Método De Ácido Sulfúrico (ESPECTROFOTOMETRIA UV)

El método por espectrofotómetro UV hace referencia al uso de la luz para medir las
concentraciones de ciertas sustancias químicas. Para que este fenómeno pueda llegar a
medirse se debe de tener presente la concentración de las especies absorbentes dado a que
esta es proporcional a la absorbancia según la ley de lamber-bee donde:

A=e x b x c

*A es la absorbancia (magnitud adimensional)

*e es un coeficiente de proporcionalidad denominado coeficiente de extinción molar, indica la

absorbancia de una determinada sustancia a una longitud de onda dada y se expresa en M-
1.cm-1.

*b es el ancho o espesor de la celda donde se deposita la muestra y se expresa en cm.

*c es la concentración expresada en moles/Litro (M).

FUNDAMENTO

La reacción de color para medir la concentración de carbohidratos solubles por

espectrofotometría se basa en la utilización del método colorimétrico de fenol-sulfúrico que
depende de la deshidratación de sacáridos derivados de hidrolizados a furfural que
transcurre en el proceso de la reacción. Los derivados del furfural con las formas de fenol
coloreado absorben la luz en el rango visible a una longitud de onda 490 nm.

Reacción:

FENOL + H2SO4 (Concentrado) + carbohidrato ------------->HMF(Amarillo naranja)

Para hexosas (Hidroximetil furfural)

DESVENTAJAS

*Evitar el empleo de fenol en la metodología reduce costos por uso de reactivos,

igualmente reduce el riego de exposición inherente a esta sustancia nociva para la
salud.

*La exposición prolongada al fenol provoca cambios en piel, pulmones, hígado,

riñones, y tracto urinario, los cuales están relacionados con la peroxidación lipídica
de algunas membranas celulares.

*Estudios en mamíferos han establecido la capacidad genotóxica del fenol, capaz de

provocar cambios en cromosomas, síntesis de ADN y expresión de genes mutantes.

CONCLUSIONES
El método de fenol-ácido sulfúrico ha sido uno de los métodos más utilizados en
investigaciones alrededor del mundo para la determinación de carbohidratos
totales. Con esta investigación se puede afirmar que el uso del fenol para la
reacción colorimétrica es innecesario. Las lecturas de absorbancia por
espectrofotometría UV en el método de determinación de carbohidratos totales se
pueden realizar satisfactoriamente con la hidrólisis de los azúcares a furfural o sus
derivados utilizando solamente ácido sulfúrico concentrado. Estas modificaciones al
método original del fenol-ácido sulfúrico permitieron disminuir los costos de
reactivos, el tiempo de ejecución y los impactos de los reactivos en los analistas y
de los residuos en el ambiente.

REFERENCIAS
1. LEOPOLD, L. F.; LEOPOLD, N.; DIEHL, H.; SOCACIU, C.. "Quantification of
carbohydrates in fruit juices using FTIR spectroscopy and multivariate analysis".
Spectroscopy. 2011, 26, 93–104. DOI 10.3233/SPE-2011-0529.

. . SUZANNE NIELSEN, S. "Phenol-Sulfuric Acid Method for Total Carbohydrates".

En : FOOD SCIENCE TEXTS SERIES (ed.), Food Analysis Laboratory Manual, 2009,
p. 47–53.

REACCION DE BENEDICT
En química, la reacción o prueba de Benedict identifica azúcares reductores (aquellos que
tienen libre su OH del C anomérico), como la lactosa, la glucosa, la maltosa y la celobiosa. En
disoluciones alcalinas pueden reducir el Cu2+, que tiene color azul, a Cu+, que en el medio
alcalino precipita como Cu2O de color rojo-naranja.

El reactivo de Benedict consta de:

sulfato cúprico (comúnmente la sal pentahidratada);

citrato de sodio (estabiliza el Cu2+ durante el almacenaje del reactivo),

carbonato anhidro de sodio y NaOH, que sirven para alcalinizar el medio

Fundamento
La prueba de Benedict es otra de las reacciones de oxidación, que como conocemos, nos ayuda
al reconocimiento de azúcares reductores, es decir, aquellos compuestos que presentan su OH
anomérico libre, como por ejemplo la glucosa, lactosa o maltosa o celobiosa, en la reacción de
Benedict, se puede reducir el Cu2+ que  presenta un color azul, en un medio alcalino, el ión
cúprico (otorgado por el sulfato cúprico) es capaz de reducirse por efecto del grupo aldehído
del azúcar (CHO) a su forma de Cu+. Este nuevo ion se observa como un precipitado rojo
ladrillo correspondiente al óxido cuproso (Cu2O),  que precipita de la solución alcalina con un
color rojo-naranja, a este precipitado se lo considera como la evidencia de que existe un azúcar
reductor. (Wade L.G. 2004)

En estos ensayos es posible observar que la fructosa  (una cetohexosa) es capaz de dar
positivo. Esto ocurre por las condiciones en que se realiza la prueba: en un medio alcalino
caliente esta cetohexosa se tautomeriza  (pasando por un intermediario enólico) a glucosa
(que es capaz de reducir al ion cúprico).
RERERENCIA

1._Wade L.G. (2004).Química Orgánica. Madrid, España: Pearson Educación S.A.

2._ María del Rosario García Fernández, Determinación de azucares reductores totales,
Universidad Autónoma de Nayarit, pagina 15-25la aurora 2007.

Análisis De Polisacáridos (Determinación De Fibra Dietética)

La fibra dietética se define como los polisacáridos y lignina que
no son digeridos por enzimas humanas, los métodos se
fundamentan en aislar la fracción de interes con la precipitación
selectiva y después determinar su peso. Una muestra
gelanitizada de alimento seco, desengrasado se digiere
enzimáticamente con alfa-amilasa amiloglucosidad y proteasa
para hidrolizar el almidón y la proteína.