Nombre: Johan Sebastián Rivera Camargo

Código: 1088317789

β- lactoglobulina
La beta lactoglobulina pertenece a las lipocalinas, una gran familia de proteínas cuya
molécula más representativa es la lactoglobulina bovina. Esta proteína hidrosoluble del
suero de la leche de vaca, que tiene una alta estabilidad a los pHs ácidos presentes en el
estómago, fue purificada y cristalizada por primera vez en el año 1934 presentando 162
residuos.

La Beta-lactoglobulina es la proteína de suero más abundante que componen

aproximadamente el 50 a 55% de las proteínas del suero. La beta-lactoglobulina es una
excelente fuente de aminoácidos de cadena ramificada (BCAA) y aminoácidos esenciales.

Posee propiedades más allá de las nutricionales. Tiene actividad biológica (péptido
bioactivo) como por ejemplo capacidad antihipertensiva, antimicrobiana, antioxidante,
anticarcenogénica, inmunomoduladora, opioide, hipocolesterolémica y otras acciones de
tipo metabólico.

No se ha detectado BLG en la leche de los roedores ( rata, raton y cobaya ), lagomorfos /

conejo) y camellos , encontrándose otra proteína sérica conocida con el nombre de WAP
(Whey Acidic Protein ). Esta proteína también esta presente en la leche del cerdo existiendo
la posibilidad de que tanto en los mamíferos donde solo hay WAP como en los que solo
hay BLG pueda existir una copia inactiva de estos genes.

La leche humana tampoco presenta BLG aunque si que se ha detectado en leche de algunos
primates como el Macaca fascicularis, Macaca mulata y el Papio hamadryas.

En el trabajo publicado en Acta Crystallographica se ha demostrado que la beta

lactoglobulina presente en la leche de reno, una proteína de 18 kilodaton de masa atómica,
es muy similar a la de vaca tal y como se ve en la siguiente imagen.

Figura 1 Diferencia estructura de la B-lactoglobulina de la leche de reno y de la vaca

Estructura y origen de la B-Lactoglobulina

En 1986 determinaron mediante técnicas cristalográficas la estructura terciaria de la

BLG bovina (figura 2), la cual mostraba una gran similitud con otra proteína conocida
como RBP (proteína transportadora de retinol en sangre). Ambas proteínas pertenecen
a la familia de las lipocalinas.

Figura 2. Estructura terciaria de la BLG (Kraulis, 1991)

Las lipocalinas junto a las avidinas y las proteínas transportadoras de ácidos

grasos (FABPs) pertenecen a una superfamilia de proteínas conocida como las
calicinas. Estas proteínas se caracterizan por poseer una estructura tridimensional
conservada que les confiere propiedades de unión a moléculas hidrofóbicas.

Extracción
Determinación de β-LG en alimentos infantiles con garantía de no contener β-LG y en
los mismos alimentos contaminados con diferentes productos lácteos y sometidos
posteriormente a distintos tratamientos térmicos

Proceso de la invención para extraer β-LG

El proceso de la invención consiste en extraer β-LG usando cloruro sódico en presencia de

un agente disruptor de puentes disulfuro y de un agente desnaturalizante y en la presencia
de una solución tampón.

Para llevar a cabo este proceso se introducen 4 g de muestra en un tubo de poliestireno de

50 mL. Se añaden 40 mL de PBS y tras un periodo de agitación de la mezcla anterior de 10
min a temperatura ambiente, se calienta durante 20 min a una temperatura de 40ºC,
centrifugándose a continuación a 2000 g durante 20 min a 25ºC, y posteriormente se
sumerge en un baño de hielo durante 15 min y se elimina la grasa manualmente.
Después se añaden 2 mL de tampón borato 2,5 mM de pH 8,3, 68 microlitros de 2-ME y
9,18·10−2 g de cloruro de guanidinio. Se cierra el recipiente y se agita a temperatura
ambiente durante 2 horas. Se toma una parte alícuota de 10 mL de esta mezcla y se añaden
30 mL de una solución cloruro sódico 0,15 M y se incuba con agitación a temperatura
ambiente durante una hora. Después la mezcla se centrifuga a 9000 g durante 35 min a
temperatura ambiente, recogiéndose el sobrenadante (que contiene la β-LG extraída) que se
filtra a través de papel de filtro Whatman 40 y de un filtro de jeringa de 0,45 µm con
membrana de baja absorción de proteínas. Finalmente, el contenido en β-LG se cuantifica
por una técnica de inmuno ensayo, por ej. de tipo ELISA.

La solución de PBS puede prepararse diluyendo 1:10 una solución de PBSx10. Para hacer
esto 60 mL de PBSx10 y 540 mL de agua MilliQ (resistividad 18MOhm.cm) se añaden en
una botella. La solución resultante tiene un pH entre 7,30 y 7,40. La solución PBSx10 se
puede preparar mediante la mezcla de los volúmenes necesarios de dos disoluciones A y B
hasta alcanzar un pH final de 6,84. La disolución A de pH 8,56 se prepara mediante la
mezcla de 17,79 g de Na2HPO4, 80,64 g de NaCl y 2,01 g de KCl en 1000 ml de agua
MilliQ. La disolución B de pH 3,58 mezclando 6,89 g de NaH2PO4, 40,32 g de NaCl y
1,01 g de KCl en 500 ml de agua MilliQ. La solución obtenida se almacena a temperatura
ambiente.

La solución de la invención formada por borato 2,5 mM pH 8,3, 2-ME y cloruro de

guanidinio se puede preparar pesando 2,29 g de cloruro de guanidinio y añadiendo 50 ml de
tampón borato. Se agita hasta la perfecta disolución del cloruro de guanidinio y finalmente
se añaden 1,7 ml de 2-ME.

La solución de tampón borato 2,5 mM a pH 8,3 se puede preparar disolviendo 9,53·10−2 g

de tetraborato sódico en 100 ml de agua MilliQ y ajustando el pH con ácido bórico 2,5 mM.

Figura 3 Resultados de la extracción

Funciones

Las lipocalinas poseen una amplísima actividad biológica pero su función aún no está
nada clara. Si bien muchas de sus actividades dependen de su capacidad de unir ligandos
lipófilos como el retinol o el ácido palmítico, otras tantas se relacionan con su acción sobre
los receptores y la formación de complejos multiproteicos. Además, la beta-lactoglobulina
es una excelente fuente de aminoácidos de cadena ramificada y aminoácidos esenciales lo
que ayuda a prevenir la degradación del glucógeno muscular y la reposición de glucógeno.
Por último, esta proteína del suero de la leche de muchos mamíferos estimula la fijación de
vitaminas liposolubles aumentando su biodisponibilidad.

Por otra parte, la BLG ha sido aislada de la leche de los rumiantes unida a diferentes
ácidos grasos y triglicéridos, pudiendo tener un papel importante en el transporte de los
lípidos de la leche. La composición de ácidos grasos que une la BLG es muy similar a
la que se encuentra en la fracción sérica de la leche, indicando que no hay una
selección de determinados ácidos grasos en la unión con la BLG (Pérez et al., 1989).
Estudios in vitro muestran como el ácido palmítico se une en la cavidad central de la
LG, de una forma similar a la unión del retinol con la RBP .

La estructura terciaria de los monómeros de la b -lactoglobulina está mantenida por dos

puentes disulfuro. También existe un grupo tiol libre, el correspondiente a la cisteína que
ocupa el lugar 121 en la secuencia. Este tiol es muy importante en la asociación de la b -
lactoglobulina con otras moléculas, especialmente con la k -caseina. Esta asociación tiene
una gran influencia en la coagulación de la leche inducida por la quimosina. Los puentes
disulfuro son también bastante reactivos, y dan lugar a reacciones de intercambio de
sulfidrilos. La b -lactoglobulina se desnaturaliza con relativa facilidad por el calor,
especialmente en ausencia de ligandos asociados.

Aplicación en la genética
la b-lactoglobulina es una de las proteínas con mayor porcentaje presente en la leche de
algunos mamíferos es caracterizado como un alérgeno debido a esto alrededor del 2 – 3%
de la población infantil siendo más vulnerables los niños menores a un año se ha realizado
varios estudios con esta proteína , se encontró una gran utilidad en la transgénesis.

Científicos neozelandeses crean vacas transgénicas capaces de producir leche especial

para alérgicos

La beta-lactoglobulina es una proteína presente en la leche de vaca a la que son alérgicos

cerca del 3 % de los niños menores de un año y estas vacas modificadas genéticamente
podrían producir leche libre de esta proteína.
Desde hace años, la leche de vaca se ha convertido en el sustituto ideal de la leche
materna pero las proteínas presentes en al leche animal son diferentes de las humanas lo
que puede desencadenar reacciones alérgicas e intolerancias.

La beta-lactoglobulina es una proteína presente en la leche de vaca a la que son alérgicos

entre un 2- 3 % de los niños menores de un año en los países desarrollados.

De las 30 proteínas que tiene la leche, las que suelen ser responsables de la mayoría de
alergias son la caseína y la beta-lactoglobulina. Como explica a EL MUNDO María José
Goicoetxea, del Departamento de Alergología e Inmunología Clínica de la Clínica
Universidad de Navarra, "no todos los niños son alérgicos a las mismas proteínas, por lo
que todos los intentos por modificar el alimento han fracasado".

La nueva técnica utilizada por los científicos de la Universidad de Waikato (Nueva

Zelanda), consistió en localizar 10 secuencias de microRNA- cadenas cortas de ácido
ribonucleico que median en la formación de proteínas- que bloqueaban la producción de
beta-lactoglobulina. El método fue testado con éxito en ratones.

Para probarlo en ganado bovino, los investigadores diseñaron mediante transferencia

nuclear un animal transgénico capaz de expresar las cadenas de microRNA identificadas
previamente. Después, estimularon hormonalmente al animal transgénico y obtuvieron lo
que esperaban: la leche producida por la vaca transgénica no contenía beta-lactoglobulina,
pero aumentaba en gran medida la caseína.

Bibliografía
https://es.wikipedia.org/wiki/Beta-lactoglobulina

http://www.tdx.cat/bitstream/handle/10803/5657/mbd1de1.pdf?sequence=1

http://milksci.unizar.es/bioquimica/temas/proteins/lactosuero.html

http://www.colvema.org/listado-noticia-detalle.asp?cod_noticia=4297

http://digital.csic.es/bitstream/10261/31942/1/2326569_B1.pdf