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Capitulo 17

Ciliados como Tetrahymena o flagelados como Chlamydomonas pueden moverse. Asimismo,


macrfagos y amebas poseen esta propiedad a pesar de carecer de apndices externos.
Las clulas tienen diferentes formas y organizacin. Las clulas epiteliales que conforman el
intestino forman una capa conocida como epithelium, cuja funcin es importar nutrientes
como glucosa desde el lumen intestinal hasta el dominio apical y exportar a travs del
dominio basolateral hacia el torrente sanguneo. Estos dominios presentan una barrera
fsica, que permite el correcto transporte. El dominio apical presenta proyecciones
denominados microvilli (incrementa la absorcin de nutrientes).

Los macrfagos que nos protegen de las infecciones mediante la fagocitosis responden ante
un gradiente qumico liberado por las bacterias, el cual los gua hasta el lugar de la infeccin.
Ante esta situacin, la estructura del macrfago sufre constantes reorganizaciones.
Las clulas presentan polaridad celular. La habilidad de crear regiones o dominios
especiales y la habilidad de dividirse (primero deben elegir un eje axis para dividirse y
luego organizar la maquinaria celular para segregar las clulas a lo largo de este eje).
Morfologa celular, organizacin interna y polaridad celular es mantenida a travs de un
sistema de protenas filamentosas (citoesqueleto). Para visualizar el citoesqueleto es
necesario solubilizar la membrana plasmtica y organelas con detergentes. El citoesqueleto
se extiende por toda la clula y se encuentra unida a la membrana plasmtica y organelas.
Es dinmico no esttico. Est compuesto de 3 sistemas de filamentos.

Microfilamentos
Subunidad
Funcin

Microtbulos

Actina

Organizacin de la

(morfologa).

intermedios
Varios

Tubulina

membrana
plasmtica

Se extiende a travs

Cell cortex

Gua para el

nuclear.

Mitotic Spindle

protenas motoras

duplicados en

(hidrolisis de ATP,

mitosis).

Funcin de barrera en
piel , cabellos y uas

(separar cromosomas

contrctil o cargo)

membrana

Soporte estructural
flagelos.

Soporte estructural a
la

desplazamiento de

miosina-> funcin

de la clula.

para cilios y

Filamentos

No

hay

motores

moleculares

Motores
moleculares :
Kinesina y dineina
transportan cargos
en microtbulos

Las clulas reciben seales de: Factores solubles que baan la clulas, clulas adyacentes o
matrix extracelular. Estas seales son detectadas por receptores celulares en la superficie
celular que activan las vas de transduccin de seal
citoesqueleto.

que regula la organizacin del

Muchas enfermedades de glbulos rojos afectan componentes del citoesqueleto que


soportan la membrana plasmtica

Microfilamentos y actina
Pueden formar estructuras diversas con diferentes funciones, con distintos grados de
organizacin:

Cell cortex: Debajo de la membrana plasmtica, provee soporte y organizacin.

Adherens Belt: Clulas epiteliales forman un anillo contrctil. Asociados con


adherens junctions. Proveer fuerza strength al epitelio.

Lamellipodim /Leading edge: Clulas migratorias. Algunas de ellas forman


proyecciones protuberantes llamadas filopodia.

Stress fibers: Microflilamentos contrctiles. Que se une al sustrato externo


mediante focal adhesions o focal contacts-

Endocytic vesicle: filamentos cortos de actina.

Contractile Ring : Citocinese

Actina
Proteinas abundantes. Conservadas intra e inter especies. Gen de actina en Ameba y
animales con similaridad de 80 %. Los mutiples genes de actina encontrados en
eucariotas modernos se origin de un unico gen bacteriano que evoluciono para tener un
papel en la sintesis de la pared celular bacteriana. Eucariotas unicelulares como levadura y
ameba poseen uno o dos genes de actina ancestrales. Humanos tienen 6 genes de actina,
plantas mas de 60 ( aunque muchos de ellos son pseudogenes no codificantes de proteinas).
Cada gen de actina funcional codifica diferentes isoformas de proteinas. Isoformas puden
ser clasificadas en 3 grupos: actina ( estructuras contractiles) , actina (cell cortex,
leading edge) , actina (stress fibers). En vertebrados 4 isoformas en celulas musculares y
2 en no musculares. Estas isoformas difieren en 25 de los 375 AA (93 % de identidad).
En clulas musculares constituye 10 % de peso total de protena celular.
musculares 1 5 %.

En clulas no

Concentracin citosolica de actina en clula no muscular: 0.1 0.4 mM. Estructuras como
microvilli (5 mM)

Monmeros de G actina
Monmero globular denominado G-actina y polmero filamentoso F- actina que forma una
estructura helical dextrogira ( 2 hebras helicales). En una misma hebra la subunidad contacta
con una subunidad hacia la derecha e izquierda , por otro lado, contacta con dos subunidades
de la otra hebra. Una unidad repetitiva consiste en 28 subunidades de actina ( una distancia
de 72 nm ), como son dos hebras: 14 sub. en cada hebra. La hendidura de unin al ATP est
orientado al (-) end. Imgenes tomadas mediante microscopio electrnico con acetato de
uranilo muestran dimetros de 7 9 nm. Cada molcula de actina posee ion Mg2+ en
conjunto con ATP o ADP.
Anlisis de cristalografa de rayos - X revela que el monmero es separado en dos lbulos
por una hendidura (Deep cleft) y 4 dominios (I IV). La regin N y C terminal se
encuentran en el dominio I.
. En la base de esa hendidura se encuentra el ATPase fold. Lugar donde ATP y Mg2+ se unen.
El piso de esta hendidura acta como bisagra que permite la flexibilidad de los lbulos

Cuando ATP o ADP esta unido a G actina, los nucletidos afectan su conformacin, sin los
nucletidos G actina denatura muy rpido.
Los cationes Mg2+ , K+ , Na+ inducen la polimerizacin de los monmeros de G- actina.
Proceso reversible. Se depolimeriza cuando la fuerza ionica disminuye en solucin.

F- actina tiene polaridad estructural y funcional

(+ end) : adicin de subunidades de actina. ( La hendidura de unin de ATP contacta


la subunidad vecina)

(- end): disociacin de subnidades de actina. La hendidura de unin de ATP se


encuentra expuesta al ambiente.

Sin resolucin atmica (rayos X) la polaridad no es detectable, sin embargo puede ser
demostrada mediante microscopia electrnica basado en la propiedad de la miosina de
unirse a los filamentos de actina. Para este experimento se emplea un exceso de miosina
S1, el cual es mezclado con los filamentos de actina y se permite la unin en un tiempo
determinado. La miosina se une con una inclinacin, con una orientacin particular,
aparentando una flecha que apunta hacia end (pointed end) , en cuanto , + end es
denominado barbed end.
*Miosina solo se une a filamentos de actina y no a microtubulos y/o filamentos
intermediarios.
- In Vitro Motility Myosin Assay

Miosina se dirige hacia el termino positivo (+ end ) del filamento de actina. Y desde que la
miosina se une a la lmina , el filamento de actina parece deslizarse hacia el terminal
negativo ( - end) (Microscopio de fluorescencia)

Dinamica de los filamentos de actina


Polarizacin ocurre en tres pasos:
La polarizacion de los filamentos de actina puede ser monitorada mendiante viscometria,
sedimentacion , espectroscopia de fluorescencia y microscopia de fluorescencia.
Cuando los filamentos de actina crecen lo suficiente para enrollarse, la viscosidad de la
solucin incrementa, que es medido como la disminucin de la tasa de flujo del
viscomentro. En el ensayo de sedimentacin mediante ultracentrigugacion ( 100,000 g x
30 min) es sedimentado F actina mas no G actina. Utilizando la tcnica de
espectroscopia de fluorescencia, G actina es marcada con un marcador fluorescente , el
espectro de fluorescencia del monmero de G- actina cambia cuando se polimeriza.
La microscopia de fluorescencia es til para el estudio de la dinmica o cintica de la
polimerizacin de la actina o para la caracterizacin de protenas que se unen a los
filamentos de actina para evaluar como afectan la dinmica o como o como polimerizan
los filamentos de actina.

Fase de nucleacin: Periodo Lag debido a la nucleacin, el cual puede ser


eliminado si se adiciona una pequea cantidad de ncleos de F-actina. Subunidades
de G- actina forman oligmero de 2 o 3 subunidades (ncleos). Cuando el oligmero
se encuentra formado por 3 subunidades acta como ncleo para la siguiente fase.

Fase de elongacin: El oligmero incrementa su longitud por la adicin de


monmeros de actina a ambos lados (-/+ end). El crecimiento de los filamentos de Factina, los monomros de G-actina disminuye hasta alcanzar un equilibrio.

Fase de Steady State (equilibrio): No hay cambios en la longitud de los


filamentos. Los trminos estn en equilibrio con los monmeros.

Cunta G actina es requerida?

Concentracion critica: Concentracion de los monomeros de G- actina en equilibrio con


los filamentos de actina. Debajo la CC filamentos no se forman. Arriba de la CC filamentos
se forman. Steady State permite la mistura de monomeros y filamentos. En el steady state la
concentracion de monomeros de actina se encuentra en CC..

Si se aade monomeros de G- Actina y ATP a filamentos de actina con miosina , los dos
terminos (end) de los filamentos se elongan a tasas diferentes. G-actina y ATP se unen con
mayor velocidad( 10 veces) en el terminal positivo (+ end) (12 M -1s-1) que en el (- end) (1.3
M-1s-1). Esta tasa de adicion es determinda en realidad por la concentracion de GActina y ATP libre.

En el positive end la tasa de asociacion y disociacion siempre es mayor (asociacin


12 M-1s-1 comparado 1.3 M-1s-1; disociacion 1.4 s-1 comparado a los 0.8 s -1). La
disociacion no depende de la concentracion de G-actina y ATP

Concentracin critica C+C : Tasa de adicin es igual a la tasa de perdida y no hay


crecimiento neto en esa terminacin. C+C = 12 M-1s-1 /1.4 M-1s-1= 0.12 M para el
extremo positivo. Valores mayores a esta concentracion el filamento crece, em
cuanto valores debajo de la concentracion , el filamento se reduce (depolimeriza) . En
el extremo + la concentracin critica es menor, en cuanto la polimierizacion,
depolimerizacion es mayor.

En el trmino negativo ( - end). La tasa de adicin es menor 1.3 M-1s-1 y la tasa de


disociacion es similar 0.8 M-1s-1. C-C = 0.8 M-1s-1 /1.3 M-1s-1= 0.6 M. Concentracion
critica mayor en comparacin al extremo positivo.

Siempre voy a tener valores de actina mayores a la concentracion critica, por eso se
favorece la adicion de monomeros de G-actina en el extremo positivo.

Treadmilling : intercambio rotatorio . Extremo positivo crece , extremo negativo


depolimeriza. Favorecido por la hidrolisis de ATP.

Cuando ATP G actina se une en el extremo + . ATP es hidrolizado a ADP y Pi. El


fosfato inorgnico es liberado de las subunidades del filamento. Filamento Asimetrico
: ATP- G actina (+ end) ; ADP + Pi + G actina, ADP + G actina ( - end)

Treadmilling es acelerado por profilina y cofilina

Profilina es una protena que se une al monmero de actina (ADP actin) en el


lado contrario al lugar del nucletido. Cuando la profilina se une al G actina - ADP
permite la perdida de ADP, que es reemplazado por ATP. Formacin del
complejo ATP Profilina - actina (monmero). Este complejo no se puede unir
al extremo negativo porque el lugar de unin se encuentra bloqueado, sin
embargo, se puede unir eficientemente al extremo positivo, la profilina en este
caso se disocia luego de la unin del monmero al polmero. La profilina no
incrementa la tasa de treadmilling, simplemente fornece un recurso de
ATP G actina. Profilina se une a secuencias ricas en AA prolina.

Cofilina es una protena involucrada en el actin treadmilling. Se une


especficamente al filamento de F actina ( subunidades que poseen ADP,
generalmente en el extremo negativo). Cofilina se une en dos monmeros del
polmero de actina e induce un pequeo cambio en el enrollamiento del
filamento. Desestabiliza el filamento e induce su ruptura en fragmentos. Cofilina
genera ms terminaciones negativas. La liberacin de subnunidades ADP-actina
son luego procesadas por profilina como descrito anteriormente.

Profilina y Cofilina son regulados via seales de transduccin.

Timosina 4 provee un reservorio de actina para polimerizacin


Por qu no toda la actina libre es polimerizada?
-

Porque existen protenas que secuestran los monmeros, siendo uno de ellos
timosina 4 ( Se une a monmeros de G actina + ATP, inhibiendo su adicin al
filamento. Timosina 4 puede ser muy til en las plaquetas que poseen mucha
actina. Es un buffer para monmeros de actina no polimerizada.

Capping proteins bloquea el ensamblaje y desamblaje de


de filamentos de actina

terminaciones

Capping proteins regulan el treadmilling que se unen a las terminaciones (- / + end ) de


los filamentos. Ayuda a prevenir que los filamentos de actina continen creciendo y
depolimerizandose de manera descontrolada.

CapZ: gran afinidad (+ end) Bloquea este terminal. Inhibe el ensamblaje. 2 mecanismos
regulan la actividad de CapZ. La actividad de CapZ es inhibido por PI (4,5)P 2 localizado en
la membrana plasmtica.
Otras protenas que bloquean el termino +, son las protenas de la familia gelsolin
(regulados por un incremento en los niveles de ion Ca 2+. Cuando el Ca2+ se une, gelsolin
sufre un cambio conformacional que le permite unirse al filamento de actina e insertarse
entre las subunidades de la hebra, rompiendo el filamento. Permanece unido en el
terminal positivo ( + end) , generando un nuevo extremo positivo que se despolimeriza.

Algunas protenas se unen a los filamentos de actina que convierten la solucin de Factina en gel. Si gelsolin es adicionado a tal gel y el nivel de Ca2+ es elevado , convierte
el estado de gel en liquidoGelsolin = Habilidad de convertir gel en lquido.

Tropomodulina: se une al negative end . Inhibe ensamblaje y desensamblaje. Presente


en clulas donde los filamentos de actina necesitan gran estabilidad (Filamentos cortos
de actina en el cortex de clulas rojas y filamentos de actina en el msculo. En ambos
casos tropomodulina trabaja con tropomiosina ( se une a ella)

Mecanismos de ensamblaje de F - actina

Un paso limitante en la polimerizacin es la formacin del ncleo.

Hay dos clases de actin nucleating proteins : La familia de protenas forminas y el


complejo Arp 2 /3 , regulados por seales de transduccin.

Formina : Ensamblaje de Filamentos largos de actina no ramificados. Ejemplos


encontrados en stress fibers, filopodias y anillo contrctil durante la citocinesis. 7
diferentes clases en vertebrados. 2 dominios adyacentes en comn denominados
dominios FH1 y FH2 ( formin homology 1 y 2 ). Dos dominios FH2 de dos monmeros
individuales forman un complejo. Este complejo une dos subunidades de actina (forma
ncleo). Terminal positivo (positive end) hacia la formina.

El dominio FH1 adjacente al dominio FH2, tambien contribuye con el crecimiento del
filamento de actina. Este dominio es rico en prolina , que son sitios de union para
muchas moleculas de profilina. El dominio FH1 incrementa la concentracion local de
profilina ATP- G- actina, recurso que sirve para adicionar monomeros al filamento en
crecimiento , formando filamentos largos con formina en el extremo +. Formina inhibe
proteinas como CapZ.
Algunas forminas existen en una conformacion de plegamiento inactivo como resultado
de la union de la mitad de la proteina con la region C- terminal. Las forminas son
activadas por la proteina de unida a la menbrana Rho-GTP (Ras related small GTPase,
que fluctua entre su forma inactiva Rho-GDP y activa Rho GTP)

Arp 2 /3: descubierto en Listeria. ramificadora. 7 subunidades , dos de las cuales son
ARP ( actin related proteins). Encontrado en eucariotas (plantas, animales, levadura ,
clulas animales). Nucleador pobre por si solo, para comenzar el ensamblaje de actina
ramificada Arp 2/3 necesita ser activado por nucleation promoting factor (NPFs). Hay
diferentes tipos de NPFs , la principal familia es caracterizada por la presencia de una
regin denominada WCA (WH2, connector, acidic)

NPFs regulan en parte el complejo ARP 2/3


NPFs se une a la subnunidad de actina a traves del dominio WCA y activan el complejo
ARP 2/3 , atravs de la interaccion con su dominio acidico. En la forma inactiva los
polipeptidos Arp2 y Arp3 , se encuentran en una configuracion erronea. Una vez activo ,
el complejo se une en un filamente de actina pre- existente. La subunidad de actina
llevada por el complejo e inicia el emsamblaje creando un nuevo extremo +, el cual crece
mientres exista ATP disponible o hasta que sea bloqueada por proteinas como CapZ. El
angulo entre el filamento nuevo y antiguo es de 70 ( angulo observado en filamentos
ramificados en el leading edge de celulas mobiles )

Un NPFs es denominado WASp , es defectuoso en pacientes con el sindome de Wiskott


Aldrich , asociado al cromosoma X y caracterizado por eczema, bajo conteo plaquetario
y deficiencia inmune. WASp existe en esa deficiencia en una conformacion inactiva, asi
que el dominio WCA no se encuentra disponible. Un mecanismo para activar la proteina
involucra a la proteina Cdc42 ( Ras related GTP protein) en el que GTP se une y abre
WASp,haciendo que el dominio acidico se encuentre disponible, asi como el dominio de
union a la actina.

Spire. Animal. 4 dominios en tndem WH2, pueden unir 4 monomeros de actina

Movimiento intracelular es impulsado por polimerizacin de actina

Listeria causa sntomas gastrointestinales. Se divide en clulas animales. Para moverse


polimeriza la actina como la cola de un cometa , y cuando corre, la empuja a la clula
adyacente para infectarla.

Listeria tiene en su superficie una proteina denominada ActA que mimetiza a NPF. ActA
se une a una proteina conocida como VASP, que posee tres propiedades importantes. A)
VASP tiene una region rica en prolina que se puede unir a profilina, incrementando ATP-G
actin para ser ensamblados por ARP 2/3. B) Se mantiene en el termino del nuevo filamento.
C) Protege el extremo positivo del capping por CapZ.
Los filamentos se encuentran enbebidos en un citoesqueleto estacionario. Listeria empujada
hacia adelante. Para su movimentacion necesita 4 proteinas.

ATP G actina

Complejo ARP 2 /3

CapZ : elongamiento de filamentos no contribuye al movimiento

Cofilina . Acelerar la depolimerizacion del termino negativo del filamento de actina,


regenerando actina libre.

Microfilamentos y endocitosis

Endocitosis: Internalizan moleculas, particulas y fluidos. Receptor mediated o fluid


phase endocitois ( moleculas o liquidos). Particulas largas (fagocitosis)

Endocitosis recluta NPFs . Vesiculas endociticas invaginan y se desprenden de las


membranas. Polimerizacion de actina por ARP 2/3.
Fagoctitosis por celulas blancas de la sangre. Cada anticuerpo tiene una region de
reconocimiento denominado dominio Fab que se une especificamente al antigeno.
Como los anticuerpos cubren la bacteria. Un segundo dominio del anticuerpo conocido como
dominio Fc se encuentraexpuesto. Esto se denomina opzonizacion. La celula blanca tiene
receptores para Fc, que reconoce los anticuerpos en las bacterias y engole al patogeno. Una
seal indica ensamblar microfilamentos con proteina motora miosina. Una vez internalizada
se forma el fagosoma que se une a lisosoma donde el patogeno es degradado.

Toxinas

Citocalisina D : promueve depolimerizacion de actina. Alcaloide fngico. Se une al


terminal + de F actina. Bloquea la adicin de subunidades. Afecta el pool de
monmeros.

Latranculina : promueve depolimerizacion de actina. Esponja. Se une secuestra


G actina y previene la polimerizacin. Afecta el pool de monmeros.

JaplasKinolide: Afecta el pool de filamentos. Esponja. Incrementa nucleacin.


Estabiliza dimeros de actina , disminuyendo la concentracin critica.

Phallodine: Afecta el pool de filamentos. Hongo Amanita phalloides angel of


death. Se une en la interface entre las subunidades de F actina. Previene
depolimerizacion aun cuando la Cc este por debajo. Falodina marcada con
fluorescencia ( solo se une a F actina) se usa para microscopia de luz.

Organizacin de actina
Para organizar la actina, las protenas entrecruzadoras ( cross linking) deben tener dos
lugares de unin a la F actina. Fimbrin : protena localizada en el microvilli ( construye
bundles de filamentos todos con la misma polaridad)
Espectrina: tetrmero con dos lugares de unin a F actina, expande el espacio entre los
filamentos de actina y forma una red debajo de la membrana plasmtica.
Filamina: regin flexible entre los dos lugares de unin de actina , funciona como una hoja
que estabiliza el cruzamiento entre filamentos como una red. ( leading edge de clulas
mviles)
Otras deben de tener un lugar de unin a la F - actina , con dos cadenas asociadas para
formar dimeros que traen consigo dos lugares de unin de actina. Estas protenas de
cruzamiento dimerico se pueden ensamblar para organizar un rigid rod , conectando los dos
lugares de unin como ocurre con la actinina. Como fimbrina, actinina organiza los
filamentos de actina en paralelo, pero lejos de fimbrina.
El complejo Arp2/3 tambuen es una importante protena entrecruzadora , se une al termino
negativo de un filamento.

Proteinas adaptadoras que unen filamentos a membranas


Los filamentos de actina son abundantes en el cortex celular debajo de la membrana
plasmatica. Ejm: Eritrocito (hemoglobina transporta oxigeno desde los pulmones a los tejidos
y CO2 es traido de vuelta a los pulmones. Eritrocitos poseen microfilamentos basado en
filamentos de actina de 14 subunidades estabilizado en ambos lados por tropomiosina y
tropomodulina en el terminal negativo. Estos filamentos sirven como hub para unir 6
moleculas de espectrina flexible. ( Esta red da flexibillidad y fuerza al eritrocito).

Espectrina se une a las protenas de membrana a travs de dos mecanismos:

Proteina ankrina : Se une al transportador de bicarbonato ( o protena


transmembrana denominada Band 3)

A travs de 1 espectrina y la protena de unin a la F actina Band 4.1 , la cual se


une a otra protena denominada Glycophorina C

Un tipo de unin ankrina espectrina asocia Na+K- ATPase al citoesqueleto de


actina en la membrana basolateral de clulas epiteliales.

Defectos genticos en el citoesqueleto de clulas rojas se pueden romper fcilmente dando


lugar a anemia esferocitica hereditaria ( clulas redondas, de vida corta). En humanos,
pacientes con mutaciones en espectrina, band 4.1 y ankrina pueden causar esta enfermedad.
Distrofia muscular de Duchenne. Afecta a la protena distrofina. Gen localizado en el
cromosoma x , mayor prevalencia en hombres. Distrofina es una protena modular, cuya
funcin es asocia la actina cortical de las clulas musculares a las protenas de membrana
que se asocian a la matrix extracelular. Distrofina, dominio N- terminal de unin a la
actina seguido de repeticiones spectrinlike ( tipo espectrina) y un dominio terminal que
une el complejo distroglicano transmembrana a la protena laminina de la matriz extracelular.
Ruptura de microfibrillas.
Orientacin de microfilamentos en microvilli. Unin de microfilamentos con fragmentos
S1 de miosina demuestra que el terminal positivo se encuentra en el tip. Cuando actina
fluorescente es aadida a la clula, es incorporado al tip del microvillus ( mostrando que
no solo el termino + se encuentra ah). No se sabe como los filamentos de actina son
unidos en el microvillus, pero la formina es una candidata.
La orientacin del terminal + de los filamentos de actina respecto a la membrana plasmtica
es encontrada universalmente( microvilli, leading edge de clulas mviles)
Unin lateral a la membrana plasmtica son provistos en parte por ezrin, radixin, moesin
(ERM). Estas protenas se encuentran plegadas (inactivas). Son activadas por fosforilacin
en respuesta a una seal externa. En la membrana plasmtica, protenas ERM pueden
asociar los filamentos de actina directa o indirectamente a travs de protenas scaffolding al
dominio citoplasmtico de protenas de membrana.

PROTEINAS MOTORAS

Miosina II (aisladas de clulas musculares esquelticas). Convierten la energa


liberada de la hidrolisis de ATP en trabajo mecnico, adems de cumplir funciones
diversas. Ejm: miosina II ( contraccin muscular) miosina V (transportan vesculas
cargo a lo largo de los filamentos de actina)

Miosina tienen dominios de cabeza, cuella y cola con distintas funciones


Miosina : filamentos bipolares. Miosina se disuelve en solucin de ATP con gran concentracin
de sales. Complejo proteico de 6 polipptidos.

2 subunidades : cadenas pesadas , alto peso molecular. Dominio Cabeza, Dominio


cuello flexible, Dominio cola.

4 subunidades conocidas como cadenas ligeras. 2 tipos de cadenas ligeras :


essential light chain , regulatory light chain. Una cadena de cada tipo se asocia
con la regin del cuello de cada cadena pesada.

La cadena pesada y los dos tipos de cadena ligera son codificadas por 3 genes
diferentes.

Miosina II tiene actividad ATPase. Miosina es tratada con la proteasa quimiotripsina


produciendo dos fragmentos , uno llamado meromiosina pesada (HMN, parte de ) y
el otro meromiosina ligera (LMN). La meromiosina pesada es tradada con papana,
produciendo subfragmento 1 (S1) y subfragmento 2 (S2). La actividad ATPase reside
en el fragmento S1, constituyendo tambin el lugar de unin a los filamentos de
actina. Actividad ATPase incrementada por la actividad de los filamentos de
actina.

El fragmento S1 de miosina II consiste en los dominios cabeza y cuello con las


cadenas ligeras asociadas. Mientras que S2 Y LMN constituyen el dominio cola.

Cunta miosina es necesaria para la actividad motora?


In vitro motility assay. The sliding filament assay. Molculas de miosina se
unen a un coverslip donde se aaden filament de actina marcados . Como las
molculas de miosina se encuentran unidas al cubreobjetos ellas no se pueden
mover, en consecuencia cualquier interaccin causada por las cabezas de miosina
con los filamentos de actina fuerza a los filamentos desplazarse relativo a la
miosina, siempre y cuando el ATP este presente. Con este experimento se
demuestra que las cabezas S1 de miosina II es suficiente para mover los filamentos
de actina. Este movimiento es causado por la unin de los fragmentos S1 a la lmina,
tratando de mover hacia el termino positivo del filamento, haciendo que el filamento
se mueve con el (-) end leading.

La longitud del dominio del cuello y nmero y tipo de cadenas ligeras dan lugar a
diferentes clases de miosinas.

El dominio cola no contribuye con la motilidad, ah se unen diferentes cargos.

Existen 40 genes de miosina en el genoma humano, 9 en Drosophila y 5 en levadura. Analisis


del dominio cabeza (head domain) sugiere 20 clases distintas de miosinas.
-

Miosina I : en humanos , 8 genes codifican cadenas pesadas de miosina I. numero


variable de cadena ligera asociada a la regin del cuello. Es la nica en que la dos
cadenas pesadas no se encuentran asociadas a travs de su dominio cola, con un
nico dominio de cabeza. Funciones: conectar filamentos de actina a la membrana,
endocitosis.

Miosina II : en humanos , 14 genes codifican cadenas pesadas de miosina II. nica


que se organiza en Filamentos bipolares con orientaciones opuestas. nica clase
involucrada en funciones contrctiles. Dominio de cuello corto.

Miosina V : en humanos , 3 genes codifican cadenas pesadas de miosina V. 2


cadenas pesadas, regiones de cuello largo con 6 cadenas ligeras, y dominio de cola
que se dimerizan y terminan en dominios que se unen a organelas especficas que
son transportadas. La longitud del cuello afecta la tasa del movimiento de miosina.

La miosina se hacia el termino positivo del filamento de actina , con la


excepcin de miosina VI encontrado en animales ( motilidad hacia el termino
negativo) . Funcion: contribuye con endocitosis, moviendo vesculas endociticas a lo
largo de los filamentos de actina lejos de la membrana plasmtica. Actina asociada a
membrana, tienen sus trminos positivos a la membrana.

CAMBIO CONFORMACIONAL EN LAS CABEZAS DE MIOSINA


En la ausencia de ATP, la cabeza de miosina se une fuerte a los filamentos de actina. Cuando
ATP se une, la afinidad de la miosina por F- actina se reduce, liberando la actina. La miosina,
hidrolizan el ATP, y los productos de la hidrolisis: ADP y Pi permanecen unidos.
La energa provista por la hidrolisis de ATP, induce un cambio conformacional en el
dominio cabeza, que resulta en el dominio cabeza rotando respecto al cuello. (Conocido
como cocked position). En la ausencia de F- actina, liberacin de Pi es lenta ( la ms lenta del
ciclo ATPase). Unin de la miosina a la F actina induce un movimiento de la cabeza y
liberacin de Pi ( Power stroke). La cabeza permanece unida hasta que el ADP se libera y ATP
nuevo se une a la cabeza, liberndolo del filamento.
Cmo la hidrolisis del ATP se convierten en fuerza?

La unin e hidrolisis del nucletido causa un pequeo cambio conformacional en el dominio


de cabeza. Este pequeo movimiento es amplificado por una regin en la base de la cabeza,
actuando como un punto de apoyo (fulcrum) causando la rotacin del cuello. La rotacin es
amplificada por un brazo de palanca que constituye el dominio cuello, asi que el filamento
se mueve unos pocos nanmetros. La distancia de una cabeza de miosina se mueve a lo
largo de la actina durante la hidrolisis de ATP. (Miosina step size, el cual debe ser
proporcional a la longitud del dominio cuello)

Las cabezas de miosina efectuan pasos discretos a lo largo de los filamentos de


actina
Optical traps para medir la fuerza generado por una molecula de miosina. Miosina es
inmobilizada en beads a baja densidad. El filamento de actina , mantiene unido dos optical
traps. Cuando ATP es adicionado , la miosina pulls on the actin filament. Usando un
mecanismo de feedback controlado por computadora, se puede medir la distancia de pulled y
la fuerza y direccion del movimiento .
Miosina II gasta 10 % del ciclo de ATPase en contacto con F- actina ( duty ratio 10 percent).
Miosina avanza distancias de 8 nm. 3 5 piconewtons de fuerza
Miosina V avanza 36 nm de longitud ( longer neck domain ). El motor se mueve sin liberarse
de la actina ( processively, esto es porque ciclo ATPase tienen un mayor duty ratio > 70 %,
disminuyendo la tasa de liberacion de ADP.

Miosina V se desplaza en el filamento de actina


2 modelos: 1 modelo propone que las dos cabezas caminan por el filamento.
El otro modelo (modelo de oruga inchworm) , las cabezas caminan paso a paso, una
cabeza toma un paso, la segunda cabeza es tirado detrs .

Cmo distinguir entre estos modelos?


En el modelo de la oruga, cada cabeza toma un paso de 36 nm, mientras que en el modelo
de caminata walking model, toma 72 nm.Cientificos asocian marcadores fluorescentes a
una region del cuello de miosina V y observaron que toman pasos de 72 nm. Porque este
paso de miosina V es tan largo ? Si compara el paso de 36 nm , observamos que es el
mismo en la longitud entre helices repetidas.

Miosina Movimientos

Miosina II: short duty cycle. Contraccion .(celulas lisas smooth, stress fibers, anillo
contractil durante citocinesis)

Miosina V: Long duty cycle

Contraccin rapida y repetitiva. Musculo celular esqueletico: cilindrico , largo (1 -40 um) ,
ancho (10-50 um), multinucleado (100 nucleos) . Dentro de cada celula muscular hay
miofibrillas, que se encuentan constituidas por sarcomeros. Un sarcomero , 2 um de
longitud en descanso, con reduccion de 70% durante contraccion.
Micoscopia electronica y amalisis bioquimicos muestran que cada sarcomero contiene 2 tipos
de filamentos : thick filaments (miosina II) y thin filaments ( actina y proteinas asociadas)
Thick filaments : compuesto por filamentos de miosina II bipolar, en el cual cabezas de
cada mitad del filamento tiene orientaciones opuestas.
Los filamentos de actina delgados (thin) se encuentran organizados con sus extremos
positivos embebidos en una estructura densa conocida como disco Z. Los dos comjuntos
de filamentos de actina en un sarcomero tienen orientaciones opuestas. Como un musculo
se contrae? Interaccion entre una cabeza de miosina y un filamento delgao de actina.
Interacciones ciclicas denominadas Cross Bridge cycle. La hidrolisis de ATP esta acoplada con
el movimiento de una cabeza de miosina hacia el disco Z, que corresponde al termino
positivo del filamento de actina. Ya que este filamento es bipolar, las cabezas de miosina en
las terminaciones opuestas atrae los filamentos delgados hacia el cento de un filamento
(thick) y al centro del sarcomero. Contraccion de un musculo intacto resulta de la actividad

de cientos de cabezas de miosina en un unico filamento thick, amplificado por cientos de


filamentos thin y thick en un sarcomero y miles de sarcomeros en una fibra muscular.

Celula muscular del corazon son celulas mono o binucleadas. En cada celula, las
terminaciones de los sarcomeros se insertan en estructuras de la membrana
plasmtica denominadas discos intercalares. Celulas musculares no son
reemplazados en respuesta al dao. Cardiomiopatia hipertrofica
(engrosamiento de la pared muscular del corazon)

Mutacion del gen de la miosina cadena pesada que compromete funcion


contractil de proteinas aun en individuos heterozigotos. En tales individuos, el
corazon trata de compemsar la hipertrofia ( alargamiento), resultando en una
arritmia irregular.

La estructura del sarcomero es mantenida por un numero de proteinas accesorias . Los


filamentos de actina son estabilizados en su extremo positivo (+ end) por CapZ y en el
extremo negativo por tropomodulina. Una proteina gigante conocida como nebulina se
extiende a lo largo de todo el filamento delgado de actina, desde el disco Z a la
tropomodulina, donde se une. Nebulina, consiste en dominios repetitivos que se unen al
filamento de actina y se cree que el numero de repeticiones determina la longitud del
filamento delgado.
Otra proteina denominada titina (cabeza asociada al disco Z) y se extiende hasta la
mitad del filamento grueso , donde otra molecula de titina se extiende al disco Z

subsecuente ( molecula elastica que mantiene los filamentos gruesos en la mitad del
sarcomero y evita el sobre estiramiento para asegurar que el filamento grueso permanezca
entre filamentos delgados.
Contraccin del musculo esqueletico es regulada por Calcio y proteinas de union a
la actina
La contraccin del musculo esqueletico es iniciado por un incremento de Ca citosolico. La
concentracion de calcio en el citosol se mantiene debajo de 0,1 uM. En el musculo
esqueletico, una baja concetracion en el nivel de calcio es mantenido por una unica Ca 2+
ATPase que continuamente bombea iones de Ca 2+ desde el citosol. Miofibrillas en el reticulo
sarcoplasmico (SR) un reticulo especilizado de celulas musculares. Reservorio de Ca 2+ en el
SR. La llegada de un impulso nervioso (potencial de accion) en la union neuromuscular
desencadena un potencial de accion en membrana plasmtica del musculo ( sarcolema). El
potencial de accion viaja hasta la invaginaciones de la membrana plasmtica conocida como
tubulos transversos. La llegada del potencial de accion a los tubulos transversos estimulan
la apertura de canales de voltaje de Ca 2+ en la membrana del RS, resultando en la liberacion
del calcio de RS , incrementando la concentracion de Ca 2+ citosolico en la miofibrila. La
elevada concentracion de Ca2+ induce un cambio en dos proteinas accesorias , tropomiosina
y troponina, que son asociados a los filamentos delgados de actina y bloquean la union a
miosina. Un cambio en la posicion de estas proteinas en los filamentos delgados de actina
permite la contraccion. Este tipo de regulacion es conocida como thin filament regulation

Tropomiosina es una molecula , de 40 nm de longitud que se une a 7 subunidades de actina


en un filamento. Moleculas de tropomiosina (TM) forman una cadena continua a cada lado del

filamento de actina. A cada lado de tropomiosina se encuentra troponina(TN) , un complejo


de tre subunidades , TN T, TN I, TN C. Troponina-C es la subnidad que se asocia al
calcio. TN C controla la posicion de TM en la superficie del filamento de actina a traves de
las subunidades TN I y TN-T. Bajo el control de Ca 2+ y TN, TM puede ocupar dos posiciones en
el filamento delgado, cambiando de estado de musculo relajado a contraido. En la ausencia
de Ca2+ ( estado relajado), TM bloquea la interaccion de miosina con F- actina y el musculo es
relajado. La union de Ca2+ a TN-C, desencadena la union de TM a un nuevo lugar en el
filamento. Concentraciones de Ca2+ mayores a 1 uM,la inhibicion ejercida por el complejo TM
TN induce la contraccion.

Actina y Miosina II forman bundles contractiles en celulas no musculares


En celulas musculares , filamentos de actina y filamentos gruesos de miosina II se organizan
en estructuras contractiles . Celulas no musculares contienen muchos tipos de contractile
bundles compuestos de filamentos de actina y miosina II, similares al de las fibras
musculares esqueleticas pero menos organizadas. Ante La carencia de un sistema regulatorio
de troponina , so regulados por fosforilacion de miosina.
En celulas epiteliales , contractile bundles son comunmente encontrados en adherens belt
( circumferencial belt), que circula la superficie interna de la celula en el nivel de los
adherens junctions. Es importante para mantener la integridad del epitelop.
Stress fibers . Es un tipo de contractile bundles importante en la adhesion celular,
especialmente en sustratos deformables. Las terminaciones de stress fibers terminan en
integrina ( focal adhesions) .
Cincunferencial belts y stress fibers contienen muchas proteinas encontradoas en el musculo
smooth y exhiben caracteristicas organizacionales que se asemejan a los sarcomeros.

Un tercer tipo de contractile bundles , se conoce como anillo contractil, una estructura
temporal que divide la celula. Cuando el anillo se contrae empuja la membrana plasmtica
dentro del citoplasma , dando lugar a un proceso conocido como citocinesis. Miosina II se
encuentra localizada en el anillo contractil, mientras que miosina I en regiones distantes ,
donde une la actina cortical a la membrana plasmatica.
Celulas deletadas en el gen que codifica la cadena pesada de miosina II no es capaz de
realizar citocinecis. En vez de eso , las celulas forman un sincitio multinucleado porque la
citocinesis pero no la division nuclear es inhibida.

Musculo liso es un tejido especializado compuesto de celulas contractiles encontrado en


muchos organos internos. Celulas lisas , alrededor de los vasos sanguineos para regular la
presion sanguinea , alredor del intestino. Celulas lisas contiene estructuras que se asemejan
contractile bundles en celulas epiteliales.
Contraccion muscular esqueletic es regulada por troponina y tropomiosina unidos al
filamento de actina que cambia entre un estado de contraccion inducido por calcio y un
estado relajado en ausencia de este. En contraste, celula lisa es regulada por el cambio de
miosina II entre el estado on y off. Regulada por una via en la que myosin regulatory light
chain
(LC) asociada con el cuello de miosina II es blanco de fosforilacion,
defosforilacion.
Cuando la cadena ligera regulatoria no se encuentra fosforilada, miosina II de la celula
muscular lisa adopta una conformacion plegada y el ciclo de ATPasa es inactivo. Cuando es
fosforilada por la enzima myosin LC kinase , cuya actividad es regulada por el nivel de
calcio citosolico libre, la miosina II no se pliega y se asocia a filamentos bipolares activo e
induce contraccion. Calcio se une a calmodulina , que induce un cambio conformacional
en la proteina, y el complejo Calcio / calmodulina se une a quinasa LC y la activa. Cuando el
calcio vuelve a sus niveles de reposo , la quinasa es inaciba y myosin light chain phosphatase
remueve el fosfato y permite que el sistema regrese al estado relajado. Contraccion es mas
lenta es musculo liso que en el musculo esqueletico. Devido a que esta regulacion involucra
miosina,es conocida como thick filament regulation.
A diferencia del musculo esqueletico que es estimulado unicamente por impulsos nerviosos,
celulas lisas
no musculares son regulados por seales externas como norepinefrina,
angiotensia, endotelina, histamina. Otras vias activan la quinasa Rho , que es capaz de
activar la miosina por fosforilacion de la cadena ligera regulatoria, calcio independiente.

Miosina V transporta vesiculas secretorias a lo largo de filametnos a 3 um/s al bud ,


segregacion de muchas organelas, que incluyen los peroxisomas, lisosomas (vacuolas) ,
reticulo endoplasmatico,trans Golgi network, end of microtubules, y algunos RNA
mensajeros . Mientras que levadura usa miosina V y filamentos de actina polarizzados,
celulas animales emplean microtubulos y sus MOTORS para transportar estas organelas.

Quizas el uso mas dramatico de miosina V se encuentra en las algas verdes gigantes , Nitella
y Chara. En estas celulas que pueden alcanzar 2 cm de lardo, y el citosol fluye rapidamente a
4.5 mm/min. Este streaming citoplasmatico es el principal mecanismo para la distribucion
de metabolitos. La velocidad del streaming incrementa desde el centro ( velocidad 0) a la
periferia. En micrografia electronica , bundles de filamentos de actin pueden ser vistos
visualizados alineados a lo largo de la longitud de la celula. Miosina V es conocidad como
miosina XI en plantas , y se encuentran asociadoas a partes del RE adjacente a los filamentos
de actina.

17.7. Migracion celular: Mecanismos, sealizacion, quimiotaxis


Migracion celular resulta de movimientos generados en diferentes partes de la celula,
integrado con un ciclo endocitico. Celulas epiteliales enun adulto animal migra para cicatrizar
una herida,y celulas blancas migran a lugares de infeccion. Menos obvio es la migracion lenta
de celulas epiteliales intestinales a lo largo del villi en el intestino y la lenta pero migracion
constante de celulas endoteliales que limitan las vesiculas sanguineas.
Migracin inapropiada de celulas cancerigenas resultan en metastasis. La migracin es
iniciada por la formacion de una larga, amplia protusion de membrana en el leading edge
de la celula. Video microscopia revela que la caracterisitica de este movimiento es la
polimerizacion de la actina en la membrana. Los filamentos de actina en el leading edge son
rapidamente entrecruzados en bundles y redes resultando en una region llamada
lamellipodium en celulas de vertebrados. En algun casos, las protusiones toman formatos
digitales, denominados filopodias. Estas estructuras forman contactos con el sustrato
( como la matrix extracelular).
El movimiento de un fibroblasto ( tejido conectivo) acontece mediante una secuencia de
eventos : extension inicial de una membrana (protrusion), union al substrato, forward flow of
citosol , retracion of the rear af the cell. Estos eventos ocurren lento y en orden secuencial en
el fibroblasto pero rapido y simultaneo en macrofagos.
Extension de membrana: En la membrana en el leading edge , la actina es nucleada por
activacion del complejo Arp2/3 y los filamentos son elongados por ensamblaje en
terminaciones positivas adyacentes a la membrana plasmatica. Como la red de actina se
encuentra fija al substrato, el frente de la membrana es empujada asi como los filamentos se
elongan. Actin treadmilling es mediado , asi como colas de cometas de Listeria, por la accion
de profilina y cofilina.

Adhesion al substrato: actin bundles en el leading edge se encuentran ancoradas a


estucturas denominadas focal adhesions. Esta union sirve para dos propositos: previene la
retraccin de la lamella (leading) y asocia la celula al subtrato, permitiendo a la celula
moverse hacia delante. Las moleculas de adhesion celular que median muchas interacciones
cell- matrix son proteinas de membrana denominadas integrinas. Estas proteinas tienen un
dominio externo que se unen especificamente a componentes de la matriz extracellular ,
como fibronectina y colageno; y un dominio citoplasmatico que lo asocia al citoesqueleto
de actina. La celula hace asociaciones en el frente, la celula migra hacia delante, las
adhesiones eventualmente asumen posiciones hacia atrs.
Cell-Body translocation: Se cree que el nucleo y otras organelas en el citoplasma se
mueven hacia adelante por la miosina II contraccion cortical dependiente en la parte rear
de la celula. Miosina II se localiza en la rear de la corteza celular.
Breaking cell attachments: las adhesiones focales en el rear de la celula se rompen , las
integrinas se reciclan y la cola es traida hacia delante. Quizas contraccion de stress fibers en
la cola o tension elastica. Celulas no se pueden mover si no se encuentran fuertemente
asociadas al substrato o no unidas a la superficie. Migraciones rapidas ocurren en un nivel de
adhesion intermedio( tiene que existir un balance), y la tasa de movimiento cae en celulas
con alto y bajo nivel de adhesion. Locomocion celular es ejercida por la traccion de fuerzas
ejercidas por la celula en el substrato subyacente.
Reciclando membranas e integrinas por endocitosis: La membrana necesaria durante
la formacion del lamellopodium es provista de endosomas internos seguido de exocitosis.
Moleculas de adhesion en focal adhesion en el rear de la celula son internalizados y
transportados por un ciclo endocitico. El movimiento de membrana internamente genera
un flujo en toda la superficie de la celula, que contribuye a la locomocion celular.

CDC42, Rho, Rac


Factores de crecimiento como factor de crecimiento epidermal(ECF) , factor de crecimiento
derivado de plaquetas (PDGF), se unen a receptores especificos de la superficie celular y
estimulan a la celula a moverse y dividirse. Ejm: en una herida, la plaquetas son activadas

siendo expuestas al colagno en la matriz extracelular. Plaquetas secretan PDGF para atraer
fibroblastos y celulas epiteliales.
Membrana ruffles son similares a los lamellopodias de celulas migratorias, ellas resultan de
la activacion de la maquinaria que controla la exocitosis de endosomas acoplado al
ensamblaje de actina.
Rac: GTPasa. Perteneciente a la superfamilia Ras. Rac es un miembro de la familia de
proteinas que regula la organizacin de microfilamentos, otras son Cdc42 y Rho.
Rac, Rho, Cdc42 actuan como switches moleculares , inactivos cuando se encuentran unidos
a GDP y activos cuando se encuentran unidos a GTP. Unidos a GDP se encuentran libres en
el citoplasma , unidos a una proteina conocida como guanine nucleotide dissociation
innhibitor (GDI). Factores de crecimieno se pueden unir y activar sus receptores para activar
proteinas regulatorias unidas a la membrana : Guanine nucleotide exchange factor
(GEFs) , que activan proteinas Rho en la membrana, liberandolos de GDI y catalizando el
intercambio de GDP por GTP. Las GTPasas permanecen activas hasta que el GTP es
hidrolisado , estimulado por GTPasa activating proteins (GAPs).

Mutante que se encuentra en su estado activo : dominant active proteins . Se unena


efectores constitutivamente. Por otro lado , existen dominant negative, que se unen e inhiben
GEF ( para evaluar procesos que son bloqueados)
Cdc42, Rac y Rho : regulacion de organizacin de microfilamentos. Mutantes dominantes
tiene efectos dramaticos en el citoesqueleto de actina. Cdc42 dominante resulta en
aparencia de filopodia, Rac dominant resulta en la apariencia de membrane ruffles, dominant
Rho resulta en la formacion de stress fibers que se contraen.

Si la activacin de Rac es estimulada por un factor de crecimiento, la introduccin de una


protena Rac dominante negativa debera permitir a la celula bloquear la habilidad del factor
de crecimiento de inducir membrane ruffling. Y esto es lo que se observa. Activacion de
Cdc42 estimula el ensamblaje de actina por ARP 2/3 atraves de la activacin de WASp , y un
nucleation promoting factor (NPF), resultando en la formacin de filopodia,
Activacion de Rac induce Arp 2 /3 , mediado por el complejo WAVE , permitir el ensamblaje
de filamentos de actina ramificados.
Activacion de Rho tiene al menos dos efectos. Activar la formina para ensamblar filamentos
de actina no ramificados. A travs de la activacin de la quinasa Rho , la cadena ligera de la
miosina II puede ser fosforilada , activando miosina II no muscular e inhibir mediante
defosforilacion , fosforilando la fosfatasa de la cadena ligera de la miosina

Celulas crecen con factores de crecimiento , formando una monocapa. La capa es rota,
generando una herida, despues del cual migran celulas, Usando este sistema, introduciendo
Rac dominantes negativas se puede observar como afecta la habilidad de las celulas para
migrar. Desde que Rac es necesario para la activacion del complejo ARP2/3 para formar el
lamellopodium , no es sorprendente que las celulas no formen esta estructura y no migren,
la herida no se cierra.
Cuando una Cdcd42 dominante negativa es introducida, ellas forman el leading edge pero la
orientacion no es correcta, tratando de midran en direcciones aleatorias. Cdc42 critica para
la polaridad celular. En animales, Cdc42 se une a su efector Par6 ( una proteina de
nematodos)

Seales del ambiente son transmitidas a Cdc42 , que orienta la celula. La celula orientada
tiene alta actividad de Rac en el frente para inducir la formacion del leading edge.
Actividad de Rho es alta en la parte trasera ( rear) para activar miosina II. Rho estimula vias
que permiten la inactivacion de Rac. Asegurando que estructuras de leading edge no sean
formandas en la parte posterior de la celula.
Chemotaxis: gradiente de concentracion. Por ejemplo, leucocitos son guiados por una
infeccion por un tripeptido secretado por muchas celulas bacteriales.
Durante el desarrollo del musculo esqueletico , una proteina denominada scatter factor
guia la migracion de mioblastos .
Migracion de la ameba Dictyostelum durante o proceso de starvation. Cuando las amebas del
suelo se encuentran stressadas, ellas comienzan a secretar cAMP , que es un agente
quimiotactico extracelular en este organismo. Las amebas se agregan y se diferencian en
fruiting body donde esporas de resistencia son formadas.

Dictyostellum siente 2 % de diferencia de concentracion a lo largo de su longitud. cAMP,


proteinas trimericas G. PI-3 quinase , es una enzima que fosforila fosfolipidos inositol unidos a
la membrana ( fosfoinositides) como PI 4,5 bifosfato [PI(4,5)P 2] produciendo PI 3,5 trifosfato
[PI(3,4,5)P3]. La enzima PI- 3 quinase se encuentra en grandes concentraciones en el leading
edge asi como sus productos. PTEN, la fosfatasa que defosforila PI 3,5 trifosfato a como PI 4,5
bifosfato, es enriquecida en la cola de la celula migratoria.
Esta asimetria se establece de la siguiente manera:
Antes que la celula sea expuesta al gradiente cAMP la fosfatase PTEN se encuentra asociada
uniformemente a la membrana plasmatica. Cuando la celula siente un gradiente, PI-3
quinasa es activado un poco mas en el frente que la parte posterior. Como resultado se tiene
mas niveles de fosfolipidos en el frente. La asociacion de PTEN es muy sensible a los niveles
de PI (3,4,5) P3 , asi que es preferencialmente depletado del frente. Desde que es menos
efectivo defosforilar PI (3,4,5) P3 en el frente y mas efectivo defosforilar PI (3,4,5) P 3 en la
parte posterior, una asimetria resulta.
La difenrencia en la concentracion de PI (3,4,5) P 3 induce el ensamblaje de citoesqueleto de
actina en el leading edge y contraccion en la parte posterior. Similar en leucocitos