PRACTICA N° 6

RECONOCIMIENTO DE PRÓTIDOS Y ENZIMAS

INTRODUCCIÓN

Las proteínas son biomoléculas que cumplen con la mayoría y con diferentes
funciones en los seres vivos sobre todo al nivel estructural. Ellas son
denominadas alimentos plásticos o polímeros de aminoácidos debido a que están
formadas por monómeros (aminoácidos); estos aminoácidos se clasifican en
esenciales o no esenciales según si podemos o no sintetizarlos. Estos monómeros
se unen mediante enlaces peptídicos, que se forman por la deshidratación de los
aminoácidos en cuestión. Los enlaces peptídicos no se rompen con condiciones
que afectan la estructura tridimensional de las proteínas como la variación en la
temperatura, la presión, el pH, la radiación; estos pueden romperse de manera no
enzimática, al someter simultáneamente a la proteína a elevadas temperaturas y
condiciones ácidas extremas.

Las enzimas son proteínas que catalizan o aceleran una reacción; por lo tanto son
necesarias para acelerar las distintas reacciones que se producen en la célula.
Debido a su naturaleza proteica, una enzima perderá sus propiedades catalíticas
por la acción del calor, ácidos, bases, disolventes orgánicos, entre otras.

Entre las enzimas se tienen a la amilasa y la catalasa. La amilasa desdobla el

almidón a maltosa y glucosa. La catalasa descompone el agua oxigenada en agua
y oxígeno molecular. La catalasa se localiza principalmente en el hígado.

OBJETIVOS

 Verificar mediante pruebas bioquímicas la presencia de proteínas en ciertos

compuestos y determinar la actividad biológica de las enzimas

 Determinar la presencia de proteínas mediante el reactivo de Biuret

 Verificar la especificidad y desnaturalización de las proteínas mediante cambios

en T°C y pH óptimo

 Observar la actividad enzimática mediante la reacción degradación sustrato –

producto.

ASPECTOS TEÓRICOS
Entre las reacciones coloreadas específicas de las proteínas, que sirven por tanto
para su identificación, destaca la reacción del Biuret. Esta reacción la producen los
péptidos y las proteínas, pero no los aminoácidos ya que se debe a la presencia
del enlace peptídico CO-NH que se destruye al liberarse los aminoácidos.

El reactivo del Biuret lleva sulfato de Cobre (II) y sosa, y el Cu, en un medio
fuertemente alcalino, se coordina con los enlaces peptídicos formando un
complejo de color violeta (Biuret) cuya intensidad de color depende de la
concentración de proteínas.

MATERIALES

Solución de NaOH al 10% Bisturís

Peróxido de Hidrógeno Hielo
Ácido Nítrico 10% Huevo*
Tubos de ensayos Leche*
Mecheros Hígado*

Nota: Los materiales con * deben ser llevados por cada estudiante a la práctica.

METODOLOGÍA

1. IDENTIFICACION DE PROTEINAS

IDENTIFICACION DE PROTEINAS MEDIANTE TRATAMIENTO ACIDO

En un tubo de ensayo añadir 5 ml de leche, agregar cuidadosamente 5 a 10 gotas

de ácido nítrico agitar suavemente hasta la formación de grumos. Repetir el
mismo procedimiento con agua destilada.
IDENTIFICACION DE PROTEINAS MEDIANTE EL REACTIVO DE BIURET

En un tubo de ensayo agregar 1 ml de clara de huevo o leche, añadir de 3 a 5

gotas del reactivo Biuret, observar y anotar.

2. IDENTIFICACION DE ENZIMAS

PRUEBA PARA VERIFICAR LA PRESENCIA Y ACTIVIDAD DE LAS ENZIMAS

En un tubo de ensayo añadir un cubo de papa de 0,5 cm 2 adicionar 5 gotas de

H2O2 observe y anote.

En un segundo tubo de ensayo añadir un trozo de hígado de 0,5 cm 2 adicionar 5

gotas de H2O2 observe y anote.
PRUEBA PARA VERIFICAR LA ESPECIFICIDAD DE LAS ENZIMAS

ESPECIFICIDAD TÉRMICA

En un tubo de ensayo añadir un cubo de papa o hígado de 0,5 cm 2 (cortado en

láminas) agregar 1 ml de agua, calentar a 100°C y adicionar 1 ml de H 2O2 observe
y anote los resultados obtenidos.

En un tubo de ensayo añadir un cubo de papa o hígado de 0,5 cm2 (cortado en

láminas) agregar 1 ml de agua y enfriar a 0°C (hielo por 15 min) posteriormente
adicionar 1 ml de H2O2 observe y anote los resultados y diferencias entre el calor y
el frio.

CALOR
 FRIO

ESPECIFICIDAD AL pH

En tubo de ensayo añadir un cubo de papa o hígado de 0,5 cm 2 (cortado en

láminas), agregar 1 ml de HCl y adicionar 1 ml de H2O2 observe y anote los
resultados obtenidos.

En un tubo de ensayo añadir un cubo de papa o hígado de 0,5 cm 2 (cortado en

láminas), agregar 1 ml de NaOH y adicionar 1 ml de H2O2, observe y anote los
resultados obtenidos.

HCl H2O2

CUESTIONARIO

1. ¿Qué otras pruebas bioquímicas sirven para reconocimiento de proteínas?

2. ¿Qué le ocurre a la actividad biológica de las enzimas cuando estas son
sometidas a bajas temperaturas?

3. ¿Qué es la catalasa, que otro nombre recibe cual es el sustrato que degrada?

4. ¿Cuál es la reacción química que cataliza la catalasa?