HISTOLOGIA Y SUS

METODOS DE
ESTUDIO
Dirección de Calidad Educativa

PRESENTADO POR:
MG. TM. SHAROL Y. ALIAGA CORDOVA
PROPÓSITO

• Sintetiza la importancia de la
histología y métodos de estudio
usados para observar la célula
mediante el uso del microscopio.

• Fundamenta los pasos para

preparación de tejidos.

SHAROL ALIAGA CORDOVA

¿QUÉ ES HISTOLOGÍA?

• Estudia los tejidos de plantas y

animales, incluyendo estructura
microscópica de los tejidos sino
también la de la célula, órganos y
sistemas.

• La histología guarda una relación

directa con otras disciplinas,
biología celular, bioquímica,
fisiología, patología.

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LA CÉLULA

SHAROL ALIAGA CORDOVA

MICROSCOPIA

SHAROL ALIAGA CORDOVA

PREPARACIÓN DE TEJIDOS
TECNICAS HISTOLOGICAS

• Comprenden la preparación de tejidos para su

estudio microscópico, sometiendo el tejido por
examinar a una serie de procesos físicos-
químicos.

• El objetivo es que se pueda llegar a

conclusiones analíticas concretas y el anatomo-
patólogo pueda realizar un diagnóstico en la
determinación de la patología.

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 PROCESAMIENTO DE TEJIDOS
MX. Y SOLICITUD CORTES DE TEJIDO
MÉDICO DEL PACIENTE FIJADOS EN
FORMOL.

Recepción y
INGRESAR LA
rotulación de NO SE
FICHA A BASE
DE DATOS
la muestra, INFORMA
Mx. debidamente adecuado
rotulada, envasada
y fijada.
SI

MACROSCOPIA
INFORME DE OBTENCIÓN DE
ENTREGA DE LA MUESTRA CORTES DEL TEJIDO
RESULTADO
S
INICIO DEL PROCESO

MUESTRAS PUESTAS
EN EL PROCESADOR
FIJACIÓN DE TEJIDOS
DESHIDRATACION
ACLARAMIENTO
INFILTRACION INCLUSION EN PARAFINA Y
CONFECCION DE BLOQUES

MICROTOMIA, COLORACION,
RESULTADOS
ELABORACION Y MONTAJE Y SECADO
VALIDACION DEL
INFORME
LECTURA
 Las muestras pueden ser obtenidas por:

• Extendido
• Punción con trocar
• Autopsia

•Biopsia

Es un procedimiento diagnóstico que consiste en la extracción

de una muestra de tejido obtenida por diferentes métodos
especiales, para examinarla al microscopio.

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 PROCESAMIENTO DE TEJIDOS
TECNICAS HISTOLOGICAS

1. FIJACIÓN
• FORMOL AL 10 %
• Conservación selectiva de estructuras VELOCIDAD TIEMPO
DE DE
y componentes de las células y PENETRACIÓN INMERSIÓN
tejidos. Preserva los tejidos Tº
deteniendo la autólisis
pH
• Permite que los tejidos permanezcan
sin cambios luego de subsecuentes
tratamientos. DISTANCIA
DE
PENETRACIÓN

• El fijador, no debe encoger, ni

hinchar, ni disolver, ni distorsionar el SI LAS CÉLULAS NO FUERAN
tejido, debe destruir bacterias y FIJADAS, SE PERDERÍAN POR
hongos. SOLUCION SIMPLE, DIALISIS E
INGURGITACIÓN OSMOTICA.
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PROCESADOR DE TEJIDOS

100%
100 % XILOL

1h
1h 1h
96 % XILOL
1h
1h

1 h PARAFINA
90 % 1h 1
1h
1h
PARAFINA
80 % . 1h 2
.
PARAFINA
AGUA
1 3
FORMOL
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 2. DESHIDRATACIÓN
• Se realiza con alcoholes
• Debido a que una gran parte del tejido está constituida por agua, se
aplica una serie gradual de alcoholes (agente deshidratante) que van de
menor a mayor grado de concentración.

• Se aplica alcohol desde el 70%, 80%, 90%, 96% y alcohol al 100 % para
eliminar el agua.

• Debe ser gradual, porque si el agua sale muy rápido del tejido se deforma
y distorsiona.

SALIDA DEL
AGUA DE LA
CELULA

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 3. ACLARAMIENTO
• Permite que el alcohol de los tejidos sea reemplazado
por un líquido que disuelva la parafina, con la cual el
tejido va a ser impregnado.

• El tejido se torna transparente o claro en el xilol, esto

se debe a que cambia su índice de refracción.

LES
• Se usa el Xilol, por la inclusión rutinaria en parafina, por
su compatibilidad en muchos tipos y tamaños de
tejido.

XILOL: Es un disolvente,
líquidos incoloros e inflamable.

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4. INFILTRACIÓN

• Se coloca el tejido en un recipiente adecuado

con parafina fundida hasta que se infiltra por
completo.

• Lo recomendable es utilizar el tipo de parafina

según el tejido que se tenga.

PARAFINA:
 Sustancia sólida, ceroso, blanca, Inolora.
 Punto de fusión típico entre 47° C a 64° C.
 Es insoluble en agua, aunque si es soluble en eter,
benceno, y algunos esteres.

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 5. INCLUSIÓN
• Se impregnan los tejidos con un medio que llene todas las cavidades naturales, espacios
e intersticios tisulares y espacios intracelulares, que proporcione la consistencia firme
necesaria para hacer cortes bastante delgados sin provocar distorsión en el tejido.

• Ya que son especímenes pequeños se debe encerrar en un bloque o una masa de

material de inclusión, que permita manejar las muestras y cortar con el micrótomo.

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 INCLUSIÓN
• Son tres tipos de medios en los
cuales podemos incluir el tejido:

• Parafina
• Celoidina (ojos, embriones
grandes): lento y tedioso, difícil
corte.
• Gelatina (uso cuando debe
evitarse la deshidratación)

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Inclusión en parafina
6. SECCIÓN
• El micrótomo, permitirá obtener series ininterrumpidas de
cortes de grosor determinado y uniforme.
• Tipos:

DE MANO: DE DESLIZAMIENTO:
Corta tejido vegetal.
Cortes incluidos en
celoidína, corta secciones
entre 5 – 10 um.

DE ROTACIÓN O MINOT:
La cuchilla permanece fija y perpendicular
al portabloques, en posición vertical.
Cortes de gran presición entre 3 - 5 um.

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 MICROTOMIA:
Cortes y Secciones

CUCHILLAS PARA No deben tener amelladuras

EL MICROTOMO ni irregularidades.
Y se debe cortar con un
angulo de 5 -10º.

GROSOR DE LAS Lo usual es un grosor de 6

SECCIONES um, pero el grosor
apropiado es 4 um, esto
reduce la superposición de
los núcleos.

ORIENTACIÓN DEL Bloque correctamente

BLOQUE orientado, para que el corte
incluya toda la superficie del
tejido. Libres de
desgarramientos, líneas,
dobleces o distorsión
celular. SHAROL ALIAGA CORDOVA
 MICROTOMIA

REBANAMIENTO E“empapamiento” hace que el tejido

INICIAL y aumente de tamaño.
EMPAPAMIENTO

CREACIÓN DE Cuando se este creando una cinta,

CINTAS la rueda de mano debe hacerse girar
uniforma y lentamente. Si se hace
girar rápido, salen de distinto
grosor. Colocar la cinta en la
superficie del baño de flotación.

FLOTACIÓN Debe estar a una temperatura de

unos cuantos grados por debajo del
punto de fusión de la parafina. El uso
de agua destilada en la baño de agua
ayuda a eliminar burbujas de aire.

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7. MONTAJE
Los cortes de parafina se
montan en portaobjetos de
vidrio. Y luego se llevan a
eliminar la parafina. SHAROL ALIAGA CORDOVA
 8. TINCIÓN

• Los cortes de tejido se teñirán con colorantes de preferencia hidrosolubles.

• Va a permitir estudiar y conocer las características físicas de los tejidos, y las

relaciones entre las células que la constituyen.

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 TINCIÓN
Tipos de colorantes

1. Colorantes que diferencian los componentes

ácidos básicos de la célula.

2. Colorantes especializados que distinguen los

componentes fibrosos de la matriz extracelular

3. Sales metálicas que se precipitan en los tejidos y

forman depósitos de metales en ellos.

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 TINCIÓN
• Las tinciones mas utilizadas con las siguientes:

La hematoxilina-hemateína, tiñe Giemsa (col. +/-)

estructuras ácidas Hematoxilina
como el núcleo (color azul), y la – Eosina
eosina tiñe citoplasma y
estructuras extracelulares (color
rosa).

Tricrómicos Papanicolau
Fib. Col. Conj. 4
 XILOL XILOL

XILOL XILOL

ALCOHOL ALCOHOL
100% 100%

ALCOHOL ALCOHOL
100% 100%

ALCOHOL ALCOHOL
TINCIÓN: Proceso

95% 96%

ALCOHOL ALCOHOL

SHAROL ALIAGA CORDOVA

95% 96%

ALCOHOL
EOSINA 80%

AGUA AGUA
CARBONATADA DESTILADA
Azulamiento

AGUA HEMATOXILINA
ACIDA
CORRIENTE
AGUA

Diferenciación
9. MONTAJE, SECADO y LECTURA

• Si se examina al microscopio un corte teñido sin montar, es

difícil percibir los detalles por la gran diferencia que existe
entre la refracción de la luz en el portaobjetos, el tejido y el
aire. Además la dispersión de la luz es distinta.
• Es por esas razones que se utiliza como medio de montaje el
Bálsamo de Canadá.

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 PROCEDIMIENTOS AVANZADOS DE
OBSERVACIÓN
• HISTOQUIMICA
• INMUNOCITOQUIMICA
• MICROSCOPIA ELECTRONICA

SHAROL ALIAGA CORDOVA

Elaboré un flujograma sobre
la preparación de tejidos,
fundamentando sus distintas
etapas.

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