en los
hemocitos de esta especie. La existencia de estos dos
mecanismos: incremento del nmero de hemocitos e
induccin de la produccin del xido ntrico en
Litopenaeus schmitti en respuesta al LPS endotxico,
pone en evidencia la adaptabilidad de esta especie al
medio, ya que estos mecanismos contribuyen a que
pueda hacerle frente a las agresiones de los patgenos
de su hbitat

En los animales controles (inyectados con NaCl 0.9%)

hubo un aumento en la produccin de xido ntrico. Este
pudo deberse al estrs producido por la inyeccin y/o la
manipulacin de los animales que indujo la xido ntrico
sintasa. Sin embargo, en los animales tratados con LPS
se produjo un incremento mayor en la produccin de
xido ntrico que en el control (Tabla 3), lo que sugiere
que en este grupo la induccin se debi al efecto
simultneo del estrs y al del LPS. El no haber
encontrado diferencias significativas para la dosis de
2.10 mg / Kg de peso se puede explicar porque la
cantidad de xido ntrico inducida por el LPS no se
diferencia an de la producida por el estrs.

En este trabajo se informa que la dosis letal media

del LPS de Escherichia coli 055:B5 en camarn
blanco Litopenaeus schmitti fue a 28C y a las 24
horas de 3.78 mg / Kg de peso. Se demostr que
226

Rev. Invest. Mar. 23(3):221-227, 2002

kuruma prawns Penaeus japonicus Journal of Aquatic

Animal Health. 1: 238-242

el LPS provoca un incremento de los hemocitos

circulantes del camarn blanco Litopenaeus
schmitti y una variacin en la concentracin de
xido ntrico en la hemolinfa, la cual es
dependiente del tiempo. Los estudios futuros
deben estar encaminados a comprobar la
existencia de la enzima xido ntrico sintasa por
pruebas moleculares, reafirmar el posible
establecimiento del xido ntrico como marcador
del estado de salud de los camarones Litopenaeus
schmitti; valorar el empleo de dosis muy bajas de
esta endotoxina para estimular el sistema inmune
de esta especie y su utilizacin como inductor de la
enzima xido ntrico sintasa y del nmero de
hemocitos para la seleccin de familias ms aptas
para el cultivo en Litopenaeus schmitti.

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http://www.codemet.com/news.htm.

AGRADECIMIENTOS
Agradecemos a la direccin y colectivo de trabajadores
de la estacin de camaronicultura Yaguacam, por su
colaboracin en el desarrollo de este trabajo.

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Aceptado: 21 de julio del 2002

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