Actina y Citoesqueleto

Dr. Alejandro Claude

d e
lau
Instituto de Bioquímica
UACH

. C
e s o rA
Pr of ATP

ATP

PDB 2BTF G-actin PDB 2BTF G-actin

Arriba: Monómero de Actina en dos

representaciones diferentes.
Derecha: Caricatura simplificada.
ATP y Mg++ se unen en una cavidad
de la proteína. Actin monomer
with bound ATP

1
 ATP

PDB 2BTF G-actin

Actina puede hidrolizar su ATP ! ADP + Pi, liberando

fosfato.
El monómero de actina puede intercambiar su ADP
unido por ATP.
La conformación de la actina es diferente, dependiendo

d e
lau
si ATP o ADP ocupan el sitio de unión a nucleótidos.

. C
e s o rA
Pr of
Actina-G (actina globular),
unida a ATP, puede
polimerizar para formar actina G-actin-ATP
-F (filamentosa). polymerization
Actina-F puede hidrolizar F-actin-ATP
ATP ! ADP y liberar Pi.
Pi
ADP no se libera de los
filamentos porque la apertura F-actin-ADP
del sitio de unión está depolymerization
bloqueada.
G-actin-ADP
Intercambio ADP/ATP :
actina-G libera ADP y une ADP/ATP exchange
ATP, que está a una G-actin-ATP
concentración mayor en el
citosol.

2
 Los filamentos tienen polaridad. −
Los monómeros de actina se orientan con actin-ADP
el sitio activo hacia el mismo lado del
filamento, llamado extremo negativo.
Los monómeros de actina se orientan en
espiral alrededor del eje del filamento.
actin-ATP
− + +
myosin heads actin filament

La polaridad de los filamentos de actina puede ser

visualizada por “decorado” con cabezas globulares de
miosina. La unión de cabezas de miosina causa una
apariencia de puntas de flecha en microfotografías
d e
lau
electrónicas.

. C
e s o rA
Pr of − +
myosin heads actin filament

Filamentos cortos de actina fueron decorados con

cabezas de miosina. Después de eliminar el exceso de
miosina se aumentó la concentración de actina-G para
incrementar el grado de polimerización de actina.
El crecimiento de los filamentos por el extremo
positivo fue mayor que por el extremo negativo.
Las microfotografías electrónicas indican que las
puntas de las flechas apuntan al extremo negativo y el
lado ancho al extremo positivo.

3
 Actin treadmilling

Los filamentos de actina pueden experimentar un

movimiento de oruga, donde el largo del filamento
permanece relativamente constante, mientras se agregan
monómeros de actina por el extremo positivo y se
disocian por el negativo.
Este fenómeno ha sido observado con exposiciones

d e
lau
cortas con monómeros de actina marcada (pulso y caza).

. C
e s o rA
Pr of
capping
protein
actin filament

Proteínas terminales se unen a los extremos de los

filamentos de actina.
Según se unan a los extremos (+) o (−), pueden
estabilizar los filamentos o facilitar su disociación.

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 Dos toxinas han sido útiles para estudiar
experimentalmente los microfilamentos:
" Citocalasinas (de hongos) se unen al extremo (+) de
la actina-F y bloquean la adición de monómeros.
Despolimerización en el extremo (−) puede causar la
desaparición del filamento.
" Faloidina (de la seta Amanita phalloides) se une a
los costados de los filamentos de actina,
estabilizándolos e impidiendo su despolimerización
La faloidina marcada con un fluoróforo es utilizada
frecuentemente para visualizar filamentos de actina
por microscopía de fluorescencia.
d e
. C lau
e s o rA
Pr of
Los filamentos de actina se asocian en haces o redes a
través de uniones (cross-linking proteins). Mallas de actina
son importantes en la corteza celular (inmediatamente por
debajo de la membrana plasmática).
Los lamelipodios son proyecciones delgadas y anchas en
los extremos de células móviles. Son estructuras dinámicas
que contienen filamentos de actina que son continuamente
remodelados.
Los filamentos de actina también proveen rigidez en
estructuras largas y estrechas como filopodios y micro
vellosidades.
Las fibras de estrés se forman cuando la célula hace
contacto estable con un sustrato. Haces de actina con fibras
de miosina se extienden desde la superficie hacia el citosol

5
 En adhesiones cytosol
focales las fibras actin cross-linker
de estrés se unen a filament adapter
proteínas hetero- complex
diméricas de plasma
membrane
transmembrana integrin
(integrinas) a heterodimer
través de proteínas domain that binds
adaptadoras. matrix proteins Focal Adhesion
Las proteínas adaptadoras que unen filamentos de actina
con dominios citosólicos de integrinas incluyen α-actinina y
talina.
Los dominios extracelulares de la integrinas se unen a

d e
proteínas de adhesión de la matriz extracelular (e.g.,

lau
fibronectina).

. C
e s o rA
Pr of Cascadas de señalización regulan la formación de
adhesiones focales.
La quinasa asociada a integrina (ILK) juega un papel
en la unión de integrinas a filamentos de actina durante
la formación de adhesiones focales.
ILK se une al lípido de membrana fosfatidil-inositol-
3,4,5-trifosfato, y activa la Proteína Quinasa B, una
enzima involucrada en señalización de factores de
crecimiento.
Proteínas de la familia ERM, incluyendo ezrina,
radixina y moesina, unen filamentos de actina a la
membrana plasmática en ciertas células, al poseer sitios
de unión a actina y dominios de unión a regiones
citosólicas de proteínas integrales de la membrana
plasmática.

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 Varias proteínas
pueden interconectar
filamentos de actina en
haces de fibras o fibras
de estrés. La mayoría
de estas proteínas de
interconexión son bipolar links in filamin cross-links
diméricas o tienen dos filament bundles, in loose networks
e.g., α-actinin
sitios de unión a actina.
Cross-linking of actin filaments
Fascina, una proteína pequeña, forma haces de filamentos
paralelos y rígidos.
α-Actinina forma ensamblajes bipolares. Interconecta
filamentos de actina en fibras de estrés, lamelipodios,

d
filopodios y media la unión a integrinas de la membrana
e
lau
plasmática.

. C
e s o rA
Pr of
Villina interconecta
filamentos de actina
en bajo [Ca++].
A altos niveles de
[Ca++], villina
puede separar estos
bipolar links in filamin cross-links
filamentos y unirse filament bundles, in loose networks
como “cap”o e.g., α-actinin
proteina terminal. Cross-linking of actin filaments
Espectrina forma un complejo tetramérico. Es parte de una
red citoesquelética en la cara citosólica de la membrana
plasmática en eritrocitos y otras células.
Filamina es una proteína en forma de V. Interconecta los
filamentos de actina en redes sueltas que dan al citosol su
consistencia de gel.

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 actin filaments
filamin or other cross-linker
cross-linked actin network (gel)
Ca++-activated gelsolin severs &
caps (+) end of actin filaments.
smaller filament fragments (sol)

Gelsolina, es activada por Ca++ y corta un

filamento de actina, uniéndose al extremo (+),
bloqueando el re-crecimiento del filamento.
Gelsolina cataliza transiciones gel ! sol.
Gelsolina no se une a actina en ausencia de Ca++.
El calcio causa un cambio conformacional en
d e
lau
gelsolina que expone un sitio de unión a actina.

. C
e s o rA
Pr of actin-gelsolin
PDB 1DBO

Se muestra actina-G acomplejada con el extremo

carboxilo terminal de gelsolina, con Ca++ unido.
Gelsolina, que interactúa con actina filamentosa, se une
al costado del monómero de actina por el extremo
positivo.

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 Cofilina es un miembro de la familia
de proteínas llamadas factores
despolimerizantes de actina (ADF).
Cofilina se une a los costados de los −
filamentos de actina y distorsiona la
periodicidad helicoidal de la F- cofilin
actina. En ciertas condiciones, bound to
cofilina puede cortar filamentos de actin-ADP
actina.
Cofilina promueve la disociación
de G-actina-ADP (unida a cofilina)
del extremo (-) de los filamentos. actin-ATP
Cofilina se une a G-actina-ADP e +
inhibe el intercambio ADP/ATP
bloqueando la polimerización de los
d e
lau
filamentos de actina.

. C
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Pr of
La fosforilación de cofilina provoca su disociación
de la G-actina , la cual puede luego intercambiar ADP
por ATP y adicionarse al extremo (+) de F-actina.
La polimerización de la actina puede ser disparada
por cascadas de señales relacionadas con la
fosforilación de cofilina.

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 Timosina β4, una proteína pequeña de 5kDa forma un
complejo 1:1 con G-actina.
Timosina ha sido propuesta como un “amortiguador” de
la concentración de actina libre, manteniendo una
reserva de actina sin polimerizar.
Un aumento de la concentración de timosina β4, puede
causar la despolimerización de F-actina al disminuir la
concentración de G-actina libre.

d e
. C lau
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Pr of
Profilina juega un
papel en la regulación (−)
de la polimerización de
la actina.
Profilina forma un ATP-Sr
complejo 1:1 con G-
actina.
Profilina puede
secuestrar monómeros actin
de actina. (+)

Profilina se une opuesta profilin

al surco de unión de
nucleótidos, en el
extremo (+) de G- PDB file 2BTF
actina.

10
 La unión de profilina altera la
conformación de G-actina,
abriendo el sitio de unión para Actin
nucleótidos.
Esto activa el intercambio de Profilin
ADP por ATP.

Profilina aumenta la concentración local de G-actina-

ATP, la forma que es capaz de polimerizar :
La entrega localizada de G-actina-ATP por profilina
puede facilitar la polimerización de filamentos de actina.
Profilina también puede actuar como un transportador

e
de actina, donándola a los extremos (+) de los filamentos.

lau d
. C
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Pr of
PIP2, fosfatidil-
inositol-4,5- O H2C O
O

C R2

bisfosfato, es un R1 C O CH O
lípido de H2C O P O
membranas, cleavage by O− H
involucrado en Phospholipase C OH OPO32−
cascadas de H OH
H
OH
señalización. H H
PIP2
2−
phosphatidylinositol- H OPO3
4,5-bisphosphate
Quinasas de señalización convierten el fostatidil-inositol de
membranas a PIP2. Fosfolipasa C, activada por una de estas
cascadas, cataliza la hidrólisis de PIP2 en las moléculas de
señalización diacilglicerol e inositol-trifosfato (IP3).

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 phosphatidyl inositol (in membrane)

PIP2
Phospholipase C
(signal activated)

IP3 diacylglycerol

causes Ca++ activates

release from ER Protein Kinase C

Además de generar los segundos mensajeros diacil-

glicerol e IP3, la formación e hidrólisis de PIP2 regula el
citoesqueleto de actina.
d e
. C lau
e s o rA
Pr of
La formación e
hidrólisis regulada
Profilin release by PIP2 cleavage
plasma
membrane
de PIP2 afecta PIP2 DAG
profilina y la IP3
profilin
polimerización de
actina próxima a la
actin-
membrana profilin
plasmática. cytosol complex
PIP2 se une a profilina en la cara citosólica de la
membrana plasmática. Esto inhibe la interacción actina-
profilina.
La hidrólisis de PIP2 libera profilina, que puede unirse a
G-actina y activar el intercambio de ADP/ATP. El aumento
de G-actina-ATP estimula la polimerización de filamentos
de actina.

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 Gelsolina y cofilina también unen PIP2.
Esta unión a PIP2 inhibe a gelsolina y cofilina,
secuestrándolas cerca de la superficie celular. La
liberación regulada de estas proteínas controla la
formación de lamelipodios y el movimiento celular.
En espermios de erizo, profilina secuestra una gran
cantidad de actina entre el núcleo y el acrosoma (un
lisosoma modificado).
La activación del espermio, a través de cambios de pH
o de [PIP2], libera esta reserva de actina desde
profilina a los extremos (+) de filamentos de actina, lo
que impulsa el acrosoma hacia la membrana
plasmática del oocito.

d e
. C lau
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Pr of − +

Arp2/3 inicia la A rp2/3

polimerización de la actin-A D P
actina.
actin-A T P

El complejo Arp2/3 consiste en dos proteínas

emparentadas con actina, Arp2 y Arp3, y cinco proteínas
mas pequeñas.
Este complejo es activado por un factor de nucleación y se
une al costado de un filamento pre-existente. Esto genera
un sitio de ensamblaje de un nuevo filamento con una
estructura bifurcada.

13
 Los Lamelipodios contienen una
gran cantidad de filamentos
− +
bifurcados de actina.
Arp2/3 es abundante en Arp2/3
lamelipodios. El avance del
extremo móvil de la célula es actin-ADP
controlado por el crecimiento de actin-ATP
filamentos de actina en esta
estructura.
Las proteínas WASP/Scar activan el complejo Arp2/3.
WASP y Scar son miembros de una numerosa familia de
factores que promueven la nucleación de filamentos de
actina.
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. C lau
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Pr of
Las proteínas WASP/Scar tienen dominios
independientes para unir & activar Arp2/3 y para unir
factores de señalización.
Luego, WASP/Scar pueden determinar la región celular
donde la polimerización de actina puede ocurrir.
E.g., las proteínas WASP son activadas por unión de
proteínas del tipo Rho y/o por PIP2.
Rho representa una familia de pequeñas proteínas que
unen GTP y que regulan el citoesqueleto de actina.
Ejemplos:
" Rac activa la formación de lamelipodios.
" Cdc42 activa la formación de filopodios.
" Rho activa la formación de puntos de adhesión focal y
fibras de estrés.

14
 La forma activa de las proteínas del tipo Rho es la unida
a GTP.
Su activación ocurre a través de factores de intercambio
de GTP (GEFs) que se unen a Rho, desplazan el GDP y
favorecen la entrada de GTP.
Su inactivación requiere:
" Proteínas activadoras de GTPasa (GAPs) que facilitan
la hidrólisis de GTP por Rho.
" Inhibidores de disociación de nucleótidos de guanina
(GDIs) que unen Rho e impiden el intercambio de
GDP por GTP.
Los GEFs, GAPs y GDIs están a su vez sujetos a
regulación.
d e
. C lau
e s o rA
Pr of
Ejemplos específicos de efectos de proteínas del tipo de
Rho activadas:
Cdc42-GTP y Rac-GTP activan WASP, favoreciendo
la polimerización de actina.
Rho-GTP, a través de efectores secundarios (quinasas y
fosfatasas), activa la quinasa de la cadena liviana de
miosina, favoreciendo la interacción de miosina con
filamentos de actina durante la formación de fibras de
estrés.
Rho-GTP, Rac-GTP y Cdc42-GTP activan quinasas
involucradas en cascadas de señalización de factores de
crecimiento, causando la activación de factores de
crecimiento.

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 Algunos patógenos (e.g., Listeria & Shigella y el virus
vaccinia) utilizan la actina de la célula mesonera para
desplazarse en el interior de la célula infectada y para su
transmisión a otras células.
Las bacterias se mueven por crecimiento de colas de
actina.
En Listeria, una proteína bacterial de superficie
homologa a WASP, activa el complejo Arp2/3.
Shigella posee una proteína de superficie que une a
WASP.
Vaccinia tiene una proteína de superficie que al ser
fosforilada une a WASP.
d e
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Pr of

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