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Determinacion de Azucares Totales Por El Metodo Fenol Sulfurico PDF
Determinacion de Azucares Totales Por El Metodo Fenol Sulfurico PDF
Para realizar este método se tiene que hacer una curva de calibración con
disoluciones de concentración conocida utilizando una solución estándar de
glucosa para determinar las absorbancias y hacer una modelo para poder seguir e
interpolar las absorbancias de las muestras y conocer las concentraciones, para
preparar las muestras tomamos una solución de muestra se le añadió ácido
sulfúrico y fenol que ayudan a formar complejos con las proteínas, después se
tomó la medida de la absorbancia de las muestras y se determinó la concentración
de las proteínas en las muestras problema.
INTRODUCCION
Los carbohidratos se logran destruir por calor y por adición de ácido y son
particularmente sensibles a ácidos fuertes y altas temperaturas. Bajo estas
condiciones una serie de reacciones complejas toman lugar empezando con una
deshidratación simples, si se continúa el calentamiento y la catálisis ácida se
producen varios derivados del furano que condensan consigo mismos y con otros
subproductos para producir compuestos obscuros o compuestos coloridos
producto de la condensación de compuestos fenólicos y con heterociclos con el
nitrógeno como heteroátomo. La condensación más común es con fenol y es un
método fácil, eficaz y rápido.
FENOL.- Los riesgos principales que albergan los fenoles es que son tóxicos y
corrosivos por lo que pueden provocar quemaduras y afectar al SNC y es por eso
que se debe hacer uso de mascarillas, lentes y guantes de Viton, Butilo y/o
Neopreno (no se recomiendan de Goma Natural, Nitrilo, PVC o de PVA) así como
el equipo cotidiano en el laboratorio como bata, pantalón de mezclilla y zapato
cerrado. Entre los riesgos secundarios de este compuesto están que es inflamable
por lo que se debe contar con extintores de polvo químico seco; y reacciona
levemente produciendo CO y CO2. El área de trabajo con fenoles debe ser
ventilada o en campanas de laboratorio con extracción forzada.
En caso de inhalación trasladar a la persona donde exista aire fresco, sí hay paro
respiratorio emplear la reanimación cardiopulmonar y suministrar oxígeno.
En caso de contacto con la piel u ojos se debe lavar el área rápidamente con
abundante Agua mínimo durante 20 minutos.
En caso de ingesta se debe inducir al vómito, lavar la boca y dar a beber
abundante agua así como aplicar el antídoto contra Fenol.
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disocia y pasa al torrente sanguíneo en forma de ion Sulfato y finalmente se
elimina por orina y sudor. Para ayudar a minimizar el riesgo se debe dar a beber
agua o leche en cantidad de 2 vasos para diluir los contenidos estomacales y no
se debe inducir al vómito.
En caso de contacto con piel u ojos reaccionar de la misma manera que con los
fenoles con la excepción de que se debe aplicar bastante jabón y no mucha agua.
Al mezclar este ácido con agua se debe tener precaución ya que genera una gran
cantidad de calor. Se recomienda agregar el ácido al agua y no viceversa. Y el
agua no debe estar caliente.
Para el manejo de estos residuos se debe tomar en cuenta el material del bidón en
el cual se van a almacenar, es decir, que el material con el que este hecho no
reaccione con los residuos además que hay que tener una temperatura estable así
como la gradiente de luz
OBJETIVO
Ensayar la cuantificación de carbohidratos totales por el método Fenol-ácido
sulfúrico para la aplicación en diversas muestras de interés en el estudio de
alimentos.
REQUERIMENTOS
Material Reactivos
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20 tubos de ensaye 16 x50 mm con 10 mL de fenol al 5%
tapa. 40 mL de H2SO4 concentrado.
10 Microtubos de 1.5 mL 1 mL Sulfato de zinc 10%
1 Gradilla 1 mL NaOH 0.5N
1 Pipeta graduada de 10 mL
1 Pipeta graduada de 5 mL. Equipo
1 Pipeta automática de 1000µl. Espectrofotómetro 490 nm.
1 Pipeta automática de 200 µl. Centrifuga para microtubos 10,000 rpm
10 Puntas de 1000µl. Vórtex
10 Puntas de 200 µl
1 Celda de vidrio de 3.5 mL Muestra
1 Baño con hielo. 1mL Solución de sacarosa 1%
1 Cronómetro. 1mL Solución de almidón 1%
1 Par de guantes de látex 5 mL de medio de cultivo con sacarosa
1 Lentes protectores
CÁLCULOS
Preparación de la Curva Estándar de Glucosa
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Cabe mencionar que se puede tomar cualquier razón para las mezclas
dependiendo de la capacidad de la micropipeta con la que se cuente en el
laboratorio o de la cantidad de las sustancias.
PROCEDIMIENTO
Posteriormente, se agita cada una de las muestras y se ponen en agua fría (25 a
30 °C) durante 15 minutos.
Para finalizar, teniendo las muestras listas, se lee la absorbancia de cada una de
las muestra en el espectrofotómetro a 490nm.
Para continuar, se agitó cada una de las muestras y se pusieron en agua fría (25 a
30 °C) durante 15 minutos. Teniendo las muestras listas, se lee la absorbancia de
cada una de las muestra en el espectrofotómetro a 490nm.
Realizar la regresión lineal para obtener la ecuación de la recta que nos ayude a
describir la relación entre la absorbancia y la concentración de glucosa [µg/mL].
Se utiliza esta relación basado en que la glucosa absorbe a esta longitud de onda
y entre mayor absorbancia tenemos mayor concentración.
Resultados a obtener
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Referencias
Robert K. 1988. Harper Bioquímica Ilustrada. Editorial: El manual moderno. México
Df.
Dubois, M.; Gilles A.; Hamilton, J.; Rebers, P. y Smith, F. 1956. Colorimetric
method for determination of sugars and related substances. Analitycal chemistry
28(3): 350-356.
http://acasti.webs.ull.es/docencia/practicas/5.pdf