PROTOCOLO DE PRÁCTICA

Práctica 9. DETERMINACIÓN DE CARBOHIDRATOS TOTALES (Método Fenol-Ácido

sulfúrico)

OBJETIVO: Cuantificar los carbohidratos totales por el método del Fenol-ácido sulfúrico.

INTRODUCCIÓN

El método de fenol-ácido sulfúrico es un método colorimétrico simple y rápido para determinar los
carbohidratos totales en una muestra. El método detecta virtualmente, todas las clases de hidratos de
carbono, incluyendo los monosacáridos, disacáridos, oligosacáridos y polisacáridos. Aunque el método
detecta prácticamente todos los carbohidratos, la absortividad de los diferentes grupos de hidratos de
carbonos varia. Por consiguiente, a menos que se conozca que muestra solo contiene un tipo de
carbohidrato, se deben expresar los resultados, arbitrariamente, en términos de un hidrato de carbono
dado.
En el presente método, el ácido sulfúrico concentrado degrada cualquier polisacárido, oligosacárido y
disacárido a monosacárido. Las pentosas (compuestos de 5 carbonos) son seguidamente deshidratadas
para dar furfural y las hexosas (compuestos de 6 carbonos) a hidroximetilfurfural. A continuación,
estos compuestos reaccionan con el fenol produciendo una coloración amarillo-dorada. Para los
productos con un contenido muy alto de xilosa (una pentosa), tales como el trigo o el salvado de maíz,
debería utilizarse la xilosa para elaborar la curva de calibrado para el ensayo y medirse la adsorción a
480 nm. Para los productos con alto contenido de azucares de la familia de las hexosas, se utiliza
habitualmente la glucosa para construir la curva de calibrado y se mide a 490 nm, la coloración
desarrollada en esta reacción es estable durante varias horas y, bajo las condiciones adecuadas, la
exactitud del método queda dentro de un ± 2%.

MATERIAL Y EQUIPO

• Espectrofotómetro
• Balanza analítica
• Matraces volumétricos
• Pipetas volumétricas
• Tubos de ensayo
• Ácido sulfúrico concentrado (96-98%)
• Dilución de fenol al 5% en agua
• Patrón de glucosa de 100 mg/L.
METODOLOGÍA

1. Disolución de la muestra: se pesan con exactitud de 0.5 g de muestra seca molida. La muestra
se homogeniza con 25 mL de agua aproximadamente (hasta que se disuelva), y se coloca en
un matraz volumétrico de 100 mL se afora.
2. Preparación de la curva de Patrón: se preparan tubos como se indica en la tabla 1 y se le
agregan los reactivos necesarios.
3. Mezcle los tubos de ensayo. Deje reposar los tubos durante 20 minutos en un baño de agua a
25° C, para llevarlos a temperatura ambiente.
4. Agite nuevamente los tubos de ensayo por vibración, antes de la lectura absorbancia. Se lee a
una absorbancia de 490 nm.
5. Construya la curva de calibración de la determinación de carbohidratos totales expresada en
términos de mg de glucosa/L.
6. Realizar los cálculos correspondientes.
Tabla 1. Preparación de las disoluciones de glucosa y las muestras
Patrón de Muestra Fenol 5% H2SO4 conc.
Tubo Agua (mL)
Glucosa (mL) (mL) (mL) (mL)
Blanco 0.0 0.0 2.0 1.0 5.0
1 0.1 0.0 1.9 1.0 5.0
2 0.2 0.0 1.8 1.0 5.0
3 0.3 0.0 1.7 1.0 5.0
4 0.4 0.0 1.6 1.0 5.0
5 0.5 0.0 1.5 1.0 5.0
6 0.6 0.0 1.4 1.0 5.0
7 0.7 0.0 1.3 1.0 5.0
8 0.8 0.0 1.2 1.0 5.0
9 0.9 0.0 1.1 1.0 5.0
10 1 0.0 1.0 1.0 5.0
Muestra 1 0.0 1.5 0.5 1.0 5.0
Muestra 2 0.0 2.0 0.0 1.0 5.0
CUESTIONARIO
1. Aporte tres razones por las cuales es importante el análisis de los hidratos de carbono.
2. ¿Cuáles son los principios en los que se basa la determinación del contenido total de hidratos de
carbono, utilizando el método de fenol-ácido sulfúrico?

BIBLIOGRAFÍA
1. BeMiller, J. N. (2009). El análisis de los hidratos de carbono. En Nielsen, S.S., (Eds), Análisis de
alimentos (pp. 169-202). Acribia.