DETERMINACIÓN DE AMINOÁCIDOS TERMINALES CON GRUPO ALFA AMINO

LIBRE.
MÉTODO DE SANGER
INTRODUCCIÓN.

La determinación de la estructura primaria de una proteína suele denominarse secuenciación.

Existen varias maneras de determinar la secuencia de aminoácidos. El primero en lograr esto fue
Frederick Sanger, quién diseño un método, el cual consiste en el marcaje del amino terminal a través
del uso de DNFB. Este compuesto químico color amarillo reacciona con los grupos amino libres en
condiciones ligeramente básicas formando los dinitrofenil derivados (DNP-aa), también reaccionará
con los grupos imidazol, fenólicos y epsilonamino, por lo que se dará una dinitrofenilación en la
cadena lateral de la tirosina, histidina y lisina. Al hidrolizar el péptido o la proteína ya dinitrofenilada,
se da una ruptura total de los enlaces peptídicos lo que nos da como resultado un hidrolizado que
contendrá aminoácidos libres y DNP derivados que se conservan intactos, ya que su enlace es más
difícil de romper. Los DNP de aminoácidos terminales, a diferencia de los demás DNP y de los aa’s
libres, son no polares por lo que se pueden extraer muy fácilmente con un disolvente no polar. Estos
DNP son sometidos a cromatografía, y se determina al aminoácido amino terminal de la proteína en
comparación con otros DNP derivados.

OBJETIVOS.

Identificar el aminoácido alfa-amino terminal de las cadenas de la molécula de hemoglobina

mediante el método de Sanger.